CULTIVOSMétodos Tradicional y Automatizado
Dra. Susana PoggiLab. de Micobacterias “Dr. Abel Cetrangolo”Cátedra de Neumonología – Inst. “Dr. Raúl Vaccarezza”Hospital F.J. Muñiz.
CARACTERISTICAS DEL CULTIVO
• Complementa a la baciloscopía, pone en evidencia bacilos viables de la muestra (10 – 100 b/ml).
• Tiene mayor sensibilidad, es más compleja y más cara que la baciloscopía.
• Caracteriza los bacilos y permite diferenciar el M. tuberculosis del MOTT.
• Permite hacer ATB.• Tiene 100% de especificidad.• Es el método de referencia con el que se tiene que
evaluar todo nuevo método.
REQUERIMIENTOS QUE LIMITAN LA IMPLEMENTACION DE CULTIVOS
• Mayor dedicación del personal.
• Entrenamiento en prácticas de mayor riesgo biológico.
• Equipos de mediano y alto costo con mantenimiento asegurado.
• Laboratorio espacioso con direccionamiento y purificación del aire.
POBLACIONES MICROBIANAS EN LAS LESIONES DE LA TUBERCULOSIS HUMANA
FORMAS DE PRESENTACION SEGÚN MEDIO DE CULTIVO
• Formación de colonias en medio sólido (Löwenstein Jensen y Stonebrink).
• Turbidez en un caldo (Dubos).• Cambio de color en sensor incorporado
(MBBact) o emisión de fluorescencia (MGIT) cuando el bacilo libera CO2 o consume O2.
• Medición con isótopos radiactivos de CO2 (Bactec 460) liberado por las micobacterias y medido en una escala.
COMPOSICION DEL MEDIO DE LÖWENSTEIN-JENSEN
COMPOSICION DEL MEDIO DE STONEBRINK
COMPOSICION DEL MEDIO DE MIDDLEBROOK
PREPARACION DE MUESTRAS PARA REALIZAR CULTIVOS
• Muestras con flora acompañante decontaminar con NaOH al 4% (se puede agregar Nacetil-cisteína ) neutralización con SO4H2 al 12% lavado con agua (método de Petroff).
• Muestras tomadas asépticamente de sitio estéril: se siembran sin tratar y tratadas con el método de Petroff.
SEGUIMIENTO DEL CULTIVO
• Siembra Verde (ácido)
Amarillo (básico)
• A las 48 hs se tapa, se revisa que no hubiera contaminación.
• Revisar la estufa cada 7/10 días.
• Sacar los positivos e informar.
• Descartar los negativos a los 60 días.
LECTURA DE CULTIVOS
• Fecha en que se observó el cultivo.• Cuantificación de colonias
Positivo 1 a 19 colonias+ 20 a 100 colonias++ +100 colonias separadas+++ colonias incontables
• Morfología de las colonias(rugosas, lisas, otras características peculiares)
• Pigmentación(no pigmentada, amarillenta, anaranjada)
CARACTERISTICAS DEL BACILO
• La luz solar, la desecación y el calor son bactericidas.El fenol, formol, formalheido e hipoclorito de sodio son letales.
• Puede resistir a bajas temperaturas.(2 a 4º C hasta -70º C). También a ciertos desinfectantes como trifosfato de Na y a bases fuertes como el NaOH.
• Se divide cada 18/24 hs, es aeróbeo y una atmósfera de CO2 al 10% favorece su crecimiento.
IDENTIFICACION DEL M. tuberculosis
• Colonias rugosas, secas de color crema.
• Test de identificación positivo y NAP.
• Métodos moleculares (sondas).• Pruebas bioquímicas.
Niacina +Catalasa inhibida a 68º CNitratasa +Velocidad de desarrollo lenta.
MEDIOS LIQUIDOS
• Dubos Cepario Reactivación de cepas CIM
• Middlebrook Bactec MBBact Mgit
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