FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE
GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA
AÑO 2015
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
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INDICE
Organización de la Cátedra 3
Condiciones para aprobar la materia 6
Objetivos Generales de la Materia 7
Programa de la materia 7
Programa analítico 9
Cronograma de clases de bioquímica 16
Bibliografía recomendada y complementaria 17
Instructivo para confección de monografía 19
Normas de Bioseguridad 23
Materiales de Laboratorio 28
Laboratorios 36
Laboratorio de Proteínas 37
Reacción del Biuret 37
Prueba de Heller 38
Laboratorio de Enzimas 39
Reconocimiento y Desnaturalización de la Catalasa 39
Laboratorio de Ácidos Nucleicos 40
Electroforesis de ADN 41
Bioseguridad (1) 41
Laboratorio de Glúcidos 42
Molisch 42
Lugol 43
Fehling 44
Laboratorio de Lípidos 45
Formación de emulsiones 45
Saponificación 46
Bioseguridad (2) 47
Laboratorio de Metabolismo de Lípidos 47
Caracterización de Cuerpos Cetónicos en orina 47
Laboratorio de Hormonas 48
Determinación de glucosa en orina con tiras reactivas 49
Laboratorio de Vitaminas 50
Det. del poder reductor deL ácido ascórbico (Vitamina C): 51
Reacción de Fehling 51
Reacción de Lugol 52
Bioseguridad (3) 53
Laboratorio de digestión de Rumiantes Monogástricos y Aves 53
Hidrólisis del almidón 54
Determinación de Tripsina en Mat. Fecal de aves 55
Detección de microorganismos yodófilos 56
Análisis del Licor Ruminal: 57
Bioseguridad (4) 58
Ejercicios de Seminario 60
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Organización de la Cátedra de Bioquímica Nómina de Docentes de la Cátedra
Apellido y Nombres Cargo Docente Dedicación
Dra. GLADIS LILIA SANDOVAL (GLS) Prof. Titular. Exclusiva
M.V. ENRIQUE CELSO ALMIRÓN (ECA) Prof. Adjunto. Semiexclusiva
MSc Bioq. GRACIELA P. ESQUIVEL (PEL) Jefe de trabajos Prácticos Simple
Dra. MSc SILVANA LICIA MARUÑAK (SLM) Aux. Docente de I Exclusiva
MSc Bioq. MARÍA BÁRBARA DE BIASIO (MBDB) Aux. Docente de I Exclusiva
M.V. GLADYS ROXANA E. OBREGÓN (GREO) Aux. Docente de I Simple
M.V. VALERIA INÉS AMABLE (VIA)* Aux. Docente de I Simple
M.V. GABRIELA LAFFONT (GVL) Aux. Docente de I Simple
M.V. MARIANO PINO (MSP) ** Aux. Docente de I Semiexclusiva
Sr CLAUDIO R. ROMERO Ayudante Alumno Simple
Srta MARÍA EUGENIA DIAZ BURATOVICH Ayudante Alumno Simple
Srta. DANIELA ELIZABETH CARROCINO Ayudante Alumno Simple
*En uso de licencia sin goce de haberes. **Dedicación simple completando una semidedicación
hasta finalizar la licencia*.
Iniciación y finalización del Ciclo lectivo 2013:
Fecha de Iniciación 06/04/15 Clase Inaugural
Fecha de Finalización 06/07/15 Evaluación Integral
Modalidad: Cursado promocional – Primer cuatrimestre.
El presente régimen promocional de la materia incluye la opción de regularizarla para ser aprobada
en las sucesivas mesas de examen.
Días y Horarios de Clases: lunes y jueves entre las 8:00 y las 16:00 o 18hs
Horarios, Salones y Docentes a cargo de clases
Clase Comisión de
TP
Horario Docente a cargo Salón
Lunes / Jueves
Clases Teóricas (IT) Todas 10:00-12:00 Sandoval/Almirón/
Doc.Asignado
Modular “B”
Clases Prácticas
Áulicas 1 8:00-10:00 María B. De Biasio Modular “B” /
Salón Schiffo
2 8:00-10:00 Silvana L. Maruñak Modular “C”
3 12:00-14:00 Gabriela Valeria
Laffont
Modular “B”
4 12:00-14:00 Gladys Obregón Modular “C”
5 14:00-16:00 Mariano Pino Modular “B”
6 14:00-16:00 Claudio Romero Modular “C”
Clases de la
modalidad
semipresencial
7 A convenir Patricia Esquivel
Modular “B”/a
convenir
CLASES DE BIOQUÍMICA TEÓRICOS: LUNES Y JUEVES 10 A 12 hs
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SEMINARIOS
EN DÍAS COMUNES (SIN LABORATORIO NI RECUPERATORIO DE PARCIALES) LUNES Y JUEVES
COMISIÓN HORARIO DOCENTE A/C LUNES JUEVES
1 8,00 A 10,00 MBDB MODULAR B A.sCHIFFO
2 8,00 A 10,01 SLM MODULAR C MODULAR C
3 12 A 14 GVL MODULAR B MODULAR B
4 12 A 14 GREO MODULAR C MODULAR C
5 14 A 16 MSP MODULAR B MODULAR B
6 14 A 16 CRR MODULAR C MODULAR C
7 16 PEL MODULAR B MODULAR B
EN DÍAS CON LABORATORIO Y SEMINARIOS LUNES JUEVES
SEMINARIOS (CP ó Sem)
COMISIÓN HORARIOS DOCENTES A/C COMISIÓN HORARIOS DOCENTES A/C
1 8 A 10 MBDB 4 12 A 14 GREO
2 8 A 10 SLM 5 14 A 16 MSP
3 12 A 14 GVL 6 14 A 16 CRR
LABORATORIOS (L)
COM 4a 8,00-9,30 GREO COM 1a 8,00-9,30 MBDB
COM 4b 12,00-13,30 GREO COM 1b 12,00-13,30 MBDB
COM 5a 13,30 - 15,00 MSP COM 2a 13,30 - 15,00 SLM
COM 5b 15,00 - 16,30 MSP COM 2b 15,00 - 16,30 SLM
COM 6a 16,30 - 18,00 CRR COM 3a 16,30 - 18,00 GVL
COM 6b 18,00 - 19,30 CRR COM 3b 18,00 - 19,30 GVL
Modalidad: Cursado promocional – Primer cuatrimestre. El presente régimen promocional de la materia incluye la opción de regularizarla para ser aprobada
en las sucesivas mesas de examen.
Desarrollo de las clases
La materia se desarrolla según dictado cuatrimestral y régimen promocional para los alumnos
inscriptos. Son dieciséis (16) unidades temáticas (UT) del Programa Analítico vigente, distribuidas
en 4 unidades modulares (UM) las que incluyen 15 introducciones teóricas, 15 clases prácticas
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áulicas y 4 de Laboratorio, 4 evaluaciones parciales, con sus recuperatorios (uno para cada una +
uno extraordinario) y una evaluación integral (VER CRONOGRAMA).
Introducciones Teóricas (IT)
Días LUNES y JUEVES de 10:00 a 12:00 a cargo de la Profesora Titular, el Profesor
Adjunto, con la colaboración de los demás docentes diplomados (según asignación de temas). Se
desarrollan los conceptos centrales de los temas del programa analítico vigente, remarcando los
aspectos más importantes, utilizando diferentes recursos didácticos, a los cuales los alumnos tienen
acceso para consultar, copiar o fotocopiar, como por ejemplo archivos informáticos, láminas y
transparencias. Todo el material para los alumnos está accesible en la dirección web del Blog de la
Cátedra: www.catbioquimicavet.ecaths.com
Las clases tendrán una duración de 2 horas reloj y son de carácter optativo en general.
Clases Prácticas Áulicas (CP)
Clases de 2 horas reloj de duración, desarrolladas los días LUNES y JUEVES en aulas
Modular “B”, Modulares C y aula Schiffo, en forma simultánea en tres turnos, según comisiones (Nº
1 a 6). Se requiere asistencia mínima de un 80 % para los alumnos que desean promocionar la
materia y 75 % para la regularización.
Se evalúan mediante cuestionarios o trabajos prácticos que se resuelven y discuten en el contexto de
la clase. Con la participación en los trabajos indicados en cada clase práctica, se califican con escala
de 1 a 10. Estas actividades tendrán evaluaciones en cada UM.
Trabajos Prácticos de Laboratorio (L) Clases de 2 (dos) horas reloj de duración (cuatro L en total), desarrolladas en días LUNES y
JUEVES en el Laboratorio de Ciencias Básicas, en forma sucesiva en turnos a partir de las 8:00
horas, según las 6 (seis) comisiones de laboratorio. De asistencia y aprobación obligatoria, se
requieren 4/4 para los alumnos promocionales de la materia y 3/4 para los regulares. La calificación
se corresponderá con nota del 1 al 10.
Los requisitos son vestimenta adecuada (guardapolvo, guantes, etc.), participación en prácticos,
presentación de protocolos completos y aprobación de una evaluación oral o escrita sobre los
trabajos prácticos de cada L. Esta instancia también debe ser aprobada para acceder al examen
escrito de cada evaluación parcial (el 100 % para los alumnos que desean promocionar la materia y
el 75 % para los que la vayan a regularizar).
Evaluación del proceso
Como se desprende de lo anteriormente expuesto, cada evaluación parcial tiene varias
instancias de aprobación:
Actividad intra-aula
Cada clase práctica requiere de la lectura previa del tema, se efectuarán diferentes
modalidades de evaluación (oral o escrita, individual y/o grupal). Además, de la misma manera los
alumnos deben aprobar los Laboratorios implementados. En ambos casos (CP y L), los alumnos que
desean promocionar la materia deberán aprobar el 100 % de las clases asistidas y los que la vayan a
regularizar el 75 % de las clases dadas; dicha aprobación los habilita para responder el cuestionario
escrito. Las notas obtenidas corresponderán con una escala de aprobación de entre 6 a 10; notas
inferiores serán insuficientes y de ser necesario, el trabajo práctico deberá ser recuperado con
actividades ad hoc.
Actividad extra-aula
Paralelamente al desarrollo de las clases en el aula, se utilizarán dos modalidades de trabajo
grupal extra-aula: 1) producción escrita (monografía) y defensa oral sobre temas puntuales;
actividad denominada “exposiciones grupales”, que son presentadas en 10 a 15 min por cada grupo
en diferentes clases prácticas durante el cursado. 2) Además, se requiere a los alumnos una búsqueda
de trabajos de investigación sobre temas asignados previamente, con lectura grupal, interpretación y
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exposición en clases según normas explícitas. Estas actividades también serán evaluadas en la
misma forma que las actividades intra-aula y con los mismos efectos.
Evaluación escrita (cuestionario)
Se implementarán en los horarios que se informan en transparentes, una por cada UM, en
número de cuatro en total, cada una con un recuperatorio (para alumnos regulares). Se deberá
aprobar con nota 7 (siete) o más para la promoción y nota de 6 (seis) o más para la regularización.
Evaluaciones recuperatorias (oral)
Los alumnos que no alcancen el puntaje requerido para la promoción y cumplan con los
demás requisitos de la materia, podrán recuperar una sola evaluación parcial en una sola
oportunidad. De no alcanzar ese objetivo solo podrán acceder a regularizar la materia.
Para los alumnos que vayan a regularizar cada parcial desaprobado tiene un recuperatorio y,
tendrán derecho a una evaluación recuperatoria extraordinaria en caso de que adeudaren un solo
parcial para regularizar la materia.
Evaluación integral
Los alumnos que cuenten con una asistencia del 80% o mayor, que obtengan nota igual o
superior a siete en todas las evaluaciones parciales y cumplan con las demás condiciones para la
promoción de la materia accederán al examen integral. Este consistirá en una evaluación escrita
integradora, debiendo contestar correctamente el 60% como mínimo de los contenidos; este
resultado determinará la nota final para la aprobación de la materia con calificaciones de 6 a 10.
CONDICIONES PARA APROBAR LA MATERIA
Alumnos promocionados
La condición de alumno “promocionado” en Bioquímica se alcanza al finalizar cada dictado
intensivo de esta materia cumpliendo las siguientes exigencias.
a) Asistencia al 80% de las clases como mínimo (se incluyen las CP y, según disponibilidad de
salones, las IT).
b) Aprobación del 100 % de los parciales (los trabajos prácticos de laboratorio deben aprobarse en
su totalidad ya que son parte de las evaluaciones parciales), habiendo obtenido un puntaje para la
evaluación escrita de 7 (siete) o superior en cada UM.
c) Para permitir el acceso a los mecanismos descriptos de promoción, los alumnos que hayan
obtenido nota inferior a siete en una sola evaluación parcial tendrán derecho a un solo
recuperatorio.
d) Aprobación de una Evaluación Integral con un puntaje mínimo de seis (6).
Alumnos regulares Si no cumplieren con los requisitos de la promoción pero asistieran al 75% de las clases y
aprobaran con un mínimo de seis (6) puntos el 75 % de las Evaluaciones Parciales y de los
Laboratorios (3 de 4 parciales y L aprobados) quedarán en condición de alumnos “regulares”. En
esta última condición podrán aprobar la materia en las mesas constituidas al efecto, en la forma
establecida según reglamentación vigente.
Las evaluaciones parciales con nota inferior a seis tendrán sus respectivos recuperatorios,
teniéndose una segunda posibilidad en el caso de que el alumno adeudare solo una para regularizar
la asignatura.
Si no cumpliesen con las condiciones descritas para la regularización de la materia, los
alumnos quedarán en condición de “Libres”, con posibilidad de rendir un examen.
Alumnos libres Los que no reúnan las condiciones para la promoción o la regularización de la materia se
considerarán alumnos “libres” y podrán rendir un Examen Libre según la reglamentación vigente
(con actividad práctica, un escrito y un oral sin bolillero).
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OBJETIVOS GENERALES DE LA MATERIA
Los objetivos generales de la Bioquímica son que el alumno conozca las estructuras de los
compuestos presentes en los organismos vivos, sus roles y los esquemas metabólicos de valor
universal que dan lugar a los procesos vitales; y que pueda identificar aspectos que destaquen las
implicancias de esos conocimientos en Veterinaria.
Estos objetivos se alcanzarán mediante:
1) El estudio de a) la terminología, el ambiente de las reacciones bioquímicas vitales y los
métodos de estudio de la materia; b) las estructuras, propiedades y roles de los componentes
orgánicos e inorgánicos de la matriz vital; c) la bioquímica de la digestión, la absorción, el
transporte, almacenamiento y los destinos metabólicos principales de las moléculas presentes en los
organismos vivos; y d) los mecanismos de regulación e integración metabólicos.
2) La incorporación de destrezas en: a) técnicas que permitan comprobar algunas de las
propiedades de los componentes orgánicos e inorgánicos de la matriz vital e incorporar aspectos
fundamentales de la metodología de trabajo y del rol del laboratorio en el ámbito de competencia del
médico veterinario; y b) ensayos de búsqueda y análisis bibliográfico y exposición oral de temas
relacionados con las estructuras y metabolismos de las distintas moléculas biológicas
CONTENIDOS MÍNIMOS
Definición y alcances de la Bioquímica estructural y la Bioquímica dinámica. Terminología y
métodos de estudio.
Formas químicas, propiedades y roles de los compuestos inorgánicos del organismo animal.
Estructuras, propiedades e importancia del material genético, proteínas, glúcidos, lípidos y
algunos de sus compuestos derivados o asociados.
Estructuras, propiedades y mecanismos de acción de las enzimas, vitaminas y otras coenzimas.
Bioenergética: estructura y metabolismo de las moléculas responsables del transporte,
almacenamiento y cesión de energía.
Principales rutas metabólicas que siguen los ácidos nucleicos, proteínas, glúcidos, lípidos y sus
respectivas moléculas constituyentes o asociadas.
Procesos bioquímicos de la digestión en animales monogástricos, aves y rumiantes, que
conducen al aprovechamiento de los alimentos.
Naturaleza química, propiedades de los principales grupos, mecanismos de acción e importancia
de las hormonas en la regulación e integración metabólica.
PRERREQUISITOS
Conocimientos básicos de Química General, Inorgánica y Orgánica y Físico-Química;
especialmente en cuanto a lo concerniente a: Átomo, materia, sustancia, elementos, isótopos,
valencia, uniones químicas entre átomos y entre moléculas. Iones, ácidos y bases; pH y sistemas
buffer. Estados físicos de la materia. Soluciones, molaridad, molalidad, normalidad. Análisis
químico cuali y cuantitativo. Conceptos de energía, tipos, reacciones químicas, equilibrio de las
reacciones. Sistemas físicos, entalpía, entropía, energía libre.
Compuestos orgánicos, hidrocarburos, funciones orgánicas. Isomería plana y estereoisomería.
Nociones de la estructura microscópica y molecular de las células eucarióticas y procarióticas.
Unidades base del sistema SI y otras de uso común en físico-química.
PROGRAMA
PLAN DE ESTUDIOS 2008 VIGENTE DESDE EL AÑO 2009 (Resolución Nº 451/2008)
OBJETIVOS DE LA ASIGNATURA
Unidad Temática Nº 1: BIOQUÍMICA Y BIOMOLÉCULAS
Delimitar el campo que abarca la Bioquímica, conocer sus implicancias, su importancia en
Medicina Veterinaria, la terminología que emplea y los métodos de estudio.
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Comprender la importancia del ambiente acuoso en los procesos bioquímicos que tienen lugar
en la matriz vital y el rol de los compuestos inorgánicos y orgánicos.
Unidad Temática Nº 2: PROTEINAS
Reconocer la estructura, las propiedades, los criterios de clasificación y la importancia biológica
de los aminoácidos, péptidos y proteínas y de algunos compuestos derivados.
Unidad Temática Nº 3: ENZIMOLOGÍA
Reconocer la naturaleza, propiedades, nomenclatura y mecanismos de acción de las enzimas y
deducir su importancia en el organismo y sus aplicaciones en ciencias médicas.
Unidad Temática Nº 4: METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS
Reconocer las principales rutas metabólicas en las que están implicadas las proteínas, los
aminoácidos y las moléculas asociadas o derivadas y reconocer las estructuras, propiedades y
productos de aminoácidos y bases nitrogenadas en diferentes especies animales.
Unidad Temática Nº 5: ACIDOS NUCLEICOS
Conocer la naturaleza de la estructura del material genético en diferentes tipos celulares y las
propiedades e importancia de las moléculas componentes de las nucleoproteínas y nucleótidos
libres.
Unidad Temática Nº 6: METABOLISMO DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Conocer las principales rutas metabólicas en las que están implicados los ácidos nucleicos y sus
moléculas constituyentes.
Unidad Temática Nº 7: GLUCIDOS Conocer clasificación, estructura, propiedades, importancia de los glúcidos y de los compuestos
derivados y las técnicas para su caracterización.
Unidad Temática Nº 8: METABOLISMO GLUCÍDICO
Comprender los roles, orígenes y destinos de los glúcidos en el organismo animal e identificar
las principales rutas de su metabolismo y las conexiones con los demás compuestos no glucídicos.
Unidad Temática Nº 9: LIPIDOS Conocer clasificación, estructura, propiedades, importancia de los lípidos y las sustancias
asociadas a ellos y las técnicas para su caracterización
Unidad Temática Nº 10: METABOLISMO LIPÍDICO
Comprender los roles de los lípidos y sustancias asociadas o derivadas en el organismo animal y
conocer las principales rutas del metabolismo de los ácidos grasos y los lípidos y los destinos de
dichas moléculas en los diferentes organismos vivos.
Unidad Temática Nº 11: VITAMINAS
Reconocer las estructuras, propiedades y reacciones químicas en las que intervienen las
vitaminas y deducir su importancia en el organismo animal, en especial en su rol como coenzimas.
Unidad Temática Nº 12: ASPECTOS MOLECULARES DE LA ACCIÓN HORMONAL:
BIOQUÍMICA DE LAS HORMONAS
Diferenciar la distinta naturaleza química de las hormonas y las propiedades de los principales
grupos, reconocer las estructuras básicas, los mecanismos de acción y su importancia en la
regulación e integración metabólicas.
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Unidad Temática Nº 13: UTILIZACION DE LA ENERGIA POR LOS ORGANISMOS VIVOS
Reconocer las moléculas responsables del transporte, almacenamiento y cesión de energía para
el normal funcionamiento orgánico, las rutas aeróbicas y anaeróbicas y la síntesis de compuestos
ricos en energía.
Unidad Temática Nº 14: BIOQUÍMICA DE LA DIGESTION EN MONOGÁSTRICOS Y AVES
Identificar los procesos bioquímicos de la digestión en animales monogástricos y aves, los
mecanismos de acción, sustratos y productos de las enzimas de las diferentes partes del tracto
digestivo y sus particularidades.
Unidad Temática Nº 15: BIOQUÍMICA DE LA DIGESTION EN EL RUMIANTE
Conocer el rol de los microorganismos ruminales, las condiciones y particularidades de los
procesos bioquímicos digestivos de los rumiantes y su importancia en el aprovechamiento de los
alimentos, en especial de la celulosa y el nitrógeno no proteico.
Unidad Temática Nº 16: INTEGRACIÓN Y CONTROL DE LOS PROCESOS METABÓLICOS
Reconocer los esquemas metabólicos de valor universal que dan lugar a los procesos vitales y su
integración en el metabolismo intermedio, profundizando en ejemplos para comprender la
interrelación y control de las vías metabólicas.
Adquirir el concepto de “lesión bioquímica” y la noción de la importancia de su identificación
para poder predecir las consecuencias de la alteración de los procesos bioquímicos “normales” y
para reconocer las armas disponibles en bioquímica clínica y el rol del laboratorio en el ámbito de
competencia del médico veterinario.
PROGRAMA ANALITICO
Unidad Temática Nº 1
BIOQUÍMICA Y BIOMOLÉCULAS
a) Definición, alcances como disciplina y como ciencia interdisciplinaria. Bioquímica descriptiva y
bioquímica dinámica. Objeto e importancia de la Bioquímica actual. Fuentes bibliográficas.
Bioquímica y Medicina Veterinaria. Terminología científica. Métodos de estudio. Bioseguridad.
b) Bioelementos. Clasificación y funciones de los principales bioelementos. Biomoléculas:
organización jerárquica molecular en las células. Medios extra e intracelular. Agua y electrolitos.
Estructuras molecular y macromolecular del agua; rol en los sistemas biológicos, acción como
disolvente, ionización de la molécula y participación en el equilibrio iónico. Distribución del agua
en el organismo animal; proporciones en los diferentes tejidos.
Unidad Temática Nº 2
PROTEINAS
a) Concepto. Aminoácidos: definición, clasificación. Estructuras y propiedades de los aminoácidos
que constituyen las proteínas y de los aminoácidos no proteicos; importancia del tamaño y polaridad
de las cadenas laterales. Aplicación en el estudio de las proteínas. Ión bipolar. Comportamiento
ácido base de los aminoácidos, propiedades eléctricas. Punto isoeléctrico. Propiedades ópticas,
estereoisomería. Aminoácidos esenciales. El enlace peptídico.
b) Polipéptidos y proteínas: importancia y diversidad funcional de las proteínas. Clasificación según
su función. Clasificación según su forma: fibrosas y globulares. Estructura de las proteínas; fuerzas
covalentes y no covalentes determinantes. Niveles de organización estructural: primaria, secundaria,
terciaria y cuaternaria. Propiedades generales. Factores físico-químicos que condicionan la
conformación de las proteínas. Desnaturalización: agentes que alteran la estructura nativa.
Hidrólisis. Diferencias entre proteínas animales y vegetales. Péptidos, polipéptidos y proteínas de
interés en medicina. Proteínas transportadoras de oxígeno: mioglobina y hemoglobina.
Inmunoglobulinas: tipos, zona variable, sitio de unión al antígeno, región constante y región
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variable. Glucoproteínas: estructura molecular de los sistemas de transportadores de membrana,
canales iónicos y receptores.
Unidad Temática Nº 3
ENZIMOLOGIA
a) Definición. Naturaleza química de enzimas, coenzimas, cofactores, zimógenos e isoenzimas.
Nomenclatura y clasificación según la Unión Internacional de Bioquímica. Propiedades de las
enzimas. Diferencias con catalizadores inorgánicos. Sitio catalítico y otras regiones de la superficie
de las enzimas. Especificidad. Asimetría de la unión enzima-sustrato. Compartimentalización celular
de las enzimas. Sistemas enzimáticos extracelulares. Asociaciones multienzimáticas.
b) Mecanismo de acción enzimatica: unión enzima-sustrato; modelos de “llave y cerradura” o de
Fischer y de “ajuste inducido” o de Koshland. Mecanismos catalíticos: catálisis ácido-base,
covalente, de iones metálicos, de proximidad y orientación y unión preferencial del complejo de
estado de transición. Velocidad de la reacción enzimática. Factores que influyen sobre la reacción
enzimática: concentración del sustrato, pH, temperatura, cofactores y coenzimas. Activación.
Inducción y represión enzimática. Inhibición competitiva y no competitiva. Regulación metabólica y
alostérica. Enzimas en el diagnóstico clínico y como insumos de laboratorio. Cuantificación de la
actividad enzimática. Unidades.
Unidad Temática Nº 4
METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS a) Relaciones entre el nitrógeno inorgánico y el orgánico. Fijación biológica de nitrógeno.
Asimilación de amoníaco por los organismos vivos; biosíntesis de glutamato, glutamina,
asparragina y carbamoil fosfato. Fuentes de aminoácidos. Proteólisis, vida media de las proteínas.
Pozo común de aminoácidos. Destinos metabólicos de los aminoácidos. Características comunes de
las vías de degradación de aminoácidos. Desaminación y descarboxilación. Función precursora de
los aminoácidos: formación de aminas biógenas. Metilación. Metionina activa. Transferencia de
metilos. Rol del ácido tetrahidrofólico. Transaminación y mecanismo de acción del fosfato de
piridoxal. Interconversión de aminoácidos. Metabolismo de triptófano, fenilalanina e histidina.
b) Destino del residuo no nitrogenado. Aminoácidos glucogénicos y cetogénicos. Degradación de la
cadena carbonada de los aminoácidos. Rutas que conducen a ácido pirúvico, a intermediarios del
ciclo de los acidos tricarboxílicos y a acetil-CoA. Destinos del nitrógeno amínico. Animales
ureotélicos, uricotélicos y amoniotélicos. Biosíntesis de urea; vías de eliminación y recuperación en
diferentes especies animales.
Unidad Temática Nº 5
ACIDOS NUCLEICOS
a) Definición. Importancia en los procesos vitales y como base de la herencia. Bases puricas y
pirimídicas. Unión con ribosa y fosfatos. Nucleósidos y nucleótidos. Estructura del ATP, UTP, GTP.
Propiedades fisicoquímicas de los ácidos nucleicos. Unión entre nucleótidos.
b) Ácidos nucleicos. Estructura y rol biológico. RNAm, RNAt y ribosoma. Estructura del DNA
procariótico y eucariótico. Modelo de Watson y Crick. Diferencias entre DNA nuclear (cromatina),
mitocondrial, bacteriano y viral.
Unidad Temática Nº 6
METABOLISMO DE ÁCIDOS NUCLEICOS a) Definiciones de terminología genética, código genético y mutaciones. Flujo de la información
genética. Duplicación del ADN, mecanismo en procariotas; diferencias con eucariotas. Naturaleza
secuencial, dirección, enzimas. Transcripción del ADN en procariotas. Biosíntesis de ácidos
ribonucleicos (ARNm, ARNt y ARNr).
b) Biosíntesis de proteínas: esquemas básicos; etapas: iniciación, elongación, terminación.
Nucleótidos libres. Importancia biológica. Su relación con los metabolismos. Catabolismo de bases
puricas y pirimídicas. Síntesis y eliminación de ácido úrico y beta-alanina.
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Unidad Temática Nº 7
GLUCIDOS a) Definición. Clasificación y función biológica de los glúcidos. Monosacáridos y oligasacáridos
de interés, estructuras, propiedades. Isomería de monosacáridos. Compuestos estructuralmente
relacionados y derivados de monosacáridos: ésteres fosfóricos de los monosacáridos; deoxiazúcares;
alcoholes; aminoazúcares; N-acetil aminoazúcares; ácidos derivados de los monosacáridos:
aldónicos, urónicos y aldáricos; lactonas.
b) Disacáridos: maltosa, isomaltosa, celobiosa, sacarosa, lactosa. Polisacáridos de reserva y
estructurales. Homopolisacáridos: almidón, celulosa, pectinas, glucógeno. Heteropolisacáridos;
Mucopolisacáridos: ácido hialurónico, condroitín sulfato, queratán sulfato, dermatán sulfato,
heparán sulfato. Glicoproteínas. Glicolípidos. Pared celular vegetal, estructura y función biológica.
Unidad Temática Nº 8
METABOLISMO GLUCÍDICO a) Importancia de los glúcidos de la dieta en el metabolismo. Absorción y destinos metabólicos de la
glucosa dentro de las células procariotas y eucariotas. Glucólisis. Fermentación y respiración
aeróbica: destinos metabólicos del ácido pirúvico; descarboxilación oxidativa, complejo piruvato
deshidrogenasa; formación y destinos del Acetil CoA. Síntesis de ácido acético por las bacterias.
Síntesis de ácido láctico por las bacterias y el músculo. Formación de ácido propiónico por las
bacterias. Utilización del ácido propiónico por el animal.
b) Otras rutas de degradación de la glucosa: Vía de las pentosas fosfato. Gluconeogénesis; necesidad
fisiológica de síntesis de glucosa por los animales. Ciclo de Cori. Biosíntesis de glucógeno;
glucógeno sintasa. Glucógenolisis. Papel del almacenamiento muscular y hepático de glucógeno.
Unidad Temática Nº 9
LIPIDOS
a) Definición. Propiedades generales. Clasificación. Estructura química. Glicerol y otros “alcoholes
grasos”. Acidos grasos saturados y no saturados; propiedades, fórmulas. Importancia biológica.
Formación de sales o jabones. Hidrólisis química. Lípidos simples: acilglicéridos de importancia
biológica. Grasas y aceites. Propiedades físico-químicas de los acilglicéridos. Actividad óptica.
Ceras. Galactoglicéridos.
b) Lípidos complejos. Glicerofosfolípidos no nitrogenados y nitrogenados. Esfingolípidos y
glicoesfingolípidos. Estructura y función. Propiedades físicas e importancia. Sustancias asociadas a
lípidos: compuestos de estructura terpenoide y esteroidea. Esteroles y esteroides. Clasificación
general. Nomenclatura y fórmulas. Colesterol. Importancia biológica. Lípidos en la estructura de
membranas. Lipoproteínas. Biomembranas: modelos estructurales. Componentes lipídicos. Fluidez
de las membranas, rol de esteroles. Componentes proteicos; ubicación en la membrana; proteínas
periféricas e integrales.
Unidad Temática Nº 10
METABOLISMO LIPÍDICO a) Productos de la digestión de lípidos y absorción. Síntesis y transporte de triglicéridos en la
mucosa intestinal. Transporte de los lípidos a los tejidos; roles de las lipoproteínas. Captación
celular de los lípidos circulantes. Tejido adiposo; Grasa blanca y Grasa parda. Movilización de
ácidos grasos almacenados. Factores Lipotrópicos. Catabolismo de los glicéridos. Degradación de
los ácidos grasos: activación de ácidos grasos, la acil-CoA ligasa. Lanzadera de la carnitina. Beta-
oxidación de los ácidos grasos; rendimiento energético. Oxidación de ácidos grasos insaturados y de
número impar de átomos de carbono. Formación y metabolismo de los cuerpos cetónicos.
b) Anabolismo de los lípidos. Biosíntesis de ácidos grasos (sistema mitocondrial); lipogénesis.
Biosíntesis de ácidos grasos por el sistema de la malonil S.CoA o protoplasmático. Esquema del
metabolismo de lípidos simples y complejos. Metabolismo de esteroides; transporte de colesterol y
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12
su utilización en animales. Estructuras y metabolismos de otros compuestos isoprenoides:
Eicosanoides (prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos).
Unidad Temática Nº 11
VITAMINAS a) Generalidades. Estructuras químicas, funciones y fuentes de las vitaminas. Vitaminas
liposolubles: A (retinol), A2 (3- dehidrorretinol), D2 (ergocalciferol), D3 (colecalciferol), E
(tocoferol), K (factor de coagulación). Vitaminas hidrosolubles: B1 (tiamina) B2 (riboflavina), B6
(piridoxina), B12 (cianocobalamina), C (ácido ascórbico), Niacina, ácido pantoténico, ácido fólico,
colina, carnitina.
b) Importancia de las vitaminas como coenzimas. Biosíntesis de coenzimas que utilizan nucleótidos
de adenina (FAD, NAD, NADP y coenzima A). Síntesis de vitaminas en rumen.
Unidad Temática Nº 12
ASPECTOS MOLECULARES DE LA ACCIÓN HORMONAL: BIOQUÍMICA DE LAS
HORMONAS a) Comunicación intercelular: endócrina, parácrina y autócrina. Aspectos generales de la
bioquímica de las hormonas. Concepto. Clasificaciones según su naturaleza química, su origen, el
sitio de acción y duración del efecto, ejemplos. Esquema general de la biosíntesis de hormonas
proteicas y no proteica; ejemplos. Secreción, transporte y degradación.
b) Mecanismos de acción de las hormonas: receptores y efectores, conceptos y clasificaciones.
Mecanismos de transducción de señales por receptores de membrana plasmática: proteinas G.
Segundos mensajeros: adenilciclasa, guanilciclasa, ión calcio; metabolismo del fosfatidilinositol 4,5-
difosfato: generación de IP3, diacilglicerol y ácido araquidónico. La calmodulina. Características
generales de los receptores de hormonas esteroideas y tiroideas. Mecanismos de acción de las
prostaglandinas. Otras señales químicas extracelulares: conceptos y ejemplos de feromonas,
prostanoides, neurotransmisores y factores de crecimiento.
Unidad Temática Nº 13
UTILIZACION DE LA ENERGIA POR LOS ORGANISMOS VIVOS
a) Catabolismo y anabolismo. Concepto de energía: reacciones exergónicas y endergónicas. Energía
libre y reacciones químicas. Enlaces ricos en energía. Potencial de transferencia de grupos.
Acoplamiento energético. Fuentes de energía en los sistemas biológicos. Rol central del ATP como
transportador de energía libre. Oxidación biológica, la mitocondria como escena de la acción. Etapas
de la respiración. Generación de acetil coenzima A. Ciclo de los ácidos tricarboxílicos o de Krebs:
reacciones, enzimas, balances y rol biosintético de algunos compuestos intermedios.
b) Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa. Introducción. Componentes principales de la
cadena respiratoria. Deshidrogenasas. Flavoproteínas. Ubiquinona. Coenzima Q. Citocromos,
transporte de electrones. Fosforilación oxidativa, complejo ATPasa, localización, sistema de
enzimas, mecanismo. Control respiratorio, acoplamiento de la fosforilación oxidativa con el
transporte de electrones. Sistema mitocondrial de transporte para substratos respiratorios y sus
productos. El oxígeno como substrato para otras reacciones metabólicas; oxidasas y oxigenasas;
citocromo P-450. Incompleta reducción del oxígeno; antioxidantes naturales.
Unidad Temática Nº 14
BIOQUÍMICA DE LA DIGESTION EN MONOGÁSTRICOS Y AVES a) Los alimentos, clasificación. Composición química de la dieta de las especies animales. Procesos
químicos de la digestión en monogástricos: carnívoros y omnívoros (proteínas, ácidos nucleicos y
nucleoproteínas, hidratos de carbono y lípidos). Actividad de las enzimas y composición de las
secreciones digestivas. Absorción de agua, sales minerales, glúcidos, lípidos, aminoácidos y bases
púricas y pirimídicas en el tracto digestivo.
b) Procesos químicos de la digestión en las aves, generalidades. Composición de la saliva.
Bioquímica de la digestión en: buche, proventrículo y molleja. Enzimas de los jugos pancreático e
intestinal.
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
13
Rol digestivo de la bilis. Fenómenos químicos de la digestión en intestino grueso y ciegos.
Características y composición de las heces.
Unidad Temática Nº 15
BIOQUÍMICA DE LA DIGESTION EN EL RUMIANTE a) Condiciones del rumen como cuba de fermentación. Micropoblación ruminal, clasificación según
localización y sustratos. Digestión microbiana de los hidratos de carbono: celulosa, almidón,
pectina, disacáridos y monosacáridos; importancia del fósforo. Importancia de los ácidos grasos
volátiles producidos por bacterias. Aprovechamiento y metabolismo de los AGV en el rumiante.
b) Hidrólisis de las proteínas en el rumen. Proteínas vegetales. Importancia de la solubilidad y
estructura. Acción bacteriana en el metabolismo proteico. Utilización de los aminoácidos.
Importancia de la proteína bacteriana y de los infusorios. Absorción del nitrógeno en el rumen.
Importancia del amoníaco y la urea en el metabolismo ruminal. Ciclo de recuperación de la urea.
Degradación y absorción de los lípidos en el rumen. Fermentación de la galactosa y glicerina e
hidrogenación de los ácidos grasos insaturados. Importancia de los ácidos grasos microbianos.
Alimentos que escapan a la degradación ruminal. Degradación y aprovechamiento de diversos
sustratos en librillo, cuajar e intestino.
Unidad Temática Nº 16
INTEGRACIÓN Y CONTROL DE LOS PROCESOS METABÓLICOS
a) Metabolismo específico de tejidos. Interdependencia entre los principales órganos en el
metabolismo energético de los animales. División de tareas metabólicas entre los órganos más
importantes. Metabolismo intermedio. Nociones de la regulación del metabolismo por hormonas.
Principal regulación hormonal del metabolismo energético.
b) Adaptación metabólica: regulación de los niveles de nutrientes en los tejidos ante diferentes
estados nutricionales y hormonales. Control hormonal de la glucemia: acciones hormonales a corto
y a largo plazo (efectos en los metabolismos de glúcidos, lípidos y proteínas). Cambios del
metabolismo energético: estrés metabólico del ayuno y la diabetes como ejemplos para la
comprensión de la integración metabólica. Concepto de Lesión bioquímica.
Dra Gladis Lilia Sandoval de Grando
Profesora Titular
PROGRAMA DE TRABAJOS PRÁCTICOS
CLASES PRÁCTICAS ÁULICAS (CP)
CP1: Unidad Temática Nº 1 y 2ª
Taller sobre el trabajo en laboratorio de química, bioseguridad y prevención de accidentes.
Reconocimiento de materiales utilizados y su conservación.
Ejercitación de estructuras y nomenclatura de aminoácidos, su clasificación y propiedades, unión
peptídica y péptidos de interés en medicina.
CP2: Unidad Temática Nº 2b
Resolución de ejercicios de opción múltiple referentes a propiedades físico-químicas de
aminoácidos y proteínas de interés en medicina.
CP3: Unidad Temática Nº 3
Ejercitación en reconocimiento de enzimas, nomenclatura, mecanismos de acción y ubicación en la
clasificación de la UIB. Interpretación de gráficos de actividad enzimatica según influencia de
factores que afectan su actividad. Trabajo grupal de análisis e interpretación de publicaciones
científicas seleccionadas previamente sobre actividad de enzimas e isoenzimas y métodos de
estudio, con exposición oral ante la clase.
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14
CP4: Unidad Temática Nº 4
Ejercitación sobre reacciones comunes del metabolismo de aminoácidos y proteínas en diferentes
especies animales.
CP5: Unidad Temática Nº 5
Ejercicios de aplicación para fijación de conceptos acerca de estructuras, nomenclaturas,
propiedades e importancia biológica de nucleósidos, nucleótidos y ácidos nucleicos.
CP6: Unidad Temática Nº 6
Trabajo grupal sobre metabolismo de ácidos nucleicos y síntesis de proteínas, basado en lectura y
análisis de trabajos científicos. Análisis comparativo del catabolismo de bases púricas y pirimídicas.
Síntesis y eliminación de ácido úrico, orígenes y valores normales en el suero de especies
ureotélicas y uricotélicas.
CP7: Unidad Temática Nº 7
Glúcidos: reconocimiento e interpretación de las formas isoméricas. Ejercitación sobre estructuras
de glúcidos y derivados por reducción, oxidación y sustitución.
CP8: Unidad Temática Nº 8
Resolución de crucigramas e incógnitas en esquemas metabólicos centrales en el metabolismo de los
glúcidos, con discusión sobre respuestas correctas e incorrectas.
CP9: Unidad Temática Nº 9
Ejercicios de aplicación para fijación de conceptos acerca de estructuras, nomenclaturas y
propiedades de lípidos simples, complejos y sustancias asociadas.
CP10: Unidad Temática Nº 10
Análisis e interpretación de esquemas sobre composición y metabolismo de las lipoproteínas
plasmáticas. Comparación entre anabolismo y catabolismo de ácidos grasos.
CP11: Unidad Temática Nº 11
Lecturas complementarias sobre importancia y rol de las vitaminas liposolubles e hidrosolubles.
Elaboración de cuadros comparativos.
CP12: Unidad Temática Nº 12
Exposiciones grupales de temas seleccionados por los alumnos a partir de títulos sugeridos
previamente en relación con las estructuras y los mecanismos de acción hormonales.
CP13: Unidad Temática Nº 13a
Ciclo de Krebs: trabajo grupal de estudio y análisis del ciclo, con práctica de fórmulas e
identificación de las conexiones de los diferentes intermediarios con otras vías metabólicas.
Resolución de crucigramas.
CP14: Unidad Temática Nº 13b
Exposiciones grupales de temas seleccionados por los alumnos a partir de títulos sugeridos
previamente y en relación con los substratos y vías para la obtención de energía; respiración aerobia
y anaerobia. Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa.
CP15: Unidad Temática Nº 13b
Resolución de incógnitas en esquemas del metabolismo intermedio.
Exposiciones grupales de temas seleccionados por los alumnos a partir de títulos sugeridos
previamente y con relación a la regulación hormonal del metabolismo energético.
CP16: Unidad Temática Nº 13b
Elaboración de cuadros comparativos referentes a sustratos, enzimas y productos en los diferentes
niveles del tubo digestivo de monogástricos y aves.
CP17: Unidad Temática Nº 13b
Elaboración de cuadros comparativos referentes a sustratos, enzimas y productos en los diferentes
niveles del tubo digestivo de rumiantes. Condiciones de una cuba de fermentación, analogías con el
rumen. Ciclo de recuperación del nitrógeno: esquematización.
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CLASES PRÁCTICAS DE LABORATORIO – Según Unidades Temáticas (UT 1 a UT 16)
Laboratorio de UT 1 a 6: Prácticas de Laboratorio sobre ambiente celular, Aminoácidos,
Proteínas, Enzimas y Metabolismo nitrogenado.
Laboratorio de UT 7 a 10: Prácticas de Laboratorio sobre Glúcidos, Lípidos y sus
Metabolismos.
Laboratorio de UT 11 a 13: Prácticas de Laboratorio sobre Vitaminas, Bioquímica de las
Hormonas y Oxidaciones biológicas.
Laboratorio de UT 14 a 16: Prácticas de Laboratorio sobre Bioquímica de la Digestión en
monogástricos, aves y rumiantes. Metabolismo Intermedio.
PROGRAMA DE EXAMEN
UT = Unidad Temática
Bolilla 1: UT 1a- 11a-16a
Bolilla 2: UT 1b- 11b-13a
Bolilla 3: UT 2a- 10b-14a
Bolilla 4: UT 2b- 10a-14b
Bolilla 5: UT 3a- 9b-16b
Bolilla 6: UT 3b- 9a-16a
Bolilla 7: UT 4a-7a-15b
Bolilla 8: UT 4b-7b-15a
Bolilla 9: UT 5a-8b -13b
Bolilla 10: UT 5b-8a -14a
Bolilla 11: UT 6a-12b-13a
Bolilla 12: UT 6b-12a-15b
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CRONOGRAMA DE CLASES-CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA – 1º cuatrimestre – AÑO 2015
Clase
Nº Fecha CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA – 1º cuatrimestre – AÑO 2015 - CRONOGRAMA
1 L – 6 ABRIL
GLS/PEL
IT y CP de UT 1: Introduc. a la Bioquímica. Matriz Vital. Agua. Bioelementos y biomoléculas.
Materiales de laboratorio y bioseguridad.
Clase inicial a semi-presenciales: Inscripción, condiciones de cursado, formación de grupos de
trabajo. Manejo del blog de la Cátedra. Acuerdos sobre modos de comunicación, plazos para los
trabajos y formas de evaluación.
2 J – 9 ABRIL
MBDB IT y CP de UT 2 y 3: Proteínas
3 L – 13 ABRIL
SLM / GLS IT y CP de UT 3 y 4: Enzimas
4 J – 16 ABRIL
ECA IT y CP de UT 4: Metabolismo de Aminoácidos y Proteínas
5 L – 20 ABRIL
MBDB IT y CP de UT 5: Ácidos Nucleicos.
6 J -23 ABRIL
MBDB
IT de UT 6: Metabolismo de ácidos nucleicos. CP: Comisiones 1, 2 y 3
Lab 1 de UT 1 a 6: Prácticas de Lab. 1 s/ ambiente celular, AA, Proteínas, Enzimas y
Metabolismo nitrogenado: Comisiones 4a, 4b, 5a, 5b, 6a y 6b
7 L – 27 ABRIL
CP: Metabolismo de ácidos nucleicos. Comisiones 4, 5 y 6
Lab 1 de UT 1 a 6: *1Prácticas s/ambiente celular, AA, Proteínas, Enzimas y Metabolismo
nitrogenado: Comisiones 1a, 1b, 2a, 2b, 3a y 3b.
8 J- 30 ABRIL Evaluación Parcial Nº 1 de UT 1 a 6
9 L– 4 MAYO
ECA/SLM IT y CP de UT 7: Glúcidos
10 J - 7 MAYO
GLS IT y CP de UT 8: Metabolismo de Glúcidos
11 L - 11 MAYO
GREO
IT y CP de UT 9: Lípidos
12 J – 14 MAYO
MSP
IT de UT 10: Metabolismo de Lípidos. CP: Comisiones 1, 2 y 3.
Lab de UT 5 a 8: Prácticas de Laboratorio sobre Glúcidos, Lípidos y sus Metabolismos:
Comisiones 4a, 4b, 5a, 5b, 6a y 6b
13 L - 18 MAYO
CP: Metabolismo de Lípidos. Comisiones 4, 5 y 6.
Lab de UT 7 a 10: Prácticas de Laboratorio sobre Glúcidos, Lípidos y sus Metabolismos:
Comisiones 1a, 1b, 2a, 2b, 3a y 3b.
14 J – 21 MAYO IT y CP de UT 11 y 12: Bioquímica de Vitaminas y Hormonas - Exposiciones Grupales
(ORAL)
L – 25 MAYO FERIADO REVOL. DE MAYO
Antoine-Laurent de Lavoiser
(1743-1794). Considerado el
padre de la química moderna
por sus trabajos sobre
combustión, composición
química del agua y del aire,
entre otros.
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15 J – 28 MAYO
SLM / GVL Evaluación Parcial Nº 2 de UT 7 a 10
16 L – 1º JUNIO
GLS
IT y CP de UT 13 (1ra parte): Utilización de Energía en los Organismos Vivos - Oxidaciones
biológicas – Ciclo de Krebs
17 J – 4 JUNIO
MBDB
IT de UT 13 (2da parte): Cadena Respiratoria – Fosforilación Oxidativa. CP: Cadena
Respiratoria – Fosforilación Oxidativa: Comisiones 1, 2 y 3.
Lab de UT 11 a 13: Prácticas de Laboratorio sobre Vitaminas, Bioquímica de las Hormonas y
Oxidaciones biológicas: Comisiones 4, 5 y 6.
Sáb. 6 JUNIO Recuperatorio evaluaciones parciales Nº 1 y 2
18 L – 8 JUNIO
CP de UT 13 (2da parte): Cadena Respiratoria – Fosforilación Oxidativa: Comisiones 4, 5 y 6.
Lab de UT 11 a 13: Prácticas de Laboratorio sobre Vitaminas, Bioquímica de las Hormonas y
Oxidaciones biológicas: Comisiones 1, 2 y 3.
19 J - 11 JUNIO
GREO / MSP IT y CP de UT 14 y 15: Bioquímica de la Digestión en Monogástricos, Aves y Rumiantes
20 L – 15 JUNIO Evaluación Parcial Nº 3 de UT 11 a 13
21 J – 18 JUNIO
ECA
IT de UT 16: Metabolismo Intermedio e Integración. CP: Metabolismo Intermedio e Integración.
Comisiones 1, 2 y 3.
Lab de UT 14 a 16: Prácticas de Laboratorio sobre Bioquímica de la Digestión en monogástricos,
aves y rumiantes. Metabolismo Intermedio: Comisiones 4, 5 y 6
22 L – 22 JUNIO
CP de UT 16: Metabolismo Intermedio e Integración: Comisiones 4, 5 y 6.
Lab de UT 14 a 16: Prácticas de Laboratorio sobre Bioquímica de la Digestión en monogástricos,
aves y rumiantes. Metabolismo Intermedio: Comisiones 1, 2 y 3.
J – 25 JUNIO Evaluación Parcial Nº 4 de UT 14 a 16
23 L – 29 JUNIO Recuperatorio Evaluaciones Parciales Nº 3 y 4
24 J – 2 JULIO Recuperatorio Extraordinario de Evaluaciones Parciales
25 L - 6 JULIO Evaluación Integral (ESCRITO / ORAL)
Fecha de iniciación del ciclo: 6/04/15 Clase Inaugural
Fecha de finalización: 6/07/15 Evaluación Integral
BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA (*) Y COMPLEMENTARIA
1. (*)BERG JM TYMOCZKO JL & STRYER L. BIOCHEMISTRY. Fifth Edition, 2002. W.H.
2. (*)BLANCO, A.: Química Biológica, 7ma. ed., El Ateneo, Buenos Aires, 2000.
3. (*)BOREL, J.P.; RANDOUX, A.; MAQUART, F.X.; LE PEUCH, C. & VALEIRE, J.:
Bioquímica Dinámica, 1ra. ed. en español, Ed. Médica Panamericana, Buenos Aires, 1989.
4. (*)CAMPBELL, NA & REECE, JB. Biología. 7ª ed., Ed. Médica Panamericana, University of
California, Riverside, Berkeley, California, 2007. http://www.medicapanamericana.com/campbell/
5. (*)CURTIS H y BARNES N S. Autores de la actualización de la 6º ed.: CURTIS, H; BARNES,
NS; SCHNEK, A; FLORES, G. Biología. 7º. Ed., Panamericana, Buenos Aires, 2007.
http://www.curtisbiologia.com/
6. (*)HERRERA, E.: Elementos de Bioquímica, 1ra. ed. en español, Interamericana, México,
1993.
7. (*)LEHNINGER, A., NELSON, D.L. y COX, M.M. "PRINCIPIOS DE BIOQUIMICA",
editorial Omega, 3ª Edición, 2002.
8. (*)McGILVERY, R.W. & GOLDSTEIN, G.W.: Bioquímica - Aplicaciones Clínicas, 3ra. ed. en
inglés y 2da. En español, Nueva Editorial Interamericana, México, 1986.
9. (*)MURRAY, R; GRANNER, D; MAYES, P & RODWEL, V: Bioquímica de Harper, 15ta.
ed., El Manual Moderno, México, 2000.
10. (*)ROSKOSKI, R. Bioquímica. McGrow-Hill. 2000.
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
18
11. (*)VOET, D. y VOET, J. G. "BIOQUIMICA", 3º ed., Ed. Médica Panamericana, Buenos Aires,
2006. www.medicapanamericana.com
12. (*)VOET, D; VOET, JG & PRATT, ChW. Fundamentos de Bioquímica. La vida a nivel
molecular. 2º ed., Ed. Médica Panamericana, Buenos Aires, 2007. www.medicapanamericana.com
13. BRESCIA, F.; ARENTS, J.; MEISLICH, H. & TURK, A.: Fundamentos de Química, 3ra. ed.,
Compañía Editorial Continental, México, 1980.
14. CHURCH, D.C.: Fisiología digestiva y nutrición de los rumiantes, Vol. 1, 2 y 3, Acribia,
Zaragoza, España, 1983.
15. CONN, E.E. & STUMPF, P.K.: Bioquímica fundamental, 3ra. ed., Limusa, México 1977.
16. DE ROBERTIS, NOWINSKI, SAEZ. Biología Celular. 12da. Ed. Bs. As., El Ateneo, 1998.
17. DEVLIN T. Bioquímica, libro de texto con aplicaciones clínicas. 2 Tomos. 3ª Edición. Editorial
Reverté 1999, 2000.
18. HENRY, J.B.: Todd-Sanford-Davidsohn Diagnóstico y Tratamiento Clínicos por el
Laboratorio, Tomos I y II, 8va. ed., Promotora Editorial, México, 1991.
19. KOLB, GURTHER, KETZ, SCHRODER, Y SEIDEL. Fisiología Veterinaria. 2a. ed. española.
Zaragoza, Acribia, 1976.
20. LEHNINGER, Albert. Bioquímica. 3a. ed. Barcelona, Omega, 1979.
21. LINDQUIST R. Bioquímica, problemas. Interamericana Mc Graw- Hill (1991).
22. MAIDANA, Sergio. Bioquímica de la digestión ruminal. 1a. ed. Resistencia, Moro, 1982.
23. MATHEWS C., VAN HOLDE K., AHERN K G. Bioquímica. 3º Edición. Addison Wesley,
2002.
24. MAYNARD. Nutrición animal. 7ma. Ed, 1981.
25. MONTGOMERY. Bioquímica, casos y texto, 6ta. Ed, 1998.
26. MONTGOMERY; DRYER; CONWAY & SPECTOR: Bioquímica Médica, 1ra. ed. en español,
Salvat Editores, Barcelona, España, 1984.
27. NIEMEYER, H.: Bioquímica, 2da.ed., Intermédica, Buenos Aires, 1974.
28. RAWN J. D. Tomos I y II.. –Bioquímica-1ra. Edición. Ed. Interamericana - McGraw-Hill.
1989.
29. STRYER L. Bioquímica. Ed. Reverté, 1995.
30. VILLEE S. Biología. 4ta. ed, 1998.
31. W.H. Freeman, New York. EN:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?call=bv.View..ShowTOC&rid=stryer.TOC&depth=10
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
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Instructivo para confección de monografía
"Una monografía estructura en forma analítica y crítica la información recogida en distintas fuentes
acerca de un tema determinado. Exige una selección rigurosa y una organización coherente de los
datos recogidos. Dicha selección y organización sirve como indicador del propósito que orientó la
escritura" (en Kauffman y Rodríguez; 1994, página 47).
La monografía debe estar organizada en:
1. Carátula: la carátula es la primer hoja, donde debe constar
a. asignatura
b. título del tema
c. autores
d. año
2. Introducción: enmarca el tema y destaca su importancia.
3. Desarrollo: exposición del contenido temático
4. Conclusión: proporciona un resumen del tema expuesto que cierra el planteo de la introducción.
Debe ser sintética pero completa.
5. Bibliografía: Las referencias bibliográficas deben escribirse siguiendo las normas contenidas en
este documento. Éstas normas pueden consultarse, para su ampliación y mayor comprensión en:
http://www.hospitalitaliano.org.ar/docencia/biblioteca/attachs/vancouver%20N%ba%201.pdf
Para la entrega de la monografía en Bioquímica se tendrán en cuenta los siguientes aspectos:
Deben consignarse al menos tres fuentes bibliográficas consultadas, las cuales NO deben
pertenecer a una sola de las 5 categorías señalas (A, B, C, D, E). La extensión del trabajo no
debe superar las 10 páginas en letra 12 y doble espacio.
La monografía será evaluada en función a su pertinencia al tema, presentación, ortografía
(más de 10 errores ortográficos implicarán el descuento de un punto en la calificación) y
caligrafía en el caso de los manuscritos.
La nota de la monografía es la misma para todos los integrantes del grupo.
Este trabajo debe ser presentado el mismo día en que el grupo haga su exposición oral.
*Normas para la escritura de Referencias bibliográficas
Las referencias bibliográficas se numerarán correlativamente según el orden en el que aparecen por
primera vez en el texto. Se identificarán en el texto, en las tablas y en las leyendas mediante
números arábigos entre paréntesis. Las referencias citadas únicamente en las tablas o en las leyendas
de las figuras se numerarán de acuerdo con el orden establecido por la primera identificación dentro
del texto de cada tabla o figura en particular.
Se utilizará el estilo de los siguientes ejemplos, que se basan en los formatos que emplea la National
Library of Medicine (NLM) de los Estados Unidos en el Index Medicus. Los títulos de las revistas
deberán abreviarse, según el estilo empleado en el Index Medicus. Debe consultarse la List of
Journals Indexed in Index Medicus, que publica anualmente la NLM por separado y en el número
correspondiente al mes de enero del Index Medicus. El listado también se puede obtener a través de
Internet: http://www.nlm.nih.gov.
Se evitará la utilización de resúmenes como referencias. Las referencias a originales aceptados pero
todavía no publicados se designarán con expresiones como«en prensa» o «de próxima aparición»;
los autores deberán obtener autorización por escrito para citar dichos artículos y comprobar que han
sido admitidos para su publicación. La información procedente de artículos remitidos pero
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rechazados, se mencionará en el texto como «observaciones no publicadas», previa autorización por
escrito de la fuente.
Se evitarán las referencias del tipo «comunicación personal», salvo cuando ofrezcan información
esencial no disponible en fuentes públicas, en cuyo caso figurarán entre paréntesis en el texto el
nombre de la persona y la fecha de la comunicación. Si se trata de artículos científicos, los autores
deberán obtener de la fuente de la comunicación personal la autorización por escrito y la
confirmación de su exactitud.
Las referencias bibliográficas deberán ser cotejadas por el (los) autor(es) con los documentos
originales.
El estilo de los requisitos de uniformidad (estilo Vancouver) se basa en gran medida en el estilo
normalizado ANSI adoptado por la NLM para sus bases de datos (por ejemplo, MEDLINE). Se han
añadido notas en los casos en que el estilo Vancouver difiere del estilo utilizado por la NLM.
A) Artículos de revista
• (1) Artículo estándar (Se mencionan los 6 primeros autores y, si su número excede de 6, se añade
la expresión «et al.») [Nota: La NLM incluye actualmente hasta 25 autores; si hay más de 25, la
NLM cita los 24 primeros, luego el último autor y finalmente añade «et al.»].
Vega KJ, Pina I, Krevsky B. Heart transplantation is associated with an increased risk for
pancreatobiliary disease. Ann Intern Med 1996 Jun 1;124(11):980-3.
Como opción, si una revista lleva paginación continua a lo largo del volumen (como sucede con
muchas revistas médicas) pueden omitirse el mes y el número. [Nota: Por coherencia, esta
alternativa se emplea en los ejemplos de este documento. La NLM no aplica esta opción.]
Vega KJ, Pina I, Krevsky B. Heart transplantation is associated with an increased risk for
pancreatobiliary disease. Ann Intern Med 1996;124:980-3.
En el caso de más de 6 autores:
Parkin DM, Clayton D, Black RJ, Masuyer E, Friedl HP, Ivanov E, et al. Childhood leukaemia in
Europe after Chernobyl: 5 year follow-up. Br J Cancer 1996;73:1006-12.
• (2) Autor institucional
The Cardiac Society of Australia and New Zealand. Clinical exercise stress testing. Safety and
performance guidelines. Med J Aust 1996;164:282-4.
• (3) No se menciona autor
Cancer in South Africa [editorial]. S Afr Med J 1994;84:15.
• (4) Artículo en idioma distinto del inglés [Nota: La NLM traduce el título al inglés, cita el título
original entre corchetes y añade una indicación del idioma original en abreviatura.]
Ryder TE, Haukeland EA, Solhaug JH. Bilateral infrapatellar seneruptur hos tidligere frisk kvinne.
Tidsskr Nor Laegeforen 1996;116:41-2.
• (5) Suplemento de un volumen
Shen HM, Zhang QF. Risk assessment of nickel carcinogenicity and occupational lung cancer.
Environ Health Perspect 1994;102 Suppl 1:275-82.
• (6) Suplemento de un número
Payne DK, Sullivan MD, Massie MJ. Women's psychological reactions to breast cancer. Semin
Oncol 1996;23(1 Suppl 2):89- 97.
• (7) Parte de un volumen
Ozben T, Nacitarhan S, Tuncer N. Plasma and urine sialic acid in non-insulin dependent diabetes
mellitus. Ann Clin Biochem 1995;32(Pt 3):303-6.
• (8) Parte de un número
Poole GH, Mills SM. One hundred consecutive cases of flan lacerations of the leg in ageing patients.
N Z Med J 1994;107(986 Pt 1):377-8.
• (9) Número sin volumen
Turan I, Wredmark T, Fellander-Tsai L. Arthroscopic ankle arthrodesis in rheumatoid arthritis. Clin
Orthop 1995;(320):110- 4.
• (10) Sin número ni volumen
Browell DA, Lennard TW. Immunologic status of the cancer patient and the effects of blood
transfusion on antitumor responses. Curr Opin Gen Surg 1993:325-33
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
21
• (11) Paginación en números romanos
Fisher GA, Sikic BI. Drug resistance in clinical oncology and hematology. Introduction. Hematol
Oncol Clin North Am 1995 Apr;9(2):xi-xii.
• (12) Indicación del tipo de artículo según corresponda
Enzensberger W, Fischer PA. Metronome in Parkinson's disease [carta]. Lancet 1996;347:1337.
Clement J, De Bock R. Hematological complications of hantavirus nephropathy (HVN) [resumen].
Kidney Int 1992;42:1285.
• (13) Artículo que contiene una retractación
Garey CE, Schwarzman AL, Rise ML, Seyfried TN. Ceruloplasmin gene defect associated with
epilepsy in EL mice [retractación de Garey CE, Schwarzman AL, Rise ML, Seyfried TN. In: Nat
Genet 1994;6:426-31]. Nat Genet 1995;11:104.
• (14) Artículo retractado
Liou GI, Wang M, Matragoon S. Precocious IRBP gene expression during mouse development
[retractado en Invest Ophthalmol Vis Sci 1994;35:3127]. Invest Ophthalmol Vis Sci 1994;35:1083-
8.
• (15) Artículo sobre el que se ha publicado una fe de erratas
Hamlin JA, Kahn AM. Herniography in symptomatic patients following inguinal hernia repair [fe de
erratas en West J Med 1995;162:278]. West J Med 1995;162:28-31.
B) Libros y otras monografías
[Nota: En versiones anteriores de las normas de estilo de Vancouver figuraba incorrectamente una
coma, en lugar de un punto y coma, entre el editor y la fecha.]
• (16) Personas como autores
Se coloca en este orden: Autor/es. Título del libro. Edición. Lugar de publicación: Editorial; año.
Nota: la primera edición no es necesario consignarla. La edición siempre se pone en números
arábigos y abreviatura: 2ª ed. – 2nd ed. Si la obra estuviera compuesta por más de un volumen,
debemos
citarlo a continuación del título del libro: ……….. . Vol. 3
Ringsven MK, Bond D. Gerontology and leadership skills for nurses. 2nd ed. Albany (NY): Delmar
Publishers; 1996.
• (17) Directores de edición y compiladores como autores
Norman IJ, Redfern SJ, editores. Mental health care for elderly people. New York: Churchill
Livingstone; 1996.
• (18) Organización como autor y editor
Institute of Medicine (US). Looking at the future of the Medicaid program. Washington: The
Institute; 1992.
• (19) Capítulo de libro [Nota: En versiones anteriores de las normas de estilo de Vancouver
figuraba una coma, en lugar de una «p. » delante de las páginas]
Phillips SJ, Whisnant JP. Hypertension and stroke. In: Laragh JH, Brenner BM, editors.
Hypertension: pathophysiology, diagnosis, and management. 2nd ed. New York: Raven Press; 1995.
p. 465-78.
• (20) Actas de congreso
Kimura J, Shibasaki H, editores. Recent advances in clinical neurophysiology. Proceedings of the
10th International Congress of EMG and Clinical Neurophysiology; 1995 Oct 15-19; Kyoto, Japan.
Amsterdam: Elsevier; 1996.
• (21) Ponencia presentada a congreso
Se coloca en este orden: Autor/es de la comunicación/ponencia. Título de la
comunicación/ponencia. En: Título oficial del congreso. Lugar de publicación. Editorial; año.
Página inicial-final de la comunicación/ponencia.
Nota: es frecuente que la fecha y ciudad de celebración formen parte del título del congreso. Esta
misma estructura se aplica a Jornadas, Conferencias, Simoposios, Reuniones, etc.
Bengtsson S, Solheim BG. Enforcement of data protection, privacy and security in medical
informatics. En: Lun KC, Degoulet P, Piemme TE, Rienhoff O, editores. MEDINFO 92.
Proceedings of the 7th World Congress on Medical Informatics; 1992 Sep 6-10; Geneva,
Switzerland. Amsterdam: North-Holland; 1992. p. 1561-5.
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22
• (22) Informe científico o técnico
Se coloca en este orden: Autor/es. Título del informe. Lugar de publicación. Organismos/Agencia
editora; año. Número o serie identificatoria del informe.
Publicado por el organismo financiador o patrocinador:
Smith P, Golladay K. Payment for durable medical equipment billed during skilled nursing facility
stays. Final report. Dallas (TX): Dept. of Health and Human Services (US), Office of Evaluation and
Inspections; 1994 Oct. Report No.: HHSIGOEI69200860.
Publicado por el organismo realizador:
Field MJ, Tranquada RE, Feasley JC, editors. Health ser-vices research: work force and educational
issues. Washington: Nacional Academy Press; 1995. Contract No.: AHCPR282942008. Patrocinado
por la Agency for Health Care Policy and Research.
• (23) Tesis doctoral (o similar)
Se coloca en este orden: Autor. Título de la tesis [tesis doctoral]. Lugar de edición: Editorial (si está
editada); año.
Kaplan SJ. Post-hospital home health care: the elderly's access and utilization [tesis doctoral]. St.
Louis (MO): Washington Univ.; 1995.
• (24) Patente
Larsen CE, Trip R, Johnson CR, inventores; Novoste Corporation, assignee. Methods for procedures
related to the electrophysiology of the heart. US patente 5,529,067. 1995 Jun 25.
C) Otros trabajos publicados
• (25) Artículo de periódico
Se coloca en este orden: Autor del artículo*. Título del artículo. Nombre del periódico** año mes
día; Sección***: página (columna).
* Autor del artículo, si figura
** Los nombres de periódicos o diarios se colocan completos
*** Si existiera identificada como tal
Navarra, Gabriela. “Patentar genes plantea un grave riesgo”: entrevista con el coordinador del
Programa Latinoamericano del Genoma Humano. La Nación 2001 Junio 21. p. 14 Lee G.
Hospitalizations tied to ozone pollution: study estimates 50,000 admissions annually. The
Washington Post 1996 Jun 21;Sect.A:3 (col. 5).
• (26) Material audiovisual
Se coloca en este orden: Autor/es. Título del video [video]. Lugar de edición: Editorial; año.
Aplicable a todos los soportes audiovisuales.
HIV+/AIDS: the facts and the future [video]. St. Louis (MO): Mosby- Year Book; 1995.
• (27) Mapa
North Carolina. Tuberculosis rates per 100,000 population, 1990 [mapa demográfico]. Raleigh:
North Carolina Dept. of Environment, Health, and Natural Resources, Div. of Epidemiology; 1991.
• (28) Diccionario y obra de consulta similar
Stedman's medical dictionary. 26th ed. Baltimore: Williams & Wilkins; 1995. Apraxia; p. 119-20.
D) Trabajos inéditos
• En prensa [Nota: La NLM prefiere la expresión «de próxima aparición» ("forthcoming"), puesto
que no todos los trabajos serán impresos.]
Leshner AI. Molecular mechanisms of cocaine addiction. N Engl J Med. En prensa 1996.
E) Material informático
• Artículo de revista en formato electrónico
Se coloca en este orden: Autor. Título. Nombre de la revista abreviado [tipo de soporte] año, [fecha
de acceso]; volumen (número): páginas o indicador de extensión. Disponible en: Morse SS. Factors
in the emergence of infectious diseases. Emerg Infect Dis [serie en línea] 1995 Jan-Mar [citado 1996
Jun 5];1(1):[24 pantallas]. Disponible en: URL: http://www.cdc.gov/ncidod/EID/eid.htm
• Monografía en formato electrónico
Se coloca en este orden: Título [tipo de soporte]. Editores o productores. Edición. Versión. Lugar de
publicación: Editorial; año.
CDI, clinical dermatology illustrated [monografía en CD-ROM]. Reeves JRT, Maibach H. CMEA
Multimedia Group, producers. 2nd ed. Version 2.0. San Diego: CMEA; 1995.
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23
• Archivo informático
Se coloca en este orden: Autor. Título [tipo de soporte]. Versión. Lugar: Editorial; año.
Hemodynamics III: the ups and downs of hemodynamics [programa informático]. Version 2.2.
Orlando (FL): Computerized Educational Systems; 1993.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
INTRODUCCIÓN El trabajo en el laboratorio en mayor o menor grado, está sujeto a riesgos de todo tipo, que
debemos conocer para poder minimizarlos. La concientización del personal basada en la discusión e
información permanente es la mejor manera de minimizar los riesgos de ocurrencia de accidentes.
Es así que es necesario conocer algunos conceptos:
BIOSEGURIDAD: es la seguridad y protección de lo viviente.
ACCIDENTE: Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), Accidente es todo
suceso inesperado que en forma veloz y repentina, ocasiona interrupción o interferencia en la tarea,
pudiendo ocasionar una lesión al trabajador, pérdidas de material, deterioro del ambiente, pérdida de
tiempo, etc.
Al estudiar un accidente se deben valorar todas sus etapas:
Entre los causales podríamos mencionar a factores:
-Técnicos: infraestructura e insumos necesarios.
-Sociales: inestabilidad laboral, sobrecarga de horas de trabajo, bajos salarios, etc.
-Personales: pueden ser a su vez: individuales (desequilibrio emocional), colectivos (fallas en las
relaciones interpersonales).
RIESGOS
Los riesgos pueden clasificarse para su estudio en diferentes tipos
RIESGO DE INCENDIO
El laboratorio es un lugar de riesgo potencial alto de incendio debido a la existencia de:
-instalaciones y aparatos eléctricos.
-almacenamiento de líquidos inflamables.
-gases inflamables comprimidos.
-material de plástico (fácilmente combustible, productor de grandes cantidades de humo y gases
tóxicos)
Un programa de lucha contra el fuego debe comprender aspectos de prevención de manera de evitar
que el incendio se produzca; protección, para que una vez iniciado el fuego se minimicen las
consecuencias; y control.
Pautas básicas para prevenir el riesgo de incendio:
Los líquidos inflamables deben almacenarse en pequeñas cantidades, en recipientes seguros
y en armarios especiales.
Cuando se trabaja con líquidos inflamables debe ser en zonas ventiladas y lejos de cualquier
llama o fuente de calor.
Los recipientes que han contenido material inflamable deben ser lavados convenientemente
antes de eliminarlos.
CAUSAS ACCIDENTE CONSECUENCIAS
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24
No se deben arrojar solventes orgánicos ni líquidos inflamables por el desagüe.
Nunca se fumará en el laboratorio.
Se deben revisar periódicamente las instalaciones de gases comprimidos, para detectar
posibles fugas.
Todo el personal debe conocer las salidas de emergencia y debe ser capaz de alcanzarlas aún
a oscuras.
CLASES DE FUEGO
CLASE SIMBOLO CARACTERISTICAS FORMAS DE EXTINCION
A
Triángulo verde
letra blanca
Fuegos que se desarrollan
sobre combustibles sólidos:
madera, papel, tela, goma,
plástico, etc.
Por enfriamiento. Matafuego
aconsejado: agua muy
eficiente, polvo o anhídrido
carbónico relativamente
eficiente.
B
Cuadrado rojo
Letra blanca
Fuego sobre líquidos y gases:
gasolina, solventes, grasas,
pinturas, aceites, ceras, etc.
Por sofocación. Matafuego
aconsejado: polvo o
anhídrido carbónico muy
eficiente, agua no eficiente.
C
Círculo azul
Letra blanca
Fuegos que se desarrollan
sobre materiales, equipos o
instalaciones sometidas a
corriente eléctrica.
Con sustancias no
conductoras. Matafuego
aconsejado: polvo o
anhídrido carbónico. AGUA
NO DEBE USARSE.
D
Estrella amarilla
Letra blanca
Fuegos que se desarrollan
sobre metales combustibles:
sodio, potasio, magnesio, etc.
La extinción no se realiza
con los agentes
convencionales sino con
polvos especiales para cada
uno de ellos.
Reglas elementales de ataque y modo de utilizar el matafuego:
Ataque el fuego en la dirección del viento.
Al combatir fuegos en superficies líquidas, comience por la base y parte delantera del fuego.
Al combatir en derrames, empiece a extinguir desde arriba hacia abajo.
Es preferible usar siempre varios extinguidores al mismo tiempo, en vez de emplearlos uno
tras otro.
Esté atento a una posible reiniciación del fuego, no abandone el lugar hasta éste quede
completamente apagado.
RIESGO ELECTRICO
Se debe a la existencia de aparatos eléctricos que pueden ser causa de accidentes, tanto por
acción directa de la electricidad sobre las personas, como de la posibilidad de originar fuegos y
explosiones. Es necesario recordar algunas definiciones para entender el vocabulario:
Electricidad: agente físico que se manifiesta como una diferencia de potencial eléctrico entre dos
puntos de una sustancia. Si estos dos puntos se unen se produce una circulación de corriente
eléctrica.
La corriente eléctrica puede ser de dos tipos:
Continua: tiene intensidad, diferencia de potencial y sentido de circulación constantes.
Alterna: su intensidad, diferencia de potencial y sentido de circulación, varían en forma periódica
regular.
A
B
C
D
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25
Intensidad de corriente: es el número de cargas que circula por unidad de tiempo, su unidad es el
Ampere.
Diferencia de potencial: es la diferencia de nivel eléctrico entre dos puntos de un sistema, es la
fuerza impulsora del movimiento de cargas. La unidad es el voltio.
Resistencia: es la dificultad que opone el circuito a la circulación de corriente, su unidad es el Ohm.
De acuerdo a la forma en que afectan el cuerpo humano, las intensidades de corriente se
clasifican en:
-corrientes peligrosas: hasta 25mA.
-corrientes muy peligrosas: desde 25mA.
La resistencia del cuerpo humano depende de los siguientes factores:
Piel: es la superficie de contacto (a menor superficie mayor resistencia), importan también su
humedad (a mayor humedad menor resistencia), su grosor (mayor grosor mayor resistencia) su
temperatura y lesiones (disminuye la resistencia).
Estado general del individuo: el hambre, ser, fatiga, sueño, preocupaciones, etc. disminuyen la
resistencia que presenta el cuerpo.
Entonces, de acuerdo a lo dicho, la severidad del daño dependerá de la cantidad de corriente
recibida, del estado previo del individuo y del tiempo de exposición.
Las lesiones pueden variar desde una contracción muscular refleja (“quedarse pegado”) con
corrientes menores a 25mA. Quemaduras y paro respiratorio con corrientes entre 25 y 70mA. Con
corrientes del orden de 100mA, paro cardíaco, fibrilación cardíaca daños al sistema nervioso y
muerte.
Los medios de protección lo constituyen las conexiones a tierra, los transformadores de seguridad,
etc. siendo el medio más idóneo los disyuntores diferenciales.
RIESGO QUIMICO
Es la posibilidad de sufrir daños a través de un accidente con un “reactivo”.
Un reactivo es toda sustancia química que se utiliza para investigar o reconocer otra sustancia, según
la “reacción” que se produzca. Se pueden clasificar en orgánicos o inorgánicos o en generales y
especiales.
Existe el riesgo químico en la forma de almacenamiento, transporte, manipulación y descarte de
reactivos.
Almacenamiento: en términos generales, las drogas deben guardarse en lugares secos, frescos,
protegidos del polvo y la luz. Estos lugares deben preservarse del acceso de personas ajenas al
trabajo específico para evitar accidentes por imprudencia o desconocimiento.
Transporte: el personal debe estar capacitado acerca de los peligros que poseen los reactivos que
manipula y de cuál es la forma de proceder en casos de derrames o fugas.
Manipulación: existen una serie de normas básicas:
- En el lugar de trabajo se deben disponer solo de las disoluciones a utilizar, o bien los reactivos
puros fraccionados en recipientes adecuados.
- No se deben regresar fracciones excedentes de reactivos a los frascos originales.
- Los tapones nunca deben dejarse sobre la mesada.
- Se debe disponer de material absorbente en el lugar de trabajo, para casos de derrames.
- Cuando se realizan reacciones que produzcan vapores o gases tóxicos, se debe trabajar bajo
campana.
- Nunca se deben oler directamente de la boca del frasco, sino con la mano dirigir los vapores
hacia la nariz.
- Nunca se deben gustar los productos con los que trabaja.
- Los líquidos inflamables no se calientan a la llama directamente, y no se descartan en las piletas.
- No se deben arrojar a la pileta, ni a papeleros los restos de sodio o potasio.
- Nunca se arrojara agua sobre metales alcalinos o fundidos, porque puede producirse una
explosión.
- Cuando se calienten sustancias en tubos de ensayo, dirigir la boca del tubo hacia un lugar
despejado flameando el tubo sobre la llama.
- Los restos de cianuro nunca se arrojaran a la pileta, ya que si hay restos de ácidos se produciría
ácido cianhídrico, gas toxico mortal.
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26
- Al trasvasar reactivos conviene hacerlo con embudos.
Descarte: cuando se eliminan los reactivos, primero deben inactivarse de manera tal que no sea
peligroso para la comunidad o para el medio ambiente.
Efectos de las sustancias químicas sobre el organismo.
De acuerdo a su peligrosidad los reactivos químicos se clasifican según el siguiente cuadro:
Pictograma Clasificación y Precaución
Evitar choque, percusión, fricción, formación de chispas, fuego y acción
del calor.
Peróxidos orgánicos, sustancias y mezclas que en contacto con materiales
combustibles pueden llevar a estos a la combustión de explosión.
Evitar cualquier contacto con sustancias inflamables.
Evitar cualquier contacto con el cuerpo humano, ya que pueden provocar
graves daños para la salud posiblemente irreversibles y con consecuencias
mortales.
Se hace referencia especial a la acción cancerígena, teratógena o riesgos de
alteraciones genéticas.
Evitar contacto con el cuerpo humano, también inhalación de vapores.
Posibles daños para la salud en caso de empleo inadecuado. No se descarta
acción cancerígena, teratógena o riesgos de alteraciones genéticas.
Líquidos con punto de inflamación inferior a 0ºC y punto de ebullición
máximo de 35ºC.
Mantener lejos de llamas abiertas, chispas y fuentes de calor.
Líquidos con punto de inflamación inferior a 21ºC. Gases licuados con
punto de inflamación a presión normal. Sustancias y mezclas que en
contacto con agua y aire húmedo liberan gases fácilmente inflamables.
Mantener lejos de llamas abiertas, chispas y fuentes de calor.
Destrucción de la piel en su total grosor, en piel sana e intacta.
Evitar contacto con los ojos, la piel y la ropa mediante medidas protectoras
especiales. No inhalar vapores.
Claros daños en los ojos e irritación de la piel, que se mantienen como
mínimo 24 hs posteriores a la acción, o irritación de las vías respiratorias.
Evitar contacto con los ojos, la piel y la ropa mediante medidas protectoras
especiales. No inhalar vapores.
Cabe destacar que los pictogramas se encuentran en todos los rótulos de los reactivos químicos, de
allí la importancia de conocer su significado y las precauciones a tomar en cada caso.
RIESGO BIOLOGICO
Es la posibilidad de contraer enfermedades infecciosas a partir del manipuleo de “material
biológico”. El material biológico se puede definir como el conjunto de materia orgánica que es o
potencialmente puede ser, reservorio de agentes infecciosos, por ejemplo: sangre, orina, tejidos,
fluidos y secreciones corporales, etc.
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
27
En medicina veterinaria se suma el riesgo de contraer enfermedades infecciosas transmitidas por
animales (zoonosis), por lo tanto se debe considerar también dentro de las normas de bioseguridad,
el correcto manejo de animales. Existen una serie de normas que varían según la especie y la
finalidad, no es lo mismo el manejo de animales con objetivos clínicos que con fines de
experimentación para la investigación. En este último caso se siguen Procedimientos Operacionales
Estandarizados, son efectivos para realizar una determinada labor y lograr su objetivo y que se
realizan de forma estándar.
Las normas prácticas en el manejo de las distintas especies animales serán vistas en las materias
correspondientes. En el presente curso nos limitaremos a dar las posibles formas de infección
accidental y las precauciones generales a tener en cuenta.
En el siguiente cuadro se resumen las posibles vías de ingreso al organismo, los accidentes más
frecuentes y las precauciones a tomar.
Accidentes más frecuentes Vías de ingreso Precauciones
Inhalación de aerosoles RESPIRATORIA
Evitar producción de
aerosoles. Utilizar material de
protección adecuado (barbijos)
Ingestión accidental de material
biológico.
DIGESTIVA
Evitar pipetear con la boca.
Utilizar pro-pipetas o
dispensadores.
Inoculación parenteral de material
biológico. Herida cortante y
contacto directo con el material
biológico. Mordeduras accidentales
de animales infectados o peligrosos.
CUTÁNEA
Evitar contacto directo con el
material biológico (usar
guantes descartables). Correcto
manipuleo de animales.
Normas básicas de higiene y seguridad-Laboratorio de Bioquímica
Las medidas de Seguridad en Laboratorios son un conjunto de medidas preventivas destinadas a
proteger la salud de los que allí se desempeñan frente a los riesgos propios derivados de la actividad,
para evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su ámbito de trabajo, como hacia el
exterior. Las reglas básicas aquí indicadas son un conjunto de prácticas de sentido común realizadas
en forma rutinaria.
1. Durante su estancia en el laboratorio, el alumno deberá utilizar vestimenta apropiada para
realizar trabajos de laboratorio y cabello recogido (guardapolvo preferentemente de algodón y de
mangas largas, zapatos cerrados, evitando el uso de accesorios colgantes).
2. No se permitirá comer, beber, fumar o maquillarse.
3. Es imprescindible mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable directa de la
zona que le ha sido asignada y de todos los lugares comunes. Al finalizar el laboratorio los alumnos
dejarán todo el material ordenado y limpio.
4. Las manos deben lavarse cuidadosamente después de cualquier manipulación de laboratorio y
antes de retirarse del mismo.
5. Se deberán utilizar guantes apropiados para evitar el contacto con sustancias químicas o
material biológico. Toda persona cuyos guantes se encuentren contaminados no deberá tocar
objetos, ni superficies tales como: teléfonos, lapiceras, manijas de cajones o puertas, cuadernos, etc.
6. No pipetear con la boca.
7. No se permitirá correr en los laboratorios.
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28
8. Dado que muchas prácticas requieren el uso de corriente eléctrica, se deberá tener especial
cuidado de evitar la manipulación de elementos húmedos o reactivos inflamables en sus
proximidades.
9. Siempre que sea necesario proteger los ojos y la cara de salpicaduras o impactos se utilizarán
anteojos de seguridad, viseras o pantallas faciales y otros dispositivos de protección. Cuando se
manipulen productos químicos que emitan vapores o puedan provocar proyecciones, se evitará el
uso de lentes de contacto.
10. Se requerirá el uso de mascarillas descartables cuando exista riesgo de producción de aerosoles
(mezcla de partículas en medio líquido) o polvos, durante operaciones de pesada de sustancias
tóxicas o biopatógenas, apertura de recipientes con cultivos después de agitación, etc.
11. Se deberá verificar la ausencia de vapores inflamables antes de encender una fuente de
ignición. Para calentamiento, sólo se utilizaran resistencias eléctricas o planchas calefactoras
blindadas. Se prestará especial atención al punto de inflamación y de autoignición del producto.
12. El material de vidrio roto no se depositará con los residuos comunes. Será conveniente ubicarlo
en cajas resistentes, envuelto en papel y dentro de bolsas plásticas. El que sea necesario reparar se
entregará limpio al taller.
13. Será necesario que todo recipiente que hubiera contenido material inflamable, y deba ser
descartado sea vaciado totalmente, escurrido, enjuagado con un solvente apropiado y luego con agua
varias veces.
14. Está prohibido descartar líquidos inflamables, tóxicos, corrosivos o material biológico por los
desagües de las piletas, sanitarios o recipientes comunes para residuos.
15. Los laboratorios contarán con un botiquín de primeros auxilios con los elementos
indispensables para atender casos de emergencia.
16. En el laboratorio sólo podrán estar los alumnos del grupo correspondiente. No se admitirán
visitas.
MATERIALES DE LABORATORIO
Definición: comprende todos los elementos que se utilizan corrientemente en los
laboratorios de química. Describiremos aquí los más comunes y los que serán manipulados por
los alumnos en forma más frecuente a lo largo del curso de Bioquímica y otras materias
afines dentro de la carrera.
Clasificación:
1) De acuerdo a su constitución
Material de vidrio: Este rubro constituye la mayor parte de los elementos
de un laboratorio, debiendo reunir ciertas propiedades de resistencia. El vidrio es una mezcla de
silicatos y existen variedades con mayor o menor termorresistencia (se refiere a la capacidad que
poseen para soportar elevadas temperaturas), con diferentes proporciones de óxidos en su
composición, etc. Los vidrios termorresistentes son mezclas poliméricas de boratos (BO3') y
silicatos (SiO4"), los cuales se encuentran eslabonados (unidos) tridimensionalmente en forma
desordenada (ya que se considera un líquido enfriado hasta solidificar, sin cristalizar). Sólo son
atacados por los ácidos fluorhídrico y fosfórico concentrados y en caliente, y también por
algunos álcalis como el hidróxido de sodio (NaOH) en las mismas condiciones-
Limpieza: El material de vidrio debe estar siempre perfectamente limpio, ya que su contaminación
puede conducir a resultados erróneos. En general deben lavarse con detergente y enjuagarse con
agua destilada.
En caso de efectuarse pruebas en las que interfiera la presencia de iones (Ca3+, Fe2+,
PO4H2) el lavado debe efectuarse con detergentes no iónicos y enjuagarse una vez con ácido
clorhídrico (HCI) y repetidamente con agua bidestilada o desionizada. Para quitar restos de
material no removible con el procedimiento anterior, se pueden utilizar mezclas químicas más
agresivas.
Ellas pueden ser soluciones de:
Bicromato de sodio o potasio (50 g) y ácido sulfúrico (100 ml) en agua (llevando el volumen
final a 1000 ml). Esta mezcla se denomina sulfocrómica
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Ácido sulfúrico concentrado y ácido nítrico, llamada mezcla sulfonítrica
Jabón y agua en caliente
Soluciones de hidr6xido de sodio o de potasio
El material se sumerge en estas soluciones y se deja actuar durante un tiempo variable y se lava
nuevamente.
Material de goma
Material de metal
Material de madera
Instrumental (el desarrollo de éste apartado escapa al alcance del presente apunte).
2) De acuerdo a su capacidad para medir volúmenes
Volumétricos
No volumétricos
Esta clasificación se basa en la posibilidad que brindan diferentes elementos de vidrio para medir
volúmenes de líquidos con precisión. Los materiales no volumétricos, no están calibrados para
cuantificar volúmenes exactos.
Los elementos que se usan en volumetría tienen ciertas características que se describen a continuación:
Líneas de Graduación: Divisiones representadas por líneas, que abarcan parte o todo
el contorno del elemento volumétrico y responden a las fracciones del volumen total a medir. Así,
una pipeta o una probeta se pueden encontrar divididas en diez grandes fracciones; entre cada una
de estas fracciones se pueden presentar a su vez diez subdivisiones. Si una probeta contiene un
volumen total de 100ml, cada división será equivalente a 10ml y cada subdivisión a 1ml. Si se
tratara de una pipeta de 10ml, cada división sería 1ml y cada subdivisión 0,1ml.
Aforo: Es la marca (línea) que poseen ciertos materiales volumétricos, la cual indica el
volumen total que pueden contener a una temperatura determinada (generalmente a 20° C). Estos datos
deben estar registrados en el recipiente y se refieren a la "capacidad" del mismo.
Materiales volumétricos:
Probeta
Matraz aforado
Micropipeta
Pipetas
Bureta
Materiales no volumétricos:
Pipeta Pasteur
Embudo
Balón
Tubo de ensayo
Vaso de precipitación
Caja de Petri
Capsula de porcelana
Erlenmeyer
Kitasato
Mortero
Frasco gotero
Ampolla de decantación
Vidrio de reloj
Frasco de reactivos
Otros términos a tener en cuenta para la utilización de material volumétrico son:
Menisco: Este término no hace referencia al material de laboratorio, sino que corresponde a la
forma que adopta la superficie del líquido contenido en el recipiente, al "mojar" el vidrio. Esta forma,
depende de la mayor o menor tensión superficial y de si se trata de líquidos polares (como el agua) o
no polares (como los hidrocarburos).
Enrase: Es el procedimiento por el cual se hace coincidir el menisco con el aforo o línea
de graduación al medir un líquido. Estos elementos deben estar a la altura del ojo del
observador durante el proceso de medición, teniendo la precaución de apoyar el recipiente sobre
una superficie plana horizontal (para las probetas) o de mantenerlo perpendicular a dicha superficie
(para las pipetas).
Descripción de materiales de vidrio volumétricos Probeta: Recipiente cilíndrico graduado, con borde superior terminado en pico de jarra. Posee
una base que puede ser de vidrio, madera o plástico. Para utilizarlas se apoyan sobre las mesadas,
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se carga el líquido hasta un volumen ligeramente inferior al requerido, y luego se completa
lentamente hasta enrasar.
Matraz aforado: Recipiente con una porción esférica y base plana y cuello generalmente largo,
donde se halla el aforo- De capacidad variable, sirven para preparar y guardar soluciones. Se
cargan generalmente con embudo y en forma similar a las probetas.
Bureta: Tubo terminado en punta afinada y graduado. Por medio de un robinete o llave (debe
estar lubricado) permite la salida del liquido contenido en forma gradual, generalmente por
goteo. De capacidad variable, son usadas para medir volúmenes exactos, por ejemplo al efectuar
titulaciones. Se cargan por arriba con embudo. Se sostienen en soportes adecuados. El robinete
tiene dos posiciones extremas (cerrado y abierto) e intermedias. Se usa en operaciones en que se
necesita medir volúmenes con gran exactitud.
Micropipetas: Llevan este nombre pipetas de capacidad inferior al
mililitro. Se clasifican en manuales y automáticas. Las primeras son
de vidrio, aforadas, se conectan a una manguera de goma con
boquilla para cargar por succión y descargar por soplado. Se debe
secar la parte de la punta que fue sumergida, ya que se trabaja con
volúmenes tan pequeños que una gota que pudiera quedar (30-50µl)
introduciría un error considerable. Su uso fue desplazado por las
micropipetas automáticas.
Las micropipetas automáticas (dibujo) son calibradas en fábrica;
pueden ser de volumen fijo o regulable. Tienen dos posiciones, una
para la carga y otra para la descarga. Se usan con "tips" (picos de
plástico) descartables, uno para cada muestra. Tienen amplia
difusión por la practicidad, rapidez y exactitud en la medición de
volúmenes.
Pipetas bola o de traslado: En su parte media poseen una dilatación o bulbo; puede
tener uno o dos aforos y están calibradas para un volumen fijo de líquido. No son
graduadas.
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Descripción de materiales NO volumétricos
1) De vidrio
• Pipeta Pasteur: Consisten en un tubo de vidrio o plástico no graduado ni
calibrado que consta de dos partes de diferentes diámetros (la inferior se
denomina capilar, por su delgadez). El extremo superior se conecta a una
pera de goma que se aprieta o deja expandir para expulsar o cargar el
líquido. Se fabrican con facilidad a partir de tubos de vidrio blandos.
• Tubos de ensayo: Recipiente cilíndrico con un extremo cerrado (convexo) y el otro con borde
redondeado o liso. Los hay de diferentes tamaños, cada uno de los cuales tiene nombres diferentes.
Los utilizados en el laboratorio de Bioquímica usualmente son de aproximadamente 18mm de
diámetro por 15cm de largo y hasta 20ml de capacidad. Deben tener relativa resistencia a los golpes
y al calor. Esto se puede comprobar dejándolo caer en forma vertical y con el extremo cerrado hacia
abajo a unos 5cm de la superficie dura, debiendo resistir el impacto. Para calentarlo, se lo coloca en
ángulo de 45° (sosteniéndolo con una pinza) y se expone a la llama su pared inferior moviéndolo
constantemente para evitar que se rompa y para un calentamiento homogéneo. Si se debe llegar a la
ebullición, no puede cargarse más de dos tercios de su capacidad.
• Embudo: De medidas variables, puede ser liso o estriado. Este últimos se usan para filtración con
conos de papel de filtro; las estrías permiten la entrada de aire, lo que facilita el filtrado.
• Ampolla de decantación: Es un recipiente esférico con un orificio superior para su llenado (con
un tapón). Por debajo se continúa con un tubo al que se interpone un robinete o llave; este
mecanismo permite separar mezclas de dos o más fases.
• Balones: Recipiente esférico sin base, con cuello cilíndrico largo o corto (que en algunos casos
presenta una salida lateral para trabajos de destilación). Se presenta con distintas capacidades;
necesita estar sujeto a un soporte y pueden ser utilizados para calentar sustancias o para
destilaciones.
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• Erlenmeyer: Son recipientes de forma cónica, con vértice superior terminado en un cuello corto y
una base plana. Se los utiliza para preparar y guardar soluciones.
• Kitasato: Son similares a los anteriores, pero poseen una tubuladura lateral corta en la base del
cuello. Tienen paredes gruesas y muy resistentes y capacidad variable. Se pueden emplear para
filtrar al vacío.
• Vidrio reloj: Vidrios en forma cóncava. Pueden servir para depositar sustancias en pequeñas
cantidades, mezclarlas o pesarlas y evaporar.
• Cajas de Petri: Recipientes cilindrico de altura muy inferior a su diámetro. Constan de dos partes:
la caja propiamente dicha y la tapa que cubre a la caja (de igual forma pero mayor diámetro). Tiene
variada utilidad, pero es especialmente empleada para cultivos en microbiología.
• Vaso de precipitación: Recipiente con el borde superior terminado en jarra. Tienen capacidad
variable y pueden ser lisos o graduados.
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• Frascos goteros: Son frascos de plástico o vidrio grueso (generalmente oscuros), casi siempre de
capacidad inferior a los 100 ml. Los de vidrio tienen tapones de vidrio acanalados y terminados en
pico que permiten el goteo.
• Frascos de reactivos: Similares a los anteriores pero pueden ser de mayor capacidad. Hay
oscuros (para reactivos sensibles a la luz) y claros, generalmente son de boca ancha y tienen
tapones de vidrio en forma de hongo (esmerilados).
• Cápsula de porcelana: Recipiente similar al vidrio de reloj pero de mayor capacidad (y no es
de vidrio).También se usa para evaporar sustancias.
• Mortero: Consta de dos partes; un recipiente con relativa profundidad y grosor de sus paredes
(resistentes), que pueden ser de diferentes tamaños y un pilón o mazo, que se utiliza para triturar
sustancias sólidas por medio de presión o pequeños golpes, pueden ser de vidrio o porcelana
• Desecadores: Los desecadores de vidrio tienen paredes gruesas y forma cilíndrica, presentan
una tapa esmerilada que se ajusta herméticamente para evitar que penetre la humedad del medio
ambiente. En su parte interior tienen una placa o plato con orificios que varía en número y
tamaño. Estos platos pueden ser de diferentes materiales como: porcelana o nucerite (combinación
de cerámica y metal).
2) Materiales de goma
• Tapones: Existen de varios colores y tamaños, clasificados por números cuyos diámetros
coinciden con los de tubos, balones, erlenmeyers, etc.
• Tubuladuras: También existen de variadas clases (de plástico, goma negra o roja opacas,
látex transparente, mas o menos resistentes al calor, etc.). Se emplean como medio de conexión
al armar ciertos aparatos (como el de destilación y filtrado al vacío), o también como tubuladura
de gas o agua. Su longitud y diámetro varían según la necesidad; el diámetro se toma midiendo la
luz y se expresa en cm o subunidad de pulgada.
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• Propipetas: Dispositivo que consiste en una pera de goma con 2 tubuladuras de salida. La
superior se utiliza para hacer ingresar o salir aire de la pera. La inferior contacta con la boquilla de
la pipeta y contiene una sección transversal. Posee una válvula que regula la entrada de líquido a
la pipeta y otra para descargarlo. Es un sistema muy ingenioso y simple que evita los accidentes
del operador por aspiración del contenido de las pipetas y permite enrasar y descargar fácilmente.
Los pipeteadores son dispositivos o instrumentos para el trasvase o medición de fluidos.
3) Materiales metálicos v de madera • Trípode y mantilla con amianto: El trípode consta de un sostén circular de hierro con tres
patas, utilizados para apoyar recipientes que serán calentados con un mechero. La mantilla es una
rejilla metálica cuadrada con un centro impregnado con amianto (silicato de calcio y magnesio)
que se interpone entre el recipiente a calentar y el mechero (sobre el trípode), así el calor se
distribuye en forma pareja.
• Cepillos de cerda: Están constituidos por dos trozos de alambre enroscados uno sobre el otro
entre los cuales se sostienen trocitos de cerda (en la porción inferior) que se disponen en forma
espiral y perpendicular al alambre. Existen de diversos tamaños para poder ser introducidos en los
diferentes elementos de vidrio y efectuar una cómoda y adecuada limpieza.
• Mechero de Bunsen: Tubo metálico por el cual circula gas que entra por una conexión lateral.
El gas se mezcla con aire que entra por dos orificios de la base, cuyo tamaño puede ser regulado.
El uso más frecuente que se dará al mechero es el calentamiento de tubos de ensayo; para ello se
usará una llama no mayor de 10 cm, en lo posible de color azulado para evitar el depósito de
carbón en las paredes del tubo.
• Soportes universales: Estos elementos de hierro constan de una base rectangular plana y,
perpendicularmente inserto en ella, el soporte propiamente dicho. Este es un vástago de metal al
que se adosan pinzas que sujetan diversos materiales (buretas, balones, tubos refrigerantes, etc.)
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• Pinzas de Bunsen: También llamadas de "doble nuez". Sus dos extremos actúan como pinzas.
De un lado se sujetan al soporte y por el otro se adecuan al recipiente a sostener. El ajuste se
efectúa con tornillos mariposa o similares.
• Pinzas de Mohr: Son llaves hechas de una varilla de metal doblada a la mitad de manera que
sus brazos se superponen y queda formado un ojal. Este se puede abrir presionando los extremos
de los brazos de la varilla para enhebrar un tubo de goma. La pinza sirve para cerrar o abrir a
voluntad la luz del tubo de goma.
• Pinzas de madera: Son broches parecidos a los usados para sostener ropa, pero con un brazo
de mayor longitud para comodidad del operador. También los hay de metal y para diferentes
diámetros de tubos. Se usan para sostenerlos durante el calentamiento.
• Gradillas portatubos: Son de metal, madera, acrílico o alambre forrado en plástico. Consisten
en soportes con múltiples perforaciones de diferentes diámetros donde van insertos los tubos.
Manteniéndolos en forma vertical. Algunas son para tubos de ensayo y otras para tubos de
hemólisis o Kahn.
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LABORATORIO N°1
PROTEINAS
Introducción: Los aminoácidos son compuestos orgánicos con un grupo ácido (carboxilo -COOH)
y un grupo básico (amina -NH2), unido al carbono (carbono inmediato al carboxilo), es decir son
- aminoácidos. Presentan actividad óptica (excepto la glicina) y la configuración “L” es la de
mayor interés bioquímico.
Los aminoácidos pueden establecer enlaces covalentes entre el grupo carboxilo de uno y el
grupo amina de otro, denominados “uniones peptídicas”, de tipo amida y que se producen con
pérdida de agua. Los polímeros formados por hasta diez aminoácidos unidos por uniones peptídicas
se llaman péptidos, los que poseen más de 10 residuos de aminoácidos pero menos de 50 se
denominan polipéptidos y los que superan ese número se denominan proteínas.
Las proteínas son macromoléculas formadas por un gran número de aminoácidos. Poseen
una estructura muy compleja, por lo que se la describe en distintos niveles de organización:
- Estructura Primaria: se refiere al número e identidad de los aminoácidos que componen la
molécula y al ordenamiento de estas unidades en la cadena polimérica (secuencia de aminoácidos).
Las cadenas son lineales, no poseen ramificaciones por la naturaleza de la unión peptídica.
- Estructura Secundaria: es la disposición espacial regular y repetitiva que adopta la cadena
polimérica. Puede ser -hélice, -lámina o lámina plegada, o bien disponer la cadena en una
estructura irregular, en tal caso se habla de una disposición al azar. Estas estructuras se mantienen
unidas por puentes de hidrógeno.
- Estructura Terciaria: se refiere a la arquitectura tridimensional completa de una cadena de
resíduos de aminoácido. De acuerdo con la forma final se clasifican en globulares y fibrosas. Estas
conformaciones se mantienen unidas por fuerzas de atracción o repulsión electrostática, enlaces de
hidrógeno, presencia de cadenas hidrofóbicas e hidrofílicas y puentes disulfuro según el tipo de
aminoácidos que constituyan la molécula.
- Estructura Cuaternaria: es la disposición espacial de las subunidades polipeptídicas
constituyentes de las proteínas formadas por más de una cadena polipeptídica o monómero
(proteínas oligoméricas, mero: parte). Las fuerzas responsables de mantener en posición a las
diferentes subunidades son las mismas que en el caso anterior.
La secuencia de aminoácidos de una proteína es el principal determinante de su
conformación espacial, propiedades y características funcionales. Los requerimientos estructurales
para que una proteína cumpla su papel fisiológico son muy rigurosos, no solo es necesario mantener
el número y tipo de aminoácidos constituyentes, además, cada uno de ellos debe ocupar una
posición definida en la cadena. Alteraciones en ese ordenamiento o sustituciones de aminoácidos
pueden afectar la capacidad funcional de la molécula hasta tornarla inútil.
Cuando las proteínas son sometidas a la acción de agentes físicos como calor, agitación
mecánica, radiaciones, etc., o agentes químicos como ácidos o álcalis fuertes, detergentes iónicos,
agentes caotrópicos (urea, guanidina), solventes orgánicos, metales pesados, etc., pueden sufrir
alteraciones en su conformación al modificarse las fuerzas que mantienen unidas las estructuras.
Esta desorganización estructural resulta en la pérdida de las propiedades naturales y funcionalidad
de la proteína. El proceso se denomina desnaturalización y se pierden las estructuras cuaternaria,
terciaria y secundaria de la proteína, de modo irreversible en la mayoría de los casos. La estructura
primaria no se ve afectada ya que los agentes desnaturalizantes no atacan la unión peptídica. Sin
embargo, experimentalmente se comprobó que la desnaturalización proteica en algunos casos puede
ser reversible cuando los tratamientos desnaturalizantes no son tan drásticos. Las proteínas
desnaturalizadas (ej. la clara de huevo calentada) son menos solubles y precipitan, pierden su
capacidad de cristalizar, tienen mayor reactividad química y son más fácilmente atacadas por
enzimas.
1- Reacción de Biuret
Fundamento: Los péptidos y proteínas forman complejos de coordinación con el ión cúprico
(Cu++
). Cada ion Cu++
se liga a la cadena aminoacídica por 4 valencias de coordinación aportadas
por pares electrónicos libres de átomos de nitrógeno (figura 1). Los iones Cu++
reaccionan tanto con
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los N de las uniones peptídicas (dando color rojo) como con los N de grupos amino libres (dando
color azul) lo que da por resultado un color violáceo.
Utilidad: Esta reacción es muy utilizada para poner en evidencia la presencia de polímeros de
aminoácidos e incluso cuantificarlos en fluidos biológicos (orina, sangre, líquido cefalorraquídeo,
etc.). La cuantificación se basa en el hecho que los complejos coloreados absorben energía, de
modo que a mayor cantidad de complejo coloreado formado, mayor será la cantidad de energía
absorbida. Esta energía, de una longitud de onda específica (540nm) para cada compuesto, se puede
determinar utilizando un equipo de laboratorio.
C
NH
CH
C
NH
CH
R
R
O
O C
NH
CH
C
NH
CH
R
R
O
O
Cu2+
Figura 1: Complejo de coordinación entre Cu
2+ y nitrógeno proteico
Materiales:
- Tubos de ensayos - Pipetas - Propipetas
- Baño termostático - Gradillas
Reactivos:
- Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil aril
poliéter (AAP)
- Agua destilada
- Muestra: suero
Procedimiento: Rotular tres tubos de ensayo: 1, 2 y 3 y proceder según el siguiente esquema de
trabajo:
- Tubo1: 50 l de agua destilada + 3,5 ml del reactivo EDTA/Cu. (control negativo)
- Tubo2: 50 l de suero + 3,5 ml del reactivo EDTA/Cu.
- Tubo3: 50 l de suero diluido al medio con solución fisiológica + 3,5 ml del reactivo EDTA/Cu.
Mezclar por agitación e incubar durante 15 minutos a 37°C en baño termostático. Observar los
colores generados en cada tubo y las intensidades.
Resultados:
- Tubo1: coloración azul del reactivo EDTA/Cu.
- Tubo2: coloración violeta intenso del complejo proteína – Cu.
- Tubo3: coloración violeta pálido del complejo proteína – Cu.
2- Prueba de Heller
Fundamento: Es una prueba específica e importante por su facilidad de realización. Se fundamenta
en la acción desnaturalizante de un agente químico (Ácido Nítrico: HNO3) sobre las proteínas
presentes en una muestra, poniéndose en evidencia el resultado por la disminución de la estabilidad
de las mismas en disolución, lo cual provoca su precipitación.
Utilidad: Se trata de una prueba para la detección de proteínas en orina utilizando ácido nítrico
como reactivo. Los fluidos biológicos poseen una cantidad de proteínas que los caracterizan, por
ejemplo en el plasma de un individuo normal (caninos, felinos, equinos, etc.) en ayunas hay 6-
8g/dL, pero en la orina no debería detectarse proteínas, ya que durante el proceso de formación de la
misma se realiza un filtrado de la sangre, siendo retenidas en el cuerpo evitando que se pierdan. Sin
embargo en determinadas situaciones fisiológicas y patológicas las proteínas pueden aparecer en la
orina y por ello hay pruebas de laboratorio que permiten detectarlas.
Materiales:
- Tubos de ensayos - Pipetas -Propipetas
- Gradillas
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Reactivos:
- Ácido Nítrico concentrado
- Agua destilada
- Muestra: Orina Procedimiento: Rotular tres tubos de ensayo con los números 1 (control negativo), 2 (control
positivo) y 3 (Muestra problema). Colocar en el tubo 1, 4ml de agua destilada, en el tubo dos 4ml de
muestra control positivo y en el tubo 3, 4 ml de muestra problema. Inclinar los tubos a 45º sobre la
mesada y agregar a cada uno, lentamente por las paredes, 1 ml de ácido nítrico concentrado.
Reservar los tubos en una gradilla y observar el resultado.
Resultado: La visualización de un anillo insoluble blanquecino en la zona de separación de ambas
fases líquidas, pone en evidencia la presencia de proteínas desnaturalizadas indicando positividad de
la prueba.
ENZIMAS
Introducción: Las enzimas son catalizadores biológicos en la mayoría de los casos de naturaleza
proteica, ya que se ha descripto la actividad catalítica en moléculas de ARN (Ribozimas), que
aumentan la velocidad de reacciones químicas en seres vivos. Actúan disminuyendo la energía de
activación de la reacción química.
Como todo catalizador, no se consume durante las reacciones que cataliza y a diferencia de los
catalizadores inorgánicos, son específicas para cada reacción química y permiten que éstas ocurran
en condiciones de temperatura, presión y pH compatibles con la vida.
Las enzimas se clasifican según el tipo de reacción que catalizan en seis grupos:
- oxidorreductasas
- transferasas
- hidrolasas
- liasas
- ligasas
- isomerasas
Estructuralmente, las enzimas poseen un sitio activo, que es la región mediante la cual se une a su
sustrato. Esta región posee una estructura tridimensional determinada por residuos de aminoácidos
distribuidos espacialmente de manera precisa.
La actividad enzimática puede modificarse al variar la concentración enzimática, concentración del
sustrato, por acción de cambios de temperatura, pH y presencia de inhibidores entre otros.
1- Reacción de Reconocimiento y Desnaturalización de Catalasa
Fundamento: La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y
vegetales que posee la función de catalizar la hidrólisis de un producto tóxico que se genera durante
el metabolismo celular, el peróxido de hidrógeno (H2O2) generando agua y oxígeno según la
siguiente reacción. Pertenece a la categoría de las oxidorreductasas (EC1.11.1.6)
Utilidad: Realizaremos las siguientes pruebas para poner en evidencia la presencia de catalasa en
tejido animal (visualizando los productos finales de la reacción que cataliza) y para destacar la
importancia de la estructura tridimensional de las enzimas para mantener su funcionalidad. La
existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como
desinfectante cuando se aplica sobre una herida. Como muchas de las bacterias patógenas son
anaerobias (no pueden vivir en presencia de oxígeno), mueren con el desprendimiento de oxígeno
que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada.
Materiales:
- Tubos de ensayos - Pipetas - Pinza
- Propipetas - Gradillas
Reactivos:
- Peróxido de Hidrógeno (Agua oxigenada)
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- Muestra: Tejido hepático de ave fresco y hervido previamente
Resultados: la observación de burbujas se corresponde con la presencia de oxígeno, uno de los
subproductos de la reacción. Dicha observación correlaciona con la presencia de la enzima
funcional. La ausencia de burbujeo puede asociarse con pérdida de funcionalidad enzimática por
desnaturalización térmica de la catalasa.
ACIDOS NUCLEICOS
Introducción: son sustancias del más alto rango biológico, a ellos se atribuyen importantes
funciones tales como ser reservorio de la información genética y responsables de su transmisión de
una célula a otra célula hija o de una individuo a otro. Poseen un rol fundamental en el proceso de
síntesis proteica ya que dirigen el ensamblaje correcto de aminoácidos.
Los ácidos nucleicos, ADN y ARN son estructuras poliméricas de doble y simple cadena
respectivamente. En el ADN el monómero constituyente recibe el nombre de desoxirribonucleótido
mientras que para ARN, su denominación es ribonucleótido y químicamente están constituidos por
un azúcar, una base nitrogenada (púrica o pirimidica) y un grupo fosfato que al pH celular le
confiere cargas negativas. Al azúcar se unen las bases nitrogenadas por enlace N-glicosídicos y los
grupos fostato por enlaces de tipo fosfoéster. Luego cada nucleótido se une a otro mediante enlaces
fosfodiéster establecidos entre el grupo fosfato de un nucleótido con el oxhidrilo 3´de otro. Se
genera de este modo una monohebra que se mantiene unida a otra cadena “Complementaria” por
enlaces Puente de hidrógeno, en el caso de ADN.
Electroforesis de ADN
La electroforesis es una técnica empleada para separar moléculas basándose en propiedades
como tamaño, conformación o carga eléctrica. Consiste en utilizar una matriz o soporte semisólido
con una estructura molecular porosa, a través de la cual pueden migrar moléculas de diferentes
tamaños cuando se aplica un campo eléctrico, en un medio conductor de la corriente eléctrica
(buffer de corrida). Las moléculas más pesadas migran más lentamente que las más livianas o de
menor tamaño. Por tener las moléculas de ADN y ARN cargas negativas, estas moléculas se mueven
hacia el polo positivo del soporte semisólido (agarosa en nuestro caso).
Las matrices que se utilizan son muy variadas y su elección depende de la finalidad de la
electroforesis. Una de las más utilizadas es la compuesta por agarosa (polisacárido obtenido de
algas), polvo blanco, que se disuelve en un medio iónico a altas temperaturas. A la agarosa disuelta,
en caliente, se le agrega un colorante que permita la visualización de las moléculas separadas
(tradicionalmente, Bromuro de etidio) y luego se vierte en una plataforma cuadrada o rectangular
que contiene un dispositivo similar a un peine cuyos dientes servirán como impresión para generar
un hueco (pocillo) donde se depositarán las muestras a separar. Una vez solidificada la matriz con el
Procedimiento: Rotular dos tubos de ensayo: 1 y
2. Introducir en el tubo 1 trocitos de hígado
fresco y en el 2 trocitos de tejido hepático
previamente hervido en agua.
Añadir a cada tubo 5 ml de agua oxigenada.
Observar
Figura 2: Esquema del procedimiento de la Reacción
de Reconocimiento y Desnaturalización de Catalasa
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colorante, se retira el peine con sumo cuidado. Se traslada el gel a la cuba de electroforesis que
contiene el buffer de corrida y se cargan (siembran) las muestras problemas en cada pocillo
generado. Antes de la siembra, se mezcla la muestra problema con un buffer de siembra que
contiene entre otros componentes, un colorante (en general azul de bromofenol) que posibilita la
visualización del cargado como así también el avance del frente de corrida. Se aplica un campo
eléctrico y se espera a que la separación ocurra.
Cuando se ha completado la electroforesis, se procede a la etapa de revelado mediante la
visualización por transiluminación con luz UV, ya que el bromuro de etidio además de intercalarse
entre las bases de los ácidos nucleicos, emite una radiación fluorescente al ser irradiado con luz
ultravioleta, observándose en caso positivo, bandas rojo- anaranjadas.
Si se siembran varias muestras una junto a otra en el gel, se producirán separaciones
paralelas, mostrando cada una bandas de distintos tamaños correspondientes a cada componente de
la mezcla. Si las separaciones son incompletas, se dará un solapamiento entre bandas haciendo
indistinguibles dos o más componentes.
Existen marcadores especiales que contienen una mezcla de moléculas de ADN de tamaños
conocidos, llamados marcadores de peso molecular, que se siembran en cada proceso de separación
electroforética con la finalidad de comparar las alturas de las bandas de dicho marcador con aquellas
provistas por las muestras problema para determinar su tamaño.
1- Electroforesis de Ácido Desoxirribonucleico
Preparación de Agarosa 1,5%
Pesar 1,5g de agarosa y agregar buffer TBE (EDTA, ácido bórico, tris) 1.0X hasta alcanzar un
volumen final de 100ml. Disolver la agarosa por calentamiento en microondas. Agregar 3µl de
solución de Bromuro de etidio (10mg/ml) y volcar sobre plataforma de acrílico con peine. Dejar
solidificar. Retirar el peine y disponer en cuba de electroforesis con buffer TBE 1.0x.
Siembra, Corrida y Revelado
Mezclar 2l de buffer de siembra (azul de bromofenol, glicerol y agua) y 10l de solución de ADN.
Homogeneizar con pipeta automática y sembrar en cada pocillo del gel preparado con anterioridad.
Correr a 100voltios durante 25minutos. Retirar el gel y observar el ADN por transiluminación con
luz UV.
Foto 1: electroforesis en gel de agarosa
BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO N°1
Riesgos químicos:
ACIDO NITRICO: Ingestión: Corrosivo. Dolor abdominal, sensación de quemazón, shock.
Inhalación: Sensación de quemazón, tos, dificultad respiratoria, pérdida del conocimiento.
Piel: Puede causar severas quemaduras.
Ojos: Quemaduras graves e irritación ocular.
PERÓXIDO DE HIDROGENO: El peróxido de hidrógeno es muy irritante en concentraciones altas,
ya que causa quemaduras temporales al desprenderse en la reacción el oxígeno.
La ingestión de soluciones diluidas de peróxido de hidrógeno puede inducir vómitos, leve
irritación gastrointestinal, distensión gástrica, y en raras ocasiones, erosiones o embolismo (bloqueo
de los vasos sanguíneos por burbujas de aire) gastrointestinal. Ingerir soluciones de 10-20% de
concentración produce síntomas similares, sin embargo, los tejidos expuestos pueden también sufrir
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quemaduras. Ingerir soluciones aún más concentradas, además de lo mencionado anteriormente,
puede también producir rápida pérdida del conocimiento seguido de parálisis respiratoria.
BROMURO DE ETIDIO: Es una sustancia fuertemente mutagénica y es irritante a los ojos, piel,
mucosas y el tracto respiratorio. Los efectos sanitarios de la exposición a este compuesto no han
sido todavía investigados profundamente. Se sospecha que puede ser cancerígeno y teratogénico por
su cualidad de mutagenicidad, aunque no hay ninguna prueba concluyente de ninguno de estos
efectos. Si se ingiere, se inhala o se absorbe por la piel, esta sustancia puede tener efectos nocivos.
Riesgo de Incendio: En estos laboratorios trabajaremos con mecheros de Bunsen por lo que
tendremos que tomar las medidas necesarias para evitar quemaduras e incendios.
Riesgo eléctrico: Verificar las instalaciones eléctricas así como el mantenimiento de los equipos
empleados. En estos laboratorios utilizaremos el baño termostático.
Riesgos Biológicos: TEJIDOS (hígado), SUERO Y ORINA: Siempre que se manipule material
biológico se deben tomar ciertas precauciones como el uso de guantes, barbijos, antiparras,
guardapolvos o delantales y evitar ingestión y contacto con mucosas.
LABORATORIO N°2
GLÚCIDOS
Introducción: Los azúcares son polihidroxialdehídos o polihidroxicetonas. El grupo carbonilo es un
grupo muy reactivo y forma hemiacetales al reaccionar con un grupo –OH propio o de otra
molécula. En el caso de que la cadena del azúcar sea lo suficientemente larga (4-6 átomos de
carbono), uno de los grupos hidroxilo de la misma molécula puede reaccionar con el grupo
carbonilo para formar un hemiacetal cíclico, que se halla en equilibrio con la forma de aldehído o de
cetona libre. Los grupos funcionales aldehído y ceto libres o potencialmente libres (comprometidos
en la unión hemiacetálica) pueden oxidarse, reduciendo a diversas sustancias. Esta posibilidad es
utilizada para su caracterización en diferentes reacciones químicas.
Los glúcidos pueden clasificarse teniendo en cuenta varios aspectos: Aldosas/ Cetosas: grupo funcional
Glúcidos Tener el grupo funcional libre o comprometido: reductores o no reductores
Monosacáridos/Disacáridos/ Oligosacáridos /Polisacáridos: número de subunidades
monoméricas que los constituyan
Homopolisacáridos/ Heteropolisacáridos: semejanzas entre sus constituyentes
Los diferentes grupos de glúcidos poseen características estructurales propias y por lo tanto
comportamientos diferentes frente a distintos reactivos químicos, lo cual posibilita que mediante
técnicas de laboratorio y seleccionando analíticamente las reacciones, se pueda conocer la
composición de una muestra problema.
Por ejemplo si dispusiéramos de una muestra incógnita que se presume contiene glúcidos, siguiendo
una marcha analítica podríamos descifrar frente a cual grupo de glúcidos estamos presentes.
1- Molisch
Fundamento: Se basa en la acción hidrolizante y deshidratante del ácido sulfúrico sobre los
hidratos de carbono. En dicha reacción el ácido sulfúrico cataliza la hidrólisis de los enlaces
glucosídicos de la muestra y la deshidratación a furfural (en las pentosas) o hidroximetil furfural (en
las hexosas). Estos furfurales se condensan con el α-Naftol del reactivo de Molisch, dando un
producto coloreado Violeta (Ver reacciones abajo). La reacción es exotérmica, pues libera calor al
reaccionar.
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Utilidad: Diferenciar glúcidos libres o combinados, de otros grupos moleculares como lípidos y
proteínas. Para determinar la cantidad y naturaleza específica del azúcar es necesario recurrir a otras
pruebas.
Materiales:
-Tubos de ensayo -Gradilla -Pipetas - Propipetas
-Pipetas Pasteur -Baño termoestático - Pinzas de madera.
Reactivos:
-Muestra: Solución al 5% de Hidratos de carbono y muestra problema -Agua destilada
-Reactivo de Molisch (α-naftol al 5-10% en etanol)
-Acido Sulfúrico (H2SO4) concentrado
Procedimiento: Rotular tres tubos de ensayo: 1, 2 y 3 y dispensar a cada uno 10ml de solución 5%
de un hidrato de carbono conocido (glucosa), agua y solución al 5% de la muestra problema
respectivamente. Añadir a cada tubo 2-3 gotas de reactivo de Molisch (α-naftol al 5-10% en etanol,
preparado en el momento) y mezclar el contenido. Inclinar los tubos y dejar resbalar
cuidadosamente 1ml de ácido sulfúrico concentrado a lo largo de la pared del tubo de manera que
se forme una capa bajo la fase acuosa. A continuación calentar los tubos en baño termostático unos
minutos (60°C durante 10 minutos).
Resultado: ante la presencia de glúcidos, luego de unos instantes, aparece un disco color violeta en
el límite de separación entre ambos líquidos (Abajo: ácido sulfúrico)
2- Lugol
Fundamento: El reactivo de Lugol no reacciona químicamente con los polisacáridos, sino que
forma con ellos un complejo de inclusión termolábil (en frío) que se caracteriza por presentar
distintos colores según las ramificaciones que presente la molécula de polisacárido.
Utilidad: Se utiliza como indicador para identificar polisacáridos como los almidones, glucógeno y
ciertas dextrinas. El Lugol no reacciona con azúcares simples como la glucosa o la fructosa.
Materiales:
- Tubos de ensayo -Pipetas -Propipetas
- Pipetas Pasteur - Gradillas
Reactivo:
- Lugol: disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico (KI) en agua destilada.
- Muestras: engrudo de almidón y solución de glucosa 5% en agua
- Agua destilada
Procedimiento: rotular 3 tubos de ensayo, agregar a uno de ellos 3ml de engrudo de almidón, a otro
3ml de solución de glucosa al 5% y al otro 3ml de agua, agregar unas gotas de Lugol. Observar.
Resultado: Aparición de un color azul intenso o violeta: indicativo de presencia de almidón.
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Aparición de color rojo-violeta: indicativo de existencia de dextrinas
Ausencia de color (con Molisch positivo): Presencia de mono o disacáridos
3-Reacción de Fehling: El reactivo de Fehling es un reactivo moderadamente oxidante, que
consiste en dos soluciones acuosas llamadas Fehling A y Fehling B. Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitación del hidróxido de cobre (II). Al mezclar cantidades iguales de las dos soluciones, se forma un complejo soluble de tartrato cúprico, de color oscuro, el cual proporciona una pequeña cantidad de iones Cúprico (Cu2+).
El hidróxido de sodio y el tartrato que contiene el reactivo, actúan como quelantes (secuetradores) y
son empleados para evitar que el ion cúprico precipite como hidróxido cúprico e interfiera en la
reacción (Ver imagen inferior)
El tartrato no pude formar complejos con el ión cuproso (I) de manera que la reducción del ion
cúprico a cuproso al reaccionar con los carbohidratos, provoca la formación de un precipitado rojo
ladrillo, procedente del óxido cuproso cuando la reacción es positiva.
Las cetosas también dan positiva la reacción de Fehling, ya que en condiciones básicas tautomerizan
a aldosas debido a un equilibrio ceto-enólico, catalizado por el medio básico (NaOH) y la adición de
energía (Calor). Así, la fructosa isomeriza a glucosa y manosa.
Fundamento: El ensayo se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído.
Éste se oxida a un ácido carboxílico y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido cuproso,
que forma un precipitado de color rojo ladrillo. Un aspecto importante de esta reacción es que la
forma aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si
un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido de cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor.
Utilidad: se utiliza para identificar azúcares reductores (galactosa, glucosa, lactosa, levulosa,
maltosa, pentosas).
Materiales:
- Tubos de ensayo -Gradillas -Pipetas
-Baño termostático o mechero -Propipetas
Reactivo:
- Agua destilada
- Reactivo de Fehling “A”:
- Sulfato cúprico cristalizado (azul): 35g
- Acido Sulfúrico concentrado: 5ml
- Agua destilada: hasta 1000ml.
- Reactivo de Fehling “B”:
- Sal de Seignette o de Rochelle (tartrato mixto de potasio y sodio): 150g
- Solución de hidróxido de sodio al 40%: 5ml
- Agua Destilada: hasta 1000ml.
- Muestra: engrudo de almidón y solución de glucosa 5% en agua
.
Procedimiento: Rotular tres tubos de ensayo y agregar a cada uno de ellos 1 ml de reactivo de
Fehling (A+B). Dispensar al primero de ellos 2ml de solución de glucosa 5% en agua, al segundo,
2ml de engrudo de almidón y al último 2ml de agua. Calentar suavemente (BM o Fuego directo)
(40°C durante 10 minutos). Observar
Resultado: Se observará aparición de precipitado color rojo-ladrillo en presencia de glúcidos
reductores.
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Inicio de la reacción si da positivo: ejemplos (dos positivos y uno
negativo)
LÍPIDOS
Introducción: Los lípidos están ampliamente distribuidos en animales y vegetales, comprenden un
grupo heterogéneo de sustancias que se caracterizan por su escasa o nula solubilidad en agua y su
solubilidad en solventes orgánicos. En agua forman emulsiones, que son dispersiones inestables de
una fase dispersa (de menor volumen) en una fase dispersante (de mayor volumen).
No forman estructuras poliméricas como los polipéptidos y polisacáridos.
Son de fundamental importancia desde el punto de vista biológico, ya que
constituyen parte fundamental de las membranas celulares, forman parte de las reservas energéticas
(grasas neutras), actúan como vehículo de vitaminas liposolubles y se relacionan con numerosas
moléculas con acciones fisiológicas diversas como hormonas, vitaminas, ácidos biliares, etc., como
aislante térmico entre otras funciones.
De acuerdo a la complejidad de sus moléculas se clasifican en lípidos simples
(acilgliceroles y ceras) y complejos (fosfolípidos, glicolípidos y lipoproteínas), como así también se
describen sustancias asociadas a lípidos tales como esteroles, terpenos, vitaminas liposolubles, etc.
En la molécula de casi todos los lípidos se encuentran ácidos orgánicos monocarboxílicos
denominados genéricamente ácidos grasos y se utiliza esta característica para clasificar a los lípidos
en dos grupos, atendiendo a que posean en su composición ácidos grasos (lípidos saponificables) o
no los posean (lípidos insaponificables).
Lípidos saponificables
- Simples. Son los que contienen carbono, hidrógeno y oxígeno.
Acilglicéridos. Son ésteres de ácidos grasos con glicerol. Cuando son sólidos se les
llama grasas y cuando son líquidos a temperatura ambiente se llaman aceites.
Céridos (ceras): son esteres de alcoholes y ácidos grasos de cadena larga
- Complejos. Son los lípidos que, además de contener en su molécula carbono, hidrógeno y
oxígeno, contienen otros elementos como nitrógeno, fósforo, azufre u otra biomolécula
como un glúcido. Son abundantes como constituyentes de membranas (Fosfolípidos,
Glucolípidos).
Lípidos insaponificables: Terpenoides, Esteroides, Prostaglandinas
1- Solubilidad. Formación de Emulsiones
Fundamento: Los lípidos son insolubles en agua y pueden formar emulsiones inestables con ella.
Una emulsión es una mezcla transitoria de dos sustancias no miscibles entre sí. Cuando sustancias
lipídicas se agitan fuertemente en medio acuoso se dividen en pequeñísimas gotas formando una
emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupación de las
gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sitúa sobre el agua.
Utilidad: El objetivo del presente trabajo práctico consiste en poner en evidencia algunas
propiedades de lípidos relacionadas a su estructura, por ejemplo la solubilidad en solventes
orgánicos e insolubilidad en solventes acuosos, mediante la formación de emulsiones.
Materiales:
Líquido azul Líquido rojo
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- Tubos de ensayo -Pipetas -Propipetas
- Gradillas
Reactivo:
- Éter o Cloroformo
- Muestras: Aceite
- Agua destilada
Procedimiento: Rotular dos tubos de ensayo, colocar 2ml de aceite en cada uno. Añadir a uno de
ellos 5ml de agua y al otro 5ml de éter o cloroformo. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar
reposar. Observar.
Resultados: Se observará que el aceite se ha disuelto en el éter formando una única fase y en
cambio no lo hace si la fase dispersante es agua (el aceite subirá debido a su menor densidad). En
este último caso se forma una solución de aspecto lechoso que luego de reposar unos minutos a
temperatura ambiente sobre la mesada se separa en dos fases inmiscibles entre sí.
2- Saponificación: Es la hidrólisis termo alcalina de una grasa o aceite, obteniéndose como
resultado jabones. Los jabones poseen un extremo hidrófobo (cadena carbonada) y un extremo
hidrófilo (dado por el extremo polar), esto le permite interactuar entre moléculas que no son solubles
entre sí estabilizando la emulsión que han formado.
Fundamento: En esta reacción los ácidos grasos se separan del alcohol al que están esterificados
(glicerol o esfingol) y se forman sus sales que pueden ser de sodio o potasio, dependiendo de la base
que se utilice. Los jabones poseen una porción polar y otra no polar, y por ser moléculas anfipáticas
poseen la particularidad de tener acción emulsificante y por tanto acción limpiadora.
Utilidad: poner en evidencia propiedades químicas de las grasas, atribuibles al grupo carboxilo de
los ácidos grasos. Cuando una ácido graso reacciona en medio alcalino, forman sales llamadas
jabones.
Materiales:
- Tubos de ensayo -Pipetas -Propipetas
- Baño termostático - Gradillas -Pinzas de Madera
Reactivo:
- Etanol
- Hidróxido de sodio o potasio
- Agua destilada
- Muestras: grasa
Procedimiento: Colocar en un tubo de ensayo de vidrio un trocito de grasa y solubilizarla con 5ml
de etanol. Agregar 5ml de NaOH o KOH al 40% (en agua destilada). Llevar a ebullición en baño
termostático durante 15 minutos, agitando regularmente. Dejar enfriar y comprobar las propiedades
jabonosas y formación de espuma del producto obtenido.
Resultado: cuando se forman jabones (sales de acidos grasos y metales alcalinos como Na o K), tras
la hidrólisis termoalcalina, al agitar el tubo de ensayo se genera espuma.
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BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO N°2
Riesgos químicos:
ACIDO SULFURICO: La preparación de una disolución de ácido puede resultar peligrosa por el
calor generado en el proceso. Es vital que el ácido concentrado sea añadido al agua (y no al revés)
para aprovechar la alta capacidad calorífica del agua. En caso de añadir agua al ácido concentrado,
pueden producirse salpicaduras de ácido.
ALCOHOL ETÍLICO: La ingestión del etanol puede afectar al sistema nervioso central,
provocando estados de euforia, desinhibición, mareos, somnolencia, confusión (alguno habrá
sentido sus efectos el fin de semana). Al mismo tiempo, baja los reflejos.
HIDROXIDO DE SODIO: Ingestión: puede causar daños graves y permanentes al sistema
gastrointestinal. Inhalación: Irritación con pequeñas exposiciones, puede ser dañino o mortal en altas
dosis. Piel: Peligroso. Los síntomas van desde irritaciones leves hasta úlceras graves.
Ojos: Peligroso. Puede causar quemaduras, daños a la córnea o conjuntiva.
Riesgos biológicos, Riesgos eléctricos y Riesgos de incendios: idem laboratorios anteriores.
LABORATORIO N°3
METABOLISMO DE LÍPIDOS
Introducción: La insulina es una hormona proteica que permite el ingreso de glucosa a las células
para poder ser utilizada como fuente de energía. Durante la inanición o en determinados trastornos
metabólicos en los cuales no hay suficiente insulina o hay pérdida de funcionalidad de la misma, la
célula no puede utilizar glucosa, catabolizando grasas en su lugar. A medida que aumenta el
metabolismo de las grasas para generar energía, se forman moléculas llamadas cuerpos cetónicos,
que son cetoácidos (cetonas y ácidos carboxílicos) que se acumulan en sangre y orina y que resultan
tóxicos en altos niveles (Acetona, acetoacetato y β-hidroxibutirato).
1- Caracterización de cuerpos cetónicos en orina: La detección de cuerpos cetónicos se realiza
habitualmente mediante la utilización de tiras reactivas. Estas consisten en una cinta de
material plástico o papel, de aproximadamente 5mm de ancho. Las cintas de material plástico
constan de unas almohadillas impregnadas de sustancias químicas (Ejemplo: Nitroprusiato de sodio
para la detección de cetoácidos) que reaccionan con los compuestos presentes en la orina
produciendo un color característico. En las cintas de papel, los reactivos se encuentran adsorbidos
directamente sobre la misma. Estas últimas frecuentemente son específicas para una única reacción
(por ejemplo medición de pH), mientras que las cintas con almohadillas permiten realizar varias
determinaciones simultáneamente. Existen tiras reactivas con diferentes objetivos, algunas
son cualitativas y solo determinan si la muestra es positiva o negativa para un metabolito de interés
y otras son semicuantitativas, además de brindar una reacción positiva o negativa aproximan un
resultado cuantitativo; en estas últimas las reacciones de color son aproximadamente proporcionales
a la concentración de sustancia presente en la muestra. La lectura de los resultados se realiza
comparando los colores obtenidos con una escala de colores provista por el fabricante, no
necesitando de aparatos adicionales. La prueba se puede leer a partir de los pocos segundos y hasta
30 minutos después de la inmersión de la tira en la muestra de orina (dependiendo de la marca del
producto que se esté utilizando). Se pueden informar valores semicuantitativos, expresados
usualmente como trazas, 1+, 2+, 3+ y 4+.
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Fundamentos (Tiras reactivas Urine Strip 10): En esta reacción el ácido acetoacético en medio
alcalino reacciona con el nitroprusiato (nitroferricianuro) de sodio y sulfato de magnesio para
producir un complejo de color magenta. El color resultante varía desde tostado cuando no hay
reacción, a distintos tonos de purpura para reacciones positivas. La prueba no detecta ácido
hidroxibutírico, y es solo débilmente sensible a acetona cuando se adiciona glicina a la reacción, sin
embargo como estos compuestos provienen del ácido acetoacético, puede presuponerse su existencia
y no es necesaria una demostración selectiva. Las medicaciones que contienen grupos sulfhidirlo,
tales como el mercaptoetanol y la levodopa u otras sustancias que colorean la orina, pueden dar
resultados atípicos. En muestras conservadas inadecuadamente puede ocurrir una disminución falsa
de los valores debido a volatilización y degradación bacteriana.
Utilidad: Por lo general en la orina no aparecen cantidades cuantificables de cetonas pues todas
estas sustancias se metabolizan completamente para producir energía, dióxido de carbono y agua.
Sin embargo en determinadas condiciones fisiológicas como lactancia o cuando el metabolismo de
los hidratos de carbono se encuentra alterado, se producen desbalances metabólicos que conducen a
la aparición de cetonas en orina como producto del metabolismo de las reservas grasas del
organismo.
Materiales:
- Vidrio de reloj o caja de Petri -Pipetas Pasteur
Reactivo:
- Tiras reactivas Urine Strip 10
- Agua destilada
- Muestras: orina
Procedimiento: se dispondrá de 3 tubos o frascos con muestras de orina de pacientes. Con pipeta
Pasteur aspirar aproximadamente 1-2ml de cada muestra de orina problema y dispensar sobre una
tira reactiva (sobre un vidrio de reloj o caja de Petri) para cada muestra. Esperar el tiempo indicado
por el fabricante y comparar la tira con la imagen de referencia presente en el envase comercial de
las mismas. Repetir la operación utilizando agua en lugar de muestra. Observar.
Resultado: se compararán las intensidades de colores obtenidas para cada muestra con los valores
de referencia provistos por el fabricante.
HORMONAS
El sistema endócrino está constituido por una gran diversidad de células, agrupadas en glándulas o
dispersas en diferentes tejidos que elaboran y secretan productos activos. En muchos casos estos
productos se denominan hormonas y se vierten a la circulación en respuesta a estímulos específicos,
llegando así a células efectoras (blanco, target o diana) en las cuales producen un efecto
determinado. También secretan sustancias que no llegan a la sangre, sino que actúan sobre la misma
célula de origen o sobre células contiguas, llamándose efectos autócrinos y parácrinos
respectivamente.
De acuerdo a la naturaleza química, las hormonas pueden clasificarse en cinco grupos:
- Esteroideas: derivan del colesterol y debido a su naturaleza poco polar, estas hormonas
atraviesan fácilmente la membrana celular. Ejemplos: glucocorticoides, hormonas sexuales.
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- Derivadas de aminoácidos: Ejemplos: Adrenalina y Noradrenalina derivadas de la médula
suprarrenal y Hormonas tiroideas. Las primeras son hormonas solubles en agua y no penetran las
células blanco y las segundas son poco solubles en agua y atraviesan la membrana por difusión.
- Derivadas de ácidos grasos: Ejemplos: prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos. Se originan
de ácidos grasos poliinsaturados. Sus acciones primarias son de tipo autócrinas y parácrinas
- Péptidos: Ejemplos: Factores reguladores hipotalámicos, oxitocina, glucagón, etc.
- Proteínas: Ejemplo: insulina, prolactina, tirotrofina, etc. Las hormonas proteicas y peptídicas son
sintetizadas por ribosomas asociadas al retículo endoplasmático rugoso (RER). Estas hormonas se
almacenan en vesículas intracelulares y son liberadas por exocitosis, son solubles en medio acuoso y
en su mayoría circulan libres en sangre.
Acciones hormonales de regulación de la Glucemia
Los niveles de glucemia (Glucosa en sangre) son mantenidos en un rango estrecho de variación,
debido a la acción concertada de un sistema multihormonal de regulación. Existen permanentemente
procesos que tienden a disminuir los valores de glucemia y otros que tienden a aumentarlos, estando
ambos procesos en equilibrio en estado de salud.
Son procesos Hipoglucemiantes:
- Facilitación del ingreso de glucosa a las células
- Estimulación de la glucogenogénesis
- Estimulación de las vías de degradación de glucosa (glucólisis, vía de las pentosas)
- Conversión de glucosa en otro tipo de compuestos (Ejemplo: en ácidos grasos)
La insulina es el principal factor hipoglucemiante y todos los procesos que operan en este sentido
son activados por esta hormona.
Son procesos Hiperglucemiantes:
- Glucogenólisis hepática
- Gluconeogénesis
- Absorción de glucosa intestinal.
El glucagón, entre otras acciones, activa la glucogenólisis hepática y la gluconeogénesis. La
adrenalina activa la glucogenólisis muscular y hepática, pero solo el hígado libera glucosa a la
circulación para aumentar la glucemia. El cortisol aumenta la gluconeogénesis en hígado y
disminuye la utilización de glucosa en tejidos extrahepáticos. La hormona del crecimiento
disminuye el ingreso de glucosa al músculo y la utilización de glucosa en general.
1- Determinación de glucosa en orina con tiras reactivas
Fundamentos (Tiras reactivas Urine Strip 10): En esta reacción la glucosa se transforma
secuencialmente por reacciones enzimáticas. Primero la glucosa oxidasa cataliza su oxidación a
acido glucónico y peróxido de hidrogeno. Luego, la peroxidasa cataliza la reacción del peróxido de
hidrogeno con ioduro de potasio formándose productos coloreados que van desde celeste verdoso a
marrón verdoso intermedio y marrón.
Utilidad: Por lo general en la orina no aparecen cantidades cuantificables de glucosa, pero en
determinadas situaciones, por ejemplo: cuando el nivel de este azúcar aumenta en sangre, podría
detectarse en muestras de orina. Por lo tanto su detección en orina y su cuantificación en sangre,
pueden ser informativas para orientar al médico veterinario en la búsqueda de la causa de la afección
presentada por un paciente.
Materiales:
- Vidrio de reloj o caja de Petri -Pipetas Pasteur
Reactivos:
- Tiras reactivas Urine Strip 10.
- Agua destilada
- Muestras: orina
Procedimiento: se dispondrá de 3 tubos o frascos con muestras de orina de pacientes. Con pipeta
Pasteur aspirar aproximadamente 1-2ml de cada muestra de orina problema y dispensar sobre una
tira reactiva (sobre un vidrio de reloj o caja de Petri) para cada muestra. Esperar el tiempo indicado
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
50
por el fabricante y comparar la tira con la imagen de referencia presente en el envase comercial de
las mismas.
Resultado: se compararán las intensidades de colores obtenidas para cada muestra con los valores
de referencia provistos por el fabricante.
VITAMINAS
Introducción: Las vitaminas son compuestos orgánicos de estructura química relativamente simple
y variada. La mayoría de las vitaminas esenciales no pueden ser sintetizadas por el organismo, por
lo que éste no puede obtenerlas más que a través de la ingesta equilibrada de alimentos naturales.
Las vitaminas son compuestos químicos que junto con otros elementos nutricionales actúan como
catalizadoras de todos los procesos fisiológicos y no poseen funciones plásticas o energéticas, pero
son esenciales para mantener la salud y el buen funcionamiento corporal. De acuerdo a la
solubilidad se las puede clasificar en liposolubles (A, D, E y K) e hidrosolubles (B y C).
* Vitaminas liposolubles: a este grupo pertenecen: el Retinol o Vitamina A (antixeroftálmica), los
Colecalciferoles o Vitamina D (antirraquítica), los Tocoferoles o vitamina E (antioxidante), y la
Vitamina K (antihemorrágica).
Generalidades:
- Son moléculas hidrófobas.
- Solo pueden absorberse con eficiencia si la absorción de lípidos es normal
- Su transporte en sangre se realiza por unión a lipoproteínas o proteínas fijadoras específicas.
- Químicamente se trata de lípidos insaponificables, caracterizados por su incapacidad para
formar jabones; ya que carecen en sus moléculas de ácidos grasos unidos mediante enlaces éster.
Las mismas son poco alterables y el organismo puede almacenarlas como reserva, su carencia
estaría basada en malos hábitos alimentarios o en falta de exposición a la luz solar.
* Vitaminas hidrosolubles: a este grupo pertenecen: el Complejo B y la Vitamina C o Ácido
Ascórbico.
Generalidades:
- Debido a su solubilidad en agua, sus excesos se excretan por orina.
- Rara vez se acumulan en concentraciones tóxicas.
- Su almacenamiento es limitado (excepto cobalamina), por lo que deben recibirse con
regularidad.
1- Determinación del poder reductor de Ácido Ascórbico (Vitamina C): La vitamina C
pertenece al grupo de las hidrosolubles, permitiendo eliminar sus excesos del organismo a través de
la orina. Su almacenamiento es limitado, por lo que debe recibirse un aporte con regularidad. Se
encuentra en cítricos, hortalizas y leche vacuna. Participa en la síntesis de colágeno y la formación
de matriz extracelular. Es antioxidante y participa en procesos de defensa contra agentes infecciosos.
Químicamente, el ácido ascórbico se relaciona con las hexosas, solo que a diferencia de los glúcidos
metabolizables en el organismo, es la conformación L de la vitamina la biológicamente activa. Es un
ácido débil y un enérgico reductor que cede dos de sus hidrógenos con suma facilidad generando
como producto ácido deshidroascórbico, el cual es inestable en medio alcalino y se oxida
irreversiblemente en forma espontánea incorporando agua y generando 2,3-diceto-L-Gluconato.
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
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Utilidad: La capacidad del ácido ascórbico de poder reducir (oxidándose) a otras sustancias se
puede utilizar en el laboratorio para su identificación. El poder reductor se puede poner en evidencia
mediante la reacción de Fehling o de modo indirecto, mediante la reacción de Lugol.
1-a Reacción de Fehling
Fundamentos: Ver Laboratorio N° 2
En esta reacción se pone en evidencia el poder reductor del acido ascórbico, mediante la reducción
del catión cúprico a cuproso y la precipitación del mismo como óxido cuproso color rojo ladrillo.
Materiales:
- Tubos de ensayo -Gradillas -Pipetas
-Mechero -Propipetas -Pinzas de Madera
Reactivos:
- Agua destilada
- Reactivo de Fehling “A”:
- Sulfato cúprico cristalizado (azul): 35g
- Acido Sulfúrico concentrado: 5ml
- Agua destilada: hasta 1000ml.
- Reactivo de Fehling “B”:
- Sal de Seignette o de Rochelle (tartrato mixto de potasio y sodio): 150g
- Solución de hidróxido de sodio al 40%: 5ml
- Agua Destilada: hasta 1000ml.
- Muestra: solución de Vitamina C y Jugo de naranjas.
Procedimiento: Rotular tres tubos de ensayo: M (muestra), P (positivo) y N (Negativo). Colocar en
cada tubo 1 ml de solución Fehling A y 1 ml de solución Fehling B. Estas soluciones se mezclan en
volúmenes iguales al momento de su uso.
Agregar al tubo rotulado M, 2 ml de jugo de naranja en solución acuosa, al rotulado P igual volumen
de suspensión de Vitamina C en agua y al tubo N, igual volumen de agua. Calentar a fuego directo,
flameando el tubo evitando que entre en ebullición. Observar el resultado
+ Cu2+ Ión Cúprico
+ Cu2O
Ácido L – ascórbico
Oxido cuproso (Rojo Ladrillo)
Ácido L – Deshidroascórbico
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2015 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
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Resultado: se observa un precipitado color rojo ladrillo de óxido cuproso cuando existen en el
medio sustancias reductoras, como el ácido L – ascórbico.
(*) Antes de utilizar el reactivo de Fehling, se debe controlar que esté en buenas condiciones, porque
los reactivos viejos se reducen solos. Entonces, colocar en un tubo de ensayo una parte del reactivo
y cuatro de agua destilada, llevar a ebullición durante medio minuto. Si el líquido permanece azul, el
reactivo está en buenas condiciones.
1-b Reacción de Lugol
Fundamentos: Esta práctica se basa en la reacción clásica del yodo con almidón. El almidón como
se estudió en el capítulo correspondiente a glúcidos es un homopolisacárido de origen vegetal que
está compuesto por dos polímeros distintos de glucosa; amilosa y amilopectina. El componente
macromolecular amilosa tiene forma helicoidal y es capaz de formar un complejo de coloración azul
violácea con el yodo. Al reaccionar el complejo coloreado yodo-amilosa (solución indicadora) con
el ácido L- ascórbico presente en los jugos de los cítricos o con la vitamina C obtenida de un
producto comercial, la solución indicadora pierde el color. Esto se debe a que la vitamina C es
oxidada por un oxidante suave como la solución de yodo para dar lugar al ácido deshidroascórbico y
a iones yoduro. De esta forma el almidón, que se tornaba violáceo en presencia de yodo, se vuelve
incoloro en contacto con yoduro.
+ I3 −
↔ + 2H+ + 3I
-
Ácido L- ascórbico Ácido deshidroascórbico
Materiales
Tubos de ensayo
Pipetas.
Pro-pipetas.
Gradillas porta tubos.
Vasos de precipitado.
Goteros.
Baño termostático
Reactivos
Solución Indicadora
Agua destilada
Jugos de cítricos como fuente de vitamina C
Suspensión de vitamina C comercial en agua
Procedimiento: Previamente se preparó una solución indicadora del contenido de vitamina C,
consistente en un complejo coloreado constituido por almidón y yodo (solución de Lugol). Para ello
se disolvió almidón con suficiente agua y se agregó solución de Lugol (Yodo, KI en agua) hasta
observar un color azul violáceo.
Solución indicadora
GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS - BIOQUIMICA - AÑO 2013 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS - UNNE
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Luego, para poner en evidencia el poder reductor de la vitamina C, se rotularon tres tubos de ensayo
M (muestra), P (positivo) y N (Negativo). A cada tubo se agregaron 5ml de la solución indicadora
junto con 10 gotas de jugo de cítrico al tubo M, 10 gotas de suspensión de Vitamina C al tubo P y 10
gotas de agua destilada al tubo N, agitar suavemente cada uno de los tubos para luego comparar la
coloración de la mezcla frente a un fondo blanco organizándolos en orden de color (del más claro al
más oscuro).
Resultados: La coloración menos intensa o más clara, hace referencia a un mayor contenido de
vitamina C en la muestra. La razón es porque la vitamina hace que la solución indicadora pierda el
color.
.
BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO N°3
Riesgos biológicos, Riesgos eléctricos y Riesgos de incendios: idem laboratorios anteriores.
LABORATORIO N°4
LABORATORIO DE LA DIGESTION DE MONOGASTRICOS, AVES Y
RUMIANTES
Los animales monogástricos poseen tubos digestivos adaptados a las dietas que consumen.
Así, un carnívoro (que ingiere alimentos fácilmente digestibles con las enzimas que secreta)
tiene un tracto digestivo más corto que un omnívoro o un herbívoro. Estos últimos poseen
en el intestino grueso regiones colonizadas por gérmenes fermentadores. Las aves poseen
para este fin dos ciegos. Los lugares donde se digieren en mayor proporción los alimentos
son el estómago (en el caso de las aves son dos: glandular y muscular) y el intestino
delgado, donde se vierten enzimas pancreáticas, intestinales y la bilis, para digerir los
distintos sustratos (glúcidos, lípidos y proteínas): pepsina, tripsina, quimotripsina, amilasa,
lipasa, carboxi y aminopeptidasas, etc.
Los rumiantes se caracterizan por su capacidad para alimentarse de pasto o forraje. Esta
característica se basa en la posibilidad de poder degradar los hidratos de carbono
estructurales del forraje que son muy poco digestibles para las especies de estómago simple
o no-rumiantes por no producir Beta-glucosidasas. La degradación del alimento se realiza
mayoritariamente por digestión fermentativa (no por acción de enzimas digestivas
secretadas por el rumiante) llevada a cabo por diferentes tipos de microorganismos
Tubos de ensayo conteniendo
solución indicadora
Tubos de ensayo en los que se
observan los resultados de la prueba
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(bacterias, protozoos y hongos) a los que el rumiante aloja en sus divertículos
estomacales. Al alimentar a los rumiantes, se alimenta indirectamente a los
microorganismos ruminales, los que para un buen desarrollo requieren un medio favorable.
De esta forma hay una simbiosis entre los gérmenes y el animal. Aunque existen otros
microorganismos en el rumen, las bacterias representan la fracción de la población ruminal
imprescindible para la vida del rumiante. Si bien existe una amplia variedad y alternativas
para clasificarlas, resulta útil agruparlas en base a los sustratos que emplean para nutrirse y
a los productos finales de su fermentación, por ej.:
Celulolíticas: fermentan hidratos de carbono estructurales de la pared celular
(celulosa, hemicelulosa y pectinas) produciendo AGV (especialmente acetato)
Amilolíticas: fermentan hidratos de carbono de reserva de los granos (almidón)
produciendo AGV (especialmente propionato)
Proteolíticas: degradan las proteínas produciendo AGV y amoníaco (NH3)
El tipo de hidrato de carbono predominante en la dieta condiciona el desarrollo (aumento de
la población) del tipo de flora adecuada para su fermentación y el ajuste del pH a su rango
ideal. Así, una ración rica en almidón es fermentada por una flora amilolítica que
desarrolla mejor a un pH de 5,5 a 6,0; mientras que una ración compuesta por forraje con
alto contenido de hidratos de carbono estructurales (celulosa, hemicelulosa y pectinas) será
fermentada por una flora celulolítica que desarrolla mejor a pH de 6 a 6,9 (más alcalino).
1- Hidrólisis del almidón. La degradación del almidón se produce in vivo por acción de
enzimas hidrolíticas del tubo digestivo. Los animales monogástricos poseen amilasas (alfa -
1-4 glucosidasas), dextrinasas y disacaridasas, capaces de fragmentar el almidón,
glucógeno, maltosa e isomaltosa, hasta glucosa.
Fundamentos: In Vitro se puede lograr la degradación no enzimática (ácida en caliente) del
almidón, obteniéndose progresivamente moléculas intermedias, de pesos moleculares cada
vez menores, según el siguiente esquema.
Almidón almidón soluble amilodextrinas acrodextrinas
maltosa glucosa
Dichos productos de digestión pueden ponerse en evidencia mediante la reacción de Lugol
Utilidad: poner en práctica una reacción química in vitro (comparable a la digestión
enzimática in vivo) para asociar la coloración obtenida como punto final de la reacción con
el grado de digestión de almidón producida.
Materiales:
- Tubos de ensayo -Pipetas -Propipetas
- Pipetas Pasteur - Gradillas
Reactivo:
- Lugol: disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico (KI) en agua destilada.
- Muestras: engrudo de almidón
- Agua destilada
- HCl
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Procedimiento: Rotular 12 tubos de ensayo y colocar 1 gota de solución de Lugol a cada
uno de ellos. Luego, en un vaso de precipitado con 750 ml de agua hirviendo (baño
termostático), se prepara como sustrato de la reacción de Lugol una solución de almidón al
5% + 2 ml de HCl (previamente mezclados) en un tubo de ensayo. Posteriormente se toman
del fondo del recipiente muestras de sustrato a intervalos de 2 minutos y se depositan en
cada uno de los 12 tubos con solución de Lugol. Este procedimiento debe repetirse hasta
que la coloración obtenida con Lugol mas la muestra permanezca uniformemente amarilla.
Luego se agrega a todos los tubos 10 ml de agua y se separan los que tengan colores
netamente diferenciales a simple vista.
Resultados: se obtendrá la siguiente escala y resultados asociando la presente prueba con la
reacción de Fehling (Ver tabla inferior). Esta comparación nos permite asociar ambos
resultados (Lugol y Fehling) con el tipo de moléculas obtenidas tras la digestión química.
Coloración Compuesto Fehling
Pardo sucio y precipitado almidón insoluble (-)
Azul intenso almidón soluble (-)
Violeta amilo dextrinas (-)
Rojo pardo eritodextrinas (-)
Incoloro acrodextrinas (-)
Incoloro maltosa (+)
Incoloro glucosa (+)
2- Determinación de Tripsina en materia fecal de aves: Test de la gelatina. La
tripsina es una endopeptidasa que tiene selectividad por enlaces que contienen el grupo
carboxilo de aminoácidos diaminados (arginina y lisina). Sus productos son polipéptidos
con aminoácidos básicos en el extremo C–terminal. La tripsina activa todos los zimógenos
producidos por el páncreas.
Utilidad: La evaluación de la actividad proteolítica de la tripsina en las heces es una de
las pruebas que pueden reflejar enfermedades pancreáticas.
Fundamentos: este test se fundamenta en la habilidad de la tripsina para atacar a la
gelatina (proteína) de tal manera que, luego de la incubación de la enzima con la gelatina,
la solución no podrá solidificar.
Materiales:
- Tubos de ensayos - Gradilla - Pipetas
- Propipetas - Baño termostático
Reactivos:
- Gelatina sin sabor al 7,5%
- Bicarbonato de sodio al 5%
- Agua destilada
- Muestra: materia fecal de aves (dilución 1 en 9 con agua destilada).
Procedimiento: rotular dos tubos de ensayo 1 y 2. Colocar en cada uno de ellos 2 ml de
gelatina al 7,5% que actuará como sustrato de la enzima, 1ml de bicarbonato de sodio 5%
para dar el pH necesario para que la enzima actúe y luego al tubo rotulado 1, agregar 1ml de
dilución fecal (muestra que contiene a la enzima a evaluar) y al rotulado 2, 1ml de agua
destilada como control negativo de reacción. Incubar ambos tubos a 37ºC por 1 hora ó a
temperatura ambiente por 2 horas y media. Refrigerar los tubos 20 minutos y observar los
resultados.
Resultados:
- Tubo 1: se observa falta de solidificación en caso de presencia de tripsina (prueba
positiva).
- Tubo 2: se observa la gelatina solidificada.
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3- Análisis del contenido ruminal: coloración con yodo de bacterias y protozoarios
yodófilos. Los protozoos del rumen son anaeróbicos estrictos, aprovechan diversos hidratos
de carbono para obtener energía y los degradan con formación de ácidos grasos volátiles
(AGV: ácido acético, propiónico, butírico, láctico, CO2 e H2). Todos los microorganismos
ciliados (Holótricos) sintetizan un hidrato de carbono de reserva semejante al almidón
(hasta 70% de su peso seco) que es metabolizado con formación de los mismos productos
finales. Al almacenar grandes cantidades de este carbohidrato en su citoplasma, se hacen
más pesadas, de mayor peso específico que el licor ruminal y precipitan. Así, adicionando
glucosa a nuestra muestra de líquido ruminal e incubando un tiempo determinado,
sedimentan los protozoos holótricos por su mayor peso específico. Estos gérmenes
proliferan en rumiantes bien alimentados y desaparecen en el ayuno. Poseen un
metabolismo hidrocarbonado propio, independiente de la presencia de las bacterias.
Realizan hidrólisis ácida completa de la amilopectina muy ramificada (pura) hasta glucosa,
que es degradada en ácido láctico, AGV, CO2 e H2.
Algunas cepas de bacterias ruminales también poseen la capacidad de formar hidratos de
carbono de reservas intracelulares (almidón o glucógeno bacteriano) por lo que darán
positivas a esta coloración.
La flora sacarolítica del intestino o del fermento que se eliminan con las materias fecales
(aún en monogástricos), también dan positiva la reacción, por lo que esta prueba se puede
efectuar con muestras de materias fecales en suspensión.
Fundamento: ver guía TP Nº2: reacción de Lugol
Utilidad: destacar la importancia de las condiciones químicas para el desarrollo de
gérmenes ruminales y la utilización de azúcares por los mismos.
Materiales:
- Tubos de ensayo - Pipetas
- Propipetas - Baño Termostático
- Centrífuga - Portaobjetos y cubreobjetos
- Microscopio óptico - Pipetas Pasteur
- Gradillas
Reactivos:
Muestra: Licor ruminal (obtenidos por zonda o fístulas)
Dextrosa 5%
Álcali, para llevar a pH alcalino
Formol
Solución de Lugol
Procedimiento: rotular tres tubos de ensayo: 1, 2 y 3 y agregar a cada uno de ellos 2ml de
licor ruminal y 2ml de solución de dextrosa 5%. Agregar al tubo 2, álcali en cantidad
necesaria para alcalinizar la mezcla y al tubo 3 una gota de formol. Incubar 30 minutos a
40°C, centrifugar a 1500rpm y descartar el sobrenadante. Agregar a cada uno de los
sedimentos 1ml de solución de Lugol. Incubar 10 minutos a 37°C y colocar de cada tubo
una gota de sedimento sobre un portaobjetos. Cubrir cada uno de los tres vidrios con un
cubreobjetos y observar al microscopio óptico en 40X.
Resultados: Se observan gránulos de almidón de color pardo amarillento contenidos en los
microorganismos del tubo 1, mientras que en los del tubos 2, al cual agregamos álcali y por
lo tanto llevamos a una condición de pH desfavorable para el crecimiento de bacterias, por
lo cual no se observará coloración. En el análisis de los gérmenes del tubo 3, dado que se ha
agregado un agente desnaturalizante de proteínas (formol), los gérmenes se mueren y no se
observa coloración.
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4- Estudio del jugo ruminal: La digestión fermentativa depende del normal desarrollo de
los microorganismos que la realizan. Por esta razón, el rumiante crea y mantiene las
condiciones ideales para su crecimiento y multiplicación, convirtiéndose en un “gigantesco
medio de cultivo líquido” o cuba de fermentación.
Utilidad: realizar un análisis detallado para orientar el diagnóstico de patologías digestivas.
Extracción: Cantidades importantes: sonda de calibre bastante grueso, de unos 2m de longitud;
inclinando la cabeza del animal o mediante una bomba de vacío.
Cantidad pequeña: punción por debajo del pliegue de la babilla, puncionando en
dirección craneal, hacia delante. Recoger líquido y filtrar.
Se puede dejar a temperatura ambiente cierto tiempo o en baño termostático durante varias
horas.
Análisis:
1.- COLOR: verde-grisáceo, en función del tipo de alimentos.
Verde oliva-pardo alimentación con pasto.
Gris: remolacha.
Amarillo-pardo: ensilados.
Gris lechoso: acidosis ruminal.
Negruzco: indigestión con podredumbre de panza.
Grisáceo y grumoso: indigestión láctea en terneros/corderos.
2.- OLOR: aromático, al menos no repelente.
Repugante-mohoso-pútrido: putrefacción proteica (ingiere demasiada proteína y se
produce una fermentación anormal de esa proteína).
Ácido-picante: ácido láctico (hidratos de carbono de fácil digestión).
Inodoro-mohoso: inactividad del jugo ruminal.
Olor a “cuajar” (ácido): alteración del tránsito pilórico.
3.- CONSISTENCIA: ligeramente viscosa (aspecto de sopa).
Acuosa: inactividad ruminal.
Viscosa: contaminación con saliva.
Burbujas pequeñas: fermentación espumosa.
4.- pH: 5,5 - 7,4
Más altos: alimentación con fibra y/o proteína en exceso.
Más bajos: alimentación rica en hidratos de carbono (ácido láctico).
Alcalinidad: ayuno, inactividad de la flora ruminal.
Muy bajos: acidosis ruminal (exceso de HC o reflujo del cuajar).
5.- SEDIMENTACIÓN/FLOTACIÓN: agitar y ver si las partículas finas caen al fondo; las
partículas groseras flotan. Normalmente se separan en 4-8 minutos.
Jugo inactivo sedimentación rápida, flotación retardada o ausente.
Putrefacción/fermentación espumosa flotación muy rápida, mezcla de sólidos y
líquidos.
6.- PROTOZOOS:
Funciones degradación de HC, regulación de la población bacteriana, síntesis de
proteínas de alto valor biológico.
Realizar el examen con material recién extraído.
Gran variabilidad: 105-107/ml.
Nº total / tamaño / vivos-muertos: da una idea de la funcionalidad de ese líquido
ruminal.
Trastornos: van muriendo; primero desaparecen los grandes, luego los medianos y
finalmente los pequeños. En trastornos graves la muerte es uniforme. En procesos
recientes y moderados aparecen vivos y muertos.
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7.- BACTERIAS:
Funciones / nº variable
107-1012 gérmenes / ml / g según alimentación, animal, etc.
Menor número: alimentación con hidratos de carbono.
Acidosis láctica: predominio de Gram positivos.
Alcalosis: aumentan el número de Gran negativos.
Indigestión y ayuno: disminución del número de bacterias.
8.- HONGOS:
Funciones poco claras.
Mantienen la anaerobiosis a nivel ruminal.
Su número aumenta en caso de acidosis ruminal.
BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO N° 4
Riesgos químicos:
ACIDO CLORHÍDRICO: El cloruro de hidrógeno es irritante y corrosivo para cualquier
tejido con el que tenga contacto. La exposición breve a bajos niveles produce irritación de la
garganta. La exposición a niveles más altos puede producir respiración jadeante,
estrechamiento de los bronquiolos, coloración azul de la piel, acumulación de líquido en los
pulmones e incluso la muerte. La exposición a niveles aún más altos puede producir
hinchazón y espasmos de la garganta y asfixia. La mezcla del ácido con agentes oxidantes
de uso común, como la lejía, también llamada lavandina en algunas partes, (hipoclorito de
sodio, NaClO) o permanganato de potasio (KMnO4), produce el tóxico gas cloro.
A pesar de estas características los jugos gástricos en el estómago humano contienen
aproximadamente el 3 % de ácido clorhídrico. Allí ayuda a coagular las proteínas y
desempeña un papel importante como coenzima de la pepsina en su digestión. También
ayuda en la hidrólisis de los polisacáridos presentes en la comida. Es secretado por las
células parietales. Éstas contienen una extensiva red de secreción desde donde se secreta el
HCl hacia el lumen del estómago.
Riesgos:
Ingestión: Puede producir gastritis, quemaduras, gastritis hemorrágica, edema, necrosis. Se
recomienda beber agua o leche y NO inducir el vómito
Inhalación: Puede producir irritación, edema y corrosión del tracto respiratorio, bronquitis
crónica. Se recomienda llevar a la persona a un lugar con aire fresco, mantenerla caliente y
quieta. Si se detiene la respiración practicar reanimación cardio- pulmonar
Piel: Puede producir quemaduras, úlceras, irritación. Retirar de la zona afectada toda la
vestimenta y calzados y lavar con agua abundante durante al menos 20 minutos
Ojos: Puede producir necrosis en la córnea, inflamación en el ojo, irritación ocular y nasal,
úlcera nasal. Lavar el o los ojos expuestos con abundante agua durante al menos 15 minutos
BICARBONATO DE SODIO: La Inhalación del polvo o niebla puede causar daños al
sistema respiratorio y al tejido pulmonar lo cual puede producir desde una irritación a las
vías respiratorias superiores hasta la neumonía química. El contacto prolongado causa
irritación a la piel con enrojecimiento y formación de ampollas, lo cual puede agravarse en
personas con lesiones previas a la piel. La severidad del ataque a la piel va en relación
directa y proporcional a la concentración y tiempo del contacto.
FORMOL:
HIDROXIDO DE SODIO: Ingestión: puede causar daños graves y permanentes al sistema
gastrointestinal. Inhalación: Irritación con pequeñas exposiciones, puede ser dañino o
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mortal en altas dosis. Piel: Peligroso. Los síntomas van desde irritaciones leves hasta
úlceras graves.
Ojos: Peligroso. Puede causar quemaduras, daños a la córnea o conjuntiva.
Riesgo de Incendio, Riesgo Eléctrico, Riesgo Biológico: Idem laboratorios anteriores
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EJERCICIOS DE SEMINARIO:
Seminario unidad temática 1: Bioelementos y moléculas de interés biológico
1. Explique el rol del agua como solvente en el organismo animal
2. Explique la importancia del conocimiento de la bioquímica como parte de la curricula de la
Carrera de Veterinaria.
3. Complete las oraciones
Las propiedades del material a estudiar que permiten efectuar los siguientes estudios biológicos son:
La ______________ separa células, moléculas o líquidos no miscibles, esto es posible por las
diferencias en cual propiedad de los mismos:
La colorimetría permite identificar y cuantificar sustancias según dichas sustancias
puedan_____________ o ___________________la luz.
La electroforesis posibilita la separación de moléculas según éstas tengan: diferentes
________________ ________________________________________.
4. Bioelementos primarios, en conjunto 95% de la materia viva, principales constituyentes de las
biomoléculas, son:
C= 20 %, H= 9.5 %, O= 62 %, N= 2,5 % /// P, S
5. Bioelementos secundarios: 4,5% de la materia viva, son:
Na, K, Ca, Mg, Cl
6. Oligoelementos, son inferiores al 0,1%, no son los mismos en todos los seres vivos y son
indispensables para el desarrollo armónico del organismo. Se han aislado unos 60
oligoelementos en los seres vivos, pero solamente 14 de ellos pueden considerarse comunes para
casi todos; son:
Fe, Mn, I, F, Co, Si, Cr, Zn, Li, Mo
7. ¿Cuál de las siguientes características NO es común a los llamados bioelementos primarios?:
a) entre tales elementos pueden establecerse enlaces covalentes sencillos y múltiples.
b) la combinación de tales elementos produce compuestos, generalmente, con cierta o bastante
reactividad química.
c) sus combinaciones originan una rica variedad de funciones químicas.
d) al ser pocos, el número de compuestos a que su combinación da lugar es bastante limitado.
e) son imprescindibles para formar las principales biomoléculas orgánicas.
8. Complete los siguientes enunciados referentes a las propiedades del agua:
-Los líquidos orgánicos (citoplasma, líquido tisular, plasma, linfa, savia, etc) son disoluciones
acuosas que sirven para el transporte de sustancias y como medio en el que se producen las
reacciones metabólicas. El agua interviene en muchas de reacciones como la fotosíntesis, en las
hidrólisis y en las condensaciones.
- A diferencia de otras sustancias de peso molecular semejante, el agua es_____________ a
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temperatura ambiente.
Debido a su polaridad el agua es buen disolvente de los compuestos ___________________ y
__________________.
- El _______________________(calor necesario para elevar 1ºC la temperatura de 1 g) es
Relativamente ____________________, así como el _________________________. Gracias a
estas dos propiedades el agua interviene en la t_________________________.
- Máxima densidad a 4°°C. Como consecuencia el hielo ___________________el agua líquida, lo
que impide los océanos y otras masas menores de agua se congelen de abajo a arriba.
- En el agua son elevadas las fuerzas de cohesión (atracción entre las moléculas de agua) y de
adhesión (atracción entre el agua y una superficie) lo cual origina los fenómenos de
__________________ por los que el agua asciende en contra de la gravedad por conductos de
diámetro muy fino (capilares). Estos fenómenos contribuyen al transporte de sustancias en los
vegetales.
9. El agua al ionizarse produce...
a) iones H3O+ y OH-;
b) iones H3O- y OH+;
c) iones H3O+ y OH+;
d) iones H3O- y OH-.
e) Ninguna de las opciones anteriores
BIOMOLÉCULAS ORGÁNICAS
1. Escriba la estructura de los grupos funcionales enumerados:
Grupos Funcionales Hidrófilos Grupos Funcionales Hidrófobos
Carboxilo - COOH Radical Alquílico - CH2 - R
Hidroxilo o Alcohol - OH Radical etilénico - CH = R
Carbonilo > C = O Radical fenilo - C6 H5
Amino - NH2
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2. Complete los espacios en blanco:
Los grupos funcionales polares son s________________ en agua o _________________. Los no polares son
____________________ o ___________________.
3. Complete los espacios en blanco del siguiente cuadro observando las moléculas debajo del mismo. Identifique los diferentes átomos que componen estas estructuras y clasifíquelos en primarios, secundario u
oligoelemento.
Figura Elementos Grupos funcionales
Primario Secundario Oligoelemento presentes
Ribosa 5 P
Cisteína
6-mercaptopurina
Fluoroacetato
Colesterol
Acetil CoA
Ribosa 5 P Cisteína Fluoroacetato
6-mercaptopurina Colesterol Acetil CoA
4. Observe la estructura de las siguientes moléculas y deduzca su solubilidad frente al agua
(hidrofílica, hidrofóbica, anfipática). Señale con una X en la grilla.
hidrofílico hidrofóbico anfipático
Lípido complejo
Molécula de jabón
Glucosa
Triacilglicérido
Fosfato de Dexametasona
Vitamina A
Vitamina B1- (Tiamina)
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Seminario unidad temática 2: aminoácidos, péptidos y proteínas
1. Observe las fórmulas y diga; ¿de que compuesto se trata? ¿Qué tipo de isomería puede observar?
¿Cómo se indica en el nombre del compuesto?
2. ¿Qué diferencias hay entre proteínas Simples y Conjugadas? ¿Cómo se las subclasifica?
3. ¿Existe alguna diferencia entre las proteínas de origen animal y las de origen vegetal? Justifique
su respuesta.
4. Aplicación de conocimientos a Proteínas de interés. Explique para el colágeno y la hemoglobina:
a. Función
b. Localización
c. Particularidades acerca de la estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria (si la tuviera)
de cada una.
d. Clasificación (simples o complejas)
5 - Cuáles de las siguientes afirmaciones describen a la cadena lateral del aminoácido serina:
a) Contiene un grupo hidroxilo
b) Puede formar uniones disulfuro
c) Puede participar de uniones puente de hidrógeno
d) Esta cargada a pH fisiológico
Lípido complejo Molécula de jabón Glucosa
Triacilglicérido Vitamina B1- (Tiamina) Vitamina A
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6 - Cuáles de los siguientes aa posee una cadena lateral cargada a pH fisiológico.
a) Ácido aspártico
b) Lisina
c) Acido glutámico
d) Asparragina
7 - La glutamina:
a) Contiene 3 grupos titulables
b) Contiene un grupo amida
c) Es un aa ácido
d) Contiene una cadena lateral que puede formar puentes de hidrógeno en proteínas
8 - Cuáles de las siguientes afirmaciones acerca de los aminoácidos son correctas:
a) La glicina contiene 2 hidrógenos disociables
b) La tirosina es un sitio de unión de grupos fosfatos en proteínas
c) La cisteína es un aminoácidos que contiene azufre
d) La glutamina es clasificada como un aminoácido básico.
9 - La unión peptídica
a) Es un tipo especial de unión amida
b) Posee un carácter parcial de doble ligadura
c) No está ionizada a pH fisiológico
d) Se rompe por agentes que desnaturalizan proteínas , tales como solventes orgánicos o altas
concentraciones de urea.
10 - El péptido alanil-glicil- serina
a) Contiene alanina con un grupo alfa –amino libre
b) Contiene tres enlaces peptídicos
c) Es ópticamente activo.
d) Es un dipéptido
11 – Escribir la estructura iónica predominante de la Gly a pH 3; 7 y 13
12 – Las proteínas son macromoléculas biológicas constituidas básicamente por:
a) C, H, O, P
b) C, H, O, N
c) C, H, O, Fe
13 – Los alfa – L aminoácidos se caracterizan por:
a) la disposición del grupo carboxilo a la izquierda del carbono
b) la disposición del grupo amino a la derecha del carbono
c) la disposición del grupo amino a la izquierda del carbono
14 – El comportamiento anfótero de los aminoácidos se refiere a .
a) el pH que exista en una disolución acuosa determina su ionización
b) el pH que exista en una disolución acuosa determina su actividad óptica
c) el pH impide que se solubilicen en una disolución acuosa
15 – Un ejemplo de polipéptido es :
a) Ala – Glu- Tyr – Met- Pro
b) Cys – Pro – His- Ala – Ile – Phe – Gly
c) Ninguna es correcta
16 – En cuanto al enlace peptídico, es cierto que:
a) se estable entre los grupos amino de dos aminoácidos contiguos
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b) se establece entre los grupos carboxilos de dos aminoácidos contiguos
c) se estable entre los grupos amino y carboxilo de dos aminoácidos.
17 – Escriba la fórmula desarrollada del siguiente dipéptido: Lis – Asn
18 - El punto isoeléctrico de un aminoácido es:
a) El pH en el cual las cargas positivas son iguales a las cargas negativas.
b) La temperatura a la cual la disociación del aminoácido es la máxima
c) El pH en el cual la disociación del aminoácido es la máxima
d) Las opciones a, b y c son correctas.
e) Las opciones a, b y c son incorrectas
19 - En cuanto a la estructura de los aminoácidos:
a) Alanina y tirosina poseen un anillo bencénico
b) Lisina y arginina poseen más de un átomo de nitrógeno en su estructura
c) La metionina posee un átomo de azufre en su estructura
d) Las opciones a, b y c son correctas.
e) Las opciones a, b y c son incorrectas
Seminario unidad temática 3: Enzimas
Interpretación de gráficos 1. El gráfico 1 ilustra las energías de activación de una determinada reacción en presencia y
ausencia de una enzima. ¿Cuál es la curva que grafica el curso de la reacción en presencia de la
enzima?
2. ¿Qué propiedades de las enzimas permiten considerarlas como catalizadores? ¿Qué es un centro
activo?
3. Representa gráficamente la cinética de los enzimas señalando el valor de Vmax y Km. Explica
brevemente la inhibición competitiva.
GRÁFICO 1
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Seleccione la opción correcta:
4. Los enzimas alostéricos suelen tener estructura cuaternaria, formados por varios protómeros
a) Verdadero
b) Falso
5. Si un producto final provoca el cambio de conformación del enzima inicial a la forma inactiva, el
proceso se llama...
a) inducción enzimática
b) inhibición no competitiva
c) retroinhibición
d) regulación conformacional
6. Las moléculas reguladoras de las enzimas alostéricas se unen al centro activo del enzima,
modificando su actividad
a) Falso
b) Verdadero
7. Las enzimas alostéricas se sitúan preferentemente al final de las rutas metabólicas como sistema
de control final.
a) Verdadero
b) Falso
8. El producto final de una ruta metabólica es normalmente un regulador positivo de las enzimas
alostéricas del inicio de la ruta.
a) Verdadero
b) Falso
9. Las enzimas alostéricas tienen dos conformaciones, y sólo una de ellas es activa.
a) Falso
b) Verdadero
10. De la lectura del abstract trascripto a continuación extraiga las respuestas a las siguientes
preguntas:
a) ¿Cuál es la estructura química de la proteína identificada?
b) ¿Cuál es la actividad enzimática asignada a dicha proteína? Escriba la estructura del sustrato.
c) ¿Cuál de las dos enzimas descriptas mostró mayor afinidad por el sustrato? Fundamente su
respuesta.
d) ¿Qué conclusión puede sacar de la comparación de las dos Vmax?
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Abstract:
Manzanares, P., Van den Broeck, H.C., De Graaff, L.H. and Visser, J.
Purification and characterization of two different -L-rhamnosidases, RhaA and RhaB, from
Aspergillus aculeatus.
Applied and Environmental Microbiology. 67(5), 2230-2234 (2001).
Abstract: Two proteins exhibiting -L-rhamnosidase activity, RhaA and RhaB, were identified upon
fractionation and purification of a culture filtrate form Aspergillus aculeatus grown on hespiridin.
Both proteins were shown to be N glycosylated and had molecular masses of 92 and 85 kDa, of which
approximately 24 and 15%, respectively, were contributed by carbohydrated. RhaA and RhaB,
optimally active at pH 4.5 to 5, showed Km and Vmax values of 2.8 mM and 24 U/mg (RhaA) and 0.30
mM and 14 U/mg (RhaB) when tested for p-nitrophenyl- -L-rhamnopyranoside. Both enzymes were
able to hydrolyze -1,2 and -1,6 linkages to -D-glucosides. Using polyclonal antibodies, the
corresponding cDNA of both -L-rhamnosidases, rhaA and rhaB, was cloned. On the basis of the
amino acid sequences derived from the cDNA clones, both proteins are highly homologous (60%
identity).
Seminario unidad temática 4: metabolismo de aminoácidos y proteínas.
1. Indique en las celdas correspondientes de la grilla siguiente Verdadero (V) o Falso (F) según
corresponda, para cada afirmación, en relación al metabolismo de aminoácidos y proteínas.
Los aminoácidos pueden ser utilizados como combustible, pero como función
secundaria, reemplazados por carbohidratos y grasas
Los niveles de aminoácidos dependen del equilibrio entre biosíntesis y
degradación de proteínas corporales
Cuando el exceso de aminoácidos se utiliza en síntesis de nuevos constituyentes,
se dice que el balance nitrogenado es negativo
La pérdida del grupo carboxilo de aa da lugar a formación de aminas biógenas,
de intensa acción fisiológica
El principal donante de metilo es la metionina activa o S-adenosil metionina
A través de transaminaciones, el organismo puede generar aminoácidos si
dispone de los cetácidos correspondientes
2. ¿Cuál es la función de la S - adenosil metionina? Esquematice su estructura.
3. Mecanismo de las reacciones de transaminación ( formación de Bases de Schiff).
4. Escriba las fórmulas correspondientes a las reacciones catalizadas por las enzimas ALAT (GPT)
y ASAT (GOT).
5. Escriba las reacciones de formación de cadaverina y putrescina. ¿Qué tipo de reacciones son?
6. ¿Cuáles son los aminoácidos precursores de las siguientes aminas biógenas?: histamina,
tiramina y triptamina?
7. Qué es una reacción de transpeptidación? Escriba la ecuación correspondiente a la formación de
glutatión.
8. Esquematice el metabolismo de triptófano, fenilalanina e histidina.
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9. El esquema siguiente ejemplifica una reacción básica de la degradación de los aminoácidos.
Complete los espacios en blanco del mismo (sustrato/s, producto/s, enzima, coenzima).
Seminario unidad temática 5: ácidos nucleicos
1. ¿Qué otra función poseen los nucleótidos libres, aparte de actuar como eslabones de cadenas
poliméricas? Dibuje la estructura del ATP y explique su composición.
2. ¿Cuantos tipos de ARN conoce? ¿Qué diferencia estructural con el ADN poseen? ¿Cuáles son
sus funciones y en que parte de la célula se encuentran? ¿Cuáles son sus estructuras? Graficar.
3. Mencione diferencias entre el ADN de procariotas y eucariotas.
4. Explique quienes poseen ADN circular y cómo es el genoma de los virus.
5. Escribir la fórmula de los siguientes compuestos:
(Identifique las uniones entre las diferentes partes de la molécula)
CMP (5’ monofosfato de citidina)
dGMP (5’ monofosfato de desoxiguanosina)
6. Dibuje la estructura de los anillos de purina y pirimidina y coloque la numeración correcta de sus
átomos.
________________________________________________________________________________
Seminario unidad temática 6: metabolismo de ácidos nucleicos
1- Explique como ocurre el catabolismo de bases púricas y pirimídicas, cuáles son sus productos y
como se eliminan del organismo.
2- Mencione las enzimas que participan en el proceso de duplicación del Ácido Desoxiribonucleico
y mencione sus funciones.
3. Metabolismo de bases púricas
a) Nombrar los compuestos precursores de la síntesis del anillo de purina
b) Dibujar la estructura de la ribosa 5 fosfato
c) Esquematizar la biosíntesis de los nucleótidos de purina a partir de la ribosa 5 fosfato
d) Dé ejemplos de otras vías para la síntesis de nucleótidos de purina en el organismo
e) ¿Cuáles son los productos del catabolismo de las purinas?
f) Explique el comportamiento del ácido úrico en pH sanguíneo normal
g) Explique la importancia de los uratos y sus orígenes en las especies animales.
4. Metabolismo de pirimidinas
a) Nombrar los precursores de la síntesis del núcleo de pirimidina
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b) Esquematice la biosíntesis del núcleo de pirimidina
c) Esquematice el catabolismo del núcleo de pirimidina
5. Biosíntesis de nucleósidos di y trifosfatos
Complete las siguientes ecuaciones
a) GMP + _________ GDP + ADP
b) GDP + _________ GTP + ADP
Indique las enzimas implicadas en las reacciones y los cofactores necesarios
6. Biosíntesis de ácidos nucleicos
a) Esquematice la replicación del ADN
b) Esquematice la síntesis de los 3 tipos de ARN
7. Cómo eliminan el Nitrógeno en exceso los mamíferos, las aves, los reptiles y los peces?
Seminario unidad temática 7: Glúcidos
Dado el siguiente compuesto:
1. Identifique el grupo de moléculas de interés biológico al que pertenece.
2. Describa las isomerías que advierte en dicha estructura
3. Forme el hemiacetal (furanósido y piranósido) correspondiente, con los dos isómeros que se
generan en cada caso.
4. ¿Qué producto obtendría si hace reaccionar dicho compuesto con una molécula de metanol?
Escriba la ecuación correspondiente. Ubique al producto de la reacción dentro de la
clasificación de glúcidos.
5. ¿Qué tipos de isomería puede presentar la fructosa?
6. Describa con fórmulas la unión éster entre un glúcido y un ácido fosfórico.
7. ¿Cuáles son las características generales de los heteropolisacáridos?
8. Describa ubicación en el organismo y función de cada uno de ellos.
9. ¿Por qué se comportan como polianiones y qué característica le otorga a la molécula?
10. Describa la función y estructura de los proteoglicanos.
11. Forme una glicoproteína de 8 residuos de glúcidos. ¿Cuál podría ser su función?
12. ¿cuáles son los glicolípidos más abundantes y en qué se diferencian bioquímicamente?
CHO
C
C
OHH
HHO
C HHO
C OHH
CH2OH
D-Galactosa
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13. Describa la estructura de la pared vegetal y explique la disposición y función de los glúcidos
que la forman.
14. Compare estructuralmente a las moléculas de almidón y celulosa.
Seminario unidad temática 8: Metabolismo de glúcidos
1.- Ingreso de la Glucosa a las células: naturaleza química y ubicación celular de los
Transportadores de Glucosa. Diferencias entre SGLT y GLUT. Clases de GLUT según su
distribución tisular. Propiedades cinéticas.
2.- La Glucosa – 6 fosfato constituye lo que se denomina un punto de “encrucijada metabólica”,
¿cuáles son los posibles destinos de este metabolito? ¿En qué condiciones se ve favorecido cada
uno de ellos? Esquematice.
3.- Glucógeno: ¿Para qué sirve? ¿Por qué el organismo deposita glucosa como glucógeno y no
como glucosa – 6 fosfato, siendo que la formación de este último demanda menor gasto
energético. ¿Existe alguna analogía estructural con el almidón? Esquematice formación y
degradación.
4.- ¿A qué se denomina gluconeogénesis? ¿En qué situaciones se produce? ¿A partir de qué
sustratos? ¿Por qué no es el camino inverso de la glucólisis? Esquematice los tres desvíos que
posibilitan esta vía, señalando las enzimas involucradas y su ubicación celular. Balance
energético. ¿Es una vía catabólica o anabólica?
5.- Explique el proceso observado en el esquema de la figura, en qué condiciones y dónde se
produce.
6.- Nombre los siguientes compuestos y explique qué relación tienen con el metabolismo de
carbohidratos:
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7.- Marque en el siguiente esquema los dos posibles caminos para la producción del propionato por
las bacterias ruminales.
8.- Mencione tres procesos que aportan glucosa a la sangre y tres procesos que la extraen. El banco
de respuestas lo ayudará en la selección.
SUSTRAEN APORTAN
a) a)
b) b)
c) c)
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Banco de respuestas
vía de las Pentosas-Fosfato - absorción intestinal – glucólisis – glucogenólisis -
gluconeogénesis hepática – glucogenogénesis
Seminario unidad temática 9: Lípidos
Escribir las fórmulas de los siguientes compuestos:
a) ácido esteárico
b) ácido oleico
c) 1,2 dilauril 3 esteaoril L glicerol.
d) 1,2,3 trilinoleil D glicerol
e) Ácido 9,10 dicloro linoleico
f) Araquidato de sodio
g) Ácido fosfatídico
h) Ceramida
Escribir las ecuaciones correspondientes a las siguientes reacciones:
a) •Saponificación de triesteaoril D glicerol
b) •Hidrogenación del ácido palmitoleico
Deduzca la variación relativa de las propiedades físicas entre el ácido esteárico y el oleico
Seminario unidad temática 10: Metabolismo de lípidos
1- Cetogénesis: Realice un esquema con los tejidos involucrados en la formación, utilización y
excreción de cuerpos cetónicos. ¿En qué situaciones se produce? Esquematice las etapas de
formación y utilización de cuerpos cetónicos (con fórmulas). ¿Qué es la cetosis?
2- Biosíntesis de ácidos grasos: situaciones en las que se produce. Describa el funcionamiento del
complejo Ácido graso sintetasa. Esquematice las etapas. Balance energético. ¿Se pueden
sintetizar ácidos grasos insaturados?
3- Eicosanoides: grupo de compuestos que comprende, funciones biológicas que realizan.
4- ¿Cuál es el intermediario común en la biosíntesis de triglicéridos y fosfolípidos; enumere los
pasos de la biosíntesis de fosfolípidos?
5- ¿Cuáles son los factores Lipotrópicos?
6- Utilización y transporte del colesterol en los animales.
7- Describa en orden de mayor a menor los componentes de las siguientes lipoproteínas y las
funciones de la mismas.
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Seminario unidad temática 11: Vitaminas
1. El ácido nicotínico, la vitamina D, y la vitamina K. tienen cierta independencia de la dieta,
pudiendo ser sintetizadas por el organismo. ¿De qué manera ocurre esto?
2. Describa la participación del pirofosfato de tiamina (PPT) en la descarboxilación oxidativa
del piruvato.
Seminario unidad temática 12: Bioquímica de las hormonas
De estas seis actividades, deben resolverse en clases por lo menos cuatro. Las demás podrán
completarse luego para ser consideradas en la siguiente clase práctica.
1. Esquematice el Sistema del AMPcíclico y el Sistema Calmodulina-Calcio.
2. Esquematice el Sistema de la proopiomelanocortina (POMC).
3. A que se denomina vida media de las hormonas, ¿de qué factores depende?
4. Esquematice la biosíntesis de hormonas tiroideas y describa las acciones. ¿De qué aminoácidos
derivan estas hormonas?
5. Hormonas derivadas del colesterol: realice las estructuras químicas señalando las diferencias en
cada caso.
6. Esquematice el mecanismo de acción de hormonas esteroideas.
7. Nombrar las acciones de la insulina y del glucagón y explica la regulación de su secreción.
Seminario unidad temática 13: Utilización de la energía. CICLO DE KREBS: Catabolismo
del Acetil – CoA. CADENA RESPIRATORIA. FOSFORILACION OXIDATIVA
1. ¿Que son las especies reactivas del oxígeno y como se generan?
2. ¿Qué efectos tienen las especies reactivas del oxígeno en el organismo?
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3. ¿Qué mecanismos de defensa posee el organismo contra dichas espacies reactivas? Sistemas
endógenos y exógenos.
4. El Acetil – CoA constituye un punto de encrucijada metabólica, ¿cuáles son los posibles
orígenes y destinos de este metabolito? Esquematice.
5. Ciclo del Acido Cítrico, de Acidos Tricarboxilicos o de Krebs: Ubicación celular. Papel
funcional. Reacciones: describa cada una de ellas (con fórmulas), indicando las enzimas
que intervienen y los principales puntos de regulación. Balance energético. ¿Es una vía
catabólica o anabólica?
6. Cadena respiratoria y fosforilación Oxidativa: ¿de qué manera se acoplan? Para que sirven?
Esquematice indicando los complejos, las bombas de protones, las coenzimas que
interaccionan y la ATP sintetasa. Rédito de ATP: rinde lo mismo un NADH + H+ y un
FADH2? ¿Por qué?
7.- Identifique la reacción de la figura siguiente, a qué vía metabólica pertenece y si es una
reacción endergónica o exergónica.
8.- Defina y ejemplifique acoplamiento energético en las vías metabólicas.
9.- Complete el cuadro, donde para cada una de las reacciones del ciclo de Krebs presentadas se
detallan el sustrato, el producto y la enzima actuante.
10.- Mencione y ejemplifique el rol biosintético de algunos compuestos intermedios del ciclo de
Krebs.
11.- Identifique los Sistemas de provisión de energía muscular (Sistema Creatínfosfato -
Sistema de ácido láctico - Sistema Oxidativo) y complete el cuadro
N° de Orden de
la Reacción (R)
Sustrato Enzima Producto
Oxalacetato (o ácido
oxálico)
Isocitrato
deshidrogenasa
Oxalacetato
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Sistema de provisión Período Energía
Sistema Creatínfosfato0-30 s La energía en forma de 'combustible' empleada en los
músculos (procedente del ATP muscular)
Sistema de ácido lácti30 s - 5 min Energía en forma de 'combustible' empleada en los
músculos procedente del glucógeno
Sistema Oxidativo 1 min - 4-5 h Energía procedente de la oxidación de los lípidos y del
glucógeno.
Seminario unidad temática 14 y 15: Bioquímica de la digestión en monogástricos, aves y
rumiantes
1. Construya un cuadro comparativo de las enzimas presentes en cada órgano del sistema
digestivo de monogástrico y de aves.
2. Clasifique las enzimas anteriores en endo o exo enzimas, y explique brevemente el modo de
acción de cada una de ellas y las condiciones necesarias para las catálisis en las que
intervienen.
3. Elija un sustrato (glúcido, lípido, proteína) y esquematice la digestión en los diferentes
niveles del tubo digestivo de monogástricos y de aves.
4. Clasificar a las distintas aves según el tipo de dieta que ingieren.
5. Describir brevemente las principales diferencias del aparato digestivo de las aves con
respecto a las otras especies domésticas.
6. Resuma en un esquema las condiciones necesarias para la fermentación en el rumen y en
una cámara de fermentación.
7. Esquematice la degradación de celulosa y almidón en el rumen.
8. Nombre los productos de la fermentación de azúcares, que son absorbidos por las paredes
del rumen y algunos de sus destinos en el rumiante.
9. Esquematice el ciclo de recuperación de la urea por el rumiante.
10.
Seminario unidad temática 16: Integración y control del metabolismo
1. Sobre la organización del metabolismo es
cierto que:
a) Todas las rutas metabólicas están formadas
por secuencias de reacciones irreversibles
catalizadas por enzimas.
b) Las rutas anabólicas generan intermediarios
metabólicos, productos de desecho, ATP y
poder reductor que pueden ser utilizados en
las rutas catabólicas.
c) Las rutas anfibólicas ocurren
preferencialmente en anfibios, pero no en
microorganismos.
d) Las rutas catabólicas generan
intermediarios metabólicos, productos de
desecho, ATP y poder reductor que pueden ser
utilizados en las rutas anabólicas.
e) Las rutas anabólicas permiten la biosíntesis
de productos de excreción para el organismo,
generando energía y poder reductor útil para
las rutas anfibólicas.
2. Las vías metabólicas que requieren energía
y conducen a moléculas complejas a partir de
precursores, se conocen colectivamente como:
a) Anabolismo.
b) Autotrofismo.
c) Catabolismo.
d) Heterotrofismo.
e) Metabolismo.
3. En los procesos catabólicos, el conjunto de
las reacciones son:
a. Endergónicas.
b. De síntesis.
c. Exergónicas.
d. El proceso requiere energía.
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4. Señale sobre la figura siguiente las rutas metabólicas que se encuentran aceleradas o estimuladas
en la diabetes mellitus (poniendo signos + junto a las flechas).
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