Clasificación de las pruebas serológicas Interacción primaria: - Inmunofluorescencia
- Enzimoinmunoensayo
- Radioinmunoensayo
- Inmunocromatografía
- Ensayo de polarización de luz fluorescente
Interacción secundaria: -Aglutinación
-Precipitación
Interacción terciaria: -Fijación de complemento
-Pruebas intradérmicas
¿Qué detectan las pruebas de interacción primaria?
Detectan la unión directa (o interacción molecular) entre un Ag determinado y el Ac específico para ese Ag se conocen como pruebas
de interacción primaria.
¿Para que pueden ser utilizadas las pruebas de interacción primaria?
Estas pruebas pueden ser utilizadas para detectar presencia, localización y otras para cuantificar tanto Ag como Ac en muestras problema .
¿Las pruebas de interacción primaria son visibles directamente?
NO. La formación del complejo Ag-Ac se evidencia porque uno de los reactivos Ag o Ac está marcado.
El "marcado" del Ag o del Ac se realiza mediante la unión covalente con elementos que emiten una señal característica y observable.
Al reactivo (Ag o Ac) marcado.
¿A que se denomina conjugado?
¿Que sustancias marcadoras se utilizan para la fabricación de conjugados y como se
detecta la señal emitida?
Ensayo de polarización de la luz fluorescente
(FPIA, FPA)
Principio:
La velocidad de rotación de las moléculas en solución es inversamente
proporcional a su tamaño
Ag marcado libre
Alta velocidad de rotación
Valor mP bajo
Ag marcado unido a Ac específico
Menor velocidad de rotación
Valor mP alto
Ensayo con Ag marcado
para detección de Acs
Ensayo competitivo para
detección de Ag
Moléculas pequeñas
Rotación rápida
Baja polarización
Moléculas más grandes
Rotación lenta
Alta polarización
Unión
Sin Ag
Ag marcado unido a Acs
Alta polarización
Ag en la muestra desplaza al Ag
marcado
Baja polarización
Competencia
C. Lützelschwab, 2002
EJERCICIOS DE LA GUIA
Células dendríticas identificadas mediante anticuerpos marcados con peroxidasa.
Hematoxilina como coloración de fondo
C. Lützelschwab, 2002
Tejido sinovial en rodilla de humano. Identificación de Molécula de Adhesión Vascular 1 (VAP-1) en el
endotelio cuboidal y capas profundas de vénulas de endotelio alto. Inmunoperoxidasa y coloración
de hematoxilina (Akin et al, 2001, Infect Immun, 69(3):1774-1780)
C. Lützelschwab, 2002
Explante de recto de Bovino inoculado con E. coli. Las bacterias adheridas a la mucosa
están teñidas de rojo (flecha). Anticuerpos anti E. coli (O157) marcados con fosfatasa
alcalina, el sustrato utilizado es Vector Red y hematoxilina como coloración de fondo
(Baelher y Mosley, 2000. FEMS Microbiol Lett, 185:239-242)
C. Lützelschwab, 2002
Identificación de fibras de actina en el citoplasma mediante anticuerpos
anti-actina marcados con rodamina
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