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UNA INTRODUCCIÓN A LA
INGENIERÍA GENÉTICA
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Direcciones de interés:
• http://www.chimie-sup.fr/OGM.htm
• Es una página en francés muy buena sobre OGM.
• http://www.jenabioscience.com/
• Empresa que vende todo tipo de enzimas.
• http://www.juntadeandalucia.es/averroes/recursos_informaticos/concurso2000/3prem
io/viginsercion.html
• Muy interesante: sencilla y con buenos esquemas sobre inserción de ADN en células
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Enzima de restricción EcoRI
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Cómo se unen dos fragmentos da ADN
cortados por la misma enzima de restricción
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Cómo se unen dos fragmentos da ADN
cortados por la misma enzima de restricción
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Cuatro ejemplos de enzimas de
restricción
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CLONACIÓN DE UN GEN
EN UNA BACTERIA Y
EMPLEANDO UN
PLÁSMIDO COMO VECTOR
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ADN RECOMBINANTE
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CLONACIÓN DE UN GEN EN UNA BACTERIA Y EMPLEANDO UN
PLÁSMIDO COMO VECTOR
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Algunos ejemplos de enzimas de restricción
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Vector de ADN: Virus
Esquema de un virus
bacteriófago: es un vector
muy eficaz puesto que de
forma natural los virus inyectan
su material genético en células
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Infección de una bacteria por un
bacteriófago
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Vector: Cósmido
Plásmido
Pertenecientes al fago
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Gel de agarosa: matriz o soporte
de la electroforesis
La agarosa es un polisacárido que se extrae
de ciertas algas. Está compuesto por un
disacárido, la agarobiosa que se repite en
largas cadenas.
(En realidad la agarosa es una parte de un
polisacárido más complejo llamado agar-agar
que se emplea habitualmente como medio de
cultivo bacteriano).
La agarosa se
disuelve en agua
caliente y al enfriarse
se transforma en un
gel (parece gelatina)
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Electroforesis: autorradiografía
• Placa fotográfica revelada: las manchas claras sobre fondo oscuro corresponden a los diferentes fragmentos de ADN.
• En este caso, se han separado fragmentos de 5 muestras diferentes.
Este método ya ha quedado
anticuado
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Dispositivo para realizar la
electroforesis en gel El dispositivo consta de:
Una bandeja donde se verterá
el gel en estado líquido.
Un transformador que
suministra corriente eléctrica
continua.
Un peine que permitirá
excavar uno pocillos en el gel
donde se depositarán los
fragmentos de ADN a separar
en disolución
Este instrumento es una
micropipeta automática:
permite manejar cantidades
de líquido minúsculas con
gran precisión
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VECTORES DE ADN NO
BIOLÓGICOS
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Electroporación
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Microinyección
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Microproyectiles • Se denomina biolística o
biobalística a la introducción de DNA en células mediante la aceleración (disparo) de proyectiles de muy pequeño tamaño (microproyectiles).
• Generalmente los microproyectiles tienen alredededor de una micra (10-6 m) de diámetro, y son de un material inerte (oro o tungsteno).
• Los microproyectiles se pueden recubrir de DNA, y se pueden acelerar mediante pólvora, una descarga eléctrica, o utilizando gases a presión (por ejemplo helio comprimido). De esta forma se puede introducir DNA en prácticamente cualquier tejido de cualquier especie vegetal.
Este método se emplea para
obtener plantas transgénicas
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PCR
Reacción
en Cadena de
la Polimerasa
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Termociclador
• Un termociclador es
básicamente un
calentador que dispone
de un control automático
de ascenso y descenso
de temperatura y un
temporizador. Dentro, en
un recipiente, tiene lugar
la Reacción en
Cadena de la
Polimerasa
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Secuenciación: método de Sanger
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Secuenciación: método de Sanger
Ejemplo de fragmentos
que pueden formarse en
el recipiente con ddATP a
partir de la siguiente
secuencia:
5’-CTGACTTCGACAA-3’
ddAGCTGTT
ddAAGCTGTT
ddACTGAAGCTGTT
DIDESOXINUCLEÓTIDOS
MATERIAL NECESARIO PARA LA
SECUENCIACIÓN:
•FRAGMENTO DE ADN DE CADENA
SENCILLA PARA SECUENCIAR
•DIDESOXINUCLEÓTIDOS
TRIFOSFORILADOS MARCADOS
•ADN POLIMERASA
•CEBADORES
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Secuenciación: método de Sanger
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Secuenciación: método de Sanger
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Secuenciación: método de Sanger
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Secuenciación automática: método
de Sanger modificado
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Secuencia de un ADN tal y como la muestra
un secuenciador automático
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Máquina de secuenciación
automática de ADN
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Cómo funciona un biochip
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Biochip con marcadores fluorescentes
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Biochip
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Fluorocromos • Un fluorocromo es un componente de una molécula que hace que
ésta sea fluorescente. Este grupo funcional de la molécula es capaz de absorber energía de una longitud de onda específica y de emitirla en otra determinada de mayor longitud de onda (es decir, con menor energía). La cantidad de energía emitida y su longitud de onda dependen del propio fluorócromocomo.
• Habitualmente, los fluorocromos absorben energía de tipo ultravioleta y emiten en el rango de la luz visible.
• Hoy en día se conocen muchos tipos de fluorocromos de diferentes colores.
• Esta tecnología es particularmente importante en el campo de la bioquímica para el estudio de proteínas y en el análisis de ADN.
• Los fluorcromos se adosan a otras moléculas y sirven como marcadores de éstas.