Microscopia de contraste de fase
Microscopia de contraste de fase
Contraste: diferena de iluminao entre amostras e os arredores ou o plano de fundo.Transmisso = luz + fluorescncia (absoro + refrao+ reflexo)
fluorescncia
refrao absoro
LUZ
reflexo
Microscopia de contraste de fase
Tipos de contraste de fase
Positivo: 1) Positivo: amostra mais escura do que o plano de fundo; 2) Negativo: amostra mais clara do que o plano de fundo. Negativo:
EquaoContraste = (If - Ia) x 100 If
I = intensidade de luz do campo (f) ou da amostra (a).
Microscopia de contraste de fase
Tipos de amostra
Amplitude: 1) Amplitude: alteram a intensidade da luz transmitida. Amostras transparentes coradas causam o mesmo efeito. 2) Fase: no absorvem luz, mas causam mudana de fase Fase: nos comprimentos de onda que a atravessam.Amostra transparente Amostra tipo amplitude Amostra tipo fase
Amostra tipo misto (maioria)
Microscopia de contraste de fase
Contraste em amostra com baixo retardo de fase Plano daimagem
ocular
- Os raios no desviados so retardados cerca de de l em relao aos raios no desviados; Lente do tubo - a diferena de intensidade de luz no percebida pelo olho humano objetiva (no d contraste).Raios desviados Raios no desviados Distncia focal amostra condensador
Microscopia de contraste de fase
O que o contraste de fase faz?
1) Contraste de fase positivo - Acelera os raios no desviados em de P elevando a diferena de fase total para de P; - a amostra fica escura, circundada por halo claro, sobre um fundo mais claro (menos claro que o halo). D contraste. 2) Contraste de fase negativo - Retarda os raios no desviados em de P elevando a diferena de fase total para de P; - a amostra fica clara, circundada por halo escuro, sobre um fundo mais escuro (menos escuro que o halo). D contraste.
Microscopia de contraste de fase
Configuraono desviados + 90 No desviados objetiva amostra
Raios desviados 180 fora de fase Anel de fase Raios desviados 90 fora de fase
TrabalhaTrabalha-se nos planos da imagem conoscpica
condensador
Anel de fase
Microscopia de contraste de fase
ConfiguraoParte central do anel mais fina que a periferia Contraste positivo
Parte central do anel mais fina que a periferia
Contraste negativo
Microscopia de contraste de fase 1)
Dados tcnicos Acessrios obrigatrios: anel de fase para obrigatrios:condensador e objetivas com anis de fase;
extra: 2) Acessrio extra: filtro verde. Isto porque os o sistema projetado para funcionar melhor no centro do espectro visvel (cor verde).
Microscopia de contraste de fase
Tcnicas e contrasteAmostra Transparente Corada Transparente Transparente Transparente Transparente Tcnica Campo claro Campo claro Contraste de fase Contraste diferencial de interferncia Campo escuro Fluorescncia Contraste 2-5% 25% 15-20% 15-20% 60-75% 60-75%
Microscopia de contraste de fase
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Alinhamento dos anis de faseUsar telescpio de fase (o mesmo usado para ver a imagem conoscpica) para ver os anis pela ocular; Alinhar os anel do condensador movimentando os parafuso de ajuste no condensador prprio para a tcnica; Sem alinhamento a tcnica no funciona.
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Anis no alinhados
Anis alinhados
Microscopia de contraste de fase
Indicaes
- Amostras vivas ou fixadas no coradas; - Melhorar contraste para visualizao de detalhes em amostras coradas (ex.: estriaes transversais de msculos)
Microscopia de contraste de fase
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Limitaes
os halos podem obscurecer os detalhes que circundam a amostra; os anis de fase reduzem a resoluo da objetiva; no adequada para amostras espessas.
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Microscopia de contraste de fase
Imagens
- Clulas de ovrio de hamster
Contraste de fase positivo
Contraste de fase negativo
Osso de dinossauro fossilizado com quartzo no canal de Havers Preparo por desgaste
Contraste de fase Osso compacto humano Preparo por desgaste
Contraste de fase + colorao Aterosclerose (placa de colesterol na parede da artria)
Contraste de fase + colorao Pneumonia brnquica
Contraste de fase + HE Lngua humana
Contraste de fase + HE Cartilagem hialina
Contraste de fase Plen de plantasc
Contraste de fase + HE Neurnio multipolar
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