UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS ... · Diversas enfermedades humanas están...
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO “PREVALENCIA DE IgE SÉRICA TOTAL COMO MARCADOR DE HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1 EN ESCOLARES DE LA PARROQUIA DE SAN RAFAEL, MEDIANTE LA TECNICA DE ELISA REALIZADA EN EL LABORATORIO DE GENÉTICA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS” Trabajo previo a la obtención del Título de Licenciado en Laboratorio Clínico e Histotecnológico AUTOR: Cisneros Guerrero Jeffer Alexander TUTOR: Dr. Carlos Vladimir Torres Serrano Quito, octubre 2015
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO
“PREVALENCIA DE IgE SÉRICA TOTAL COMO MARCADOR DE
HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1 EN ESCOLARES DE LA PARROQUIA DE SAN
RAFAEL, MEDIANTE LA TECNICA DE ELISA REALIZADA EN EL
LABORATORIO DE GENÉTICA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS”
Trabajo previo a la obtención del Título de Licenciado
en Laboratorio Clínico e Histotecnológico
AUTOR: Cisneros Guerrero Jeffer Alexander
TUTOR: Dr. Carlos Vladimir Torres Serrano
Quito, octubre 2015
ii
DEDICATORIA
Este trabajo lo dedico primeramente a mi padre quien me ha educado y guiado en la vida para ser una persona correcta, dándome apoyo, guía y consejo para esforzarme hasta cumplir mis metas y por su amor incondicional en el transcurso de toda mi vida.
También está dedicado a mi familia y a todas las personas que me han ayudado en mi formación profesional y humana, a todos ellos dedico este trabajo con cariño y un muy grande aprecio.
Cisneros Guerrero Jeffer Alexander
iii
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Dios por darme la vida, por su amor perfecto y constante en mi existencia y ser mi fortaleza siempre.
Agradezco a mi familia que siempre me apoyo dándome valores y educación que siempre estarán en mi persona y son la base de lo que soy y llegare a ser.
Le agradezco también al Dr Carlos Torres, profesor y tutor de mi proyecto investigativo por brindarme de sus conocimientos y su apoyo en el área académica científica.
Cisneros Guerrero Jeffer Alexander
iv
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, Jeffer Alexander Cisneros Guerrero en calidad de autor del trabajo de tesis realizado
sobre “Prevalencia de IgE sérica total como marcador de hipersensibilidad tipo 1 en escolares
de la parroquia de San Rafael, mediante la técnica de ELISA realizada en el laboratorio de
genética de la facultad de ciencias médicas”, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD
CENTRAL DEL ECUADOR hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o de la
parte que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,
seguirá vigente a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y
demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
Quito, 20 de Octubre del 2015
Jeffer Alexander Cisneros Guerrero
CI:0401601190
Telt:5111380
E-mail: [email protected]
v
Quito, 27 de Octubre del 2015
APROBACIÓN POR PARTE DEL TUTOR DE TESIS
En calidad de Tutor del Trabajo de Fin de Carrera, realizado por el señor Jeffer Alexander
Cisneros Guerrero, con cédula de identidad 040160119-0, cuyo tema es “Prevalencia de IgE
serica total como marcador de hipersensibilidad tipo 1 en escolares de la parroquia de San
Rafael, mediante la tecnica de ELISA año 2015”, dejo en constancia que el mismo ha sido
orientado y revisado durante su ejecución y cumple tanto en el aspecto de forma como de
contenido, por tanto se aprueba su presentación para el tramite respectivo.
Atentamente
Doc. Carlos Vñladimir Torres Serrano TUTOR DEL TFC
vi
ÍNDICE
Contenido Págs.
DEDICATORIA .................................................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTOS ........................................................................................................................ iii
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL .......................................................................iv
APROBACIÓN POR PARTE DEL TUTOR DE TESIS ........................................................................ v
ÍNDICE ..................................................................................................................................................vi
ÍNDICE DE ANEXOS ...........................................................................................................................ix
ÍNDICE DE GRAFICOS .......................................................................................................................xi
ÍNDICE DE TABLAS ............................................................................................................................ x
RESUMEN .......................................................................................................................................... xii
ABSTRACT ........................................................................................................................................ xiii
CAPITULO I .......................................................................................................................................... 1
EL PROBLEMA ..................................................................................................................................... 1
1.1 UBICACIÓN .................................................................................................................................... 1
1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA .............................................................................................. 3
1.3 OBJETIVOS ..................................................................................................................................... 4
1.3.1 Objetivo General ........................................................................................................................ 4
1.3.2 Objetivos Específicos .................................................................................................................. 4
1.4 JUSTIFICACIÓN ............................................................................................................................. 4
CAPITULO II ......................................................................................................................................... 6
MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................ 6
2.1 MARCO LEGAL .............................................................................................................................. 6
Constitución de la República del Ecuador ........................................................................................... 6
Leyes de la Universidad Central del Ecuador ....................................................................................... 7
Misión: ................................................................................................................................................ 8
Visión: ................................................................................................................................................. 8
2.2 INMUNOGLOBULINA E ................................................................................................................ 9
2.2.1 Definición ................................................................................................................................... 9
vii
2.2.2 Estructura ................................................................................................................................. 10
2.2.3 Función ..................................................................................................................................... 11
2.2.4 IgE relacionada con procesos Alérgicos .................................................................................... 12
2.2.5 diagnóstico de laboratorio ....................................................................................................... 14
2.2.6 valores normales ...................................................................................................................... 15
2.3 HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1 ..................................................................................................... 16
2.3.1 Naturaleza de los alérgenos ..................................................................................................... 16
2.3.2 Síntesis de IgE ........................................................................................................................... 20
2.3.3 Unión de la IgE a mastocitos y basófilos ................................................................................... 21
2.3.4 Reacción inmediata y fase tardía .............................................................................................. 24
2.3.5 Manifestaciones clínicas y patogenia ....................................................................................... 27
2.3.6 Epidemiologia ........................................................................................................................... 28
2.3.6.1 Epidemiologia Mundial ..................................................................................................... 29
2.3.6.2 Epidemiologia Regional .................................................................................................... 29
2.4 TÉCNICA DE ELISA ..................................................................................................................... 31
2.4.1 Reacción Antígeno – Anticuerpo .............................................................................................. 31
2.4.2 Fundamento ............................................................................................................................. 32
2.4.3 Tipos de Elisa ............................................................................................................................ 33
2.4.3.1 ELISA indirecto ................................................................................................................ 33
2.4.3.2 ELISA Directo ................................................................................................................... 34
2.4.3.3 ELISA Sándwich ............................................................................................................... 35
2.4.3.4 ELISA por competición ..................................................................................................... 36
2.5 VARIABLES Y SU OPERACIONALIZACÍON ............................................................................ 38
CAPÍTULO III ...................................................................................................................................... 40
METODOLOGÍA ................................................................................................................................. 40
3.1 TIPO DE ESTUDIO........................................................................................................................ 40
3.2 NIVEL DE INVESTIGACIÓN ....................................................................................................... 40
3.3 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN ............................................................. 40
3.4 UNIVERSO Y MUESTRA ............................................................................................................. 41
3.4.1 Universo ................................................................................................................................... 41
3.4.2 Muestreo .................................................................................................................................. 41
3.4.3 Fórmula de cálculo ................................................................................................................... 41
viii
3.4.4 Criterios de inclusión ................................................................................................................ 42
3.4.5 Criterios de exclusión ............................................................................................................... 42
3.5 TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS ................................................ 42
3.5.1 Instrumentos ............................................................................................................................ 42
3.5.2 Métodos ................................................................................................................................... 43
3.5.3 Manejo del equipo Elisys uno para la determinación de IgE total ............................................ 43
3.5.4 Procedimiento .......................................................................................................................... 43
3.6 TIPOS DE ANÁLISIS .................................................................................................................... 45
3.7 CONSIDERACIONES ÉTICAS ..................................................................................................... 45
CAPÍTULO IV ...................................................................................................................................... 46
4.1 RESULTADOS ............................................................................................................................... 46
4.2 DISCUSIÓN ................................................................................................................................... 55
4.3 CONCLUSIONES .......................................................................................................................... 57
4.4 RECOMENDACIONES ................................................................................................................. 58
CAPÍTULO V ....................................................................................................................................... 59
LA PROPUESTA ................................................................................................................................. 59
5.1 TITULO ......................................................................................................................................... 59
“IgE COMO MARCADOR DE HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1” .................................................................. 59
5.2 JUSTIFICACIÓN............................................................................................................................. 59
5.3 BENEFICIOS .................................................................................................................................. 59
5.4 OBJETIVO ..................................................................................................................................... 59
5.5 DESARROLLO ............................................................................................................................... 59
BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................................. 62
ANEXOS .............................................................................................................................................. 67
ix
ÍNDICE DE ANEXOS
Contenido Págs.
Anexo 1. Encuesta y formulario de consentimiento informado……………………………………………………….69
Anexo 2. Cronograma de actividades…………………………………………………………………………………………….…70
Anexo 3. Equipo ELISYS UNO……………………………………………………………………………………………………..….…71
Anexo 4. Procesamiento de Muestras……………………………………………………………………………………………..71
Anexo 5. Reactivos para ELISA marca Accu-Bind………………………………………………………………………….….71
x
ÍNDICE DE TABLAS
Contenido Págs.
Tabla 1. Niveles de IgE según la edad ................................................................................................... 14
Tabla 2. Valores de IgE según el método utilizado ELISA ................................................................... 16
Tabla 3 . Distribuciòn de niños que participaron en el estudio - Según nivel IgE ................................. 46
Tabla 4. Distribución de niños que participaron en el estudio según la presencia de signos alergicos .. 47
Tabla 5. Distribuciòn de niños que participaron en el estudio según el sexo ......................................... 48
Tabla 6. Distribuciòn de niños que participaron en el estudio con IgE alta - tabla según el sexo .......... 48
Tabla 8. Distribución de niños que participaron en el estudio y presentaron niveles altos de IgE
según la edad ......................................................................................................................................... 49
Tabla 9. Distribución según el diagnostico previo de alergias ............................................................... 50
Tabla 10. Distribución de niños según nivel IgE y el diagnostico previo de alergias ............................ 51
Tabla 11. Distribución de niños con IgE elevada según su posible causa de alergia ............................. 52
Tabla 12. Distribución de niños con ige elevada respecto a los antecedentes familiares de alergia ....... 53
Tabla 13. Distribución de niños según nivel IgE y la presencia de signos alergicos ............................. 54
Tabla 14. Distribución de niños según nivel IgE y sexo ........................................................................ 54
xi
ÍNDICE DE GRAFICOS
Contenido Págs.
Ilustración 1. Estructura de la IgE ......................................................................................................... 11
Ilustración 2. Proceso Inmunológico de la Hipersensibilidad tipo 1 ...................................................... 22
Ilustración 3. Distribucion de niños que participaron en el estudio según nivel de IgE ......................... 46
Ilustración 4. Distribución de niños que participaron en el estudio según la presencia de signos
alergicos ................................................................................................................................................ 47
Ilustración 5. Distribuciòn de niños que participaron en el estudio con IgE alta según el sexo ............. 49
Ilustración 6. Distribución según el diagnostico previo de alergias ....................................................... 51
Ilustración 7. Distribución de niños con IgE elevada según su posible causa de alergia ....................... 52
Ilustración 8. Distribución de niños con ige elevada respecto a los antecedentes familiares
de alergia ............................................................................................................................................... 53
xii
TEMA: “Prevalencia de IgE sèrica total como marcador de hipersensibilidad tipo 1 en
escolares de la parroquia de San Rafael, mediante la tecnica de ELISA realizada en el
laboratorio de genètica de la facultad de ciencias mèdicas”
Autor: Cisneros Guerrero Jeffer Alexander
Tutor: Dr. Carlos Vladimir Torres Serrano
RESUMEN
La Hipersensibilidad tipo 1 es una alteración del sistema inmunitario que ha aumentado
ampliamente en las últimas décadas y la Organización Mundial de la Salud (OMS) le
considera como una preocupación médica y epidemiológica, se la conoce también como
hipersensibilidad inmediata debido a su aparición en los pocos minutos después del contacto
con el antígeno, en la práctica clínica estas reacciones se denominan alergia o atopía afectando
a más del 30% de la población. Mediante este estudio se determinó los valores de IgE sérica
total mediante ELISA en escolares de ambos sexos de la parroquia de San Rafael en el Cantón
Rumiñahui, estos niños comprenden una edad entre 6 y 12 años de edad.
Se encontró una tasa de prevalencia de 51.88 casos positivos por cada 1.000 niños escolares
entre 6 y 12 años de edad, como resultado de este estudio el 67% de los niños presentan
valores superiores a lo normal y el 33% están dentro del rango normal. Lo cual concuerda con
el 61,2 % que tienen antecedentes familiares de alergias y con el 67% que presentó
sintomatología alérgica.
PALABRAS CLAVES: ATOPÍA/ HIPERSENSIBILIDAD/ ALERGIA/
INMUNOGLOBULINA E / REACCIÓN INMUNE/ ALÉRGENO
xiii
TITLE: “Prevalence of total serum IgE as a marker of type 1 hypersensitivity in
schoolchildren from the parish of San Rafael, by ELISA performed in the laboratory of
genetics at the school of medical sciences”
Author: Cisneros Guerrero Jeffer Alexander
Tutor: Dr. Carlos Vladimir Torres Serrano
ABSTRACT
The Type 1 hypersensitivity is a condition that has vastly increased in recent decades and
WHO regards it as medical and epidemiological concerns, it is also known as immediate
hypersensitivity due to its appearance in the few minutes after contact with the antigen,
clinical practice these reactions are known allergy or atopy affecting more than 20% of the
population. Through this study the values of total serum IgE was determined by ELISA in
school and boys from the parish of San Rafael in Canton Rumiñahui, between 6 and 12 years
old.
A prevalence of 51.88 positive cases per 1,000 school children between 6 and 12 years old
found, It was found that 67% of children have higher than normal values and 33% are within
the normal range. Which is consistent with the 61.2% who have a family history of allergies
and the 67% who presented allergic symptoms.
KEYWORDS: ATOPY/ HYPERSENSITIVITY/ ALLERGY/ IMMUNOGLOBULIN E/
IMMUNE REACTION/ ALLERGEN.
I CERTIFY that the above and foregoing is a true and correct translation of the original document in Spanish. ________________________ Raul Isaicas Caza Pantusina Certified Translator ID: 1716488556
1
CAPITULO I
EL PROBLEMA
1.1 INTRODUCCION
Diversas enfermedades humanas están producidas por respuestas inmunitarias a antígenos
ambientales que dan lugar a la activación de la hipersensibilidad tipo 1 y la síntesis de
anticuerpos IgE los que actúan sobre los mastocitos y basófilos liberando mediadores
vasoactivos e inflamatorios que causan la sintomatología alérgica. (Abbas, 2008)
La Organización Mundial de la Alergia (WAO) ha publicado un informe en el que se alerta
sobre el aumento de las enfermedades alérgicas en todo el mundo. En esa comunicación se
enfatiza que en las últimas décadas su prevalencia ha aumentado de forma considerable y se
sugiere que las enfermedades alérgicas serán un problema importante en el siglo XXI. (World
Allergy Organization, 2015). Se prevé que la tendencia empeorará a medida que trascurra el
siglo. Actualmente las enfermedades alérgicas son uno de los motivos de consulta más
frecuentes tanto en la atención primaria como especializada. (Rojas Espinoza, 2006)
Alrededor del 30-40% de la población mundial está afectada por una o más enfermedades
relacionadas con hipersensibilidad tipo 1 (alérgicas). (Vennera & Picado , 2012)
Rogala en su estudio realizado a 141 pacientes mostro una prevalencia de un 45.3% de
pacientes con niveles altos de IgE total. (Rogala & Bozek, 2015). Otro estudio dirigido por los
laboratorios Bago tomo una muestra de 116 niños alérgicos para mostrar la sensibilidad de la
IgE total encontrando datos clínicos confirmatorios de alergia en el 90% de estos y entre el 70-
90% de tienen elevación de la IgE demostrando así la utilidad de esta prueba. (Laboratorios
2
Bago, 2003) En otro estudio realizado en nuestro país en la ciudad de Cuenca a 182 niños se
obtuvo una prevalencia del 58% con niveles elevados de IgE total. (Idrovo, Sapatanga, &
Solano, 2013) Las inmunoglobulinas (Igs) son proteínas producidas por los linfocitos B y son
las mediadoras del componente humoral de la reacción inmunitaria. La inmunoglobulina E
(IgE) fue descubierta en 1967 y reconocida como un mediador fundamental en la
hipersensibilidad tipo 1 además que interviene en otras reacciones inmunológicas y en contra
de agentes patógenos parasitarios entre otras causas de menor frecuencia, por lo cual no se
identifica como una Inmunoglobulina que se restringe a hipersensibilidad tipo 1 sino que
también interviene en otras reacciones inmunes. (Vennera & Picado, 2012)
Los niveles de IgE muestran un aumento mínimo durante la niñez, alcanzando niveles adultos
durante la segunda década de vida. En general, los niveles totales de IgE aumentan con las
alergias que presentan una persona y el número de veces que está expuesta a los alergénicos
relevantes por lo cual es usada como marcador alérgico en primera línea. Un aumento más
significativo puede verse en individuos sensibilizados, pero también en casos de mieloma,
aspergilosis pulmonar, cirrosis hepática y durante las etapas activas de infecciones
parasitarias. (Monobind Inc., 2015)
La unión alergeno IgE induce la liberación de mediadores que inicia un proceso inflamatorio
localizado, como urticaria, conjuntivitis, rinitis, asma o generalizado como choque
anafiláctico. La prevalencia de las enfermedades alérgicas va en aumento importante en todo
el mundo tanto en los países desarrollados como en los países en desarrollo. Este aumento es
especialmente importante en los niños, en quienes se observa la mayor tendencia de aumento
en las últimas dos décadas. (Pawankar, 2011)
Debido a que la prevalencia de las alergias ha aumentado, se debe de considerar como un
principal problema de salud. Según las estadísticas de la organización Mundial de la Salud
3
(OMS), se estima que 300 millones de personas tienen problemas alérgicos, enfermedades que
afectan notablemente la calidad de vida de estos individuos y de sus familias, y que además
generan un impacto negativo en el bienestar socio-económico. Se ha demostrado que la
inmunoglobulina E (IgE) ocupa un lugar fundamental en la patogenia de la enfermedad
alérgica y en otras en las que el mecanismo responsable aún no se conoce bien. (Pawankar,
Canonica, & Holgate, 2011) En la hipersensibilidad de tipo I la reacción depende de la
producción de IgE contra los alérgenos y la activación de los mastocitos sensibilizados con
IgE reactiva frente a estos alérgenos. Este tipo de reacción es prácticamente inmediata,
desarrollándose la respuesta en segundos o minutos. La mayor parte de la IgE se encuentra
unida a la superficie de los mastocitos, eosinófilos y basófilos. (Idrovo, Sapatanga, & Solano,
2013) La Organización Mundial de la Salud (OMS) acepta como enfermedades alérgicas las
siguientes: rinitis, sinusitis, asma, neumonitis por hipersensibilidad, conjuntivitis, urticaria,
eczema, dermatitis de contacto, choque anafiláctico y algunos trastornos gastrointestinales
mediados por IgE. (Organización Mundial de la Salud, 2014)
Los pacientes con una enfermedad alérgica tienen una concentración de IgE sérica total hasta
45 veces mayor que los niños sanos y el 85% tienen un nivel de IgE que excede el valor medio
para la edad. (Muños & Lopez , 2004)
1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Cuál es el nivel de IgE caracterizado como marcador de hipersensibilidad tipo 1 en escolares
de la parroquia San Rafael del Valle de los Chillos, medida con la técnica de ELISA en el año
2015?
4
1.3 OBJETIVOS
1.3.1 Objetivo General
Determinar la tasa de prevalencia de anticuerpos IgE total como marcador de hipersensibilidad
tipo 1 acorde a los antecedentes familiares y sintomatología en niños escolares de la parroquia
San Rafael mediante ELISA año 2015.
1.3.2 Objetivos Específicos
Determinar la prevalencia de niños con niveles elevados de IgE en la parroquia de San
Rafael.
Determinar el número de escolares con relación a los niveles de IgE y el sexo en la
parroquia San Rafael.
Estudiar antecedentes y sintomatología de alergias en niños escolares en la parroquia San
Rafael.
1.4 JUSTIFICACIÓN
Consideradas como las “epidemias del siglo XXI”, En el mundo aproximadamente una de
cada ocho personas sufre algún tipo de reacción alérgica que puede desde reducir la calidad de
vida, hasta poner en serio riesgo la salud general de una persona. (Organización Mundial de la
Salud, 2014) El origen de las alteraciones de la hipersensibilidad tipo 1 es múltiple a tal nivel
que puede desde estar perfectamente identificado el causante (el alérgeno) hasta ser totalmente
desconocido la causa y exige un estudio completo para determinarlo. (Organización Mundial
de la Salud, 2012)
5
Aunque la cuantificación de IgE total no es diagnóstico de un proceso alérgico es la
inmunoglobulina clave en el desarrollo de la hipersensibilidad tipo 1 ya que sus niveles en
suero sanguíneo se elevan en gran medida en los individuos atópicos en comparación con otras
patologías como parasitosis y problemas hepáticos en los que sus aumentos son leves.
(Monobind Inc., 2015) La IgE total es útil para confirmar la sensibilización a alérgenos
inhalantes comunes. IgE total elevada puede indicar una alta probabilidad de sensibilización y
puede ser útil para decidir si una investigación adicional se justifica en pacientes con pruebas
de alergia específicos negativos a un panel de alérgenos inhalados comunes. (Kerkhof ,
Dubois , & Postma , 2013) Una elevada de IgE total tiene un alto valor predictivo positivo
para la identificación in vitro de IgE específica en el diagnóstico de alergias el nivel de IgE
total tiene un alto valor predictivo negativo en el rango más bajo, lo que sugiere que las
pruebas de IgE específica no puede estar justificada en aquellos pacientes con baja IgE totales
(<10 UI / ml). (Chung & Park, 2012) El laboratorio clínico a través de la determinación de IgE
sérica total en la sangre contribuye al diagnóstico de las alergias, considerando que estudios
realizados en otros países demuestran en los niños alérgicos un aumento de la IgE sobre todo
en la niñez, razón por la cual la población en estudio serán los escolares. (Idrovo, Sapatanga,
& Solano, 2013) El diagnóstico oportuno de problemas alérgicos permitirá mejorar la calidad
de vida de la población escolar de la parroquia de San Rafael en el Valle de los Chillos.
Por medio de la técnica de micro ELISA se dará a conocer los niveles de anticuerpos IgE de
estos niños en edad escolar, así con esta investigación se dará un aporte tanto formativo como
científico para los estudiantes de la Carrera de Laboratorio Clínico, un aporte social a la
comunidad de San Rafael, y se expondrá datos científicos para los docentes de la Facultad de
Medicina, al dar a conocer la prevalencia de IgE y el estado de hipersensibilidad tipo 1 en esta
muestra de niños.
6
CAPITULO II
MARCO TEÓRICO
2.1 MARCO LEGAL
El desarrollo del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera, se halla sustentado por las leyes
Ecuatorianas las cuales promueven el desarrollo de la investigación y la adquisición de nuevos
conocimientos. Además, como parte de su función, el Estado asegura el bienestar de sus
pobladores, de tal manera que contempla en sus leyes el incentivo a la promoción de nuevos
conocimientos en beneficio de aquellos.
Constitución de la República del Ecuador
Art. 343: El sistema nacional de educación tendrá como finalidad el desarrollo de capacidades
y potencialidades individuales y colectivas de la población, que posibiliten el aprendizaje, y la
generación y utilización de conocimientos, técnicas, saberes, artes y cultura. El sistema tendrá
como centro al sujeto que aprende, y funcionará de manera flexible y dinámica, incluyente,
eficaz y eficiente. (Constitución de la Republica del Ecuador, 2008)
Art. 350: El sistema de educación superior tiene como finalidad la formación académica y
profesional con visión científica y humanista; la investigación científica y tecnológica; la
innovación, promoción, desarrollo y difusión de los saberes y las culturas; la construcción de
soluciones para los problemas del país, en relación con los objetivos del régimen de desarrollo.
(Constitución de la Republica del Ecuador, 2008)
7
Art 360: El sistema garantizará, a través de las instituciones que lo conforman, la promoción
de la salud, prevención y atención integral, familiar y comunitaria, con base en la atención
primaria de salud; articulará los diferentes niveles de atención; y promoverá la
complementariedad con las medicinas ancestrales y alternativas. (Constitución de la Republica
del Ecuador, 2008)
Art. 385: El sistema nacional de ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales, en el
marco del respeto al ambiente, la naturaleza, la vida, las culturas y la soberanía, tendrá como
finalidad: 1. Generar, adaptar y difundir conocimientos científicos y tecnológicos. 2.
Recuperar, fortalecer y potenciar los saberes ancestrales. 3. Desarrollar tecnologías e
innovaciones que impulsen la producción nacional, eleven la eficiencia y productividad,
mejoren la calidad de vida y contribuyan a la realización del buen vivir. (Constitución de la
Republica del Ecuador, 2008)
Leyes de la Universidad Central del Ecuador
El estatuto de la Universidad Central del Ecuador también contempla y ampara la realización
del Proyecto de Investigación de Fin de Carrera, como medio para fomentar la investigación
científica y como requisito para la obtención del título al que aspira el estudiante al finalizar la
carrera. (Universidad Central del Ecuador, 2015)
La Ley Orgánica de Educación Superior establece como Derechos de las y los estudiantes,
acceder, movilizarse, permanecer, egresar y titularse sin discriminación conforme sus méritos
académicos
Art. 212: El trabajo de graduación o titulación constituye un requisito obligatorio para la
obtención del título o grado para cualquiera de los niveles de formación. Dichos trabajos
8
pueden ser estructurados de manera independiente o como consecuencia de un seminario de
fin de carrera. Para la obtención del grado académico de licenciado o del título profesional
universitario de pre o posgrado, el estudiante debe realizar y defender un proyecto de
investigación conducente a una propuesta que resolverá un problema o situación práctica, con
característica de viabilidad, rentabilidad y originalidad en los aspectos de aplicación, recursos,
tiempos y resultados esperados. (Universidad Central del Ecuador, 2015)
Facultad de Ciencias Médicas - Laboratorio de Genética
Misión:
La Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Central del Ecuador, forma profesionales
críticos de nivel superior en el campo de la salud con competencias éticas, humanistas,
técnicas, científicas y en investigación, caracterizadas por la excelencia, comprometidas con la
verdad, la probidad, la justicia y solidaridad. Crea y difunde el conocimiento científico-
tecnológico y participa en la solución de los problemas relacionados con la salud individual y
colectiva.
Visión:
La Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Central del Ecuador, continuará con el
liderazgo en la formación de profesionales en ciencias de la salud, en la gestión de procesos y
en la generación de nuevos conocimientos, con la participación efectiva del talento humano, la
utilización del método científico y de modelos educativos y tecnología apropiados. Tendrá una
vinculación eficaz con la comunidad, será pionera en la formación de profesionales
comprometidos con el respeto y la defensa de los derechos humanos y la transformación de la
salud de la población.
9
2.2 INMUNOGLOBULINA E
2.2.1 Definición
La inmunoglobulina E (IgE) es una proteína anticuerpo, constituye uno de los cinco tipos de
anticuerpos, que se hallan en el cuerpo humano junto con la IgG, IgA, IgM, e IgD. La IgE es
el principal mediador de la hipersensibilidad tipo 1 y actúa además frente a parásitos. (Rojas,
2012) Los anticuerpos IgE se encuentran principalmente en los pulmones, la piel y las
membranas mucosas y son los responsables de la sensibilización de los mastocitos y del
reconocimiento de los antígenos en las reacciones de hipersensibilidad inmediata. (Abbas,
Lichtman, & Pillai, 2008)
Se sabe que la IgE es esencial en las reacciones alérgicas como anafilaxia, rinitis alérgica,
asma y dermatitis atópica. Se han identificado para la IgE receptores de alta (FcERI) y baja
afinidad (FcERII). En el hombre, el FCRI, el clásico receptor tetramérico, se expresa en forma
constitutiva en células efectoras de anafilaxia, mastocitos y basófilos. La forma trimérica del
mismo se expresa de modo variable en células presentadoras de antígenos como monocitos,
células de Langerhans y células dendríticas periféricas. La cadena alfa del receptor es
responsable de la unión a la IgE, la cadena beta aumenta la estabilidad de la unión y la
señalización; mientras que el dímero de cadenas gamma, compartido por otros receptores para
el fragmento Fc de inmunoglobulinas, tiene secuencias de activación basadas en tirosina
(ITAM) que participan en la conducción de la señal al interior de la célula.
La unión del antígeno a la IgE unida al receptor origina su agregación y provoca la activación
de la célula, con liberación de mediadores inflamatorios y sustancias vasodilatadoras. La
activación de los eosinófilos a través del FcERI se asocia con una función protectora en
infecciones parasitarias. La IgE que interactúa con el FcERII interviene en la presentación de
10
antígenos y citotoxicidad celular y en la regulación de su propia producción. ( Laboratorios
Bago, 2002)
2.2.2 Estructura
La IgE es una glicoproteína de aproximadamente 190 kDa y su concentración en suero es de
0.05ug/ml. (Roitt, Delves, Martin, & Burton, 2008).
La IgE está compuesta en su mayor parte por proteína y en una pequeña proporción por
carbohidrato. Consta de 4 cadenas de aminoácidos, 2 son llamadas cortas o livianas (Cadenas
L) y las otras 2 son largas o pesadas (Cadenas H ).
Las cadenas livianas, de acuerdo con su constitución particular, pueden tener 2 variantes que
se han llamado kappa (K) o Lambda (L) pero hay que aclarar que en una sola molécula de IgE
siempre serán iguales las 2 cadenas livianas, es decir, tendrá las 2 livianas del tipo K o las 2
del tipo L, más nunca puede haber en una misma molécula 1 K y 1 L. Las cadenas pesadas por
su parte son también iguales entre sí y de acuerdo con su constitución son de la variedad
conocida como epsilon (E), diferentes a las otras 4 variantes de cadena pesada que son la
Gamma (G), Alpha (A), Mu (M) y Delta (D). (Abbas, Lichtman, & Pillai, 2008)
Tanto las cadenas livianas como las pesadas están formadas por segmentos de
aproximadamente 110 aminoácidos a los que se llaman dominios los mismos que están unidos
entre sí de modo covalente por puentes o uniones disulfuro. En la IgE existen 2 dominios en
cada cadena liviana y 5 dominios en cada cadena pesada. Al igual que como ocurre en los
otros tipos de inmunoglobulinas, en las cadenas livianas y pesadas hay dominios llamados
constantes (porque los aminoácidos que los componen mantienen siempre la misma
11
secuencia) y dominios variables (porque la secuencia de sus aminoácidos varia de una
molécula a otra) que son los que por su variabilidad de secuencia determinan la especificidad
para el antígeno. La nomenclatura de los dominios depende de la característica descrita, así en
la cadena liviana hay un dominio constante (CL) y un dominio variable (VL) mientras que en
la pesada hay 4 dominios constantes (CH1, CH2, CH3 y CH4) y 1 variable (VH). (Madero
Izaguirre, 2008)
Ilustración 1. Estructura de la IgE
Fuente: (Calvo, Cabrera , & Ramirez , 2009)
2.2.3 Función
La mayor parte de la IgE se encuentra ligada a FcεRI en la superficie de los mastocitos,
eosinófilos y basófilos. El reconocimiento de un antígeno por la IgE desencadena complejas
reacciones inmunitarias, entre las que pueden destacarse, por ejemplo, la desgranulación de los
mastocitos, que liberan sustancias vasoactivas como la histamina, así como la intervención de
los eosinófilos en la respuesta inflamatoria. (Roitt, Delves, Martin, & Burton, 2008)
En las condiciones de defensa normal, la IgE sirve de puente de unión entre el parasito y los
eosinófilos. Por otra parte, su reacción con los linfocitos T supresores ayuda a modular la
12
respuesta inmune y evita que la producción de IgE sea excesiva. Su función en procesos de
inflamación es muy importante como inductora de la degranulación de los mastocitos.
Cumple, además, una función importante en el control de las enfermedades parasitarias, bien
sea por el mecanismo de incrementar una inflamación local que facilita la expulsión mecánica
del parasito, o por tener efecto opsonizante sobre el parasito.
La producción de IgE específica de antígenos no patogénicos, como los encontrados en
fármacos, alimentos, y alérgenos estacionales, puede provocar reacciones alérgicas. La
liberación del contenido de los gránulos de los mastocitos al reconocimiento de antígeno causa
síntomas como la hinchazón de las vías aéreas, la rinitis, y la dermatitis. La IgE se fija a la
superficie de membrana de las células cebadas o basofilas hasta por 2 semanas en una
respuesta alérgica.
Cuando una persona es alérgica a una sustancia en particular, el sistema inmunitario cree,
erróneamente, que está bajo una invasión antigénica por parásitos, y produce la IgE, en un
intento de "proteger" el organismo; de esta manera, se inicia una cadena de acontecimientos
que provocan los síntomas de la alergia. Si una persona sufre de asma producida por
reacciones alérgicas, esta cadena de acontecimientos también derivará en síntomas de asma.
(Roitt, Delves, Martin, & Burton, 2008, pág. 373)
2.2.4 IgE relacionada con procesos Alérgicos
Las alergias pueden afectar a casi todos los órganos y sistemas. Algunas pueden ser mortales
como el choque anafiláctico, los casos graves de asma y las reacciones adversas graves que se
pueden presentar tras el consumo de algunos alimentos. Las más comunes son las que afectan
la piel y el sistema respiratorio. (Rojas Espinoza, 2006, pág. 420)
13
La IgE es pieza fundamental en los fenómenos alérgicos y su concentración plasmática
aumenta notoriamente. La mayor parte de la IgE se encuentra unida a la superficie de los
mastocitos, eosinófilos y basófilos. El reconocimiento de un antígeno por la IgE desencadena
complejas reacciones inmunitarias, entre las que pueden destacarse, por ejemplo: la
desgranulación de los mastocitos, que liberan sustancias vaso activas como la histamina, así
como la intervención de los eosinófilos en la respuesta inflamatoria. (Rojas, 2012, pág. 74)
Las moléculas de IgE (MW 200,000) se unen a la superficie de las células cebadas
(mastocitos) y a los granulocitos basófilos. Seguidamente la unión de alérgenos a la unión
celular IgE causa en las células la liberación de histaminas y otras sustancias vasoactivas. La
liberación de histaminas en el organismo inicia lo que es comúnmente conocido como una
reacción alérgica. (Monobind Inc., 2015)
La liberación del contenido de los gránulos de los mastocitos al reconocimiento de antígeno
causa síntomas como la hinchazón de las vías aéreas, la rinitis, y la dermatitis. La IgE se fija a
la superficie de membrana de las células cebadas o basófilas hasta por 2 semanas en una
respuesta alérgica.
Los antígenos (alérgenos) que provocan estas respuestas anómalas son proteínas o
glicoproteínas o compuestos de síntesis, inocuos para un alto porcentaje de la población, pero
que provocan en el alérgico una reacción de hipersensibilidad mediada por una clase
minoritaria de inmunoglobulinas, las IgE. El contacto reiterado de un mismo alérgeno con las
IgEs en la superficie de unas células especializadas (mastocitos y basófilos) desencadena un
variado y molesto repertorio de síntomas como rinitis, conjuntivitis, asma, diarrea y, en casos
extremos, un shock anafiláctico. (Regueiro & Cols, 2010, págs. 176,178)
14
Tabla 1. Niveles de IgE según la edad
Elaborado por: Jeffer Cisneros
2.2.5 diagnóstico de laboratorio
Reacciones alérgicas, las cuales se han vuelto comunes, son diagnosticadas generalmente en
base al historial médico y síntomas clínicos. Sin embargo las pruebas in vitro e in vivo,
juegan un papel clave en la confirmación de sospechas clínicas y tratamientos de adaptación.
La medición de inmunoglobulina E (IgE) en sueros es usada ampliamente en el diagnóstico de
reacciones alérgicas e infecciones por parásitos. Gran número de alergias son causadas por
inmunoglobulinas de subclase IgE actuando como punto de contacto entre el alergénico y las
células especializadas por lo cual los médicos la usan como un marcador alérgico
principalmente. (Vega, 2008)
La titulación de IgE se puede realizar por varias técnicas como Electroquimioluminicencia,
Inmunofluorecensia e inmuno ensayos enzimáticos como ELISA al ser nuestro método de
elección para este proyecto de investigación hablaremos sobre ELISA, principalmente en este
método primero se adicionan el calibrador IgE, y el control o muestra del paciente al pozo
revestido con estreptavidina. El anticuerpo monoclonal marcado con biotina (especifico para
IgE) se adiciona y se mezclan los reactivos. La reacción entre los anticuerpos IgE y los IgE
nativos forma un complejo que se une con la estreptavidina cubierta al pozo. El exceso de
proteínas de suero es removido por medio de enjuague. A los pozos se les adiciona también
15
otro anticuerpo específico monoclonal para IgE. El anticuerpo marcado con enzima se une a la
inmunoglobulina E ya inmovilizada en el pozo a través de su unión con el anticuerpo
monoclonal marcado con biotina. El exceso de enzima es lavado hacia el paso de lavado. Se
genera luz mediante la adición de un sustrato. La intensidad de la luz generada es directamente
proporcional a la concentración de IgE en la muestra. (Monobind Inc., 2015)
Es además aceptado que con los métodos convencionales utilizados habitualmente en las
consultas médicas se produce un alto porcentaje de diagnósticos erróneos. Uno de los
principales motivos es la reactividad cruzada que se produce por la presencia de epítopos
comunes en fuentes biológicas de muy diverso origen, lo cual provoca polisensibilizaciones en
los pacientes. El diagnóstico molecular realizado a partir de alérgenos puros permitirá
prescribir vacunas mucho más sencillas y seguras que las empleadas en la actualidad.
(SEBBM - Sociedad Española de Bioquímica y B Molec., 2011)
2.2.6 valores normales
La concentración de IgE en el cuerpo es muy baja. Un nivel normal de IgE es de 0.5 - 200
IU/mL o 0,05% de la concentración de IgG. Los niveles altos de IgE pueden ser señal de
infección parasitaria, reacción alérgica, enfermedad autoinmune o presencia de cáncer pero los
resultados se correlacionan con el diagnóstico y clínica del paciente. Los niveles bajos de IgE
son difíciles de detectar y suelen asociarse solamente con enfermedades de inmunodeficiencia
raras.
16
Tabla 2. Valores de IgE según el método utilizado ELISA
Fuente: (Monobind Inc., 2015)
2.3 HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1
2.3.1 Naturaleza de los alérgenos
La alergia es una respuesta inmune nociva, de tipo inflamatorio, mediada por IgE, que se
desencadena en individuos que, por predisposición genética, se sensibilizan a antígenos (Ag)
externos llamados alérgenos que no son patógenos para la mayoría de los individuos, esta
predisposición genética se conoce como atopia. (Rojas, 2012)
Los alérgenos son sustancias, generalmente de naturaleza proteica, que en determinados
individuos son capaces de ocasionar una respuesta anómala, dando lugar a una serie de
síntomas adversos.
La respuesta a los alérgenos es específica por cuanto la IgE responsable es diferente para cada
uno de ellos. Nociva porque la reacción inflamatoria producida causa molestias, daño tisular y
aun la muerte.
Los alérgenos habituales consisten en proteínas del polen, ácaros del polvo doméstico, caspa
de animales, ciertos alimentos, productos químicos y antibióticos entre otros de menor
incidencia.
17
Dos características importantes de los alérgenos son:
No estimulan la respuesta inmunitaria innata y las personas se encuentran expuestas a estos
alérgenos repetidamente al ser comunes.
Muchos de los alérgenos frecuentes poseen rasgos comunes como; masa molecular baja,
glucosilación, solubilidad alta en líquidos corporales.
La evolución natural de la exposición al antígeno es un factor importante que influye en la
concentración de anticuerpos IgE específicos. Para que ocurra una reacción alérgica frente a
un antígeno determinado debe haber una exposición repetida a dicho antígeno, ya que para que
tenga lugar una reacción de hipersensibilidad a un antígeno, la producción de isotipos debe
haberse desviado hacia la IgE y los mastocitos deben haber sido sensibilizados por esta IgE.
(Abbas, Lichtman, & Pillai, 2008)
Factores de riesgo
Exposición ambiental
Frío, calor, radiación solar, agentes químicos. Las emisiones producidas por vehículos,
calefacciones y actividades industriales son las responsables de contaminantes como el
dióxido de carbono, el dióxido de nitrógeno y el dióxido de azufre que, en determinadas
concentraciones, son perjudiciales para la salud y agravantes de patologías alérgicas como el
asma. Se ha visto un aumento de cuadros alérgicos, como por ejemplo reacciones asmáticas,
en hijos descendientes de emigrantes a otro país, en comparación con los residentes en su
tierra de origen. Las estadísticas demuestran que en las zonas industrializadas se registran más
alergopatías que en las zonas rurales. (Idrovo, 2013)
Exposición al humo del tabaco
En pacientes alérgicos la exposición reiterada al humo del tabaco agrava la irritación que el
contacto con polen y ácaros provocan a nivel de su mucosa ocular, nasal y bronquial. Según
18
diversas investigaciones, los fumadores poseen un nivel más elevado de IgE, responsable de
las reacciones alérgicas.
Se ha comprobado, además, el aumento de la frecuencia de infecciones respiratorias y del
riesgo de asma bronquial en niños expuestos al tabaco de padres fumadores durante el primer
año de vida. (Idrovo, 2013)
Fármacos
Las manifestaciones alérgicas a fármacos, se diferencia de las reacciones toxicas porque se
generan con dosis mínimas, y tienen lugar solo en individuos genéticamente predispuestos. La
administración parenteral del fármaco puede desencadenar en el individuo alérgico urticaria,
asma o choque anafiláctico. (Idrovo, 2013)
Alimentos
La alergia alimentaria es más común en los niños que en los adultos, pero muchas de las
reacciones que se atribuyen a la alergia pueden deberse a la existencia de una intolerancia. Los
alimentos que aparecen implicados con mayor frecuencia son la leche de vaca, huevos,
pescados, legumbres, frutos secos, crustáceos, chocolates y fresas. Cuando el alérgeno es
ingerido la desgranulación de los mastocitos de la mucosa intestinal produce vómitos y
diarreas. Si los alérgenos son absorbidos a través de la mucosa intestinal y pasan a la sangre
pueden desencadenar la desgranulación de los mastocitos, dando lugar a la formación de
habones o ronchas en la piel, fenómeno conocido como urticaria. (Levenger, 2014)
Aditivos alimentarios
Los aditivos alimentarios como: colorantes, conservantes, antioxidantes, agentes aromáticos y
potenciadores del sabor, espesantes y emulgentes endulzantes, son sustancias que se emplean
para una mejora de las características de los alimentos. Dado que un cierto número de ellos no
posee ninguna propiedad nutritiva, han de ser completamente inocuos en las concentraciones
19
habitualmente empleadas. No obstante, debido a que su implicación en cuadros alérgicos se ha
relacionado científicamente, se hace necesario acotar mejor las concentraciones, los grupos de
población y los niveles de consumo aceptables. (Idrovo, 2013)
El polvo de las casas
El polvo de las casas constituye una de las principales causas de alergia respiratoria en todo el
mundo, los ácaros del polvo viven y se reproducen en ambientes poco ventilados y húmedos
alimentándose de escamas de piel y pelo que se nos van cayendo y se depositan en colchones,
almohadas, alfombras, tapicerías, cortinas, adornos, etc.
La reacción alérgica más común provocada por los ácaros del polvo es la rinitis alérgica,
causante de picores, estornudos, aumento de la mucosidad, falta de concentración y cansancio,
aunque también se puede manifestar a través de molestia de la piel, como eczema y dermatitis.
Plantas y polen
Son los gametos masculinos de las flores, responsables del 20% de las alergias, especialmente
rinitis y asma. Dentro de los miles de polen diferentes, únicamente los más pequeños, aquellos
que tienen de 10 a 100 micras de tamaño, tienen importancia como alérgenos. En las zonas
geográficas donde existen estaciones,hay una correlación muy precisa entre las
manifestaciones clínicas de las alergias del tracto respiratorio y las épocas de polinización de
ciertas plantas, siendo las épocas secas las de mayor riesgo. (Levenger, 2014)
Animales
La alergia a los animales es en realidad alergia a unas proteínas presentes en la saliva, orina y
sudor del animal. Estos alérgenos son tan pequeños que flotan en el aire, esparciéndose por
toda la casa. Las descamaciones o caspas de animales como: perros, gatos, y otras mascotas
como hámsteres y cobayos, pueden sensibilizar a personas atópicas y desencadenar ataques de
20
asma, constituyendo una de las principales causas de alergia después del polen y ácaros.
(Levenger, 2014)
Insectos
Los que producen reacciones alérgicas con mayor frecuencia son las abejas, avispas y pulgas.
Las picaduras por insectos se caracterizan por tener una respuesta inmediata (minutos después
de la picadura) y una respuesta tardía (24hs posterior). La primera mediada por IgE y la
segunda es mediada por linfocitos T, IgM. (Idrovo, 2013)
Ubicación geográfica
Hay una fuerte evidencia de las diferencias en la prevalencia de enfermedades alérgicas entre
las zonas urbanas y rurales en los países no industrializados, con mayor prevalencia de las
enfermedades alérgicas en las zonas urbanas. (Pawankar, et all. 2011)
En los niños en edad escolar que viven en zonas rurales de Ecuador parece haber muy bajo
riesgo de enfermedad. Las tendencias actuales de la continuación de la migración rural-urbana,
junto con los grandes incrementos esperados en la población urbana del Ecuador en los
próximos 10 años, hacen probable que las enfermedades alérgicas, incluida el asma, se
convertirá en un importante problema de salud pública en el futuro. (Idrovo, 2013)
2.3.2 Síntesis de IgE
Los anticuerpos IgE se sintetizan en los linfocitos B y son responsables de la sensibilización
de los mastocitos y del reconocimiento de los antígenos en las reacciones de hipersensibilidad
inmediata Tipo 1. (Vilella Puig, 2006)
Las personas atópicas sintetizan cantidades elevadas de IgE en respuesta a alérgenos
ambientales, mientras que los sujetos normales suelen sintetizar otras inmunoglobulinas y solo
producen pocas cantidades de IgE.
21
La síntesis de IgE depende de la activación de los linfocitos T CD4 cooperadores de la
subpoblación Th2 y de su secreción de IL-4 e IL-13, Varios factores pueden influir en esta
tendencia de aparición de respuestas Th2 frente a determinados antígenos tales como los genes
heredados, la naturaleza del antigeno y los antecedentes de exposición a él. (Abbas, Lichtman,
& Pillai, 2008)
2.3.3 Unión de la IgE a mastocitos y basófilos
La IgE específica para el alérgeno producida por los linfocitos B pasa a la circulación y se une
a los receptores del Fc de los mastocitos dejándolas sensibilizadas y preparadas para
reaccionar en un encuentro posterior con el alérgeno en cuestión. (Abbas, Lichtman, & Pillai,
2008)
La IgE se elabora en los linfocitos B y actúa como un receptor de antígenos sobre la superficie
de las células que intervienen en la hipersensibilidad tipo 1 uniéndose a un receptor de alta
afinidad especifico de las cadenas pesadas ε denominado FcεRI que inicia el proceso de
hipersensibilidad tipo 1, este receptor FcεRI no solo se encuentra en las células efectoras de
este tipo de hipersensibilidad 1 que son los mastocitos, eosinofilos y basófilos sino también en
células de langerans de la epidermis, macrófagos y monocitos activados. (Abbas, Lichtman, &
Pillai, 2008)
Los mastocitos y basófilos se ubican en las zonas de contacto entre el huésped y el medio
ambiente: piel, mucosas y submucosas de los tractos respiratorios y gastrointestinales. Ambos
tipos celulares expresan el receptor FcεRI, compuesto por 4 cadenas: una α por la que se une a
IgE, una β que cruza la membrana citoplásmica y 2γ
, que median la activación de la cascada de señalización intracitoplásmica. La unión
simultánea del alérgeno a 2 o más moléculas de IgE unidas a receptores FcεRI en la superficie
22
del mastocito genera la agregación de estos receptores, que tiene 3 consecuencias: (Vilella
Puig, 2006)
a) La fosforilación de los residuos de tirosina de las tirosincinasas que causa una cascada
de señales intracitoplásmicas, con el resultado final de la fusión de gránulos
intracitoplásmicos con la membrana plasmática y la liberación de su contenido al
medio extracelular.
b) Activación de la adenilciclasa con aumento del adenosinmonofosfato cíclico (AMPc) y
activación de la proteincinasa A, que tiene un efecto negativo, en la desgranulación y
por lo tanto es un feedback negativo.
c) Fosforilación de los factores de trascripción, que promueve la síntesis de diferentes
citocinas y quimiocinas (fig. 2). La simple unión de IgE a los receptores FcεRI de los
mastocitos causa un aumento de su supervivencia y activación.
Los mastocitos también se pueden activar directamente por diversas sustancias biológicas
como neuropéptidos, quimiocinas y la anafilotoxina C5a de la vía del complemento. (Roitt,
Delves, Martin, & Burton, 2008)
Ilustración 2. Proceso inmunológico de la Hipersensibilidad tipo 1
Fuente: (Vilella Puig, 2006)
23
Receptores FcERI de los mastocitos y basofilos
Además de influir en factores genéticos, el ensamblaje intracelular de las cadenas a y g del
FcERI también lo hace en la expresión de receptores en la superficie de las células. La
asociación de ambas cadenas es esencial para la transferencia del complejo al aparato de
Golgi, donde tiene lugar la glucosilación final. La densidad de IgE de superficie y la expresión
de FcERI se correlacionan con los niveles séricos de IgE independientemente del estado
atópico. In vitro, la incubación de basófilos con IgE se asocia con mayor expresión del FcERI
en la superficie celular. ( Laboratorios Bago, 2002)
La interacción estructural entre el fragmento Fc de la IgE y la cadena a del FcERI es muy
importante en los eventos iniciales de las reacciones alérgicas. Cada dominio de la cadena
pesada de la IgE se une a un sitio distinto de la cadena a del FcREI. Las sustancias que
bloquean cada uno de estos sitios podrían disociar el complejo entre IgE y receptor y ser útiles
en el tratamiento de las enfermedades alérgicas. (Rojas, 2012)
La cadena ß del FcERI aumenta la maduración y ensamblaje del receptor y se acompaña de
mayor expresión del mismo en la superficie celular, y es un amplificador de la transducción de
la señal intracelular. A pesar de su conexión genética con atopia, los polimorfismos del gen de
la cadena ß no parecen afectar la función del receptor. La agregación del FcERI determina la
evolución de las reacciones alérgicas en diversas formas. Recientemente se ha observado que
la sobrevida y crecimiento de las células cebadas están influidos por la unión de la IgE a su
receptor de alta afinidad. Este fenómeno actuaría como un importante amplificador de las
reacciones alérgicas. En aproximadamente el 10% de las personas, los basófilos no liberan
histamina en respuesta al entrecruzamiento del receptor. A pesar de la expresión normal del
24
mismo, estos basófilos "no liberadores" también muestran alteración de otras funciones y
sobreexpresan algunas moléculas de adhesión. La inducción de dicho fenómeno (no
liberación) en personas alérgicas podría representar otra estrategia de tratamiento. (Rojas,
2012)
Si bien no se ha definido aún con precisión el papel de los neutrófilos en las reacciones de
hipersensibilidad tipo 1, estas células han sido encontradas en la pared de bronquios de sujetos
con y sin alergia. A su vez, en neutrófilos de pacientes asmáticos se comprobó expresión del
FcERI, el cual parece capaz de estimular la liberación de IL-8. Los eosinófilos expresan baja
cantidad de FcERI. El entrecruzamiento de los FcERI y de la IgE en la superficie de
mastocitos y células cebadas produce la activación de quinasas activables por mitógenos
(MAP) y la expresión de genes de citoquinas. Recientemente se ha descripto una vía
alternativa en la cual ocurre activación de otras quinasas (JNK). Además de estas proteínas, en
la transducción de señales participan otros factores cuyo conocimiento es importante, dado
que pueden sugerir nuevas opciones farmacológicas de bloqueo. (Roitt, 2008)
La IL-4 y la IL-13 aumentan mientras que los corticoides inhiben notablemente la expresión
del FcERI en monocitos. Se ha sugerido que la IgE y el FcERI podrían tener una importante
participación en el control de la patogenicidad de ciertas bacterias y en el desarrollo de
inflamación intestinal. ( Laboratorios Bago, 2002)
2.3.4 Reacción inmediata y fase tardía
La mayoría de las reacciones de Hipersensibilidad inmediata están mediadas por la activación
de mastocitos y de otros leucocitos dependientes de anticuerpos IgE, los linfocitos Th2 tienen
una participación central en el inicio y la propagación de las reacciones de hipersensibilidad
25
inmediata mediante la estimulación de la producción de IgE y el fomento de la inflamación.
(Kumar, Abbas, Fausto, & Aster, 2010)
Se desarrolla en etapas de acuerdo con el tiempo de exposición: sensibilización, aguda, tardía,
crónica, daño tisular y fibrosis.
Sensibilización.
Se inicia cuando el individuo genéticamente predispuesto establece contacto con un alérgeno
por primera vez. Las células dendríticas capturan el alérgeno en su sitio de entrada y luego lo
presentan en los órganos linfoides a los linfocitos Th2, esto tiene como consecuencia un
aumento de los clones de linfocitos que reconocen este antígeno y de la producción de lL-4
que estimula en los linfocitos B (LB) la producción de IgE. Esta circula en la sangre y una vez
en el lugar por donde entra el alérgeno se adhiere a los receptores FceRl presente en los
mastocitos y en los basófilos. Este primer contacto clínicamente puede ser poco intenso pero
da como resultado la formación de clones de linfocitos T y B preparados para un nuevo
encuentro con el alérgeno. (Abbas, Lichtman, & Pillai, 2008)
Fase aguda
Se inicia cuando el alérgeno que produjo la sensibilización entra nuevamente al organismo.
Ante la nueva exposición, los mastocitos y los basófilos reconocen rápidamente la IgE que se
adhiere y este complejo, en la membrana, desencadena su degranulación con lo cual se liberan
los mediadores de la inflamación almacenados en los gránulos y además se generan otros
nuevos. Este tipo de reacción se conoce también como hipersensibilidad inmediata o respuesta
tipo 1 y suele ocurrir a los pocos minutos (menos de una hora) del contacto con el alérgeno,
los 1.000 gránulos intracitoplasmaticos que posee cada Mastocito son secretados una vez que
la IgE de su membrana interactúa con el alérgeno. Esta reacción tarda solo 30 segundos.
26
El proceso de degranulación lleva a la liberación de histamina y heparina e induce la
generación de una serie de citoquinas.
Con la degranulación de los mastocitos hay liberación de tres enzimas:
triptasa, quinasa y carboxilpeptidasa que constituyen el 25% de sus gránulos y son
responsables de los daños titulares que ocurren en varios procesos alérgicos.
El endotelio vascular participa activamente en el proceso inflamatorio de tipo alérgico,
facilitando la adherencia y tránsito de leucocitos de la sangre a los tejidos, mediante la
expresión de selectinas e integrinas generadas por el estímulo del IFNy y el TNFa. (Rojas,
2012, págs. 415,416)
Fase tardía
Ocurre tres a cuatro horas después de iniciada la fase aguda con la producción y liberación de
cicosanoides, prostaglandinas y leucotrienos, mediadores de la inflamación derivados de los
lípidos de membrana de los mastocitos, basófilos y las otras células de la respuesta inmune
presentes en el sitio de entrada Además, se genera una serie de quimioquinas y citoquinas que
incrementan la producción y aflujo al sitio de ingreso del alérgeno, de Eosinofilos, Linfocitos
y Monocitos que amplifican el proceso inflamatorio. Si el alérgeno continúa entrando, o no
hay una intervención terapéutica oportuna, se pasa a la siguiente fase del proceso.
Fase crónica
Cuando la exposición al alérgeno es prolongada o muy repetitiva, el proceso inflamatorio
puede perpetuarse y llevar a daño tisular y desarrollo de fibrosis. Esto ocurre especialmente en
el asma bronquial. Cuando sucede un proceso inflamatorio crónico en el asma, aumenta la
producción de TGF-beta que es una citoquina que regula a la baja la inflamación pero también
favorece el depósito de colágeno y aumenta la migración de fibroblastos, por lo que se
produce una remodelación de los alveolos. (Rojas, 2012)
27
2.3.5 Manifestaciones clínicas y patogenia
El síndrome clínico producido por una reacción alérgica depende de 3 factores: la cantidad de
IgE específica presente, la vía de introducción del alérgeno y la dosis de alérgeno. (Regueiro
& Cols, 2010). Si el alérgeno se introduce directamente en sangre o indirectamente por el
intestino, se activan los mastocitos del tejido conectivo asociado a los vasos sanguíneos, y se
produce un choque anafiláctico. Son los casos de la penicilina, la picadura de insectos y
ciertos alimentos en individuos susceptibles. Para diagnosticar reacciones anafilácticas
recientes u otras reacciones secundarias a la activación sistémica de mastocitos, se utiliza la
determinación de la triptasa sérica. La triptasa sérica es una proteasa neutra, sintetizada por el
mastocito, que tiene una vida media de 60-90 min. Inmediatamente después de una reacción
anafiláctica sistémica, el paciente no responde a las pruebas de alergia cutánea; ello se debe a
la depleción masiva de los gránulos de los mastocitos. Este fenómeno se conoce con el nombre
de taquifilaxia y tiene una duración de 72-96 horas tras la reacción anafiláctica. (Pawankar,
Canonica, & Holgate, 2011)
Otra ruta de entrada de los alérgenos es la aérea, por inhalación; en este caso la manifestación
clínica suele quedar limitada a rinitis o conjuntivitis (si el alérgeno se deposita en la conjuntiva
ocular). Sin embargo, algunos individuos, debido a la activación de los mastocitos de la
submucosa de las vías aéreas bajas, desarrollan asma.
Aunque ésta se produce como respuesta a un alérgeno, la ulterior inflamación crónica puede
perpetuarse en ausencia de nuevas exposiciones a ese alérgeno, debido a irritantes químicos
como el humo de los cigarrillos o por infecciones virales o bacterianas. Cuando la entrada del
alérgeno se produce por la epidermis o en la dermis, tiene lugar una reacción alérgica local
que se traduce en hinchazón y enrojecimiento de la piel. Unas 8 h más tarde, en algunos
individuos se produce una reacción tardía, más extensa y sostenida. Otro tipo de reacción
28
alérgica cutánea es la urticaria, que aparece como consecuencia de la ingestión de
determinados alimentos por individuos susceptibles, cuando los alérgenos penetran en el
torrente circulatorio y alcanzan la piel. Precisamente, los alergólogos aprovechan la reacción
cutánea para probar si un individuo es alérgico a un determinado alérgeno: lo inyectan en muy
pequeñas cantidades intradérmicamente y observan si se produce una reacción cutánea.
(Vilella Puig, 2006)
La degranulacion de los mastocitos es un componente central de todas las enfermedades
alérgicas, de modo que sus manifestaciones clínicas y anatomopatologicas dependen de los
tejidos en que los mediadores de los mastocitos ejercen sus efectos y de la cronicidad del
proceso inflamatorio resultante. (Abbas, Lichtman, & Pillai, 2008)
2.3.6 Epidemiologia
Del 5% al 20% de los seres humanos son atópicos, es decir, tienen predisposición genética a
desarrollar una producción elevada de inmunoglobulina E dirigida a un alérgeno especifico.
(Rojas, 2012)
Se calcula que actualmente un 30 - 40% de la población mundial vive con una o varias
enfermedades alérgicas Durante los últimos 10 años las enfermedades alérgicas se han
incrementado significativamente en el mundo, principalmente en los menores de
edad. Especialistas internacionales revelan que este aumento obedece al calentamiento global
y la alta contaminación afecta las épocas de polinización, la exposición a alérgenos
ambientales, así como la respuesta exagerada del sistema inmunológico. (World Allergy
Organization, 2015)
29
2.3.6.1 Epidemiologia Mundial
Por su parte de la Organización Mundial de la Salud (OMS) sitúa las alergias como la cuarta
enfermedad más importante en el mundo, ya que se calcula que afecta a alrededor de 300
millones de personas, lo que conlleva graves consecuencias a nivel social y económico. El
coste de los tratamientos, la pérdida de calidad de vida de quienes las sufren y los costes
derivados del absentismo laboral son algunos de los inconvenientes que derivan de la que ya
se ha llamado, la epidemia del siglo XXI. Una epidemia no infecciosa que seguirá aumentando
de forma vertiginosa, al igual que otras enfermedades respiratorias. De hecho, la OMS prevé
que unos 500 millones de personas tendrán asma en el año 2050, el doble de los casos
diagnosticados actualmente. (Levenger, 2014)
2.3.6.2 Epidemiologia Regional
En un estudio internacional llamado ISAAC (International Study of Asthma and Allergy in
chilhood) se encuestaron 500.000 niños y adolescentes de 56 países, se pudo demostrar que el
19% de los encuestados presentaba alguna enfermedad alérgica, incluyendo 14% de niños con
asma, 13,5% con rinitis y 7.4% con dermatitis atópica. En Latinoamérica, las cifras oscilan
entre el 6.6% y el 26% dependiendo de las diferentes regiones, en nuestro país se puede
deducir que sigue siendo alta la prevalencia de estas alergias. (ISAAC, 2012)
Las enfermedades alérgicas son muy comunes en Latinoamérica y, sorprendentemente, la
región ocupó el tercer lugar en términos de prevalencia de asma, rinitis y eccema; aunque,
como en otras partes del mundo, hay una gran variabilidad en la prevalencia entre distintos
países del área e incluso en diferentes regiones en un mismo país. Recientemente se describió
el aumento de la prevalencia del asma y otras alergias en algunas regiones de América Latina.
(Organización Panamericana de la Salud, 2015)
30
Los pólenes son frecuentes inductores de sensibilización alérgica en la región, tanto en adultos
como en niños. En los países en los que las estaciones del año están claramente diferenciadas
(Argentina, Chile y Uruguay), los síntomas suelen mantener un patrón compatible con la
clásica alergia estacional; en cambio, cuando predominan los climas tropicales y subtropicales
la estación de polinización suele ser más larga y, como consecuencia de la más extensa
exposición natural a los pólenes, los síntomas permanecen durante periodos más prolongados.
(Baena, Lockey, & Passalacqua, 2008)
Los alérgenos más comúnmente hallados en la región son los de los ácaros del polvo
doméstico, los cuales conforman una fauna muy rica y variada. En el polvo doméstico de
distintos lugares de Latinoamérica. Todos estos alérgenos de ácaros son potencialmente
sensibilizantes y la mayoría de niños y adultos con rinitis y asma tienen pruebas cutáneas
positivas a extractos de ácaros. Alérgenos de cucarachas, de hongos y de soya también se han
identificado como agentes sensibilizantes. Por último, debido a los diferentes climas (fríos,
tropicales y subtropicales), hay una gran variedad de insectos potenciales inductores de
reacciones alérgicas. (Baena, Lockey, & Passalacqua, 2008)
En Ecuador el cambio climático, el polvo, los ácaros y el polen, son algunos de los factores
que causan las crisis asmáticas, que según los especialistas pueden ser leves, moderadas o
severas. Ecuador existe una prevalencia intermedia de casos de asma. En nuestro país en 2006
se hizo un estudio respecto a esta enfermedad en Guayaquil y otro en Quito. Se llama ISAAC
y se hace a nivel mundial. La prevalencia del asma está en un 12% y la prevalencia de la rinitis
cerca del 45%. Prevalencia significa la cantidad de enfermos que hay en la población (El
Telegrafo, 2012) El Instituto Ecuatoriano de Estadística y Censos (INEC), por su parte,
sostiene que en 2010 se registraron 3.275 casos de esta enfermedad.
31
2.4 TÉCNICA DE ELISA
2.4.1 Reacción Antígeno – Anticuerpo
Los anticuerpos son moléculas de peso molecular aproximado de 150 kDa, pertenecientes al
grupo de las inmunoglobulinas del complejo principal de histocompatibilidad y pueden
presentarse en 2 formas, unidas a la superficie de células como son los linfocitos, la otra forma
en que se encuentran es libre en la circulación sanguínea. Son moléculas capaces de reconocer
otras moléculas, los antígenos o alérgenos en caso de la hipersensibilidad tipo 1. La capacidad
de reconocimiento de un anticuerpo radica en las secuencias variables de sus cadenas
proteicas. (Abbas, Lichtman, & Pillai, 2008)
El antígeno es una sustancia extraña que se introduce al interior de nuestro organismo
provocando una respuesta inmunitaria estimulando la producción de anticuerpos los cuales
junto con los receptores de los linfocitos T son las moléculas emblemáticas del sistema
inmunitario adaptativo, la reacción antígeno-anticuerpo es la especificidad en la que un
antígeno solo puede combinarse con el anticuerpo que lo induce a una estrecha relación. La
unión entre éstos se lleva a cabo en la formación de un enlace entre la región fijadora del
antígeno de la inmunoglobulina y el determinante antigénico. (Kindt, Goldsby , & Osborne,
2007)
Es la complementariedad de su estructura, que hace posible que un antígeno se una con el
anticuerpo específico y forme el complejo antígeno-anticuerpo. En las reacciones antígeno-
anticuerpo se distinguen 2 fases: la primera consiste en la unión del antígeno con el anticuerpo
y la segunda es la manifestación que resulta de dicha unión. La primera fase se realiza por la
combinación de áreas pequeñas tanto del antígeno como del anticuerpo, denominadas
32
respectivamente determinante antigénico y sitio activo, que al unirse forman un complejo
antígeno-anticuerpo. La reacción es reversible siguiendo la ley de acción de masas. (Condori
López , 2011)
La inmunogenicidad depende de 4 propiedades del inmunogeno: alteridad, tamaño molecular,
composición y complejidad química y la capacidad de ser procesado y presentado en la
superficie de una CPA para dar inicio a la respuesta inmunológica. (Kindt, Goldsby , &
Osborne, 2007)
2.4.2 Fundamento
El ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma
que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar
uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado
sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y,
por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar
la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro o un colorímetro. (Cultek, 2006)
Aquí se da la unión entre un antígeno con un anticuerpo especifico, logrando así la detección
de cantidades pequeñas de antígenos tales como proteínas, hormonas, péptidos o anticuerpo en
una muestra de fluido. En ELISA se usa tanto antígenos como anticuerpos marcados con una
enzima, las más usadas son la fosfatasa alcalina y la glucosa oxidasa. Se utiliza placas que
contienen antígeno inmovilizado en pocillos, para que posterior sea reconocido por un
anticuerpo especifico y este a su vez es reconocido por otro anticuerpo secundario marcado
33
con una enzima. Un sustrato cromogénico es añadido en el cual la enzima va a provocar un
cambio de color visible, el cual indica la presencia del antígeno. (Gan & Patel, 2013)
El sustrato- cromógeno específico de la enzima (p-nitrofenilfosfato o peroxidasa, para [TMB]
3. 3', 5, 5'-Tetrametilbenzidinao para la fosfatasa alcalina), el mismo que da color de acuerdo
con la cantidad de anticuerpounido o conjugado con la enzima y que la cantidad que exista
depende de los anticuerpos del paciente que reconocieron los antígenos adherido a la placa. Es
decir de la cantidad de anticuerpo unido al antígeno depende la intensidad de color, es
directamente proporcional. (Hernández & Cabiedes, 2010)
Existen varios tipos de ELISA en los que se han modificado ciertos pasos, pero aquí la etapa
clave del ensayo ELISA es la detección tanto directa como indirecta del antígeno ya sea por
adhesión o inmovilización del antígeno o bien por anticuerpos de captura específicos del
antígeno que se encuentran sobre la superficie del pocillo. Si se quiere que la medición sea
más sensible, se usa un anticuerpo de captura y un anticuerpo de detección así el antígeno a
detectar quedara entre los dos anticuerpos. (Gan & Patel, 2013)
2.4.3 Tipos de Elisa
2.4.3.1 ELISA indirecto
En este ELISA se emplea dos anticuerpos, uno primario y el secundario marcado con una
enzima. Aquí el anticuerpo primario ose lo incuba con el antígeno, para posterior incubarlo
con el anticuerpo secundario.
Las placas se incuban con antígenos, se lavan y se las bloquea con BSA.
34
Luego se añade la muestra que contiene los anticuerpos que vamos a detectar, luego se
lava.
Se añade un anticuerpo secundario ligado a una enzima, luego se lava.
Por último se añade un sustrato, aquí las enzimas ligadas alos anticuerpos van a
producir una señal cromogénica o fluorescente.
Este tipo de ELISA es muy sensible, flexible ya que se puede utilizar diferentes anticuerpos
primarios con un único anticuerpo secundarioque está marcado. (Sino Biological Inc.
Biological Solution Specialist, 2004-2015)
2.4.3.2 ELISA Directo
Es el ELISA más simple, el antígeno se encuentra unido a la placa, luego se le añade otra
proteína que suele ser albumina de suero bovino, que sirve para bloquear el resto de sitios de
unión. Aparte se encuentra una enzima ligada al anticuerpo, este complejo enzima-anticuerpo
una vez añadido va a absorber al antígeno. Posteriormente se lava el exceso de este complejo.
Una vez realizado esto quedara el complejo enzima-anticuerpo unido al antígeno. Por último
se añade el sustrato que detecta la enzima y por tanto el antígeno. (Sino Biological Inc.
Biological Solution Specialist, 2004-2015)
Este tipo de ELISA es por lo tanto muy rápido, en comparación al anterior ya que solo usa un
anticuerpo y por ende también tiene menos pasos. Se lo utiliza para probar
reaccionesespecíficas de anticuerpo-antígeno o para descartar la reactividad cruzada entre
otros anticuerpos. (Sino Biological Inc. Biological Solution Specialist, 2004-2015)
35
2.4.3.3 ELISA Sándwich
Elisa tipo sándwich doble anticuerpo
Este método se lo realiza para la detección de antígenos, en el cual se usan dos anticuerpos, el
primero se encuentra pegado a la fase sólida y captura al antígeno que se encuentra en la
muestra que es detectado por el conjugado anticuerpo-enzima o bien amplificado con un
conjugado contra el segundo anticuerpo. (Ochoa , 2012)
Elisa tipo sándwich doble antígeno
Este al contrario del anterior es para la detección de anticuerpos, tienen mucha utilidad para
evaluar la respuesta inmune que es inducida por las vacunas. Aquí se emplea un conjugado
antígeno-enzima, razón por la cual tiene una alta sensibilidad y detectabilidad ya que no
necesita diluir la muestra, pero por otro lado también detecta todo tipo de inmunoglobulinas lo
que muchas veces no es favorable. (Ochoa , 2012)
Consta de las siguientes etapas:
-Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno a
detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
-Adición de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.), de tal
forma que si está presente el agente patógeno de diagnóstico (antígeno), reaccionará
específicamente con los anticuerpos fijados al soporte. Lavado para eliminar los
antígenos que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no fijados.
-Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un epítopo
diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte) conjugados con una
enzima, los cuales reaccionan con los antígenos añadidos con la muestra problema y
36
que se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.
-Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se
puede parar la reacción si se desea.
Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado. (Cultek, 2006)
2.4.3.4 ELISA por competición
En este método el que el antígeno va a competir por la formación del complejo antígeno-
anticuerpo no marcado o a su vez el anticuerpo marcado compite por el antígeno unido y el
antígeno en la muestra. Es un tipo de ELISA donde se va a dar una unión competitiva dada por
el antígeno de la muestra y un antígeno de complemento. El procedimiento es:
Un anticuerpo primario no etiquetado se lo incuba con el antígeno presente en la
muestra.
Se añaden a la placa los complejos antígeno-anticuerpo, placa que esta pre-recubierta
con el mismo antígeno.
Luego se realiza un lavado para eliminar el anticuerpo que no se haya unido. se lo
llama de competencia, porquecuando másantígeno presente en la muestramenor va
hacer la capacidad del anticuerpo de unirse al antígeno de la placa y por eso el nombre
de competencia.
Se añade un segundo anticuerpo marcado con una enzima y que es específico del
anticuerpo primario.
Por último se añade el sustrato para dar una señal cromogénica por acción de las
enzimas restantes.
37
Como se mencionó anteriormente en este tipo de ELISA mientras mayor sea el antígeno
presente en la muestra más débil será la señal eventual. Este tipo de ELISA usa antígeno unido
a una enzima, aquí el antígeno marcado va a competircon el antígeno de la muestra (no
marcado) por los sitios de unión del anticuerpo primario. (Sino Biological Inc. Biological
Solution Specialist, 2004-2015)
38
2.5 VARIABLES Y SU OPERACIONALIZACÍON
VARIABLES
DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
INDICADOR
UNIDAD DE
ANALISIS
TÉCNICA
INSTRUMENTO
Edad
Tiempo que ha
vivido una persona
desde su nacimiento
Los niños menores de 5 años de
edad no tienen desarrollado su
sistema inmunológico y a partir
de los 6 años empieza a
desarrollarse y definirse la
hipersensibilidad tipo 1
Niños en edad
escolar entre los
6 y 12 años
Paciente
Encuesta
Hoja de recolección
de datos
Genero Es la persona que
posee genotipos y
fenotipos
diferenciados en
masculinos o
femeninos
Determina el sexo del paciente Masculino
Femenino
Paciente
Documental
Hoja de recolección
de datos
Grado Cursante Grado de educación
básica en el que se
encuentre
matriculado el
estudiante
Determinar el grado cursante
mediante la encuesta y la
exposición verbal de datos
2do a 10mo
Nivel de
Educación
Básica
Paciente Encuesta Hoja de recolección
de datos
Diagnóstico previo
de Alergia
Diagnostico medico
de atopia en menores
de edad mediante
pruebas específicas y
datos clínicos
Alteración Inmune
diagnosticada y tratada
previamente por un médico.
-Alérgico con
diagnostico
profesional
-No alérgico
Paciente Encuesta Hoja de recolección
de datos
VARIABLES
DEFINICIÓN
CONCEPTUAL
DEFINICIÓN
OPERACIONAL
INDICADOR
UNIDAD DE
ANALISIS
TÉCNICA
INSTRUMENTO
39
Motivas de alergia Motivos por los que
se produce una
reacción de
hipersensibilidad tipo
1
Sustancias, animales u objetos
que se sepa con certeza que
afectan al paciente
Mascotas
Medicamentos
Productos
químicos
Alimentos
no exhibe
Paciente Encuesta Hoja de recolección
de datos
Antecedentes
Familiares de
Alergia
Familiares con
enfermedades
alérgicas
Grupo de familiares que
presenten atopias ya conocidas y
diagnosticadas
Padres
Madres
Hermanos
Primos
Tíos
Abuelos
Paciente Encuesta Hoja de recolección
de datos
Sintomatología
alérgica
Reacciones que se
producen en el
sistema inmunitario
de dicho paciente
pertenecientes a la
hipersensibilidad tipo
1 en contra de un
alérgeno
Molestias y Síntomas típicos de
una alergia que se presenten
continua o esporádicamente
dependientes del ambiente en el
que este el paciente o persona
afectada
-Alteraciones de
la piel
-Estornudos
-Secreciones
nasales
-Nariz tapada
-Enrojecimiento
de ojos
Paciente Encuesta Hoja de recolección
de datos
Niveles de IgE Proteínas del plasma
sanguíneo
producidas por LB
Se estudia a los niños con
niveles elevados de IgE total
Nivel de IgE
total en suero
sanguíneo
Niños de la
parroquia San
Rafael
ELISA
Hoja de recolección
de datos
40
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1 TIPO DE ESTUDIO
Observacional de corte transversal, realizado en 93 niños escolares residentes de la
parroquia San Rafael del Valle de los Chillos, en periodo comprendido entre Agosto 2015
a Septiembre 2015.
A los cuales se realizó una encuesta y se tomó muestras de sangre para realizar
determinación de IgE, se procesó las muestras en el laboratorio de Genética de la Facultad
de Ciencias Médicas mediante técnica de ELISA en el Equipo ELISYS Uno.
3.2 NIVEL DE INVESTIGACIÓN
Estudio tendrá un nivel descriptivo sobre la prevalencia de IgE en niños escolares entre
los años de 6 a 12 de la parroquia de San Rafael en el Valle de los Chillos.
3.3 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACIÓN
Se procedió a elaborar una encuesta que incluyo datos demográficos como sexo, edad, y
datos sobre antecedentes alérgicos propios y familiares.
La técnica de ELISA se realizó aplicando normas según las exigencias de la casa
comercial, controles de calidad, calibraciones para determinar Nivel de anticuerpos IgE
41
total en suero sanguíneo de niños en la edad de 6 a 12 años, se procesó el muestreo en el
laboratorio de Genética de la Facultad de Ciencias Médicas.
Para el análisis estadístico se elaboró una base de datos en Excel.
3.4 UNIVERSO Y MUESTRA
3.4.1 Universo
Para la realización de la investigación sobre anticuerpos IgE como marcador de
hipersensibilidad tipo 1 se tomó como universo la población de niños escolares con
edades entre los 6 y 12 años de la parroquia San Rafael del Valle de los Chillos cuya
cantidad asciende a 1.195 según el último censo del INEC, datos de la policía comunitaria
de San Rafael y El Gobierno Municipal de Rumiñahui.
3.4.2 Muestreo
La muestra fue calculada con la fórmula de muestreo aleatorio simple para universo finito,
la misma que consiste en la elección por métodos aleatorios de una muestra cuyas
características sean similares a las de la población objetivo. La muestra fue de 93 niños
escolares.
3.4.3 Fórmula de cálculo
n: La muestra fue de 93 escolares entre 6 y 12 años pertenecientes a la parroquia San Rafael
zona 1 del cantón Rumiñahui utilizando la siguiente formula de muestreo aleatorio simple.
42
3.4.4 Criterios de inclusión
Ser niño escolar entre los 6 y 12 años
Residir en el sector de San Rafael del Valle de los Chillos
Que hayan vivido mínimo un año en el sector de San Rafael.
Que hayan llenado completamente el formulario.
3.4.5 Criterios de exclusión
Presentar alguna enfermedad aguda.
Tener alguna inmunosupresión
Niños con tratamiento antihistamínico o antiparasitario.
Muestras hemolizadas.
Muestras lipémicas.
Formularios incompletos.
3.5 TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
3.5.1 Instrumentos
Los datos serán recopilados mediante una encuesta y recolección de sangre venosa periférica
para la titulación de niveles de IgE realizada en muestras de suero sanguíneo obtenidas de
niños de la parroquia de San Rafael procesadas en el laboratorio de Genética de la Facultad de
Ciencias Médicas de la Universidad Central del Ecuador.
43
3.5.2 Métodos
Se utilizó el kit comercial de determinación cuantitativa de Ig E marca monobind de la casa
comercial Mono inc.
3.5.3 Manejo del equipo Elisys uno para la determinación de IgE total
1. Encender el equipo ELISYS
2. Encender el computador
3. Entrar en el programa ELISYS uno
4. Introducir la clave
5. Chequeo de verificación de iniciación
6. Abrir la pestaña de servicios si es que la prueba
7. Crear ensayo
8. Poner los pasos y volúmenes que viene en el inserto de la prueba
9. Utilizar el método cuantitativo para las determinaciones
10. Se guarda los cambios con un nombre nuevo
11. Ir a la muestra y poner el número de pruebas con el identificador de muestras
12. Seleccione la prueba añadir, marcar la prueba y solicitar resultados.
3.5.4 Procedimiento
Antes de proceder con el análisis lleve todos los reactivos, los calibradores y los controles a
temperatura ambiente (20-27ºC).
1. Marcar los pozos de la microplaca para cada calibrador, control y muestras de paciente para
que sean ensayadas por duplicado. Colocar cualquier pozo de la tira no usada dentro de la
bolsa de aluminio, sellarla y almacenarla a 2-8ºC.
2. Pipetear 0.025 ml (25μl) de los calibradores, controles o muestras dentro del pozo asignado.
44
3. Adicionar 0.100ml (100μl) de Reactivo IgE Biotina a cada pozo. Es muy importante
dispensar todos los reactivos cerca al fondo del pozo revestido.
4. Mezclar la microplaca ligeramente por 20-30 segundos y cubrir.
5. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente
6. Descartar los contenidos de la microplaca por decantación o aspiración. Si se decanta, se
debe sacudir la placa sobre un papel absorbente.
7. Adicionar 300μl de buffer de lavado (ver Sección Preparación de Reactivos), decantar
(golpear y secar) o aspirar. Repetir cuatro 2 veces más para un total de 3 lavados. Se puede
utilizar un lavador de placas automatizado o manual.
Seguir las instrucciones del fabricante para un uso apropiado. Si se usa una botella lavadora,
llene cada pozo (evitar la formación de burbujas) para dispensar el lavado. Decantar el lavado
y repetir 2 veces más.
8. Adicionar 0.100 ml (100μl) de Reactivo Enzimatico IgE a cada pozo. No agitar las placas
después de adicionar la enzima.
9. Incubar a temperatura ambiente por 30 minutos.
10. Desechar el contenido de la microplaca por medio de decantación o aspiración. Si se
realiza decantación, seque la placa con papel absorbente.
11. Adicionar 350μl de buffer de lavado (ver Sección Preparación de Reactivos), decantar
(golpear y secar) o aspirar. Repetir cuatro 2 veces más para un total de 3 lavados. Use puede
utilizar un lavador de placas automatizado o manual. Seguir las instrucciones del fabricante
para un uso apropiado. Si se usa una botella lavadora, llene cada pozo (evitar la formación de
burbujas) para dispensar el lavado. Decantar el lavado y repetir 2 veces más.
45
12. Adicionar 0.100ml (100μl) de solución de sustrato de trabajo en cada pozo (Ver Sección
de preparación de reactivos. Siempre adicione reactivos en el mismo orden para minimizar las
diferencias del tiempo de reacción en los pozos.
13. Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos en oscuridad
14. Agregar 0.050ml (50μl) de solución STOP y esperar 15-20 segundos.
15. Leer las Absorbancias de los pocillos a 450nm. Los resultados deben leerse dentro de los
30 minutos de adición de la solución stop.
3.6 TIPOS DE ANÁLISIS
El análisis que se utilizara para la elaboración de esta investigación será de tipo
cuantitativo, se hará estadística descriptiva con gráficos, tablas, frecuencias, porcentajes,
medidas de tendencia central (media) y dispersión.
3.7 CONSIDERACIONES ÉTICAS
Para la recolección de datos se contó con consentimiento informado por escrito de los
padres de los niños, bajo normas de manejo ético, moral y profesional. Siguiendo lo
estipulado en la cuarta carta de Helsinki.
46
CAPÍTULO IV
4.1 RESULTADOS
Tabla 3 . DISTRIBUCIÒN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO - SEGÚN NIVEL IgE
Nivel Ig E Frecuencia Porcentaje
Normal 31 33,33
Alto 62 66,67
Total general 93 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Ilustración 3. DISTRIBUCION DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO
SEGÚN NIVEL IgE
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
33%
67%
DISTRIBUCION DE NIÑOS SEGUN INTERPRETACION DE RESULTADO DE Ig E
NORMAL
ELEVADO
47
Análisis
Se aprecia que la mayoría de niños tiene niveles altos de Ig E con el 67 % mientras presentan
niveles normales el 33 % de los niños.
De acuerdo a estos datos se obtuvo una prevalencia de 51.88 casos positivos por cada 1.000
niños escolares entre 6 y 12 años de edad en relación a la muestra obtenida de niños en la
escuela Madre de la Divina Gracia de la Parroquia de San Rafael.
Tabla 4. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO SEGÚN LA PRESENCIA DE SIGNOS ALERGICOS
PRESENCIA DE SIGNOS ALERGICOS FRECUENCIA PORCENTAJE
NO 31 33,33
SI 62 66,67
Total general 93 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Ilustración 4. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO SEGÚN LA PRESENCIA DE SIGNOS ALERGICOS
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
33%
67%
DISTRIBUCIÒN DE NIÑOS SEGUN PRESENCIA SINTOMAS DE ALERGIA
NO
SI
48
Análisis
Se aprecia que el 67% de niños escolares de la muestra total presentaron sintomatología
relacionada con la alergia y el 33 % no tuvieron sintomatología.
Tabla 5. DISTRIBUCIÒN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO SEGÚN EL SEXO
SEXO Frecuencia Porcentaje
FEMENINO 49 52,69
MASCULINO 44 47,31
Muestra Total 93 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
CHI CUADRADO P= 0,29 no estadísticamente significativo
Tabla 6. DISTRIBUCIÒN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO CON IgE ALTA - TABLA SEGÚN EL SEXO
SEXO Frecuencia Porcentaje
FEMENINO 36 58.1
MASCULINO 26 41.9
Total (IgE elevada) 62 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
CHI CUADRADO P= 0,21 no estadísticamente significativo
49
Ilustración 5. DISTRIBUCIÒN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO CON IgE ALTA GRAFICO SEGÚN EL SEXO
Análisis
Se Observa que en cuanto al sexo en el total de la muestra la mayoría de niños fueron del
sexo Femenino con 52,69 % y del masculino con el 47,31 % aunque no se encontró una
diferencia estadísticamente significativa p=0,29 mientras que en el grupo de niños con IgE
elevada predomina de igual forma el sexo femenino con 58% y el masculino con 42% sin
diferencia estadísticamente significativa p=0,23.
Tabla 7. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO Y PRESENTARON NIVELES ALTOS DE IgE SEGÚN LA EDAD
Años Frecuencia Porcentaje
6 8 12.90
7 8 12.90
8 5 3.06
9 6 3.67
10 13 20.90
58%
42%
Frecuencia
FEMENINO MASCULINO
50
11 10 16.10
12 12 19.35
Total (IgE elevada) 62 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
PROMEDIO 8.85 ± 2,03 AÑOS
Análisis
Observa que un 23,66 % de niños tienen 12 años y es el grupo etario más frecuente en el
estudio total de la muestra, seguido de los del grupo de 10 años con el 17,2 % y de los de 11
años con 15,05 %. El Promedio fue de 10,14 ± 2,12 Años. El grupo etario que predomina en
los niños con IgE elevada es el de 10 años con un 20,90% seguido del grupo de 12 años con
un 19,35% y un promedio de edad menor de 8,85 ± 2,03. No se encontró diferencia
estadísticamente significativa entre los grupos etarios p=0, 32.
Tabla 8. DISTRIBUCIÓN SEGÚN EL DIAGNOSTICO PREVIO DE ALERGIAS
DIAGNOSTICADO DE
PADECER ALERGIAS FRECUENCIA PORCENTAJE
NO 70 75,27
SI 23 24,73
Muestra Total 93 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
51
Ilustración 6. DISTRIBUCIÓN SEGÚN EL DIAGNOSTICO PREVIO DE ALERGIAS
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Tabla 9. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN NIVEL IgE Y EL DIAGNOSTICO PREVIO DE ALERGIAS
INTERPRETACIÒN
ALERGICO Total
general NO SI
Normal 30 1 31
Alto 40 22 62
Total general 70 23 93
Análisis
Se reporta según diagnóstico previo de padecer alergias que el 75 % no han sido
diagnosticados de alergia y el 25 % tienen diagnóstico de atopia.
En el estudio se correlaciona el grupo que fue diagnosticado de atopias previamente con los
niveles altos de IgE en un 24%.
75%
25%
DISTRIBUCION DE NIÑOS SEGUN DIAGNOSTICO DE ALERGIA
NO
SI
52
Tabla 10. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON IgE ELEVADA SEGÚN SU POSIBLE CAUSA DE ALERGIA
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Ilustración 7. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON IgE ELEVADA SEGÚN SU POSIBLE CAUSA DE ALERGIA
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
18%
7%
6%
8% 61%
DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON IgE ELEVADA SEGÚN SU POSIBLE CAUSA DE ALERGIA
Mascotas Medicamentos Productos Químicos Alimentos No exhibe
POSIBLE CAUSA
DE ALERGIA
FRECUENCIA PORCENTAJE
Mascotas 11 18.0
Medicamentos 4 7.0
Productos Químicos 4 6.0
Alimentos 5 8.0
No exhibe 38 61.0
Total general 62 100,00
53
Análisis
El 18.0% de los niños tienen como causa más común de alergia a las mascotas seguida de los
medicamentos y alimentos con el 8.0 %, en el estudio de los niños que exhiben y que tenían un
diagnostico alérgico previo la causa más probable fueron las mascotas en un 43.4%.
Tabla 11. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON IgE ELEVADA RESPECTO A LOS ANTECEDENTES FAMILIARES DE ALERGIA
ANTECEDENTES FAMILIARES DE
ALERGIA
FRECUENCIA PORCENTAJE
NO 22 35.4
SI 40 64.6
Total general 62 100,00
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Ilustración 8. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS CON IgE ELEVADA RESPECTO A LOS ANTECEDENTES FAMILIARES DE ALERGIA
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
35.4
64.6
NO SI
PO
RC
ENTA
JE
DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN ANTECEDENTE FAMILIAR DE ALERGIA
54
Análisis
Se observa que el 64.6 % de los 62 niños que tienen la IgE elevada además tienen
antecedentes familiares de alergias.
Tabla 12. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN NIVEL IgE Y LA PRESENCIA DE SIGNOS ALERGICOS
INTERPRETACION
SIGNOS ALERGICOS Total
general NO SI
Normal 14 17 31
Alto 17 45 62
Total general 31 62 93
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Análisis
Se observa que el 72.6% tiene una IgE elevada y presentan signos alérgicos.
Tabla 13. DISTRIBUCIÓN DE NIÑOS SEGÚN NIVEL IgE Y SEXO
INTERPRETACION IgE
SEXO Total
general FEMENINO MASCULINO
Normal 14 17 31
Alto 35 27 62
Total general 49 44 93
Elaborado Por: Jeffer Cisneros 2015
Análisis
Se observa que no hay diferencia estadística en relación a los niveles de IgE y sexo.
55
4.2 DISCUSIÓN
El presente trabajo describe los resultados obtenidos durante un estudio transversal llevado a
cabo en 93 niños. A los cuales se realizó encuestas y se extrajo 5 cc de sangre para obtener
suero para realizar determinación cuantitativa de Ig E total.
Se evidencia que en cuanto al sexo la mayoría de niños de la muestra total estudiada fueron
del sexo Femenino con 52,69 % y del masculino con el 47,31 % mientras que en el grupo de
niños con IgE elevada predomina de igual forma el sexo femenino con 58% y el masculino
con 42% sin diferencia estadísticamente significativa p=0,23.
Observa que un 23,66 % de niños tienen 12 años siendo el grupo etario más frecuente seguido
de los de 10 años con el 17,2 % y de los de 11 años con 15,05 %. El Promedio fue de 10,14
± 2,12 Años. El grupo etario que predomina en los niños con IgE elevada es el de 10 años con
un 20,90% seguido del grupo de 12 años con un 19,35% y un promedio de edad menor de 8,85
± 2,03. No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre los grupos etarios p=0,
32. Similar a lo reportado por (Idrovo, Sapatanga, & Solano, 2013). Las enfermedades
alérgicas son un problema de salud importante en la etapa escolar con notorio aumento tanto
de la prevalencia como de su incidencia. Las complicaciones que originan repercuten no solo
en el aspecto biológico sino también en la calidad de vida. El estudio tuvo por objeto
determinar los valores de IgE sérica total por Microelisa en escolares de ambos sexos de la
ciudad de Cuenca, entre 6 y 12 años de edad
Se reporta según diagnosticado de padecer alergias que el 75 % no han sido diagnosticados de
alergia y el 25 % tienen diagnóstico de atopia.
56
El 18.0% de los niños tienen como causa más común de alergia a las mascotas seguida de los
medicamentos y alimentos con el 8.0 %, en el estudio de los niños que exhiben y que tenían un
diagnostico alérgico previo la causa más probable fueron las mascotas en un 43.4%. Similar a
lo reportado por (Idrovo, Sapatanga, & Solano, 2013) con los siguientes factores de riesgo:
ubicación geográfica, exposición ambiental, exposición al humo del tabaco, fármacos,
alimentos, aditivos alimentarios, polvo de las casas, polen, animales e insectos. Se aplicó una
encuesta a 900 niños que asisten a 13 escuelas públicas y privadas de la ciudad de Cuenca
Se aprecia que el 67% de niños escolares presentaron sintomatología relacionada con la
alergia y el 33 % no tuvieron sintomatología y que el 25% tiene antecedente familiar de
alergias. Se observa además que el 64.6 % de los 62 niños que tienen la IgE elevada tienen
antecedentes familiares de alergias.
El Investigador (Ramirez Hoffmann , 2014) en su estudio establece que es importante resaltar
que en la población de niños estudiada, el factor de riesgo con más frecuencia asociado con el
desarrollo de asma y rinitis alérgica fue el antecedente familiar de enfermedad alérgica. El
riesgo de desencadenar alergias en niños nacidos de dos padres alérgicos es de 60% a 70%
comparado con 25% y 40% de niños nacidos de un solo padre alérgico7,35. Esta asociación se
comprueba en el presente estudio, donde el riesgo de presentar asma en los niños de niveles
socioeconómicos bajos o rinitis alérgica en los niños de estratos socioeconómicos más altos
está directamente relacionado con el antecedente familiar. Por otro lado se han descrito
algunos genes que pueden estar involucrados en las enfermedades alérgicas y deben ser
tomados en cuenta.
57
Se aprecia que la mayoría de niños tiene niveles altos de Ig E con el 67 % mientras presentan
niveles normales el 33 % de los niños. (Idrovo, Sapatanga, & Solano, 2013) Reporto que los
valores de la IgE considerados como normales va de 0 a 86 UI/ml; el 58% de los niños con
alergia presentan valores superiores a lo normal. Existe una relación estadísticamente
significativa (p<0,05), entre los valores altos de IgE con los siguientes factores de riesgo
estudiados: exposición al humo del cigarrillo, contacto con mascotas del hogar, ingestión de
alimentos con colorantes y exposición a ambientes húmedos, cerrados y polvorientos. Los
individuos atópicos pueden presentar alergias múltiples durante su vida e incluso en un
momento determinado de la misma, esto significa que tienen IgE específica contra múltiples
alérgenos y consecuentemente por ello los títulos de IgE total son comúnmente más altos entre
la población atópica en relación a los no atópicos. Sin embargo, encontrar IgE sérica total en
concentraciones normales no descarta el diagnóstico de enfermedad atópica ya que pudiera
existir IgE específica elevada a uno o pocos alérgenos y ello no dar repercusión mayor en la
cifra total la misma que se podría entonces mantener dentro de títulos normales. De hecho, se
ha demostrado que aproximadamente la mitad de los pacientes con alergia IgE tienen una IgE
total dentro de valores normales, por tanto, el valor predictivo de esta prueba es bastante
limitado.
4.3 CONCLUSIONES
Se encontró una tasa de prevalencia de 51.88 casos positivos por cada 1.000 niños escolares
entre 6 y 12 años de edad de la parroquia de San Rafael.
Niños tiene niveles altos de Ig E con el 67 % mientras presentan niveles normales el 33 %
Se observa que no hay diferencia estadística en relación a los niveles de IgE por edad y sexo.
58
Se sabe que el 75 % no han sido diagnosticados de alergia y el 25 % tienen diagnóstico de
atopia previo al estudio. Además se observa que el 64.6 % de los 62 niños que tienen la IgE
elevada tienen antecedentes familiares de alergias.
De acuerdo con la sintomatología un 66.67% de la muestra estudiada presentaba signos
alérgicos lo cual concuerda con el 67% de niños con niveles altos de IgE.
Se observa que el 72.6% tiene una IgE elevada y presentan signos alérgicos.
4.4 RECOMENDACIONES
Incentivar investigación tanto en el ámbito de la alergología básica como clínica sobre la Ig E
y sus acciones.
Realizar estudios sobre IgE especifica ya que se encontró una prevalencia de IgE total elevada
en esta población de estudio.
Evaluar las complicaciones que existen en estos niños ya que un 25% tiene un diagnóstico
previo de alergias y además evaluar los riesgos a futuro en estudios más amplios ya que se
puede observar una prevalencia de IgE elevada.
Realizar más investigaciones de la relación IgE total como específica para usarlo como
marcador biológico de alergia.
59
CAPÍTULO V
LA PROPUESTA
5.1 TITULO
“IgE COMO MARCADOR DE HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1”
5.2 JUSTIFICACIÓN
La Hipersensibilidad tipo 1 es una patología que ha aumentado ampliamente en las últimas
décadas y la Organización Mundial de la Salud (OMS) le considera como una preocupación
médica y epidemiológica, se la conoce también como hipersensibilidad inmediata debido a su
aparición en los pocos minutos después del contacto con el antígeno, en la práctica clínica
estas reacciones se denominan alergia o atopía afectando a más del 30% de la población, las
IgE son las principales inmunoglobulinas que intervienen en esta respuesta inmune y son un
marcador indispensable para su diagnóstico.
5.3 BENEFICIOS
Los beneficiarios serán los estudiantes, el personal docente de la Universidad Central del
Ecuador, así como la población en general, dando a conocer sobre esta enfermedad, sus datos
e información más importante y su impacto en los niños.
5.4 OBJETIVO
Difundir la información mediante un tríptico para que tanto estudiantes, docentes y la
población en general conozcan los problemas que causa la hipersensibilidad tipo 1 y la
importancia de su diagnóstico temprano.
5.5 DESARROLLO
60
Es una inmunoglobulina producida por
los linfocitos B activados que se
encuentra en la sangre y sirve como
marcador alérgico y parasitario.
La titulación de esta inmunoglobulina
se mide en laboratorios por distintas
técnicas.
Esta inmunoglobulina es clave en la
activación de la activación inmunológica
de la Hipersensibilidad tipo 1.
Por eso, sus niveles suelen estar bastante
elevados tanto en pacientes alérgicos como
en personas que sufren alguna parasitosis.
La IgE se une a receptores encontrados en
mastocitos, eosinófilos, y basófilos,
induciendo la liberación de citocinas y
moléculas proinflamatorias cuando la
inmunoglobulina reconoce su antígeno
específico.
Se encuentra el problema que causa las
molestias para tratarlo de una manera
efectiva.
Evita errores en el diagnóstico
equivocado y tratamientos erróneos
Ayuda a tomar medidas para disminuir
o tratar esta enfermedad principalmente
en los niños de una manera precoz
antes de que se agraven sus síntomas.
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL
ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO
E HISTOTECNOLÓGICO
Autor: Jeffer Cisneros
(2015)
Quito, Agosto 2015
La IgE
IgE COMO MARCADOR DE
HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1
(ALERGIAS)
¿Porque es importante saber
los niveles de IgE en niños?
La IgE
61
También conocida como hipersensibilidad
inmediata debido a su rápida aparición
después del contacto con el antígeno
originando activación del sistema inmune
respecto a los linfocitos, mastocitos,
eosinofilos y basófilos liberando
mediadores de inflamación provocando la
alergia o atopia.
Una detección y diagnóstico temprano de
los procesos alérgicos ayuda en un
tratamiento específico y ayuda en el estado
de salud y la recuperación temprana en
pacientes menores de edad mejorando su
calidad de vida y en el control de esta
enfermedad que afecta aproximadamente al
20% de la población mundial y es
preocupación de los organismos de salud
mundiales
Las complicaciones principalmente
dependen del sistema inmunológico de
cada paciente y del tipo de alérgeno por lo
que pueden ser leves como un sarpullido o
incluso mortales como en ataques de asma
y anafilaxia.
A través del aire cuando una persona que
tiene la enfermedad estornuda o tose.
También se da cuando una persona toca las
ampollas de la persona infectada
piel seca
picor en la piel
urticaria
erupción cutánea
estornudos continuos
problemas respiratorios
molestias oculares
reacciones ante comidas
reacciones a medicamento
¿QUÉ ES LA
HIPERSENSIBILIDAD TIPO 1?
¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA
DEL DIAGNÓSTICO DE
ALERGIAS EN NIÑOS?
SIGNOS Y SÍNTOMAS
¿CUÁLES SON LAS
COMPLICACIONES?
¿CUÁLES SON LOS FACTORES
PREDISPONENTES?
62
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67
ANEXOS ANEXO 1
68
ANEXO 2
CRONOGRAMA
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
AÑO 2015
TIEMPOS
MESES 2015
JUL
AGO
SEP
OCT
NOV
DIC
SEMANAS 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
1.- SELECCION DEL TEMA X X
2.- Aprobación del tema X
3.- Diseño de la investigación X X
4.- Desarrollo del marco teórico X X
5.- Diseño del instrumento X
6.- Recolección de datos X
7.- Procesamiento de datos X
8.- Análisis de datos X
9.- Conclusiones y recomendaciones X
10.- Redacción del informe X
11:_ Presentación X
12.- Defensa X
69
ANEXO 3
ANEXO 4
ANEXO 5
