Tuberculosis Bovina - Revisión Bibliográfica 2013

TUBERCULOSIS BOVINA:DESCRIPCIÓN Y MÉTODOS DIAGNÓSTICOS

Mauricio Andino Molina, Mario Alejandro Moncada | 2013Escuela de Microbiología, UNAH

Revisada por Dra. Reina Laura Rivera, MSc; Dra. Rebeca Rivera, MSc

TABLA DE CONTENIDO

No. página

Tuberculosis bovina 2 Agente etiológico 2

Características epidemiológicas 3 Internacionales 4 Nacionales 6

Diagnóstico de la tuberculosis bovina 6 Cultivo bacteriológico y diagnóstico microbiológico 7 Pruebas inmunológicas (serológicas) 8

o γ Interferón 8o MAPIA 10o PPD/TST 11o Pruebas rápidas (PR-BTB) 12o Prueba de plataforma dual (DPP) 13o ELISA 13o SeraLyte-Mbv 14o Multiplex chemiluminescence immunoassay (MCI-BTB) 14o Biología molecular 15o PCR 15o Spoligotyping 16o IMS-Spoligotyping 17o Fingerprinting 17

Conclusiones 18Recomendaciones 19Anexos 21Bibliografía 23

TUBERCULOSIS BOVINA

La tuberculosis bovina es una enfermedad producida por bacterias del Complejo

Mycobacterium, principalmente por Mycobacterium bovis y Mycobacterium tuberculosis. (1–5)

En la presente revisión presentamos una colección variada de datos referentes a Mycobacterium

bovis como agente etiológico de la tuberculosis en el ganado, su asociación patológica con los

reservorios naturales y salvajes y los métodos de diagnostico utilizados en la actualidad y los que se

encuentran en desarrollo para su uso e implementación.

AGENTE ETIOLÓGICO

Mycobacterium bovis fue aislado inicialmente por Theobald Smith en el año de 1896, sus

observaciones iniciales dieron por sentado que se trataba de una bacteria del complejo

Mycobacterium debido a sus características morfológicas e histopatológicas. Mycobacterium bovis

presenta diferencias bioquímicas y características virulentas de importancia en conejos y otros

animales salvajes que distan de las presentadas por Mycobacterium tuberculosis. Años mas tarde

en trabajos subsecuentes por otros autores esta bacteria fue emplazada como una subespecie de

Mycobacterium tuberculosis y es hasta 1970 que en el proyecto presentado por Karlson et al. Se

propone el nombre de Mycobacterium bovis. (3)

Mycobacterium bovis se presenta en forma de bacilos, inmóviles y no formadores de

esporas, con un alto contenido de lípidos de alto peso molecular en su pared. Mycobacterium bovis

crece más lentamente que Mycobacterium tuberculosis, es micro-aerofílico y tiene una

temperatura óptima de crecimiento de 37ºC. En un medio sólido adecuado basado en piruvato, la

morfología colonial es disgónica y no cromógena, las colonias son lisas y de color crema. (6) Esta

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2

bacteria presenta también una mayor patogenicidad en conejos, comparándole con su homologa

Mycobacterium tuberculosis. (3)

Las características de morfología colonial en el cultivo en el medio Middlebrook1 son:

Colonias puntiformes, obtenidas tras incubación a 37 °C en 1 a 2 semanas, luego estas crecen lentamente hasta alcanzar 2-3 mm de diámetro.

No pigmentadas. Aparentemente húmedas pero ligeramente granuladas. Friables.

Mycobacterium bovis es naturalmente resistente a pirazinamida y puede establecer

infecciones zoonóticas con multi-resistencia a drogas terapéuticas. (6, 7)

CARACTERÍSTICAS EPIDEMIOLÓGICAS

En los últimos años se han realizado diversos estudios que describen los avances en cuanto

a diagnóstico y prevención. En América se cuenta con laboratorios de referencia y logística

aceptables, que aunque realizan la identificación bacteriológica y molecular, sus esfuerzos no son lo

suficientemente contundentes, en parte por la ausencia de documentación técnica y científica que se

encuentre disponible, como es el caso en la mayoría de los países de Latinoamérica, y por otro lado

el manejo que disponen las agencias internacionales de control y sanidad animal que contemplan el

sacrificio del ganado una vez haya sido establecido un diagnóstico primario por tuberculosis. (1)

Epidemiológicamente se han descrito dos tipos de hospederos: los de manutención y los

incidentales. Los primeros se encuentran constituidos por animales que son infectados, luego estos

enferman y durante este proceso son capaces de transmitir la enfermedad a poblaciones

1 VER TABLA 1 EN ANEXOS.


3

susceptibles. Luego los segundos (conocidos también como “spillover hosts”) están constituidos por

aquellos animales que se infectan y posteriormente enferman pero que durante este proceso casi

nunca transmiten la enfermedad al resto de la población. Según estudios la mayoría de los animales

enfermos encajan perfectamente en la descripción de hospederos incidentales. Hasta la fecha no se

ha demostrado o descrito una mayor susceptibilidad debido a condiciones predisponentes sean

estas genéticas o fisiológicas. (4)

En cuanto a los factores de riesgo para la infección por Mycobacterium bovis se ha

encontrado que la tasa de contacto, la alimentación de las terneras y el ingreso de nuevos bovinos

no examinados son potencialmente los principales elementos a controlar para evitar la diseminación

de la enfermedad. También se encontró que la alimentación con leche cruda a las terneras, la carga

animal, el agrupamiento de vacas en rodeos únicos, rodeos mixtos, ingreso de vacas y toros

(esporádicamente) no se asociaron de forma directa con tuberculosis bovina, sin embargo el

desmadre de las terneras a una edad superior a los cuatro días puede potenciar el riesgo. (8)

Mycobacterium bovis puede transmitirse en forma de aerosol, por lo tanto es perjudicial y

altamente riesgoso el hacinamiento de los animales y la sobreexposición de trabajadores en los

recintos de cuidado, extracción lechera y lugares de matanza. También se ha encontrado que la

dosis mínima infectante de Mycobacterium bovis es muy baja. (6, 8, 9)

A NIVEL INTERNACIONAL

En muchos países de Europa, especialmente en el Reino Unido, la tuberculosis bovina ha

constituido un problema prioritario, no solo por las implicaciones patológicas en los animales, sino

más bien por las repercusiones a nivel sanitario y socioeconómico en los consumidores y


4

productores de productos lácteos. En América los programas de control han estado orientados no

precisamente a la prevención sino al control de brotes y casos. Hacia el 2004 se estimaba que un

24% de la población bovina en América Latina no se encontraba bajo ningún tipo de control. (4, 10)

La estimación de la prevalencia de tuberculosis bovina en Latinoamérica es controversial,

debido a los factores y condiciones ya expuestos; algunos países se encuentran en la etapa de

erradicación. (11)

En cuanto a los reservorios que también son considerados como hospederos de

manutención, Europa muestra una amplia variabilidad siendo el ciervo uno de los mas

representativos. (12)

Así mismo son bien conocidas las características morfológicas y bioquímicas de las

bacterias responsables, su ciclo intracelular y otros datos relacionados. Las exigencias inherentes

para su cultivo vuelven complejo su estudio y precarizan el hallazgo de soluciones definitivas en

busca de: un tratamiento eficaz, un manejo menos radical, y de un diagnóstico rápido, simple y

confiable.

El uso de pruebas diagnosticas combinadas, aunadas a un manejo intensivo y detallista

proveen poderosas herramientas en la búsqueda del control y erradicación de la enfermedad. (13)

Las técnicas y criterios utilizados internacionalmente son tratados en las secciones

correspondientes.


5

A NIVEL NACIONAL

En una encuesta realizada hacia el 2008 existían alrededor de 96,622 explotaciones que se

dedican a la ganadería bovina. Con un hato colectivo de 2.5 millones de cabezas. También se

informó que durante la época de verano la producción de leche es de 1.8 millones de litros/día con

base a un rendimiento de 3.8 litros/vaca/día. En el invierno la producción de leche es de 2.4 millones

de litros/día con un rendimiento de 4.4 litros/vaca/día. (14)

Los datos anteriores son de suma importancia sobre todo si los extrapolamos con los

hallazgos obtenidos en estudios epidemiológicos realizados en Estados Unidos, que muestran que

Mycobacterium bovis puede convertirse en un importante elemento zoonótico por el consumo de

lácteos y derivados provenientes de hatos contaminados. (15)

Actualmente se realiza un estudio epidemiológico a nivel nacional para poder conocer las

cifras de prevalencia de tuberculosis bovina. No se cuenta con datos actualizados, sin embargo

según reportes internacionales los brotes son aparentemente esporádicos. (16, 17) Los mecanismos

de diagnóstico, manejo, prevención y control serán tratados en los apartados correspondientes.

DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCULOSIS BOVINA

El diagnóstico de tuberculosis bovina se puede realizar mediante las técnicas tradicionales

(cultivo de secreciones, tejidos), pruebas inmunológicas, pruebas de biología molecular y por

supuesto la evidencia histopatológica post-mortem. Sin embargo la utilización de pruebas

serológicas requieren personal técnico capacitado y también de logística administrativa, basado en


6

el hecho de que la enfermedad causa respuesta inmunológica similar mas no igual entre especies

animales. (18)

1. CULTIVO BACTERIOLÓGICO Y DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

Las exigencias bioquímicas del género Mycobacterium vuelven complejo el proceso

de aislamiento y recuperación. Actualmente se realiza un homogenizado y concentrado de

las muestras (piezas histológicas, tejidos y secreciones). Posteriormente este material se

cultiva preferiblemente en medios enriquecidos con piruvato y carentes de glicerol. (15, 18)

Para tal fin puede utilizarse el medio Middlebrook o Stonebrink, los cuales ofrecen

mejores tasas de crecimiento, siendo Stonebrink el que mejores resultados ha mostrado

para el aislamiento y/o recuperación de Mycobacterium bovis. El tiempo de generación es

aproximadamente de 16 a 20 horas, también se necesita un periodo de incubación mínimo

de 56 días (8 semanas), aunque se puede incubar para mejores resultados por alrededor de

84 días (hasta 12 semanas). La morfología colonial característica de Mycobacterium bovis

en este medio es de colonias puntiformes, que gradualmente crecen hasta alcanzar 1mm de

diámetro, no pigmentadas, finamente granulares y friables. También pueden identificarse

cepas determinando las propiedades clásicas de cultivo y haciendo uso de baterías

bioquímicas que incluya pruebas tales como la catalasa, ureasa, etc. (3,18)

En ciertos casos, dependiendo de la muestra referida, se realiza una tinción Ziehl –

Neelsen para determinar la presencia de BAAR como forma preliminar de diagnóstico. (15)


7

2. PRUEBAS INMUNOLÓGICAS

Las pruebas inmunológicas, basadas en la interacción antígeno-anticuerpo,

constituyen las principales herramientas modernas para el diagnóstico rápido y eficaz de

muchas enfermedades, actualmente se realizan esfuerzos para el desarrollo e

implementación de pruebas inmunológicas para el diagnóstico de la tuberculosis bovina.

Desde los primeros ensayos dirigidos hacia la detección de antígenos específicos hasta la

actual combinación de antígenos purificados para la detección de anticuerpos, estas

técnicas han recorrido un largo camino y deben aun mejorar su sensibilidad y especificidad

lo cual nos permitiría un mejor desempeño en los procesos de evaluación e investigación.

El antígeno (proteína purificada) que ha mostrado ser muy antigénico es MPB83. Su

uso en diferentes ensayos y como elemento principal en muchas de las técnicas que a

continuación se analizan es de suma importancia. (19) Otras moléculas proveen valiosa

colaboración para el diagnóstico, tales como ESAT-6, CFP-10, LAM y MPB70. (20)

Prueba de γ Interferón (IFN)

El γ interferón es un mediador crítico en la activación de macrófagos como

instrumentos ejecutores de resistencia ante patógenos intracelulares. Su

participación en los procesos de apoptosis es incuestionable, promoviendo esta en

células T-CD4+ estimulando la producción de moléculas pro-apoptóticas

intracelulares y señales bioquímicas apoptóticas externas. (21) Es aproximadamente

después de dos semanas post infección o sensibilización del animal con PPD, que


8

se alcanzan los niveles óptimos de γ interferón para su detección y los mismos son

sostenidos por alrededor de 16 semanas (utilizando como agente inmuno-

estimulante a Mycobacterium bovis). (22)

En un estudio se obtuvieron resultados que muestran la variabilidad de la

respuesta inmune de los animales inoculados con Mycobacterium bovis y donde la

respuesta humoral ante el antígeno ESAT-6 fue medida observando sus niveles

óptimos “pico” alrededor de las 8 semanas post-infección. (23)

Esta técnica combina la sensibilización y activación in-vitro de linfocitos

durante un periodo de incubación de hasta 24 horas y la detección de γ interferón

mediante ELISA. (18) Se debe señalar que esta técnica es utilizada ampliamente en

muchos países, no solo de Latinoamérica sino también en Europa y en países

industrializados. Sin embargo su costo no permite la utilización de la misma como

una prueba de rutina en la prevención y/o control de la enfermedad. (12, 18, 22, 24,

25)

Actualmente se utilizan pools de antígenos altamente purificados para la

prueba ELISA; se han obtenido mejores resultados cuando se han utilizado los

productos antigénicos ESAT-6 y CFP-10, incrementando así la especificidad de la

técnica y mejorando el valor predictivo. (12, 18, 20, 22)

Schiller O. et al reporta que la sensibilidad y especificidad del ensayo de γ

interferón ha sido estimado en múltiples estudios, la sensibilidad se encuentra en el

rango que varia desde 73.0 a 100.0 % con una media de 87.6 %, en cambio la

especificidad varia en un rango de 85.0 a 99.6 % con una media de 96,6 %. Se debe


9

considerar que la variabilidad de dichos parámetros podría ser el resultado de

reportes dispares. El autor recomienda entonces la elaboración de procedimientos

mas estandarizados para fortalecer dicha prueba como elemento de diagnóstico

primario en los programas de tuberculosis.

MAPIA

MAPIA (multi-antigen print immunoassay) es una prueba basada en la reacción

antígeno-anticuerpo, donde se evalúa la respuesta humoral del animal. Para tal fin se

imprimen por micro-aerosolización de forma covalente 12 antígenos purificados de

Mycobacterium bovis en una base o plataforma de nitrocelulosa. Los antígenos utilizados

son ESAT6, CFP10, MPB64, MPB59, MPB70, MPB83, 16kda, 38kda, E6/P10, 16/83, B-

PPD, MBCF. Los criterios de resultado son (P) positivo, (N) negativo y el análisis de los

resultados puede llevar al establecimiento de un resultado sospechoso (S), según el patrón

de lectura que es elaborado por el fabricante.(26)

MAPIA reconoce solamente Inmunoglobulinas G (IgG) y ha sido utilizado en

múltiples ensayos como prueba de contraste y referencia, dadas las múltiples aplicaciones

del mismo. (26–28)

En un estudio se analizo la respuesta inmune humoral del ciervo y se determino la

sensibilidad y especificidad de la técnica utilizando como referencia 4 antígenos purificados:

ESAT-6, CFP-10, MPB83 y MPB70. Se calculo una sensibilidad media de 64.0% y una

especificidad media de 99.0%.2 Aunque el ensayo fue practicado en sueros de ciervo y no

2 Ver Tabla 2. Respuesta Humoral en Inmunoensayos, (MAPIA).


10

bovino la información obtenida en el mismo pone de manifiesto las aplicaciones posibles y

los cambios y mejoras que son necesarios y pertinentes. (20)

La selección cuidadosa de antígenos debe ser una premisa en el desarrollo de mejoras y

optimizaciones en esta técnica. A partir de 2010, MPB70 y MPB83 son los antígenos

utilizados con mayor frecuencia en las técnicas serológicas IN VITRO que involucran el uso

de MAPIA. (12) El conjugado de MPB83-CFP10 ha mostrado una notoria mejoría en cuanto

a sensibilidad en los ensayos epidemiológicos. (29, 30)

PPD / TST

El método comercial mas ampliamente utilizado para la detección de tuberculosis

bovina es la prueba de tuberculina, donde se utiliza un conjugado de derivados proteicos

purificados de Mycobacterium bovis (PPD / PPD-B) en una inyección aplicada al animal

investigado. Posteriormente se evalúa la reacción de hipersensibilidad tardía en el punto de

inyección 72 horas post-inoculo. En algunos países es utilizada la prueba combinada CCT

que utiliza PPD bovino y PPD aviar. (18) La cepa utilizada globalmente para fabricar PPD-B

es Mycobacterium bovis cepa AN5. (12)

La prueba TST (Tuberculin skin test) hace uso de variantes en el sitio de

inoculación, composición de PPD y evaluación de la reacción inmunológica, dichas variantes

pueden intervenir en el resultado obtenido según los esquemas disponibles de

interpretación. Las variantes son: CFT (Caudal fold test), CIT (Mid cervical intradermal test),

CCT (Comparative cervical test). (12)


11

En un estudio practicado por Monaghan et al. en 1994, se obtuvo una sensibilidad

de 68-96.8% y 96-98.8% de especificidad para la variante TST-CFT, una sensibilidad de 80-

91.0% y 75.5-96.8% de especificidad para la variante TST-CIT y una sensibilidad de 55.1-

93.5% y 88.8-100.0 % de especificidad para la variante TST-CCT.

En los últimos años se ha trabajado en la fabricación de PPD mejorada, utilizando

nuevos péptidos en conjugados y utilizando variantes de hasta 21 péptidos en un solo

producto. En algunos casos la sensibilidad fue incrementada sustancialmente, sin embargo

la especificidad fue ligeramente afectada. (12)

PRUEBAS RÁPIDAS (PR-BTB)

Las pruebas rápidas son utilizadas ampliamente en el mundo diagnóstico como un

método de diagnóstico rápido y económico.

Como se ha discutido en varios estudios, el uso de múltiples antígenos específicos

de Mycobacterium bovis aerosolizados o fijados en plataformas de nitrocelulosa

constituyen la base de las técnicas de inmunocromatografía en el área veterinaria. Este tipo

de prueba ha sido utilizado no solo para bovinos sino para un amplio espectro de animales

que son infectados con Mycobacterium bovis y que constituyen reservorios naturales de

infección tanto para otros animales como para el humano. (12, 20, 25, 28, 29, 31–36)


12

Uno de los antígenos mas ampliamente utilizado para la manufactura de pruebas

rápidas de tuberculosis bovina es MPB83, según estudios se encontró una sensibilidad de

60.0% y una especificidad de 96.0% en ganado. (20)

Prueba de Plataforma Dual (DPP)

Esta novedosa prueba se utilizada en múltiples ensayos y ha sido montada para la

detección de VIH 1/ VIH 2 por CHEMBio ™, esto muestra la versatilidad de la misma.

Se ha utilizado un montaje del antígeno recombinante o purificado MPB83 y MPB70

para la detección de anticuerpos específicos en camélidos americanos. En el estudio

realizado DPP mostró una sensibilidad 74.3% y una especificidad de 97.6%. (37) El uso de

esta técnica es prometedora en el campo del diagnostico bovino a gran escala y en estudios

epidemiológicos primarios.

ELISA

ELISA es por excelencia uno de los kits comerciales y también “In House” mas

utilizados alrededor del mundo. Sus aplicaciones son infinitas y se utilizan como métodos de

referencia para el estudio de un sin numero de enfermedades y sus agentes etiológicos. Es

esta técnica la que se utiliza para poder medir la concentración de γ interferón como se

describió anteriormente en el apartado correspondiente. Así mismo el uso de antígenos

variados y en algunos casos combinados como lo son MPB70 y MPB83 hacen de esta

técnica una forma simple y segura de diagnóstico. (20, 38, 39) La sensibilidad media y


13

especificidad media con el uso de dichos antígenos es de hasta 63.5% y 88.8%

respectivamente. (20, 39)

SeraLyte-Mbv

Esta es una novedosa técnica de reciente introducción, donde se utilizan perlas de

ferrita con una capa de antígeno MPB83 unida covalentemente al soporte. El conjugado

cuenta de ferrita-antígeno (Conjugado primario) se une específicamente a los anticuerpos

presentes en el suero a examinar en animales potencialmente infectados (Conjugado

secundario). Para correr la prueba se requieren de aproximadamente 2 horas, donde el

conjugado primario y secundario son incubados, luego la mezcla de trabajo es lavada y es

detectado por anticuerpo monoclonales específicos que contienen marcadores cromógenos

(Conjugado terciario). El resultante será leído por quimioluminiscencia. La sensibilidad y

especificidad fueron de 96.0% y 98.0% respectivamente. (40)

Multiplex Chemiluminescence Immunoassay

Esta es una técnica que utiliza la inmuno-impresión por micro-aerosolización de 20

antígenos purificados en pozos de micro placa convencional para Inmunoensayo.

Posteriormente cada uno de los puntos que corresponden a un antígeno en específico es

leído por quimioluminiscencia. Se obtuvo una especificidad de 98.4% y una sensibilidad de

93.1%. (41)


14

BIOLOGÍA MOLECULAR

En los últimos años se han producidos notables avances en el diagnostico de bTB

con la herramientas de biología molecular que contribuyen a ampliar las limitaciones de las

técnicas tradicionales ya que los estudios de campo son propensos a subestimar

heredabilidad , debido a la exposición desigual a los patógenos , así como la sensibilidad

incompleta de las pruebas de diagnóstico que se utilizan se discute también la gran cantidad

de datos que ahora indica la existencia de una base genética para la resistencia a la

tuberculosis bovina en el ganado bovino. (2)

Entre las técnicas usadas para el diagnóstico tenemos la Reacción en Cadena de la

Polimerasa (PCR) y la técnica “Direct Variable Repeat Spacer Oligonucleotide Typing”

(Spoligotyping).

PCR

El PCR es una reacción de amplificación genética. En el caso de las mycobacterias,

la extracción es simple si se realiza a partir de cultivos tanto sólidos como líquidos donde

existe una cantidad elevada de ADN. Si se parte de una muestra clínica el rendimiento de la

extracción es menor y deficiente porque la cantidad de ADN es inferior lo que puede

comprometer la sensibilidad.

La técnica de PCR se ha utilizado para complementar estudios filogenéticos y

también para analizar muestras “extrañas”, como es el caso de un estudio publicado en el

que se extrajo ADN de moscas invasivas. El diagnóstico de Mycobacterium bovis y


15

Mycobacterium avium subs. paratuberculosis fue lograda por la detección de las

secuencias IS6110 y IS900, de Mycobacterium bovis y Mycobacterium avium

respectivamente. (42)

Se ha determinado por medio de esta técnica que una de las proteínas con mayor

incidencia en los ensayos realizados es la MPB83. (19) Ciertas variaciones en la técnica son

útiles para la obtención de perfiles epidemiológicos completos. La restricción de genes para

su posterior detección muestra buenos resultados y sirve también para poder identificar

infecciones mixtas en ganado. Los tejidos son una buena muestra para esta técnica. (43)

SPOLIGOTYPING

Se evaluó por su capacidad para diferenciar cepas de Mycobacterium

bovis. Este método detecta la presencia o ausencia de los espaciadores del locus de

repetición directa del genoma de M. bovis. Los espaciadores en el locus de repetición

directa se amplifican por PCR y se detectan por la hibridación del producto de PCR marcado

con biotina con una membrana que contiene oligonucleótidos derivados de secuencias

espaciadoras que han sido previamente unidos covalentemente a una membrana. Al final

del protocolo se obtiene un patrón (perfil de Espoligotipo) (44, 45)


16

IMS – SPOLIGOTYPING

La técnica de IMS (Immunomagnetic separation) nos permite concentrar de manera

especifica y selectiva bacilos de Mycobacterium bovis en muestras de tejido linfático

(nodos) mediante el uso de perlas micro-aerosolizadas con péptidos específicos.

Los resultados muestran una tasa de recuperación superior cuando se utiliza la técnica de

concentración aunada al spoligotyping mencionado anteriormente. La IMS-Spoligotyping

podría evitar la necesidad de descontaminación química, mediante la captura de forma

selectiva las células de Mycobacterium bovis y separándolas de otras bacterias en las

muestras, mejorando así su especificidad. (45)

FINGERPRINTING

En años recientes se han fabricado sondas de ADN para el estudio filogenético de

diversas formas de vida, incluyendo mycobacterias. El método más popular del DNA

fingerprinting para mycobacterias del complejo M. tuberculosis es el análisis de hibridación

del Southern Blot usando elementos de ADN repetitivos como sondas. El elemento de

inserción que mejores resultados ha dado, ha sido el IS6110, con este elemento se visualiza

mejor la variación de cepas que existen en el bacilo tuberculoso; ya que el polimorfismo del

ADN detectado por la sonda IS6110 es muy alto entre aislados clínicos no relacionados, y la

estabilidad de este elemento en el cromosoma de la mycobacteria, es muy alta. (38)


17

CONCLUSIONES

El avance de la tecnología ha permitido la implementación de nuevas técnicas de

diagnostico para la tuberculosis bovina. El uso y la aplicación de pruebas inmunológicas son

los principales objetivos de la investigación global en este tema, mas de siete (7) diferentes

plataformas de diagnóstico rápido y al menos cuatro (4) técnicas novedosas han sido

valoradas, mostrando tasas satisfactorias de sensibilidad y especificidad.

El uso de conjugados poli-antigénicos parecen ser los mejores candidatos para un

diagnostico serológico efectivo. El uso de MPB83 y proteínas recombinantes en plataformas

complejas son aún promisorias pero requieren de una gran inversión para su

implementación.

El uso de inmunoensayos convencionales utilizando pools de antígenos

recombinantes parece ser el mecanismo mas viable para combinar con pruebas tales como

γ Interferón, en la búsqueda de un diagnostico eficaz e individualizado en hatos lecheros y

ganaderos. En España se combina el uso de TST-PPD y la prueba de γ Interferón para

aumentar la sensibilidad y especificidad de los resultados.

Según expertos en Honduras, se utiliza la PPD como mecanismo de diagnostico

primario y el cultivo bacteriológico como mecanismo de diagnostico confirmatorio. Aunque

ambas técnicas proveen respuestas satisfactorias y son recomendadas por la OIE, la

implementación de pruebas serológicas o inmunológicas son necesarias para poder

competir a nivel internacional en cuanto a la exportación de productos lácteos o cárnicos.


18

RECOMENDACIONES

Se necesita realizar una recolección de datos estadísticos y técnicos sobre

tuberculosis bovina, su diagnostico, manejo, prevención y control a nivel nacional.

El ensayo de pruebas inmunológicas es una necesidad. El manejo que prescriben

los organismos internacionales en nuestro país son el aislamiento y matanza del animal

infectado. Sin embargo la transmisión de tuberculosis por medio de productos lácteos es

posible y constituye un problema no valorado en los esquemas de control epidemiológico, en

parte por los costos que esta actividad reguladora supondría.

Asimismo se requiere el ensayo de cultivos bacteriológicos, el aislamiento y la

identificación del patógeno, aunando a lo anterior una prueba de susceptibilidad a los

antimicrobianos, que sin lugar a dudas contribuiría enormemente al fortalecimiento de la

investigación y a la salud de nuestros pueblos no solo a nivel nacional sino internacional.


19

ANEXOS


20

Tabla 1. Características de Cultivo (Mycobacterium bovis)

Medium ATCC 19210

Pinpoint colonies in 2 weeks; gradually enlarged and rounded to about 1 mm in diameter; no pigmentation; colonies matted; with hand lens (3 to 5x), the surface is finely granular; colonies friable; in nonglycerinated medium, the colonies appear earlier and are larger.

Lowenstein - Jensen

Similar to above except growth is slower and colonies smaller; in nonglycerinated medium, the colonies are larger.

PetragnaniPinpoint colonies in 2 to 3 weeks; gradually enlarge to about 1 mm; no pigment; finely granular surface; friable.

Middlebrook 7H10Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3 mm; no pigment; appear moist but granular; friable.

Egg-yolk agar

Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3 mm; no pigment; flat and slightly elevated surface; granular; friable.

Stone brink

Pinpoint colonies in 1 to 2 weeks; slowly enlarge to 2 to 3 mm; no pigment; flat and slightly elevated surface; granular; friable.

Lebek medium Subsurface growth in 2 to 3 weeks.

Proskauer- Beckliquid medium

Granular deposit in 3 to 5 weeks; not turbid; no pigment; growth enhanced by 2 to 5% serum.

Dubs Tween-80liquid medium

Diffuse growth in 3 to 5 weeks; slight sediment which disperses on shaking; no pellicle; no pigment; maximal growth at about 5 weeks.


21

Tabla 2. Respuesta Humoral en Inmunoensayo utilizando MAPIA.

Antígeno * Sensibilidad (%) Especificidad (%)ESAT-6 67.0 98.0CFP-10 56.0 99.0MPB70 44.0 100.0MPB83 89.0 99.0* LA ESPECIE ANALIZADA FUE EL CIERVO.


22

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Tuberculosis Bovina - Revisión Bibliográfica 2013

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