ESPECTROSCOPA ULTRAVIOLETA-VISIBLE
FUNDAMENTOS
En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz deenerga suficiente como para provocar transicioneselectrnicas, es decir promover un electrn desdeun orbital de baja energa a uno vacante de altaenerga
FUNDAMENTOS
Transiciones electrnicas y espectro de tomos
FUNDAMENTOS
Transiciones electrnicas y espectro de molculas
FUNDAMENTOS
FUNDAMENTOS
TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
LEY DE LAMBERT-BEER
La intensidad de un haz de luz monocromtica, que incideperpendicularmente sobre una muestra, decrece segn la siguienteexpresin:
Absorbancia = x concentracin x paso pticoA = * c * b
: coeficiente de extincin Molar o absortividad molar (L/mol*cm)
a: absortividad especifica (g L-1) y se expresa en (L/g*cm)
Ej.1 Una solucin de permanganato de potasio 7,5x10-5 M, tieneuna transmitancia de 36,4% cuando se mide en una celda de 1,05cm a una longitud de onda de 525 nm.Calculara) Absorbancia de la solucinb) Absortividad molar del KMnO4
a) A= -log T = -log 0,364 = -(-0,4389) = 0,439
b) = A / b x c = 0,4389 / 1,05 cm x (7,5x10-5) mol L-1
= 5,57x103 L mol-1 cm-1
DESVIACION DE LA LEY DE LAMBERT-BEER
INSTRUMENTALESLuz monocromticaRadiacin parsitaErrores de lectura
QUMICASSoluciones concentradas (menor a 0,01 M)Equilibrios (dimerizacin, cido-base, etc.)TemperaturaEfecto del solvente o reactivos.
Linealidad hasta 1 absorbancia !!!, ideal cuantificar cerca de 0,4
unidades de absorbancia
Pendiente = coeficiente absortividad
Ejemplos de cromforos
ADICIN DE ABSORBANCIAS
ADICIN DE ABSORBANCIAS
La absorbancia de una disolucin 0,00010 M de un colorante A en
una celda de 1,00 cm es de 0,982 a 420 nm y 0,216 a 505 nm. La
absorbancia de una disolucin 0,00020 M de un colorante B es 0,362
a 420 nm y 1,262 a 505 nm. La absorbancia de una mezcla de los dos
colorantes es 0,820 a 420 nm y 0,908 a 505 nm. Calcular la
concentracin de ambos colorantes en la mezcla.
Colorante A0,00010 M
Colorante B0,00020 M
420 nm 0,982 abs. 0,362 abs.
505 nm 0,216 abs. 1,262 abs.
Colorante A0,00010 M
Colorante B0,00020 M
420 nm 9820 1810
505 nm 2160 6310
420 nm: 0,820 = 9820*1*CA + 1810*1*CB505 nm: 0,908 = 2160*1*CA + 6310*1*CB
INSTRUMENTACIN
INSTRUMENTACIN
INSTRUMENTACIN
Anlisis InstrumentalLaboratorio de Espectroscopa UV-VIS
Produccin de Bioetanol
1.- Objetivos:
- Estudio de fermentacin de glucosa mediante levadura de cervezasaccharomyces cerevisiae.
- Anlisis colorimtrico del producto de la fermentacin.- Obtencin de los espectros en el rango UV-VIS de los reactivosinvolucrados en la reaccin, as como de los productos de la reaccin.
..EN EL LABORATORIO
Determinacin de glucosa: La determinacin de glucosa se realizamediante el uso de cido 3,5-dinitrosaliclico, mtodo DNS paraazcares reductores. Al combinar un azcar reductor con el cido3,5-dinitrosaliclico, el grupo funcional aldehdo o el grupofuncional cetona del azcar, son oxidados a grupos carboxilos,mientras que el cido 3,5-dinitrosaliclico es reducido a cido 3-amino,5-nitrosaliclico, el cual tiene una coloracin naranja cuyaintensidad es proporcional a la concentracin del azcar. Ladeterminacin de la absorbancia se realiza a una longitud de ondade 540 [nm]
..EN EL LABORATORIO
540 nm
:. Glucosa inicial Glucosa final = Glucosa rxn.Fermentacin
..EN EL LABORATORIO
Ej.2. Porcentaje (%) de conversin de glucosa despus de 7 das de reaccin:
PM (glucosa) = 180 g/molGlucosa inicial = 6,5 % p/vGlucosa final = 3,85 x 10-3 M
Glucosa inicial = (6,5 g / 180 g mol-1)/0,1 L = 0,36 MGlucosa final = 0,00385 M
Glucosa inicial glucosa final = 0,36 0,00385 = 0,356
% conversin = 0,356/0,36 *100 = 98,9%
..EN EL LABORATORIO
Ej.3 Clculo de glucosa al final de la fermentacin
Datos
Alcuota = 2 mlVolumen de aforo = 25 ml
Absorbancia solucin = 0,425
Ecuacin de la recta: A = 0,0936 * C + 0,007
Donde: A = AbsorbanciaC = Concentracin de glucosa [mM] (10-3M)
:. De la ecuacin de la recta: 0,425 = 0,0936 *C + 0,007C= 4,47 mM
Factor de dilucin
Glucosa = 4,47 mM * 25 ml/2 ml = 55,8 mM de Glucosa
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