Practica de Laboratorio N 1
Practica de Laboratorio N 1OBJETIVOS: Determinar parmetros cinticos de una cepa de Aspergillus kawachi, creciendo en medio lquido. Establecer los perfiles de actividad amiloltica producida durante el cultivo. Relacionar los perfiles de actividad enzimtica que produce la cepa con la curva de crecimiento.
Datos de la prctica obtenidos a diferentes tiempos
M. de CultivoM.O.Hr. de cultivoTarapapel + platoP seco totalP seco muestraP seco (g/l)
Almidn (liq)A. kawachi01,1511,1530,0020,025
Almidn (liq)A. kawachi51,1491,1530,0040,050
Almidn (liq)A. kawachi201,1491,2060,0570,712
Almidn (liq)A. kawachi271,1471,2560,1091,363
Almidn (liq)A. kawachi441,1511,2960,1451,813
Almidn (liq)A. kawachi461,1421,2950,1531,913
Almidn (liq)A. kawachi521,1431,3030,162,000
CURVA DE CRECIMIENTOCon los datos de la tabla anterior podemos graficar la curva de crecimiento
Horas de cultivoP seco (g/l)ln X
00,025-3,68887945
50,050-2,99573227
200,712-0,33897537
271,3630,30932125
441,8130,59470711
461,9130,64841129
522,0000,69314718
Graficando solo la parte exponencial de la curva podemos obtener la velocidad especifica de crecimiento (), siendo este valor igual al de la pendiente en la ecuacin de regresin lineal. Adems podemos calcular el tiempo de generacin como: tg=Ln2/
Horas de cultivoln X
0-3,68887945
5-2,99573227
20-0,33897537
270,30932125
pte ()0,15461/hr
tg4,483hr
AZUCARES TOTALESCon los datos de las muestras patrn se construye la curva de calibracin para evaluar el contenido de azucares totales.
Curva de calibracin
Concentracin (ppm) Absorbancia
00,497
250,667
750,955
1001,045
1501,154
2001,369
Muestras
A partir de los datos obtenidos podemos calcular la variacin de las concentraciones de azcar total en el tiempo, con la ecuacin de regresin lineal.Debe hacerse un pasaje de unidad en las concentraciones, de ppm a g/l.
Horas de cultivoAbsorbanciaAz. Total (ppm)Az. Total (g/l)
01,9213229,053,23
52,7785269,525,27
203,8017705,247,71
271,6042474,292,47
440,937886,190,89
460,92845,710,85
La curva obtenida no es correcta, no debera haber aumentado (de 3,23g/l a 7,71g/l). Lo que pudo haber pasado es que en el medio el almidn no se lleg a disolver bien, por lo que debe de haberlo hecho con el tiempo, y por eso es el pico.
AZUCARES REDUCTORES (principalmente glucosa)Se realizan los mismos clculos que en el caso anterior.
Curva de calibracin
Concentracin (ppm) Absorbancia
0-0,008
100-0,001
2000,011
4000,042
5000,057
6000,064
7000,08
8000,095
9000,107
10000,123
MuestraDebe hacerse un pasaje de unidad en las concentraciones, de ppm a g/l.
Horas de cultivoAbsorbanciaAz. Reductor (ppm)Az. Reductor (g/l)
0-0,0034650,465
5-0,0072650,265
200,02418151,815
270,01513651,365
440,00910651,065
460,0069150,915
En el punto 1 y 2 hay un error de medicin, porque no es correcto que haya una disminucin, luego aumente y despus caiga de nuevo la concentracin. Lo que en realidad ocurre es que aumenta glucosa porque la enzima degrada el almidn, quedando solo glucosa, luego las clulas empiezan a consumir glucosa y por eso disminuye.
ACTIVIDAD ENZIMATICA: -amilasaIgual que anterior.
Curva de calibracin
Concentracin (ppm) Absorbancia
00,102
1000,13
2000,159
3000,213
4000,256
5000,263
6000,294
7000,339
8000,395
9000,423
Muestras
1 UE = 1 mmol Glu/minuto
Horas de cultivoAbsConc. (ppm)UE
00,154143,253,18
50,164168,253,74
200,7291580,7535,13
270,323565,7512,57
440,17183,254,07
460,181210,754,68
A la UE se lo divide en los 20 minutos que es el tiempo en que queda reaccionando, a una temperatura de 40C, para que se produzca la enzima.
RENDIMIENTOS OBTENIDOS:
Se tomaron como valores finales aquellos que correspondan a los 27 min, ya que es donde estn los valores de mximo.
Xf-Xi= 1,363g/l 0,025g/l = 1,338g/l
-(Sf-Si)= -(2,47g/l 3,23g/l) = 0,75g/l
Pf-Pi= 0,566g/l 0,14g/l = 0,42g/l
Entonces:
Yx/s = X/S= 1,77
Yp/s = P/S = 0,56
CONCLUSIONRealizando la prctica de un cultivo sumergido en un bioreactor discontinuo, pudimos obtener los parmetros cinticos, as como tambin los perfiles de crecimiento, consumo de sustrato y formacin de producto, efectuando todos los clculos pertinentes.Adems pudimos comprobar, comparando las graficas de crecimiento con la de actividad enzimtica, que la enzima -amilasa es un metabolito primario, ya que est asociado el crecimiento de la clula.
1
2
Top Related