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Universidad Autónoma de Chihuahua Facultad de Ciencias Químicas

Q.B.P. Eliel Mendoza Wong 57

VI. RECOLECCIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS BIÓLOGICAS PARA

EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE Mycobacterium tuberculosis.

6.1. RECOLECCIÓN DE MUESTRAS BIÓLOGICAS

El primer paso para un excelente diagnostico de la tuberculosis es la adecuada

recolección de las muestras biológicas a analizar. Obviamente "sin una buena recolección no

existirá un buen diagnostico. "

Mycobacterium tuberculosis, puede ser aislada e identificada a partir de cualquier

órgano del humano. La muestra a utilizar va a depender del estado patológico o del grado de

tuberculosis que este presentando el paciente durante la enfermedad. Por ejemplo si un

paciente con tuberculosis primaria acude al laboratorio es lógico pensar en una muestra

proveniente de las vías respiratorias bajas, pero si acude un paciente con VIH, además se

sospecha de una septicemia, el hemocultivo es la muestra ideal para el aislamiento.

A menudo muchas de estas muestras vienen acompañadas de flora bacteriana, y es

preciso realizar un procedimiento de digestióndescontaminación previo al cultivo

microbiológico.



Las muestras mas comúnmente utilizadas dentro de un laboratorio clínico son:

• MUESTRAS RESPIRATORIAS.

a) Expectoración natural.

b) Expectoración inducida.

• HEMOCULTIVOS.

• MUESTRAS ESTERILES.

a) Muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR).

b) Biopsias

• MUESTRAS DE ORINA

• MUESTRAS DE MATERIA FECAL.

6.1.1. MUESTRAS RESPIRATORIAS.

Comúnmente en la mayoría de los laboratorios clínicos, las muestras recolectadas de

las vías respiratorias son las muestras de esputo por expectoración. Este tipo de muestra es la

más común y la más efectiva para las baciloscopias. La mejor obtención para este tipo

muestras son aquellas en las que el paciente deposita la primera expectoración

inmediatamente después de levantarse, la muestra debe provenir del árbol bronquial obtenida

inmediatamente después de un esfuerzo de tos y no la obtenida por aspiración y secreciones

nasales y de saliva. Se sabe que es en la mañana cuando las micobacterias están en su más alta

concentración en el esputo.



6.1.1.1. EXPECTORACIÓN NATURAL.

Indicaciones.

a) El envase en donde se depositara la muestra debe ser: de plástico de boca ancha, tapa de

rosca, con una capacidad de 50 a 60 mL, de pared lisa y transparente. Fig. 6.1.

b) Etiquetar el envase con el nombre del paciente, fecha de recolección, diagnostico o control

de tratamiento y el numero de la muestra.

c) Indicar al paciente que se enjuague la boca con agua para eliminar residuos de comida.

d) Indicarle al paciente que no escupa sus secreciones salivales en el envase, y dejar claro que

la muestra de esputo debe provenir de las profundidades del pecho:, indicarle los siguientes

pasos para la expectoración:

1) Respirar profundamente

2) Retener el aire

3) Lanzar violentamente el esputo al envase.

Fig. 6.1. Envase de plástico de boca ancha y tapa hermética, adecuado para muestras de esputo por expectoración.



* NOTA. La liberación irregular e intermitente de micobacterias en la luz bronquial

provenientes de las ulceras de la mucosa o de las cavidades loculadas a menudo da como

resultado un patrón variable de recuperación a partir de las secreciones respiratorias, por ello,

como a continuación de describe, es preciso indicarle al paciente que repita la operación

anterior tres veces inmediatamente después de haber expectorado las primera muestra de

esputo en el envase.

e) Ya obtenida la expectoración, esta debe ser muco purulenta (Fig.6.2) para asegurar que la

recolección fue exitosa. Si en la muestra, se observa principalmente saliva o secreción nasal,

la muestra no se procesa, y se solicita una nueva recolección de muestra de esputo al paciente.

Preferentemente la muestra obtenida deberá ser de 3 a 5 ml.

f) Inmediatamente después de haber obtenido la primera muestra, se debe entregar al paciente

dos recipientes mas mencionándole las anteriores indicaciones, para que realicé una segunda y

tercera recolección, Fig. 6.4

Fig. 6.2. Obsérvese el color y la consistencia de una expectoración muco purulenta.

Fig. 6.3. Obsérvese el aspecto de una expectoración muco purulenta.



* NOTA. Es preciso realizar las tres tomas de muestra como se indico anteriormente, de esta

manera la probabilidad de realizar un buen diagnostico por basiloscopia será mayor. No hay

que confundir la toma de muestra de esputo en: "3 tomas" con el muestreo antiguo de 24

horas, ya que el muestreo durante 24 horas se trataba de una recolección continua. (Fig. 6.5)

Fig. 6.5. Tiempo atrás, era muy común ver que los laboratorios clínicos daban indicaciones de la recolección continua de esputo y de orina durante un periodo de 24 horas, con el objetivo de encontrar una mayor concentración de micobacterias en la muestra. Sin embargo hoy en día, la recolección tan prolongada se desaprueba, ya que se ha comprobado que una recolección continua en 24 horas, también se encuentra con una mayor concentración de microorganismos contaminantes.

Fig. 6.4. Tres muestras seriadas de esputo



6.1.1.2. EXPECTORACIÓN INDUCIDA.

Este tipo de muestra clínica generalmente se obtiene cuando el paciente no puede

expectorar de forma natural. Esta es realizada por el médico en el consultorio, y no en el

laboratorio.

6.1.1.2.1. OBTENCIÓN POSTURAL.

1. Se acuesta al paciente boca abajo sobre una camilla, haciendo que su cabeza rebase

el borde.

2. Se coloca una almohada debajo de su tórax, logrando un plano inclinado facilitando

el descenso de la secreción.

3. Indicarle al paciente que inspire profundamente, retenga el aire y después lo expulse

violentamente hasta conseguir la expectoración.



6.1.1.2.2. NEBULIZACION.

La nebulización es el método de administración de medicamentos suministrados al

paciente a través de vapores inhalados.

La nebulización es uno de los procedimientos más eficaces para administrar

sustancias broncodilatadoras. Todas las soluciones broncodilatadoras son concentradas, de

alto peso molecular con elevado contenido de solutos. Al diluirlos en solución isotónica

disminuye su concentración y así se obtienen partículas de muy pequeño tamaño que llegan a

lo más profundo del pulmón.

Fig. 6.6. Nebulizador.



Procedimiento Para los pacientes que no puedan expectorar de manera natural:

1. Se nebuliza en la garganta con vapores de agua simple. (Fig. 6.7.)

2. Los vapores de agua, provocan la expectoración de esputo proveniente de las vías

respiratorias inferiores.

3. Se recoge la primera expectoración producida después de la nebulización, y se entriegan al

paciente 2 recipientes para recoger otra muestra de esputo por nebulización en las 24 horas

siguientes o bien por expectoración natural.

Fig. 6.7. Expectoración inducida por nebulización



6.1.1.2.3. LAVADO BRONQUIAL.

El lavado bronquial es realizado solamente por un médico, y puede realizarse por

medio de una sonda o broncoscopio. Al obtener la muestra, esta es procesada en el

laboratorio.

6.1.2. HEMOCULTIVOS.

En general en los hemocultivos es mas común el aislamiento de Mycobacterium

aviumintracelullare que el Mycobacterium tuberculosis, ya que este cursa con cortos

períodos de septicemia aún en pacientes con SIDA. Aun así la posible septicemia por

Mycobacterium tuberculosis es posible.

Fig. 6.8. Lavado bronquial mediante un broncoscopio.



6.1.2.1. RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA.

1. Método de obtención

• La muestra debe obtenerse por punción periférica (Venosa o arterial).

• Una aguja por punción.

• Si existe indicación de otros exámenes, la toma del hemocultivo debe ser la primera en

recolectarse.

2. Preparación de la piel.

• Para la obtención de hemocultivos por métodos manuales, es muy importante una

buena limpieza para evitar contaminaciones.

• La punción debe ser efectuada con guantes.

• Después de la palpación de la vena, la piel debe ser lavada con providona yodada,

lavador quirúrgico, con gluconato de clorhexidina al 4 % o agua y jabón.

• La desinfección o lavado, debe de efectuarse de forma extensa sobre el sitio elegido de

la venopunción y 5 cm. alrededor.

• Se espera que el antiséptico se seque. si se utilizó tintura de yodo, se debe retirar

completamente con agua para evitar quemaduras.

• Para la obtención de hemocultivos automatizados hay menor riesgo de una

contaminación por falta de asepsia.



3. Inoculación de las Botellas.

• En el caso de los sistemas manuales, los cuales no son sellados, se debe destapar el

frasco para inocular la muestra (Debe de tenerse gran precaución en no tocar las

paredes exteriores con la aguja).

• Para el caso de los hemocultivos en los sistemas automatizados, se debe primero

descontaminar al tapón de goma antes de puncionar la botella con alcohol y esperar a

que se seque

4. Volumen de la muestra.

• Lógicamente el volumen de la muestra obtenida por hemocultivo, es

considerablemente importante para tener una mayor sensibilidad de aislamiento.

• La cantidad obtenida deberá de ser de 1:4 a 1:10 entre la muestra y el volumén de

medio de cultivo.

• Un parámetro utilizado en los hemocultivos de forma automatizada, es un volumen

mínimo de: 10 ml para adultos, 1 a 2 ml en niños recién nacidos, 2 a 3 ml para

lactantes de 1 mes a dos años, 3 a 5 ml para niños mayores de 2 años y 10 ml para

adolescentes.



6.1.2.2. SISTEMAS DE HEMOCULTIVOS.

Para la obtención de una muestra por hemocultivo, estas se pueden clasificar en tres

sistemas diferentes:

A) Sistemas de hemocultivos manuales

B) Sistema de hemocultivos semi automatizados

C) Sistema de hemocultivos automatizados.

A). Sistema de hemocultivos manuales.

• El medio de cultivo convencional contiene 0,025 a 0,05 % de polianetol sulfonato de

sodio como anticoagulante, para la inhibición bactericida del suero ante la bacteria, es

también: inactivador del complemento, y de la fagocitosis. ESTE TIPO DE

HEMOCULTIVOS NO SON EMPLEADOS PARA EL CULTIVO DE

MICOBACTERIAS.

B). Sistemas de hemocultivos semiautomatizados (LisisCentrifugación).

• Este sistema consiste en un tubo de lisis. El cual, además de contener polianetol como

anticoagulante, contiene saponina como agente lítico de eritrocitos, leucocitos y

macrófagos.



• Al someter el tubo a una centrifugación a alta velocidad, provoca la concentración de

micobacterias en el sedimento. (Fig. 6.9.).

• El sedimento es sembrado en cultivos específicos como: Lowenstain jensen, Middlebrook

7H11, etc...

• Este sistema es el de elección para el cultivo de micobacterias, sin embargo, puede

utilizarse para el diagnostico de otras bacterias patógenas.

* NOTA. Para el cultivo de micobacterias, es lógico diferenciar entre un sistema de

hemocultivo convencional al de un sistema de hemocultivo de lisiscentrifugación, ya que este

ultimo posee la capacidad de reventar o lisar a las células y dejar que la micobacteria

intracelular quede liberada, y así, obtener un mayor porcentaje de cultivos positivos.

Fig. 6.9. Sistema comercial para la lisiscentrifugación.



C. Sistemas de hemocultivos automatizados.

Los sistemas automatizados para hemocultivos, varían de la compañía o fabricante,

pero en si cada fabricante tiene diversas botellas de hemocultivo con un propósito diferente

(botellas para bacterias: aerobias, anaeróbicas, hongos, micobacterias) además estas botellas

poseen resinas que captan diversos antibióticos.

En si la muestra de sangre es tomada directamente a estas botellas especiales (Fig.

6.10), para después cultivarse a 37 grados centígrados. Los resultados pueden ser

interpretados en un sistema computarizado con el apoyo de un software especifico para el

diagnóstico de micobacterias en u periodo de hasta 10 días. (Fig. 6.11).

Fig. 6.10. Botella BACTEC para el diagnostico de M. tuberculosis.

Fig. 6.11. Sistema automatizado BACTEC para el diagnostico de diversas bacterias incluyendo a las micobacterias.



6.1.3. MUESTRAS ESTÉRILES

Las muestras estériles comprenden muestras de: líquido cefalorraquídeo, líquido

sinovial, biopsias y otros líquidos corporales. Para el caso del cultivo microbiológico, este

tipo de muestras no requieren de un tratamiento de descontaminación previo al cultivo. Tan

solo, se centrífuga la muestra a analizar, luego, el sedimento es trasferido al medio de cultivo

apropiado.

6.1.3.1. LÍQUIDO CEFALORRAQIDEO.

• El procedimiento de obtención de este tipo de muestra, solo puede ser llevado acabo por

médicos. Este deberá recolectar de 1 a 3 ml de líquido cefalorraquídeo, sin agregar

anticoagulante, y deberá depositarla en un tubo estéril con tapón de rosca y con capacidad

de 10 a 15 mL. (Fig. 6.12.).

• En el laboratorio, la muestra es centrifugada a 3,000 revoluciones durante 10 minutos.

• El sedimento es sembrado directamente en los medios de cultivo adecuados.

• El procedimiento para el cultivo de muestras líquidas estériles, como líquido pleural o

líquido sinovial es similar al procedimiento descrito para líquido cefalorraquídeo.

Fig. 6.12. Envase hermético con rosca transparente, especial para trasporte



6.1.3.2. BIOPSIAS.

Mycobacterium tuberculosis es una bacteria intracelular facultativa que puede estar

presente en macrófagos de la médula ósea, hígado, sangre y ganglios linfáticos de pacientes

con tuberculosis diseminada. Debido a que las biopsias de tejidos en general no están

contaminadas con otros microorganismos, la muestra puede ser homogenizada e inoculados

directamente al medio de cultivo sin el empleo de una solución descontaminante.

6.1.4. MUESTRAS DE ORINA.

Las muestras de orina, a menudo son utilizadas para el diagnostico de tuberculosis

renal, las indicaciones son la siguientes:

1. Las muestras de orina deben ser recolectadas en un total de 6 muestras.

2. Cada día se recogen 50 a 100 mL de orina, proveniente de la primera micción de la

mañana después de levantarse.

3. Frecuentemente es utilizado un envase estéril de con capacidad de 300 a 500 mL, y de

boca ancha para facilitar la recolección. (Fig. 6.13).

Fig. 6.13. Recipiente para muestras de orina.



4. Se prepara un frotis, y se realiza una tinción para micobactrerias.

5. Al igual que para el procedimiento de muestras de esputo, las muestras de orina son

sometidas a un proceso de descontaminación y centrifugación (véase mas adelante), para

obtener un mejor resultado en el cultivo para micobacterias.

6.1.5. MUESTRAS DE MATERIA FECAL.

Estas muestras frecuentemente son utilizadas para el diagnostico del complejo:

Mycobacterium aviumintracellulare, ya que en pacientes con SIDA su concentración puede

ser lo suficientemente alta en el tracto intestinal inferior para aislarla por cultivo.

• Las muestras de materia fecal deben recogerse en un envase limpio (no

necesariamente estéril) con una tapa de cierre hérmetico, como los envases para

muestras de esputo.

• Se realiza un extendido o frotis de la muestra en un portaobjetos y se tiñe con tinción

para bacterias acidorresistentes para la búsqueda de micobacterias.

• Si los frotis son negativos para bacterias acidorresistentes, la muestra no es procesada

posteriormente.

• Si son observados bacilos acido resistentes en los frotis teñidos, se suspende 1 g de

heces en 5 mL de caldo 7H9 de Middlebrook, y se realiza el procedimiento de



digestión y descontaminación que se describe en el siguiente apartado en esta misma

página.

Tabla. 6.1. Muestras utilizadas par a el diagnostico de tuberculosis, en r elación con el estado de la tuberculosis y si es

r equer ida un procedimiento de descontaminación – centr ifugación pr evio al cultivo.

MUESTRA UTILIZADA FRECUENTEMENTE PARA EL DIAGNOSTICO DE:

PROCEDIMIENTO DESCONTAMINACIÓN CENTRIFUGACIÓN, PREVIO AL CULTIVO

Vías respiratorias. Tuberculosis Pulmonar primaria.

Tuberculosis Pulmonar secundaria

Si

Sangre (hemocultivo). Tuberculosis diseminada por causa del VIH.

Septicemia

Si, en caso de procesar la muestra a una lisis previa al cultivo en medios específicos para micobacterias.

No, en caso de utilizar un sistema automatizado como es el caso del BACTEC .®

Estériles (LCR, Biopsias, etc…). Meningitis por micobacterias

Tuberculosis diseminada

No

Orina. Tuberculosis Renal Si

Materia fecal. Tuberculosis diseminada por causa de Mycobacterium avium intracellulare asociado al virus del VIH

Si



6.2. PREPARACIÓN DE MUESTRAS BIÓLOGICAS PARA CULTIVO

MICROBIÓLOGICO.

Una vez que la muestra fue recolectada, el proceso siguiente es la descontaminación

digestión. Las micobacterias son más resistentes que las demás bacterias de flora normal o

microbiota debido a la alta cantidad de lípidos en su pared celular, por consecuente estas son

más resistentes a las soluciones acidas y alcalinas que normalmente eliminan a las demás

bacterias. De esta manera, es posible utilizar agentes descontainantes o bactericidas que

eliminen a la microbiota normal que las acompañen en la muestra a analizar. El cultivo

microbiológico de las micobacterias se lleva en promedio hasta 3 semanas, por lo que es

importante eliminar la microbiota normal para evitar un sobrecrecimiento de estas y así

obtener un mejor crecimiento el cultivo.

6.2.1. DIGESTIÓN Y DESCONTAMINACIÓN.

Como anteriormente se ha mencionado, una vez obtenida la muestra a analizar y es

considerado el diagnóstico microbiologico por cultivo, se debe de tener en cuenta el proceso

de digestióndescontaminación antes del inoculo en el medio de cultivo.

Las muestras; respiratorias, líquidos de lavado gástrico, heces, orina, tejidos

postmortem., son las muestras mas frecuentemente sometidas al proceso de digestión

descontainación, en especial si estas presentan una consistencia mucosa o que de antemano es

roconozida como una muestra que trae consigo un exceso de microbiota.



Los agentes mas comúnmente utilizado para este proceso son los que a continuación

se describen:

Tabla.6.2. Agentes mas comúnmente utilizados par a le digestióndescontaminación de muestr as.

AGENTE COMENTARIOS NacetilLcisteína más 2 % de NaOH .

Solución de descontaminación leve con una agente mucolítico NALC para liberar las micobacterias atrapadas en el mucus. Límite de exposición al NaOH de 15 minutos.

Ditiotreitol más 2% de NaOH . Agente mucolítico muy efectivo usado con NaOH al 2%. El nombre comercial del ditiotreitol es Sputolysin. El reactivo es más costoso que el NALC. Límite de exposición al NaOH de 15 minutos.

Fosfato tr isódico al 13 % más cloruro de benzalconio (Zephiran).

Preferido por los laboratorios que no pueden controlar cuidadosamente el tiempo de exposición a la solución de descontaminación.

El Zephiran debe ser neutralizado con lecitina y no inoculado a medio de cultivo sobre la base de huevo.

NaOH al 4 % Es la solución tradicional de descontaminación y concentración. El tiempo de exposición debe de ser cuidadosamente controlado a no más de 15 minutos. El NaOH al 4 % ejerce acción mucolítica para promover la concentración para la centrifugación.

Fosfato tr isódico al 13 % Puede ser utilizada para la descontaminación de muestras cuando el tiempo de exposición se puede controlar en forma precisa. No es tan efectivo como la mezcla FTSZephiran.

Ácido oxálico al 5 % Más útil en el procesamiento de muestras que contienen Pseudomona aeruginosa como contaminante.

Cloruro de cetilpir idio al 1% más 2% de NaCl

Efectivo como solución de descontaminación para muestras de esputo enviadas a otros laboratorios. El bacilo tuberculoso ha sobrevivido 8 días de tránsito sin pérdida significativa.

* NacétilLcisteína (NALC). Es el agente más frecuentemente utilizado en los laboratorios

clínicos:



6.2.1.1. Pr incipio de lel NacetilLcisteína más 2 % de NaOH.

Las micobacterias se recuperan de manera óptima a partir de materiales clínicos

cuando se libera de mucina, líquidos corporales y células (digestión). La NacetilLCisteína

(NALC) es un agente mucolítico que en concentraciones del 0,5 al 2% puede digerir con

rapidez el esputo adherente y otras muestras mucoides en el término de 2 minutos. El

crecimiento de las micobacterias en los medios de cultivo también se incrementa cuando la

concentración de microorganismos competidores es mínima (descontaminación). El agregado

de hidróxido de sodio al 4 % (NaOH 4%)a la mezcla de digestión, hasta alcanzar un

concentración final del 2%, es el procedimiento descontaminante utilizado con más

frecuencia.

Fig. 6.14. Alguna casas comerciales de venta de reactivos químicos, venden ya preparada la mezcla de NALC + NaOH 2% para la descontaminación y digestión de muestras clínicas.



6.2.1.2. PROCEDIMIENTO ESTÁNDAR DE DIGESTIÓNDESCONTAMINACIÓN

ESTANDÁR DESARROLLADO POR KUBICA Y COL. EN LOS "CENTERS FOR

DISEASE CONTROL (CDC). "

1. Preparación: Se prepara la sustancia digestiva acetilcisteínaálcali como sigue:

Mezclar 50 mL de citrato trisódico3 H2O al 2,94% (0,1M) con 50 mL de NaOH al

4%. agregar a esta solución 0,5 g de NacetilLcisteína (NALC) en polvo antes de usarla.

El NaOH (el cual se convierte en una solución al 2% después de mezclar partes

iguales con la muestra) sirve como agente descontaminante. En ocasiones la concentración de

NaOH debe ser aumentada al 3% (solución original al 6%), en épocas de calor o en el

tratamiento de muestras provenientes de pacientes con grandes cavidadees pulmonares

asociadas con descontaminación bacteriana persistente. (Fig. 6.15.)



El NALC es un agente mucolítico sin actividad antibactericida que licua el mucus por

clivaje de puentes disulfuro, lo cual libera las micobacterias y hace mas fácil concentrarlas

mediante centrifugación con alta velocidad. (Fig. 6.15).

2. Utilizar tubos de centrífuga de plástico de 50 mL con tapas de cierre hermético para

el procesamiento de todas las muestras. Agregar la mezcla digestiva NALC en un volúmenes

igual al de la muestra. Típicamente se utiliza un volumen de 10 15 mL de muestra. Cerrar

bien fuerte la tapa.

3. Homogenizar la mezcla con un mezclador vortex durante 15 20 minutos, agitando

los tubos periódicamente. Se debe poner adecuada atención al tiempo de digestión, el cual no

Fig. 6.15. Diagrama esquemático, el cual muestra la acción principal de la NácetilLcisteína (NALC) + Hidróxido de sodio al 2 % (NaOH) como agente de digestión y descontaminación en una muestra clínica.



debe de exceder de los 20 minutos, de lo contrario será menor la probabilidad de obtener un

cultivo positivo. (Fig. 6.16).

4. Después del paso de la digestióndescontaminación, agregar buffer fosfato a pH 6,8

(preferentemente hecho con agua estéril) hasta el anillo superior del tubo. Mezclar bien.

*NOTA. El buffer fosfato hace menos probable las desviaciones bruscas de pH y también

sirve para lavar la muestra, para diluir y neutralizar las sustancias tóxicas y para reducir la

densidad de la muestra de modo que la centrifugación sea más efectiva para la sedimentación

de los microorganismos.

5. Concentrar las muestras por centrifugación a 2.000 3.000 revoluciones durante 15

20 minutos. Puede utilizarse una centrífuga refrigerada a velocidades más altas para aumentar

más la cantidad de micobacterias.

6. Después de la centrifugación, decantar todo el sobrenadante cuidadosamente en un

recipiente a prueba de salpicaduras que contenga un desinfectante fenólico. Limpiar la boca

del tubo con una torunda de algodón embebida con fenol al 5 %. Agregar una pequeña

cantidad de bufferfosfato pH 6,8 (1 2mL) y resuspender el sedimento con una pipeta

Fig. 6.16. Agitador Mezclador comercial vortex.



Pasteur. A pesar de que en el pasado se aconsejaba el agregado de una pequeña cantidad de

albúmina sérica, esto ahora se evita por que aumenta las posibilidades de contaminación y

constituye un retraso potencial en el tiempo de detección.

7. En este ultimo paso, el sedimento es trasferido en una cantidad de 0,2 a 0,4 mL del

concentrado a los medios de cultivo seleccionados. Además se preparan tres frotis para

tinción y búsqueda de bacilos acidorresistentes.

* NOTA. La baciloscopía realizada en este paso se realiza con el fin de confirmar positiva la

presencia de micobacterias en la muestra mas no interpretar los resultados como un grado o

estado de la enfermedad, interpretación que si es realizada en una baciloscopia común en

esputo.



6.2.2. CENTRIFUGACIÓN.

Una buena centrifugación es pieza clave para obtener mayor cantidad de micobacterias

en el sedimento.

Como ya se ha descrito anteriormente, las micobacterias poseen gran cantidad de

lípidos en su pared celular. El lípido tiene el efecto de que el microorganismo tenga muy baja

densidad. Si se pretende que sedimente la mayor cantidad de microorganismos durante la

centrifugación, la densidad del líquido en el que se suspende la muestra debe ser mantenida

tan baja como sea posible, y la fuerza de centrifugación aplicada a la muestra debe ser tan alta

como sea práctico.

En si, la fuerza de centrifugación a la que se debe someter las muestras para el

aislamiento de micobacterias, debe de ser a una fuerza de 3.000 g promedio. A esta fuerza de

centrifugación o una mayor, los tubos de vidrio o de plástico pueden colapsarse y deben ser

colocados en cubetas precintadas. Asimismo a altas velocidades se genera un calor

considerable y suelen requerirse centrifugas refrigeradas. (Fig. 6.17).

Fig. 6.17. Centrifuga comercial con refrigeración abordo.



6.3. CONSERVACIÓN, TRANSPORTE Y RECEPCIÓN DE MUESTRAS.

6.3.1. CONSERVACIÓN Y TRASPORTE.

El objetivo principal de transportar una muestra a otro laboratorio, es conservarla en

buen estado hasta su destino. Para ello, son utilizados diversos recipientes de distintos

materiales, conservadores y refrigerantes dependiendo del tipo de la muestra.

Especificaciones:

• Se deben utilizar cajas metálicas o de madera para la conservación durante el trasporte de

las muestras biológicas. (Fig. 6.18)

• Utilizar un material de empaque, el cual ayude a que la muestra y el recipiente no de

deteriore por el movimiento del trasporte.

• Si la muestra enviada requiere de refrigeración, colocar en el recipiente una bolsa

congelante para que la muestra se conserve a temperatura constante durante el trasporte.

Fig. 6.18. Esquematización ideal de un recipiente adecuado para el trasporte de muestras biológicas.



Para controlar las perfectas condiciones de la muestra durante su trasporte, deben de

evitarse las condiciones adversas:

• Exposición a temperaturas extremas de calor o frió.

• Los cambios bruscos de presión (durante un trasporte aéreo).

• Secado excesivo.

• Si existe un retraso excesivo en el trasporte de la muestra, es recomendable refrigerar

la muestra a 4 grados centígrados.

Es importante que la muestra este acompañada de una solicitud correspondiente al examen

solicitado. (Fig. 6.19).

Fig. 6.19. Ejemplo de una solicitud para el trasporte de una muestra biológica de Mycobacterium tuberculosis.



6.3.1. RECEPCIÓN.

En caso de que el laboratorio reciba la muestra, antes de procesarla, se deben vigilar las

siguientes anotaciones:

1. Se comprueba la rotulación de las muestras y que la información requerida por el

laboratorio receptor este debidamente colocada en el recipiente de la muestra.

2. Se evalúa la cantidad y calidad de la muestra enviada.

3. Se evalúa el tiempo trascurrido después de enviada la muestra hasta su llegada.

4. Si ocurrió un derrame durante el trasporte de la muestra, es común utilizar fenol al 5%

para su limpieza, y en caso de que el derrame sea excesivo, la muestra es desechada

por incineración o esterilización en autoclave

5. Todas los datos anteriores deben de ser reportados y guardados en los archivos

internos del laboratorio clínico.

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