Bases moleculares

Principio molecular de FISH

La tcnica FISH toma como fundamento la complementariedad de los cidos nuclicos, la cual puede ser DNA y/o RNA, a travs de puentes de hidrgeno formados entre las bases: adeninatimina (DNA) o uracilo (RNA) y citosina-guanina (DNA y RNA). Este apareamiento da lugar a una doble cadena en la cual una cadena, tiene la orientacin opuesta a la otra con respecto al esqueleto azcar-fosfato. La secuencia es leda de 5' a 3'.

Los elementos bsicos de FISH son:

Secuencia blanco de ADNSondas

Antes de la hibridacin, la sonda de ADN es etiquetada con nick detraduccin, etiquetado de primers al azar y PCR. Hay dos estrategias de etiquetado en FISH:

Indirecta: sondas marcadas con hapteno. Directa: sondas marcadas con fluorfo.

A continuacin, la sonda marcada y el ADN diana se desnaturaliza. Y finalmente, la combinacin de la sonda desnaturalizada y secuencia blanco permite la hibridacin de secuencias de ADN complementarias. Es importante recordar que la sonda etiquetada indirectamente permite la visualizacin del hapteno no fluorescente utilizando un sistema de deteccin enzimtica o inmunolgica

Tipos de sondas

Sondas especficas de un locus

Sondas que se hibridan a una regin particular de un gen. Son tiles cuando se ha aislado una pequea parte de un gen y se quiere averiguar en qu cromosoma se encuentra.

Sondas alfoides o centromricas

Sondas que contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los centrmeros de los cromosomas. Cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta. Se puede averiguar si un individuo tiene el nmero correcto de cromosomas o si tiene un cromosoma extra.

Sondas para cromosomas completos

Sondas de un tamao reducido, cada una hibridada a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral. Se consiguen imgenes en color que permiten examinar los cariotipos de una forma ms exacta.

Bibliografa:Copyright 2005 Nature Publishing Group, Speicher, M. R., et al., The new cytogenetics: Blurring the boundaries with molecular biology, Nature Reviews Genetics 6, 782792

Universidad Autonoma de Mexio (UNAM). HIBRIDACIN in situ. [Web en lnea]. . [Consulta: 9-9-2011]

Instituto Qumico Biolgico (IQB). HIBRIZACIN FLUORESCENTE IN SITU. [Web en lnea]. . [Consulta: 9-9-2011]