TECNICAS DE HISTOQUIMICA

LABORATORIO DE HISTOLOGIA

TÉCNICA HISTOLOGICA

Se denomina al conjunto de procedimientos aplicados a un material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las condiciones óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos.

HISTOQUIMICA

Es el estudio de los componentes tisulares y celulares por medio de colorantes especiales, reacciones bioquímicas y reacciones inmunológicas.

TECNICAS DE HISTOQUIMICAEs el estudio químico de los tejidos,

independientemente del método de análisis empleado, con el auxilio de los microscopios ópticos (MO) y electrónico (ME).

Esta técnica permite la identificación y localización de compuestos o radicales químicos en las células y tejidos.

B. PRINCIPALES SUSTANCIAS DE INTERÉS BIOLÓGICO DEMOSTRABLE HISTOQUÍMICAMENTE.

1. IONES

IÓN HIERRO- EL ión férrico se demuestra por la reacción con la mezcla de ferro- cianuro potásico y ácido clorhídrico (azul de Prusia) que forma un precipitado azul oscuro de ferrocianuro férrico.

- Sirve para localizar los macrófagos del SRE en el hígado y diagnosticar enfermedades en las cuales hay depósitos de hierro en los tejidos. Por ejemplo hemocromatosis y hemosiderosis.

2. LÍPIDOS.

Se usan colorantes que se disuelven en las grasas como el Sudan IV y el Sudan negro.

Sirven para el diagnóstico de enfermedades metabólicas que producen depósitos intracelulares de lípidos.

Por ejemplo Enf. de Gaucher, Enf. de Niemann-Pick, Enf. de Fabry, esteatosis hepática (hígado graso).

3. ÁCIDOS NUCLÉICOS.

DNA .-Se usa la reacción de FEULGEN que consiste :

- Hidrólisis del DNA con ácido clorhídrico para extraer las bases púricas y dejar en libertad los grupos aldehídicos del azucar.

- El reactivo de SCHIFF (PAS) reacciona con el aldehído y forma un precipitado rojo.

RNA.-Tiene gran afinidad por los colorantes básicos (basofília) lo que hace que se tiña intensamente con el AZUL DE TOLUIDINA o de METILENO.

4. PROTEÍNAS

Su identificación se basa en métodos de detección de aminoácidos.

- Reacción de aminobenceno.- Reacción de Sakaguchi que detecta la

arginina de las proteínas básicas como las histonas y protaminas.

Para Dx. de proteinosis pulmonar.

5.- POLISACARIDOS

La reacción más usada es la del PAS (ácido periódico-Schiff). El ácido oxida a los azucares en posición 1-2 y deja grupos aldehídos libres que reaccionan con el reactivo de SchifF dando un compuesto de color magenta . De este modo se demuestra la presencia de:

- Glucógeno en el hígado y músculo. - Depósito intracelular de glucógeno en enfermedades

congénitas. - Glucosaminoglicano o mucopolisacárido que forman parte de

los proteoglicanos. - Glucoproteínas.Los azucares ácidos también reaccionan con el colorante AZUL

DE ALCIAN.

6.- ENZIMAS

FOSFATASA ÁCIDASe usa el método de GOMORI que consiste en

incubar cortes de tejidos en una solución que contengan glicerol fosfato sódico y nitrato de plomo a pH 5 .

Se usa para localizar lisosomas.DESHIDROGENASASSe usan cortes no fijados junto con tetrazol para

formar un precipitado coloreado llamado formazan.

Se usa para detectar mitocondrias.

TINCION DE PAS (ácido peryódico de Schiff)Se utiliza para la detección de hidratos de carbono, libres o conjugados, en los tejidos cuando están en cantidades relativamente grandes. La modificación química del tejido consiste en la oxidación mediante el ácido periódico de los enlaces entre los carbonos próximos que contienen grupos hidroxilos. Esto provoca la formación grupos aldehídos que serán reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se combinará con ellos para dar un color rojizo brillante.

Inmunohistoquímica. Técnica de tinción que permite demostrar una variedad de antígenos presentes en las células o tejidos utilizando anticuerpos marcados. Estas técnicas se basan en la capacidad de los anticuerpos de unirse a sus antígenos.

TINCION PARA AMILOIDELa tinción de Rojo Congo seguida de visión al microscopio con luz normal (Fig. 4a) o polarizada (con la que se observa refringencia de color verde manzana) (Fig. 4b) es la técnica más práctica para demostración de sustancia amiloide.

TINCION DE PLATA PARA FIBRAS ELASTICAS

INMUNOCITOQUIMICA (INMUNOFLUORESCENCIA)Sirve para identificar proteínas especificas.

Se basa en la reacción Ag-Ac. Al Ac se le puede marcar con un compuesto fluorescente. Es el método más usado para la detección de auto-anticuerpos en enfermedades autoinmunes.

DX. POR INMUNOFLUORESCENCIA

OBTENCION DE AC MONOCLONALES

OBTENCION DE AC MONOCLONALES

APLICACIONES DE LOS AC MONOCLONALESEn Dx. de tumores

En terapia:

Tumoral

Infecciones virales,

Bacterianas,

Drogas

Toxinas

Mastocitos teñidos con Giemsa. Los gránulos citoplásmicos de histamina captan el colorante

H y E

PFAG

VIM

S-100 C. Schwann

Neurofilamentos

Enolasa neuronal específica

Proteína Tau