UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
QUÍMICA Y FARMACIA
MODALIDAD:
INVESTIGACIÓN
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO
PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS
TEMA:
INTERVALOS DE REFERENCIA BIOLÓGICOS PARA COLESTEROL, HDL
COLESTEROL Y LDL COLESTEROL EN POBLACIÓN ADULTA
JOVEN. LABORATORIO JOSÉ DARÍO MORAL.
GUAYAQUIL – ECUADOR. 2017 – 2018.
AUTORA:
JOSELYN JAZMÍN REYES SUÁREZ
TUTORA:
Q.F. ANA DELGADO GARCÍA, Mg.
COTUTOR:
Dr. Ing. Q.F. LUIS CAZAR UBILLA, Mg.
GUAYAQUIL – ECUADOR
2018
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AGRADECIMIENTO
A Dios todo Poderoso, por darme la vida, por su infinita misericordia e inmenso
amor demostrándome, que cada día es diferente y que siempre habrá nuevos
retos por vencer en el transcurso del tiempo.
A mi querida tutora. Q.F. Ana Delgado García Mg. profesora admirable, por darme
formación, por ser un modelo para seguir, recibiendo siempre su guía, le expreso
mi gratitud.
Gracias a mis padres Esteban y Vicenta, hermana Catherine, esposo José Luis e
hijos Angélica y José Esteban a quienes les he robado tiempo, espacios y afectos
durante la ejecución del proyecto, y me brindaron la alegría de cada día seguir
adelante y de alcanzar cada una de las metas propuestas.
A Directivos y Personal del Laboratorio José Darío Moral de la Facultad de
Ciencias Químicas, en especial a la Q.F. Zoila Allieri de Monroy M.Sc., directora y
a las Q.F. Cecibel Mendoza y Q.F. Eulalia Sánchez, analistas por su importante
apoyo brindado.
A mis queridos docentes que me motivaron a seguir adelante en cada etapa del
desarrollo de la carrera.
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xiv
ÍNDICE
FICHA DE REGISTRO DE TESIS…………………………………………...………....I
INFORME DE TUTORÍA……………………………………..…………………...........II
INFORME DE REVISIÓN……..……………………………..…………………..........III
CERTIFICADO PORCENTAJE DE SIMILITUD…………………...........................IV
INFORME DE ANTI-PLAGIO DEL PROGRAMA URKUND…………………..........V
LICENCIA GRATUITA INTRANSFERIBLE …….……………………………….......VI
APROBACIÓN DEL TUTOR …….………………………..……..............................VII
CERTIFICACIÓN DEL TUTOR REVISOR……………..……...............................VIII
CERTIFICADO DEL TRIBUNAL………………………………………………….......IX
CARTA DE AUTORÍA DE TITULACIÓN………………………………………………X
AGRADECIMIENTO…………………………………………………………...……....XI
RESUMEN……………………………………………………………………………...XII
ABSTRACT…………………………………………………………………………....XIII
ÍNDICE………………………………………………………………………………...XIV
ÍNDICE DE GRÁFICO……………………………………………………..............XVIII
ÍNDICE DE TABLA…………………………………………………………………….XX
INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………..1
CAPITULO I
1.1. Justificación…………………………………………………………………………3
1.2. Planteamiento del problema……………………………………………………….4
1.3. Formulación del problema……………………………………….………………...5
1.4. Objetivos…………………………………………………………………………….6
1.4.1. Objetivo General…………………………………………………..……………..6
xv
1.4.2. Objetivos Específicos…………………………...…………………...…………..6
1.5. Hipótesis…………………………………………………………………………….7
CAPÍTULO II
2. Antecedentes………………………………………………………………………….8
2.1. Marco teórico………………………………………………………………………10
2.1.1. Colesterol………………………………………………………………………..10
2.1.1.1. Bioquímica del Colesterol……………………………………………………10
2.1.1.2. Estructura Química del Colesterol…………………………………………..11
2.1.1.3. Funciones del Colesterol……………………………………………………..11
2.1.1.4. Biosíntesis del Colesterol…………………………………………………….12
2.1.1.4.1. Biosíntesis de Mevalonato…………………………………………………12
2.1.1.4.2. Formación de unidades isoprenoides…………………………………….14
2.1.1.4.3. Seis unidades isoprenoides forman escualeno………………………….14
2.1.1.4.4. Formación de Lanosterol…………………………………………………..16
2.1.1.4.5. Formación de Colesterol…………………………………………………...16
2.1.1.5. Metabolismo del Colesterol………………………………………………….18
2.1.1.6. Eliminación del Colesterol……………………………………………………18
2.1.1.7. Transporte del Colesterol…………………………………………………….20
2.1.1.8. Tipos del Colesterol…………………………………………………………..22
2.1.1.8.1. Lipoproteínas de Baja Densidad (LDL)…………………………………...24
2.1.1.8.1.1. Estructura de LDL………………………………………………………...24
2.1.1.8.1.2. Funciones de LDL………………………………………………………..25
2.1.1.8.1.3. Metabolismo de LDL……………………………………………………..26
2.1.1.8.1.4. Factores de riesgo para enfermedades cardiovasculares…………...28
2.1.1.8.1.4.1. Factores inalterables…………………………………………………..29
xvi
2.1.1.8.1.4.2. Factores modificables….………………………………………….…..30
2.1.1.8.2. Lipoproteínas de Alta Densidad (HDL)…………………………………...30
2.1.1.8.2.1. Estructura de HDL………………………………………………………..30
2.1.1.8.2.2. Funciones de HDL………………………………………………………..32
2.1.1.8.2.3. Metabolismo de HDL…………………………………………………….32
2.1.1.8.2.4. Las HDL- Colesterol actúan frente a la ateroesclerosis……………..34
2.1.1.8.2.4.1. Fundamento Bioquímico del efecto saludable de las HDL-
Colesterol……………………………………………………………………………….35
2.1.2. Intervalo de Referencia Biológico ……………………………………………..35
2.1.2.1. Generalidades ………………………………………………………………..35
2.1.2.2. Definición del Intervalo de Referencia ……………………………………..38
2.2. Glosario…………………………………………………………………………...40
2.3. Definición de siglas………………………………………………………………..44
CAPÍTULO III.
3. Metodología de la Investigación……………………………………………………46
3.1. Métodos científicos empleados en la investigación……………………………46
3.2. Metodología………………………………………………………………………..46
3.3. Tipo de Investigación……………………………………………………………..47
3.4. Población y Muestra………………………………………………………………47
3.5.1. Población ………………………………..……………………………………...47
3.5.2. Muestra…………………………………………………………………………..47
3.5. Técnicas de Investigación………………………………………………..………47
3.5.1. Protocolo CLSI C28 A3………………………………………….……………...47
3.5.2. Selección de individuos de referencia …………………………………….….48
3.5.2.1. Criterios de Exclusión…………………………………………………….…..48
xvii
3.5.2.2. Criterios de inclusión…………………………………………………….…...49
3.5.2.3. Índice de masa corporal…………………………………………………..….49
3.5.3. Recolección y tratamiento de la muestra sanguínea……………..………....49
3.5.4. Determinación de Colesterol Total, HDL- Colesterol y LDL- Colesterol…..50
3.5.4.1. Colesterol Total……………………………………………………………….50
3.5.4.2. HDL- Colesterol……………………………………………………………….51
3.5.4.3. LDL- Colesterol……………………………………………………………….51
3.5.5. Gestión del Intervalo de Referencia………………………………………...…52
3.6. Equipos…………………………………………………………………………….52
CAPÍTULO IV.
4. Recolección de datos, análisis e interpretación de
resultados……………………………………………………………………………….53
4.1. Tratamiento estadístico de los datos para la obtención de los Intervalos de
Referencia de los analitos de Colesterol, HDL-Colesterol y LDL-Colesterol……54
CONCLUSIONES……………………………………………………………………...64
RECOMENDACIONES………………………………………………………………..65
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………………….66
ANEXOS………………………………………………………………………………..73
xviii
ÍNDICE DE GRÁFICO
Gráfico I: Fuentes de Colesterol ……………………………………………………..10
Gráfico II: Estructura Química del Colesterol ………………………………………11
Gráfico III: Biosíntesis de Mevalonato ………………………………………………13
Gráfico IV: Biosíntesis de Escualeno ……………………………………………….15
Gráfico V: Formación de Colesterol …………………………………………………17
Gráfico VI: Estructura del Ácido Colánico …………………………………………..19
Gráfico VII: Estructura Química de Ácidos Biliares ………………………………..19
Gráfico VIII: Transporte del Colesterol ………………………………………………21
Gráfico IX: Estructura de Lipoproteína ………………………………………………22
Gráfico X: Composición de las Lipoproteínas ………………………………………23
Gráfico XI: Estructura de LDL ………………………………………………………..25
Gráfico XII: Endocitosis mediada por el receptor de LDL………………………….26
Gráfico XIII: Metabolismo de LDL …………………………………………………….28
Gráfico XIV: Evolución progresiva de las placas de Ateroesclerosis en la íntima
arterial…………………………………………………………………………………...29
Gráfico XV: Estructura de HDL ………………………………………………………32
Gráfico XVI: Metabolismo de HDL …………………………………………………..34
Gráfico XVII: Diagrama de Flujo de Investigación……...…………………………...46
Gráfico XVIII: Valores Atípicos para Colesterol total………………………….……55
Gráfico XIX: Histograma de Colesterol Total ………………………………………..56
Gráfico XX: Diagrama de Probabilidad ( Datos originales )………………………..57
Gráfico XXI: Valores Atípicos para HDL-Colesterol…………………………………57
Gráfico XXII: Histograma de HDL- Colesterol…………………………….…………59
xix
Gráfico XXIII: Diagrama de Probabilidad (Datos originales)…..……..…………….59
Gráfico XXIV: Valores Atípicos para LDL-Colesterol………….……………………60
Gráfico XXV: Histograma de LDL- Colesterol………………….……………………62
Gráfico XXVI: Diagrama de Probabilidad (Datos originales)…………….….……..62
Gráfico XXVII: Diagrama de Probabilidad (Datos Transformados)…….……….…63
xx
ÍNDICE DE TABLA
Tabla I: Composición de las Lipoproteínas en plasma de humanos……………..23
Tabla II: Criterios de exclusión……………………………………………………….48
Tabla III: Criterios de inclusión ………………………………………………………49
Tabla IV: Índice de masa corporal…………………………………………………...49
Tabla V: Resultados de las encuestas………………………………………………53
Tabla VI: Resultados de preguntas realizadas a mujeres ………………………….54
Tabla VII: Límites de confianza para el método No paramétrico para Colesterol
Total …..……………………………………………………………………………..….55
Tabla VIII: Estadísticas de Tendencia Central para Colesterol total …..…..…….56
Tabla IX: Límites de confianza para el método No paramétrico para HDL-
Colesterol……………………………………………………………………………….58
Tabla X: Estadísticas de Tendencia Central para HDL-Colesterol …..…………..58
Tabla XI: Límites de confianza para el método Paramétrico para LDL-
Colesterol……………………………………………………………………………….61
Tabla XII: Estadísticas de Tendencia Central para LDL-Colesterol ………………61
1
INTRODUCCIÓN
El colesterol es una de las moléculas más importantes del organismo humano,
es el compuesto esencial de las membranas celulares, además es el precursor de
importantes compuestos biológicos activos como los ácidos biliares, las hormonas
esteroides y la vitamina D, los cuales son causantes de diversas enfermedades
cardiovasculares principalmente ateromatosis vascular. (Morales Aguilar & Salas
Silverio, 2017). Para circular la sangre, el colesterol se combina con proteínas
llamadas Lipoproteínas y con Triglicéridos. Las principales lipoproteínas que
transportan el colesterol son las Lipoproteínas de baja densidad (LDL) y las
Lipoproteínas de alta densidad (HDL). (Quito Capón, Garay Escalante & Verdugo
Campoverde, 2010)
Los métodos analíticos permiten obtener una serie de resultados clínicos,
mediante los cuales se evalúa el estado de salud o condición del paciente. El
aumento, disminución o desviación de un analito o parámetro medido en
laboratorio demostraría signos de enfermedad o cambios bioquímicos en los
estadios clínicos del individuo. Por consiguiente, el laboratorio debe definir con
claridad los intervalos de referencia que permitan evaluar estas alteraciones en
función a la población que este atiende.
La obtención de intervalos de referencia responde a tres situaciones en la
práctica del laboratorio que han sido reconocidos por los organismos que regulan
o proponen guías para la gestión de calidad en el laboratorio clínico. Así se han
establecido tres procedimientos: la verificación, la transferibilidad y la
determinación de los intervalos de referencia.
En Ecuador, lo habitual es utilizar los “valores de referencia” que constan en
los instructivos que acompañan a los productos de diagnóstico in vitro (IVD, del
inglés In Vitro Diagnostic), práctica que no es recomendable debido a que los
2
valores indicados en los insertos provienen de estudios en poblaciones
americanas, europeas o asiáticas que no corresponden con las características de
la población ecuatoriana. Algunos estudios revelan que uno de los factores más
importantes a tomar en cuenta al elaborar intervalos de referencia es la elección
de la población de referencia, pues está comprobado que diferencias genéticas,
estilo de vida y medioambiente interfieren en los valores considerados de
referencia.
La determinación de los intervalos de referencia propios es lo más aconsejable
para un laboratorio, en nuestro país son pocos los laboratorios clínicos que
cuentan con intervalos de referencia propios, los acreditados o en camino de
acreditación, posiblemente por algunas razones como son:
La dificultad de encontrar individuos para este tipo de estudio, el individuo
aparentemente sano acude poco al laboratorio clínico o el volumen de
trabajo es bajo.
El tiempo que tarde en conseguir y completar el mínimo de 120 individuos
por criterio de partición y que cumple con los criterios de inclusión.
Razones de presupuesto porque la obtención de valores o intervalos de
referencia demanda que los equipos estén calibrados, el laboratorio cuente
con control de calidad interno y externo y procedimientos preanalíticos y
analíticos implementados.
El desconocimiento de este tipo de procedimientos o el no contar con
personal capacitado para realizarlo. (Castillo Dávila & Montenegro Pantoja
, 2017)
Por lo tanto, el objetivo del presente estudio se enfocó en la determinación de
intervalos de referencia para los analitos de Colesterol Total, HDL- Colesterol y
LDL-Colesterol de acuerdo a la guía C28-A3C CLSI: verificación de los intervalos
de referencia de los distintos parámetros (en una muestra de hombres y mujeres,
de 18 a 25 años) realizada por análisis automatizado (HUMASTAR 100) en el
Laboratorio José Darío Moral de la Facultad de Ciencias Químicas. Universidad
de Guayaquil.
3
CAPITULO I
1.1. Justificación
El cuerpo médico basa el diagnóstico, tratamiento, seguimiento de las
patologías que aquejan a los pacientes apoyándose en los resultados de los
análisis del laboratorio clínico en los que los Intervalos de Referencia son la
herramienta más utilizada para la interpretación de los resultados reportados,
permitiendo conocer el estado de salud del paciente. Estos valores tendrán
significado si son obtenidos en individuos clínicamente nos propios de la población
local.
En Ecuador lo habitual es utilizar los valores de referencia que constan en los
insertos que acompañan a los reactivos, práctica que no es recomendable debido
a que los valores indicados provienen de estudios de poblaciones americanas,
europeas o asiáticas que no corresponden con las características de la población
ecuatoriana, lo que va a ocasionar errores en la interpretación debido a la
diferencia de los diferentes factores antes mencionados.
Por lo antes expuesto, este trabajo va a permitir establecer los Intervalos de
Referencia biológicos para Colesterol, HDL Colesterol y LDL Colesterol en
población adulta joven del Laboratorio Darío Moral, Guayaquil.
4
1.2. Planteamiento del problema.
Los Intervalos de Referencia biológicos en el laboratorio clínico forman una
parte esencial para el diagnóstico presuntivo en el estado físico del individuo, por
lo que le permite al profesional de la salud tener valores frente a los cuales se
comparan con los resultados de los análisis emitidos por el laboratorio y así
realizar una interpretación clínica de alguna enfermedad que presente el paciente.
Los Intervalos de Referencia se definen por valores obtenidos en individuos
aparentemente sanos, seleccionados con criterios bien definidos.
Los exámenes de Colesterol, HDL Colesterol y LDL Colesterol son predictivos
cerca del riesgo de enfermedades cardiovasculares (ECV) y otros problemas
provocados por arterias bloqueadas o estrechadas; al momento de realizar estas
pruebas se utilizan reactivos provistos por el fabricante, quienes los determinan
desde individuos de referencia originarios del lugar de elaboración de los
reactivos. Los IR entre la población propia con la de individuos de referencia
considerados por el productor de los reactivos puede variar en cuanto a la
alimentación, cultura, raza, características genéticas; en lo cual este trabajo
aportaría una evidencia objetiva para detectar las significativas alteraciones de los
marcadores bioquímicos del SM que superen los límites de decisión medica de
diagnóstico, siendo importante este conocimiento desde el punto de vista de las
acciones preventivas a recomendarse para los pacientes en esta situación.
Cada laboratorio debe establecer sus propios Intervalos de Referencia
biológicos para garantizar la utilidad clínica adecuada. El Ecuador dispone de
escasa información acerca de estos Intervalos de Referencia biológicos aplicables
a la población joven adulta y definidos de manera científica y sistemática para la
población en estudio.
5
1.3. Formulación del problema
El Laboratorio José Darío Moral ha definido los Intervalos de Referencia
biológicos para Colesterol, HDL Colesterol y LDL Colesterol para la población
adulta joven usuaria y de esta manera colaborar con la detección temprana de las
enfermedades patológicas asociadas.
6
1.4. Objetivos
1.4.1. Objetivo General
Definir los Intervalos de Referencia biológicos para los analitos de Colesterol
Total y sus fracciones HDL Colesterol y LDL Colesterol en individuos adultos
clínicamente sanos entre 18 y 25 años.
1.4.2. Objetivos Específicos
Determinar el estado de salud de los jóvenes participantes mediante una
encuesta para conocer los hábitos alimenticios, antecedentes patológicos
familiares y personales.
Valorar las medidas antropométricas de los estudiantes participantes.
Seleccionar la muestra de referencia clínicamente sana.
Determinar estadísticamente el rango o Intervalo de Referencia sérico de
Colesterol, HDL Colesterol y LDL Colesterol.
7
1.5. Hipótesis
Los Intervalos de Referencia biológicos de Colesterol Total y sus fracciones
HDL Colesterol y LDL Colesterol no se han determinado para la población adulta
joven por lo que el presente trabajo pudiera optimizar la detección de las
alteraciones de estos analitos en la población joven que asiste al Laboratorio José
Darío Moral y a futuro la prevención de las patologías asociadas.
8
Capítulo II
2. Antecedentes
Rojas, Cáceres y Ortiz (2002), estudiaron “Colesterol Total y sus fracciones en
adultos jóvenes de altura: Cusco”. Los participantes fueron 109 personas entre
hombres y mujeres aparentemente sanos de 20 – 29 años. Este estudio demostró
los siguientes Intervalos de Referencia biológicos: Colesterol Total 175 mg/dl, HDL
Colesterol 51 mg/dl, LDL Colesterol 101 md/dl y Triglicéridos 116 mg/dl. (Rojas
Bravo, Cáceres Espinoza, & Ortíz Martínez, 2002)
Quito, Garay y Verdugo (2010), realizaron el estudio “Perfil Lipídico Sérico en
personas de 23 – 42 años de la ciudad de Cuenca – Ecuador”. Estudio conformado
por 1000 personas obteniendo valores de Intervalos de Referencia para Colesterol
de 100 – 220 mg/dl, HDL Colesterol de 25.1 – 69.9 mg/dl, LDL Colesterol 35.4 -
143.3 mg/dl y de Triglicéridos 40.1 – 150.4 mg/dl. (Quito Capón, Garay Escalante
& Verdugo Campoverde, 2010)
La Universidad Técnica del Norte de la ciudad de Ibarra presentó en el año
2010 un estudio de “Prevalencia de Dislipidemias y sus factores de riesgo en
adultos que acuden al Centro de Salud N° 1 de la Ciudad de Ibarra, Provincia de
Imbabura octubre del 2009 – diciembre 2010”. El estudio transversal, descriptivo
fue de 140 personas en edades comprendidas de 18 – 42 años. Los resultados
arrojaron datos de que el 37% de los adultos presentan niveles de Colesterol Total
por encima de lo normal (> 200 mg/dl), 64% con niveles de LDL Colesterol (> 100
mg/dl), 44% con niveles de Triglicéridos (> 150 mg/dl) y HDL Colesterol el 59% de
la población se encuentra en niveles bajos. (Peñafiel & Guatemal, 2010)
García, Martínez, Monroy, Juantorena, y Sánchez (2011), realizaron en estudio
de “Intervalos de referencia del perfil de lípidos en trabajadores y estudiantes de
la Universidad Autónoma del Estado de Morelos”. El estudio se realizó en 142
individuos sanos de 20 – 45 años obteniendo los siguientes intervalos de
9
referencia: Colesterol Total 90.0- 208.3mg/dL, HDL-Colesterol 26.0 – 74.9 mg/dL,
LDL-Colesterol 31.4 – 126.7 mg/dL y Triglicéridos 40.7 – 215.8 mg/dL. (García
Jiménez, Martínez Salazar, Monroy Noyola, Juantorena Ugás, & Sánchez Alemán,
2011)
Maldonado y Nicolalde, realizaron el estudio de “Factores Bioquímicos
asociados a Enfermedades Cardiovasculares y Síndrome Metabólico en el
personal administrativo de la UTN”. El estudio fue aplicado a 297 personas (164
hombres y 133 mujeres), obteniendo como resultado que el 72% de la población
presenta niveles de Colesterol por encima del rango (< 200 mg/dl); siendo mayor
en los hombres con un 40.4% que en las mujeres con 31.6%. el 68.9% con rangos
normales de HDL (33.3 – 55.0 mg/dl), el 89.22% con niveles por encima de LDL
de los rangos de referencia (< 100 mg/dl) y el 49.15% de triglicéridos por encima
de los rangos (50 -150 mg/dl). (Maldonado Noboa & Nicolalde Saavedra, 2014)
Mujica et al. (2014), realizaron el estudio de “Estimación de Intervalos de
Referencia del Colesterol total, VLDL, LDL, HDL y Triglicéridos de individuos
adultos de ciudad Bolívar”. El estudio aplicó 600 personas obteniendo los
Intervalos de Referencia para Colesterol total 126.5 – 174.5 mg/dL, HDL-
Colesterol 32.0 – 46.0 mg/dL, LDL-Colesterol 73.1 – 113.8 mg/dL, VLDL-
Colesterol 73.1 – 21.1 mg/dL y Triglicéridos 53.0 – 104.5 mg/dL. (Mujica Salazar,
y otros, 2014)
El Panel de Expertos en Teoría de Valores de Referencia (EPTRV) de la
Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) y el Comité Permanente de
Valores de Referencia del Consejo Internacional de Normalización en
Hematología (ICSH) desarrollaron la Teoría de Valores de Referencia que
proporcionan definiciones, principios y procedimientos para la determinación de
los valores de referencia. (Horowitz, y otros, 2010)
10
2.1. MARCO TEÓRICO
2.1.1. Colesterol
2.1.1.1. Bioquímica del Colesterol
El Colesterol es un componente de vital importancia para la estructura y función
de la membrana celular. Es un líquido blanquecino, blando y grasoso que se
encuentra en el plasma sanguíneo y en los tejidos del cuerpo humano; este se
puede obtener por dos fuentes: Colesterol endógeno producido por el cuerpo por
medio del hígado e intestino delgado y el Colesterol dietario producido por los
alimentos de origen animal tales como carne, huevo y productos lácteos. (Murray,
y otros, 2013)
Gráfico I.- Fuentes del Colesterol
Fuente: (Gómez Alejandro , 2014)
Es un lípido anfipático y como tal, es el componente estructural esencial de las
membranas y de la capa externa de las lipoproteínas plasmáticas. El Colesterol
es una sustancia importante y elemental que necesita el cuerpo para funcionar
normalmente. (Murray, y otros, 2013)
11
2.1.1.2. Estructura Química del Colesterol
La molécula de Colesterol se encuentra formada por una parte central de
anillos bencénicos (uno de ellos con doble enlace), una cadena alifática larga,
algunos radicales metilos y un grupo –OH, que es fundamental porque constituye
la parte hidrófila de la molécula. (Devlin, 2004)
Gráfico II.- Estructura Química del Colesterol.
Fuente: (Ramírez, 2011)
2.1.1.3. Funciones del Colesterol
Es una molécula de carácter lipídico cuya función principal en el organismo es
formar parte de la estructura de las membranas de las células que conforman los
órganos y tejidos. (Orgas, Hijano, Martínez, López, & Díaz, 2007)
El colesterol se sintetiza en muchos tejidos a partir del acetil coenzima-A (acetil-
CoA) es el precursor de una gran cantidad de esteroides importantes como los
ácidos biliares, hormonas corticosuprarrenales, hormonas sexuales, vitamina D,
glucósidos cardíacos, sitoesteroles de origen vegetal y algunos alcaloides.
(Murray, y otros, 2013)
12
2.1.1.4. Biosíntesis del Colesterol
El Colesterol es sintetizado prácticamente por todos los tejidos humanos, en
especial hígado, intestino, córtex adrenal y tejidos reproductivos, incluyendo
ovarios, testículos y placenta son los mayores contribuyentes del conjunto de
colesterol. Para los ácidos grasos, todos los átomos de carbono son derivados del
acetato, y la Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADPH) provee los
equivalentes reductores. La energía está garantizada por la hidrólisis de las
conexiones tioéster de alta energía del acetil-CoA y de fosfatos terminales del
Adenosín Trifosfato (ATP). La síntesis ocurre en el citoplasma, siendo las enzimas
encontradas en el citosol y en las membranas del retículo endoplasmático.
(Champe, Harvey, & Ferrier, 2006)
La biosíntesis del Colesterol se divide en cinco pasos:
1. Síntesis de Mevalonato a partir de acetil-CoA.
2. La formación de unidades isoprenoides a partir del Mevalonato por perdida
de Dióxido de carbono (CO2).
3. La condensación de seis unidades isoprenoides forma escualeno.
4. La ciclización de escualeno da lugar al esteroide madre, lanosterol.
5. Formación de Colesterol a partir de lanosterol. (Murray, y otros, 2013)
2.1.1.4.1. Biosíntesis de Mevalonato
La 3-hidroxi-metilglutaril Coenzima-A (HMG CoA) se forma mediante las
reacciones efectuadas en las mitocondrias para sintetizar cuerpos cetónicos.
Al inicio, dos moléculas de acetil-CoA se condensan para formar Acetoacetil
coenzima-A (acetoacetil-CoA), lo cual es catalizado por la tiolasa citosólica. La
acetoacetil-CoA se condensa con otra molécula de acetil-CoA, paso catalizado por
la Hidroximetilglutaril-CoA sintasa (HMG-CoA sintasa) para formar HMG-CoA, a la
cual el NADPH reduce a Mevalonato, reacción catalizada por la HMG-CoA
reductasa. Esta es la etapa reguladora principal en la vía de la síntesis de
colesterol, y es el sitio de acción de la clase más eficaz de fármacos que
13
disminuyen el colesterol, las estatinas que son los inhibidores de la HMG-CoA
reductasa. (Murray, y otros, 2013)
Gráfico III.- Biosíntesis del Mevalonato
Fuente: (Murray, y otros, 2013)
14
2.1.1.4.2. Formación de unidades isoprenoides
El ATP fosforila en forma sucesiva al Mevalonato mediante tres cinasas, y
después de la descarboxilación se forma la unidad isoprenoide activa, el isopentil
difosfato. (Murray, y otros, 2013)
2.1.1.4.3. Seis unidades isoprenoides forman escualeno
El isopentil difosfato se isomeriza mediante un desplazamiento del doble
enlace para formar dimetilalil difosfato, luego se condensa con otra molécula de
isopentil difosfato para formar el intermediario de 10 carbonos geranil difosfato.
Una condensación adicional con isopentenil difosfato forma farnesil difosfato. Dos
moléculas de farnesil difosfato se condensan en el extremo de difosfato para
formar el escualeno. En un principio, el pirofosfato inorgánico se elimina, con lo
cual se forma preescualeno difosfato, al que después se reduce mediante el
NADPH con eliminación de una molécula de pirofosfato inorgánico adicional.
(Murray, y otros, 2013)
15
Gráfico IV.- Biosíntesis del Escualeno
Fuente: (Murray, y otros, 2013)
16
2.1.1.4.4. Formación de lanosterol
El escualeno se pliega en una estructura que se asemeja de manera estrecha
al núcleo del esteroide. Antes de que ocurra el cierre del anillo, una oxidasa de
función mixta en el retículo endoplasmático el escualeno epoxidasa, convierte al
escualeno en escualeno 2,3-epóxido. El grupo metilo en C14 se transfiere a C13 y
el grupo metilo en C8 se transfiere a C14 conforme sucede ciclización, lo cual es
catalizado por la oxidoescualeno: lanosterol ciclasa. (Murray, y otros, 2013)
2.1.1.4.5. Formación de colesterol
La formación de colesterol a partir de lanosterol se lleva a cabo en las
membranas del retículo endoplásmico y se relaciona con cambios en el núcleo del
esteroide y la cadena lateral. Los grupos metilos de C14 y C4 se eliminan para
formar 14-desmetil lanosterol y después zimosterol. El doble enlace en C8-C9 se
pasa posteriormente a C5-C6 en dos pasos, lo cual origina el demoesterol. Por
último, se reduce el enlace doble de la cadena lateral, lo que genera colesterol.
(Murray, y otros, 2013)
17
Gráfico V.- Formación del Colesterol.
Fuente: (Murray, y otros, 2013)
18
2.1.1.5. Metabolismo del Colesterol
La dieta habitual provee unos 300 mg de colesterol por día. Esta sustancia es
absorbida por el intestino al estado libre y es esterificado dentro de células de la
mucosa, principalmente con ácido oleico, en reacción catalizada por acil-CoA-
colesterol-aciltransferasa (ACAT). Los esteres de colesterol (EC) son
incorporados, junto con triacilgliceroles, en los quilomicrones enviados a la sangre,
donde son sometidos a la acción de la lipoproteína lipasa. Las partículas
residuales o remanentes, con colesterol esterificado, son captadas por el hígado
para su degradación final. (Blanco , 2013)
El colesterol es el compuesto más importante de los esteroles. En el hombre
adulto normal se encuentra en hígado, piel, cerebro y tejido nervioso, intestino y
ciertas glándulas endocrinas; las suprarrenales contienen 10% de colesterol para
la biosíntesis de hormonas esteroidales. El contenido relativamente alto de
colesterol en la piel está relacionado con la formación de vitamina D. (Pacheco,
2005)
El colesterol se intercala entre los fosfatidilgliceroles de la membrana, con el
grupo hidroxilo hacia la fase acuosa y el resto en el interior. Esta situación
determina que a temperaturas superiores a la de transición, el colesterol
disminuye la fluidez de la membrana. (Pacheco, 2005)
La mayor parte del colesterol en el organismo proviene de síntesis de novo (1
g/día) y sólo 0.3 g/día de la dieta. Es un producto típicamente animal y se
encuentra en carne, hígado y cerebro; es particularmente abundante en yema de
huevo. (Pacheco, 2005)
2.1.1.6. Eliminación del Colesterol
Los ácidos biliares son los productos finales del metabolismo del colesterol.
Los ácidos biliares primarios son los que se sintetizan en los hepatocitos
19
directamente del colesterol. Los ácidos biliares más abundantes en el hombre son
los derivados del ácido colánico (ácido cólico y el ácido quenodesoxicólico).
(Gutiérrez, 2009)
Gráfico VI.- Estructura del Ácido Colánico.
Fuente: (García Ruíz , 2017)
Cuando experimentan reacciones en el intestino, los ácidos biliares dan lugar
a ácidos biliares secundarios que también poseen 24 átomos de carbono, estos
son el ácido desoxicólico y ácido litocólico, éstos se derivan, respectivamente, de
los ácidos cólico y quenodesoxicólico por eliminación de un grupo hidroxilo.
(Gutiérrez, 2009)
Gráfico VII.- Estructura Química de ácidos biliares.
Fuente: (Peña, 2004)
20
Los ácidos biliares se secretan a los canalículos biliares, que son canales
especializados formados por hepatocitos contiguos. Los canalículos biliares, se
unen formando los conductos biliares, que a su vez forman los conductos
terminales. Los ácidos biliares se transportan seguidamente a la vesícula biliar
para su almacenamiento, y por último al intestino delgado, en donde es excretado.
La capacidad de producción de ácidos biliares por el hígado es insuficiente para
sus demandas fisiológicas, por lo que el cuerpo depende de una circulación
enterohepática eficiente que transporta los ácidos biliares desde el intestino al
hígado, varias veces al día. (Gutiérrez, 2009)
Los ácidos biliares son importantes porque representa la única vía significativa
por la que se puede excretar el colesterol. El esqueleto carbonado del colesterol
no se oxida a CO2 y agua en el cuerpo humano, sino, que se excreta en la bilis en
forma de colesterol libre y de ácidos biliares. Los ácidos biliares impiden la
precipitación del colesterol en la vesícula biliar. Los ácidos biliares y los
fosfolípidos actúan solubilizando el colesterol en la bilis y actúan como agentes
emulsionantes preparando los triacilgliceroles de la dieta para el ataque por la
lipasa pancreática. (Gutiérrez, 2009)
2.1.1.7. Transporte del Colesterol.
La mayor parte del colesterol se encuentra en forma esterificada. El colesterol
se transporta mediante las lipoproteínas del plasma, y la proporción más elevada
del colesterol se encuentra en la LDL. El éster de colesterilo de la dieta se hidroliza
a colesterol, al que luego absorbe el intestino junto con el colesterol no esterificado
y otros lípidos de la dieta que, junto con el colesterol sintetizado en los intestinos,
se incorpora entonces en los quilomicrones. Del colesterol absorbido, 80 a 90%
se esterifica en la mucosa intestinal con los ácidos grasos de cadena larga.
(Gutiérrez, 2009)
El equilibrio del éster de colesterilo con el colesterol libre en el plasma toma
varios días en el hombre. En general, el colesterol libre es intercambiado
fácilmente entre los tejidos y las lipoproteínas, en tanto que el éster de colesterilo
21
es intercambiado entre las lipoproteínas principales que poseen proteína de
transferencia para este compuesto. La mayor parte del éster de colesterilo del
plasma es formado en las HDL, como resultado de la reacción de
transesterificación, entre el colesterol y el ácido graso en posición 2 de la
fosfatidilcolina, catalizada por la lecitina: colesterol acil transferasa (LCAT). Las
HDL constituyen el vehículo probable en combinación con la LCAT para el
transporte del colesterol, como éster, de los tejidos extrahepáticos al hígado
(transporte de colesterol inverso). Por último, todo el colesterol destinado a ser
excretado del cuerpo entra al hígado y se elimina por la bilis, como colesterol o
como ácido cólico en sales. (Gutiérrez, 2009)
Gráfico VIII.- Transporte del Colesterol
Fuente: (Murray, y otros, 2013)
22
2.1.1.8. Tipos de Colesterol.
La sangre conduce el colesterol desde el intestino o el hígado hasta los órganos
que lo necesitan y lo hacen ungiéndose a partículas llamadas lipoproteínas.
Las Lipoproteínas son estructuras esféricas subcelulares evolutivamente
desarrolladas para el trasporte de lípidos insolubles en el torrente sanguíneo.
Están compuestas por una cubierta polar que contiene apolipoproteínas (Apo),
fosfolípidos y colesterol libre y, por un núcleo en el que se hallan los elementos
hidrofóbicos (ésteres de colesterol y triglicéridos). (Argüeso Armesto, y otros,
2011)
Gráfico IX.- Estructura de una Lipoproteína.
Fuente: (Miranda Rivas, 2009)
Las lipoproteínas plasmáticas que varían en cuanto a tamaño, densidad y
composición proteica y lipídica: Los Quilomicrones (QM), VLDL (Very Low Density
Lipoproteins; Lipoproteínas de muy Baja Densidad), IDL (Intermediate Low
Density Lipoproteins; Lipoproteínas de Densidad Intermedia) que son los
remanentes de VLDL y las subclases HDL2 y HDL3, LDL (Low Density
Lipoproteins; Lipoproteínas de Baja Densidad), HDL (High Density Lipoproteins;
Lipoproteínas de Baja Densidad), (Argüeso Armesto, y otros, 2011)
23
Gráfico X.- Composición de las Lipoproteínas.
Fuente: (Ortíz Redondo, 2017)
Tabla I.-Composición de las Lipoproteínas en plasma de humanos.
COMPOSICIÓN
Lipoproteínas Fuente Diámetro
(nm)
Densidad
(g/ml)
Proteínas
(%)
Lípidos
(%)
Principales
componentes
lípidos
Apolipoproteínas
Quilomicrones Intestino 90 –
1000 <0.95 1 - 2 96 - 99 Triacilglicerol
A-I, A-ll, A-IV,1 B-
48, C-I, C-II, C-III,
E
VLDL Hígado
(intestino) 30 - 90
0.95 -
1.006 7 - 10 90 - 93 Triacilglicerol
B-100, C-I, C-II,
C-III
IDL VLDL 25-35 1.006 -
1.019 11 89
Triacilglicerol,
colesterol B-100, E
LDL VLDL 20-25 1.019 -
1.063 21 79 Colesterol B-100
HDL
Hígado,
intestino,
VLDL,
quilomicrones
Fosfolípidos,
colesterol
A-I, A-ll, A-IV, C-I,
C-II, C-III, D,2 E
HDL1 20-25 1.019 -
1.063 32 68
HDL2 10-20 1.063 -
1.125 33 67
HDL3 5-10 1.125 -
1.210 57 43
Prep-HDL3
AGL <5 >1.210 A-I
Albúmina/AGL Tejido
adiposo >1.281 99 1 AGL
Abreviaturas: HDL, lipoproteínas de alta densidad; IDL, lipoproteínas de
densidad intermedia; LDL, lipoproteínas de baja densidad; VLDL, lipoproteínas de
muy baja densidad.
24
1 Secretadas con quilomicrones, pero se transfieren a HDL
2 Asociadas con subfracciones HDL2 y HDL3.
3 Parte de una fracción menor conocida como lipoproteínas de muy alta densidad
(VHDL).
John William Gofman, médico, químico y físico nuclear, experto en plutonio,
fue el primero que identificó en 1950 dos tipos de colesterol, la LDL y la HDL en la
Universidad de Berkeley, California. Hasta entonces sólo se conocían dos tipos
de lipoproteínas, α y β. En colaboración con Frank T. Lindgren describió las
diferentes formas de lipoproteínas. (Sabán Ruiz & Monge Maillo, 2012)
2.1.1.8.1. LDL- Colesterol (Low Density Lipoproteins).
2.1.1.8.1.1. Estructura.
Las Lipoproteínas de baja densidad (LDL) o Beta-Lipoproteínas (ß-
Lipoproteínas), están compuestas 50% de colesterol y 25% de proteínas, con
diámetro de 20-25nm, densidad de 1.019 – 1.063 g/ml y se caracterizan por su
contenido de apolipoproteína B100 (Apo-B100) (Osmilda, 2017)
El Colesterol LDL también se denomina colesterol “malo” debido a la relación
que hay con el aumento de riesgo de enfermedad arteriosclerótica del corazón y
de enfermedad vascular periférica, ya que los valores elevados de LDL son
aterogénicos. Se sintetizan en el hígado a partir de las lipoproteínas de muy baja
densidad (VLDL). (Núñez, 2015)
25
Gráfico XI.- Estructura de LDL.
Fuente: (Dach, 2018)
2.1.1.8.1.2. Funciones.
Las Lipoproteínas de baja densidad (LDL) cumplen importantes funciones:
Transporte y entrega de colesterol a las células del hígado y tejidos
periféricos.
Las LDL estimulan la liberación de factor tisular pro-coagulante, mayor
producción de inhibidor I del activador del plasminógeno por las células
endoteliales.
Facilita la secreción de tromboxanos para las células endoteliales.
Sufren una oxidación, más rápida se oxidan las LDL pequeñas y densas
que las LDL largas.
Alteran fácilmente a los glucosaminoglucanos de la pared arterial.
Facilita mayor incremento en el calcio intracelular de las células de
musculo liso. (Osmilda, 2017)
26
2.1.1.8.1.3. Metabolismo
El mecanismo de supresión de la síntesis del colesterol por el colesterol ligado
a la LDL implica la actuación de receptores de LDL específicos en la superficie de
la membrana plasmática. Alrededor del 75% del catabolismo de la LDL tiene lugar
en el hígado a través de este proceso en el que interviene receptores de LDL.
(Devlin, 2004)
El primer paso del mecanismo regulador implica la fijación de lipoproteína LDL
a estos receptores de LDL, extrayéndose así las partículas de LDL del plasma. La
reacción de fijación se caracteriza por su saturabilidad, alta afinidad y alto grado
de especificidad. El receptor solo reconoce LDL y VLDL, las dos lipoproteínas
plasmáticas que contienen apolipoproteína E (Apo-E) y Apo-B100. La unión a
receptores tiene lugar en sitios de la membrana plasmática que poseen cavidades
recubiertas de una proteína llamada clatrina, la lipoproteína cargada de colesterol
sufre la endocitosis en forma de vesículas recubiertas de clatrina. Este proceso se
denomina endocitosis dirigida por receptor. En el interior de las células, las
vesículas recubiertas pierden su clatrina y se convierten en endosomas. Este
proceso se llama endocitosis mediante receptor. (Devlin, 2004)
Gráfico XII.- Endocitosis mediada por el receptor de LDL.
Fuente: (Nelson & Cox , 2015)
27
El paso siguiente supone la fusión del endosoma con un lisosoma que contiene
abundantes enzimas hidrolíticos, entre ellos proteasas y colesterol esterasa. En el
ambiente relativamente acido (aprox. pH 5,0) producido por la fusión del
endosoma con el lisosoma el receptor LDL se separa de la LDL y regresa a la
superficie celular. Dentro del lisosoma, los ésteres de colesterol de la LDL son
hidrolizados por el colesterol esterasa, produciendo colesterol libre y una molécula
de ácido graso de cadena larga. Los componentes proteicos de la partícula
residual de LDL experimentan proteólisis por las proteasas lisosómicas con lo que
los aminoácidos libres entran en el fondo de aminoácidos celular. A continuación,
el colesterol libre difunde al citosol, en donde inhibe la actividad de la HMG-CoA
reductasa mediante algún mecanismo todavía desconocido y suprime la síntesis
del enzima HMG-CoA reductasa. El colesterol actúa a nivel del DNA y de la
síntesis de proteínas reduciendo la velocidad de síntesis de la HMG-CoA
reductasa. Al mismo tiempo, la acil graso-CoA: colesterol aciltransferasa (ACAT)
del retículo endoplasmático es activada por el colesterol, lo cual promueve la
formación de ésteres del colesterol, principalmente oleato de colesterol. La
acumulación de colesterol intracelular inhibe finalmente la reposición de
receptores de LDL de la superficie celular, fenómeno denominado “Down
regulation” (regulación por disminución del número de receptores), con lo que
queda bloqueada la posterior captación y acumulación de colesterol. (Devlin,
2004)
El receptor de LDL es una glucoproteína monocatenaria. Numerosas
mutaciones en su gen están asociadas con la hipercolesterolemia familiar. El
receptor atraviesa la membrana plasmática una sola vez, situándose su extremo
carboxilo en la cara citoplasmática, mientras que el extremo amino, que contiene
el sitio de unión de LDL, se halla en el espacio extracelular. La Apo-B100 y la Apo-
E, que está presente en las IDL (Lipoproteínas de densidad intermedia) y en
algunas formas de HDL, son las dos proteínas a través de las cuales determinadas
lipoproteínas se unen al receptor de LDL. (Devlin, 2004)
28
Gráfico XIII.- Metabolismo de LDL.
Fuente: (Murray, y otros, 2013)
2.1.1.8.1.4. Factores de riesgo para enfermedades
cardiovasculares.
Los niveles elevados de colesterol favorecen a la aterosclerosis, que es la
principal causa de muerte en las sociedades industrializadas. El papel del
colesterol en el desarrollo de la ateroesclerosis se puso de manifiesto gracias al
estudio de la Hipercolesterolemia Familiar, una enfermedad genética. Esta
enfermedad se caracteriza por elevadas concentraciones de colesterol y de HDL
en el plasma, unas tres o cuatro veces más de lo que sería deseable. En la
Hipercolesterolemia Familiar, el colesterol se deposita en diversos tejidos, debido
que el plasma contiene una elevada concentración de colesterol procedente de
las LDL. En la piel y en los tendones de las personas con niveles elevados de LDL
se observan abundantes nódulos de colesterol denominados xantomas. (Stryer,
Berg , & Tymoczko, 2014)
Especialmente preocupante es la oxidación del exceso de LDL en sangre, que
da lugar a LDL oxidadas (LDLoxi) las LDLoxi son absorbidas por unas células del
29
sistema inmunitario denominadas macrófagos, que acaban hinchándose
formando células espumosas. Estas células se quedan atrapadas en las paredes
de los vasos sanguíneos y contribuyen a la formación de placas de ateroma que
provocan el estrechamiento de las arterias y dan lugar a los ataques al corazón.
(Stryer, Berg , & Tymoczko, 2014)
Gráfico XIV.- Evolución progresiva de las placas de ateroesclerosis en la íntima arterial.
Fuente: (Parra, 2018)
Existe una relación de causa y efecto entre el colesterol y las enfermedades
arteriales coronarias.
2.1.1.8.1.4.1. Factores inalterables.
Sexo y edad: Los hombres entre 45 y 55 años presentan más riesgos que las
mujeres de esa edad. En las mujeres se incrementa después de la menopausia.
Factores genéticos: Los factores hereditarios se dan por el alto nivel de lípidos
(hiperlipidemia). Esta patología es causada por un problema genético en el
metabolismo de las grasas, que provoca el aumento de los niveles de las
lipoproteínas, por lo que aumenta el riesgo de padecer enfermedades coronarias.
30
2.1.1.8.1.4.2. Factores modificables.
Presión arterial alta: Acelera la formación de depósitos de aterosclerosis
constituyendo un factor determinante para las enfermedades coronarias.
Consumo de tabaco: El consumo de tabaco conlleva a problemas que pueden
derivar en la cardiopatía coronaria.
Exceso de peso: La obesidad complica el sistema cardíaco y aumenta el
riesgo.
Diabetes: Las mujeres diabéticas de hasta 50 años tienen disminuida la
protección contra las enfermedades coronarias, protección que poseen las
mujeres en general.
Estrés y estilo de vida: El estilo de vida es uno de los factores que altera los
niveles de colesterol. (Colesterol alto e Hipertensión, 2014)
2.1.1.8.2. HDL- Colesterol (High Density Lipoproteins).
2.1.1.8.2.1. Estructura.
Las Lipoproteínas de alta densidad (HDL) o Alfa-Lipoproteínas (α-
Lipoproteínas), están compuestas 50% de proteínas y 25% de fosfolípidos, con
diámetro de 8 – 11nm, densidad de 1.063 – 1.210 g/ml y se caracterizan por su
contenido en Apolipoproteína A-I (Apo-A-I), Apolipoproteína A-II (Apo-A-II),
Apolipoproteína C-I (Apo-C-I), Apolipoproteína C-II (Apo-C-II), Apolipoproteína C-
III (Apo-C-III), Apolipoproteína D (Apo-D) y Apo-E. (Osmilda, 2017)
31
La Apo-A-I es la apolipoproteína más abundante e importante para cumplir sus
funciones; éstas se clasifican según su densidad en:
a) HDL-2 o HDL maduras con una densidad de 1.063 – 1.120 g/ml y a su vez
se sub-clasifica en HDL2a y HDL2b.
b) HDL-3 o HDL recién formadas con una densidad de 1.120 – 1.210 g/ml y
a su vez se subclasifica en HDL3a, HDL3b y HDL3c. (Osmilda, 2017)
La Apo-A-II es la segunda apolipoproteína más abundante y en menor
concentración están las Apolipoproteína A-IV (Apo-A-IV), Apolipoproteína A-V
(Apo-A-V), Apo-C-I, Apo-C-III y Apo-E. (Ponce Gutiérrez, Ponce Gutiérrez,
Rodríguez León, & Llanes Álvarez, 2013)
Las HDL son complejos macromoleculares, seudomicelares, constituidos por
lípidos anfipáticos (fosfolípidos y colesterol libre), lípidos no polares (triglicéridos y
ésteres de Colesterol) y por proteínas llamadas Apo. (Ponce Gutiérrez, Ponce
Gutiérrez, Rodríguez León, & Llanes Álvarez, 2013)
Los lípidos anfipáticos se organizan en una monocapa en la superficie del
complejo y presentan grupos polares hacia el medio acuoso. La estabilidad de la
monocapa está garantizada por las Apo. (Ponce Gutiérrez, Ponce Gutiérrez,
Rodríguez León, & Llanes Álvarez, 2013)
Los lípidos no polares son insolubles en un medio acuoso como el plasma y en
consecuencia se sitúan en el interior de las lipoproteínas, de manera tal que evitan
las interacciones con grupos polares. Por lo tanto, el transporte de los lípidos en
el plasma está garantizado. (Ponce Gutiérrez, Ponce Gutiérrez, Rodríguez León,
& Llanes Álvarez, 2013)
32
Gráfico XV.- Estructura de HDL.
Fuente: (Ponce Gutiérrez, Ponce Gutiérrez, Rodríguez León, & Llanes Álvarez,
2013)
2.1.1.8.2.2. Funciones.
La HDL cumple las siguientes funciones:
Transporte reverso del colesterol.
Actividad antioxidante.
Protección de la función endotelial.
Regulación de la actividad secretora del endotelio.
Regulación de la respuesta inflamatoria.
Regulación de la coagulación y la fibrinólisis. (Osmilda, 2017)
2.1.1.8.2.3. Metabolismo.
La HDL se sintetiza tanto en el hígado como en el intestino y se excreta a partir
de los mismos. La Apo-C y la Apo-E se sintetizan en el hígado y se transfieren
desde la HDL hepática hacia la HDL intestinal cuando esta entra en el plasma.
(Murray, y otros, 2013)
33
Una de las principales funciones de la HDL es actuar como depósito para la
Apo-C y Apo-E requeridas en el metabolismo de los QM y VLDL. La HDL naciente
consta de bicapas de fosfolípidos discoidales que contienen Apo-A y colesterol
libre. La Lecitina colesterol acil transferasa (LCAT) y el activador de LCAT Apo-A-
I se unen a las partículas discoidales, y el fosfolípido de superficie y el colesterol
libre se convierten en colesteril ésteres y lisolecitina. Los colesteril ésteres no
polares se mueven hacia el interior hidrofóbico de la bicapa, mientras que la
lisolecitina se transfiere hacia la albúmina plasmática. Se genera un centro no
polar, lo que forma una HDL seudomicelar, esférica, cubierta por una película
superficial de lípidos y Apo polares. Esto ayuda a la eliminación de colesterol no
esterificado excesivo desde lipoproteínas y tejidos. El receptor recolector B1 clase
B (SRB1) es identificado como un receptor de HDL con una función doble en el
metabolismo de HDL. En el hígado y en tejidos esteroidogénicos, se une a la HDL
por medio de la Apo-A-I, y el colesteril éster se lleva de manera selectiva hacia las
células, aunque la partícula de Apo-A-I no es captada. Por otro lado, en los tejidos,
el SRB1 media la aceptación del colesterol que sale de las células por la HDL, que
después lo transporta hacia el hígado para excreción mediante la bilis en el
proceso de transporte inverso de colesterol. (Murray, y otros, 2013)
La HDL3, generada a partir de HDL discoidal por medio de la acción de LCAT,
acepta colesterol proveniente de los tejidos mediante el SRB1, a continuación, la
LCAT esterifica el colesterol, lo que incrementa el tamaño de las partículas para
formar HDL2 menos densa. Después se vuelve a formar HDL3, sea después de
suministro de colesteril éster al hígado por medio del SRB1 o mediante hidrolisis
de fosfolípido y triacilglicerol de HDL2 por medio de la lipasa hepática y la lipasa
endotelial. Este intercambio de HDL2 y HDL3 se llama el ciclo de HDL. (Murray, y
otros, 2013)
La Apo-A-I libre se libera mediante estos procesos y forma Pre Beta HDL
(preßHDL) luego de relacionarse con una cantidad mínima de fosfolípido y
colesterol. La Apo-A-I excesiva se destruye en los riñones. Un segundo
mecanismo importante para el transporte inverso de colesterol comprende los
transportadores de casete A1 de unión a ATP (ABCA1) y G1 (ABCG1), los cuales
son miembros de una familia de proteínas transportadoras que unen la hidrólisis
34
de ATP a la unión de un sustrato, lo que permite que se transporten a través de la
membrana. El ABCG1 media el transporte de colesterol desde células hacia HDL,
mientras que el ABCA1 promueve de preferencia el flujo de salida de partículas
poco lipidadas, como preßHDL o Apo-A-I, que después se convierten en HDL3 por
medio de la HDL discoidal. La preßHDL es la forma más potente de HDL que
induce el flujo de salida de colesterol desde los tejidos. (Murray, y otros, 2013)
Gráfico XVI.- Metabolismo de HDL.
Fuente: (Murray, y otros, 2013)
2.1.1.8.2.4. Las HDL-Colesterol actúan frente a la
ateroesclerosis
Mientras que los niveles elevados de LDL, el dominio colesterol malo, pueden
provocar enfermedades coronarias, las HDL, parecen proteger al organismo frente
a las placas de ateroma. La proporción entre el colesterol en forma de HDL, que
a veces también se denomina “colesterol bueno”, y el colesterol en forma de LDL,
se puede utilizar para evaluar la susceptibilidad de una persona al desarrollo de la
enfermedad cardiaca. Para una persona sana, el cociente LDL/HDL es de 3.5 o
menor. (Stryer, Berg , & Tymoczko, 2014)
35
2.1.1.8.2.4.1. Fundamento bioquímico del efecto
saludable de las HDL.
Las HDL presente una serie de propiedades antiaterogénica, pero la propiedad
mejor caracterizada es la extracción del colesterol de las células, especialmente
de los macrófagos. Anteriormente, hemos visto que las HDL extraen colesterol de
otros tejidos del organismo para devolverlo al hígado con objeto de que sea
excretado en forma de bilis o en las heces. Este transporte inverso del colesterol
es especialmente importante en el caso de los macrófagos. De hecho, cuando el
transporte falla, los macrófagos se convierten en células espumosas y facilitan la
formación de las placas, como ya hemos visto. Normalmente, los macrófagos que
recogen el colesterol de las LDL lo transportan a las partículas HDL. Cuanto más
HDL haya, con más facilidad se llevará a cabo este transporte y menor será la
probabilidad de que los macrófagos se conviertan en células espumosas.
Presumiblemente, este intenso transporte inverso del colesterol explica, al menos
en parte, la observación de que los niveles elevados de HDL confieren protección
contra la ateroesclerosis.
Otra propiedad antiaterogénica de las HDL resulta de su asociación con la
paraoxanasa, una esterasa del suero. La paraoxanasa puede destruir la oxLDL,
lo que explica, en parte, la capacidad de las HDL para proteger de las
enfermedades coronarias. (Stryer, Berg , & Tymoczko, 2014)
2.1.2. Intervalo de Referencia Biológico (IRB)
2.1.2.1. Generalidades
La interpretación de cualquier análisis de laboratorio implica un proceso
importante de comparación del resultado del paciente con un “intervalo de
referencia” para la prueba en cuestión. Algunas pruebas proporcionan una
respuesta sencilla de “sí” o “no”, que serían las denominadas pruebas cualitativas,
tales como: test rápidos de detección de patógenos, test de embarazo, etc. Pero,
para la mayoría de las pruebas de laboratorio, el significado de un resultado
36
depende del contexto en el cual se interprete. Habitualmente, un informe de
laboratorio presentará sus resultados acompañados de un intervalo de referencia.
Ese intervalo se establece analizando el resultado de la prueba en un gran número
de personas sanas y calculando estadísticamente lo que se puede considerar
normal en esta muestra. (Jiménez Alés, 2008)
Una teoría de valores de referencia que proporciona definiciones, principios y
procedimientos para la determinación y el uso de valores de referencia fue
desarrollado por el Panel de expertos en teoría de valores de referencia (EPTRV)
de la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) y el Comité Permanente
de Valores de Referencia del Consejo Internacional de Normalización en
Hematología (ICSH). (CLSI C28 A3c) (Horowitz, y otros, 2010)
Los Intervalos de referencia (IR) son importantes en la interpretación de los
procedimientos analíticos, y son requeridos para todas las pruebas realizadas en
el laboratorio clínico, son de suma importancia en la interpretación clínica de la
enfermedad y el grado de ésta, orientando el diagnóstico médico.
Tradicionalmente los IR son tomados de los insertos (protocolos de trabajo) que
acompañan al reactivo con el que se procesa la muestra; pero en la mayoría de
los casos, los IR propuestos por el fabricante corresponden a una evaluación
realizada en condiciones y población distinta a la evaluada en los laboratorios, por
ello es de suma importancia que los IR deban ser verificados antes de ser incluidos
en el sistema de información, debido a que son una base de datos distinta al
profesional de salud e indispensables para una correcta interpretación de
resultados de los exámenes de laboratorio. (CLSI C28 A3c) (Horowitz, y otros,
2010) (Yofre, y otros, 2012)
Los Intervalos de Referencia (IR) biológico son rangos de valores de magnitud
biológica que se obtienen en una medición especifica en individuos que cumplen
con una serie de requisitos establecidos para dicha determinación; tales como:
estado de salud, edad, sexo, etnia. (Álvarez, 2013)
37
Los IR son un conjunto de valores que van desde un límite inferior hasta un
límite superior, el cual se basa con los resultados obtenidos de los individuos de
referencia y éste se compara con el valor obtenido en la medición. (Yofre, y otros,
2012)
Los IR biológicos se los obtiene de un grupo de referencia ya que estos van a
depender de variables biológicas no modificables como edad, sexo, raza y otros
por determinadas enfermedades o tratamientos que siga el paciente. Por lo que
es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios IR biológicos,
teniendo en cuenta la metodología empleada y el tipo de población, ya que sin
éstos los valores obtenidos no tendrían significado alguno. (González, 2014)
Los IR se definen por valores medidos en individuos sanos cuidadosamente
seleccionados con criterios de inclusión y exclusión bien definidos y sometidos a
las mismas condiciones de trabajo (mismas técnicas y métodos) como factores de
variación. (Gómez de la Torre, Bustinza Linares, & Huarachi, 2003)
Los valores de referencia biológicos van a depender de la población de
referencia estudiada. Por lo que un valor de referencia observado en individuos
sanos de países escandinavos va a ser diferente de los observados en individuos
sanos de los países mediterráneos. De tal manera, se puede afirmar que, en
general, los intervalos de referencia biológicos que aparecen en los libros u otras
publicaciones, incluso en las más prestigiosas y reconocidas, no deben utilizarse
con fines diagnósticos. Sólo pueden utilizarse con cierta fiabilidad aquellas
publicaciones en las que conste, sin ninguna imprecisión la descripción de la
población de referencia y el procedimiento de medida utilizado, siempre y cuando,
tanto la población como el procedimiento de medida coincidan con los que afectan
al paciente en estudio. (Fuentes Arderiu, 2011)
38
2.1.2.2. Definición de Intervalos de Referencia
La producción de valores de referencia asociados a la salud y la estimación
posterior de los intervalos de referencia para un analito dado, debe llevarse a cabo
de acuerdo con un protocolo bien definido. Esto implica seguir una secuencia de
operaciones. Este esquema debe aplicarse para establecer valores de referencia
para un nuevo analito, para un grupo diferente de individuos, o para un nuevo
método analítico con sensibilidad analítica y especificidad mejoradas para un
analito previamente medido. (Horowitz, y otros, 2010)
Para la obtención de dichos intervalos de referencia, la CLSI C28 A3c ha
propuesto los siguientes lineamientos:
Establecer una lista apropiada de variaciones biológicas e interferencias
analíticas de médicos
Establecer criterios de selección (o exclusión) y partición y diseñar un
cuestionario apropiado para revelar estos criterios en las personas
potenciales de referencia.
Ejecutar un formulario, en el que el paciente nos brinde el consentimiento
informado escrito para participar en el estudio de intervalo de referencia y
haga que la persona de referencia complete el cuestionario.
Clasifique las personas potenciales de referencia basándose en los
resultados del cuestionario y los resultados de otras evaluaciones de salud
apropiadas.
Excluir individuos del grupo de muestra de referencia en función de los
criterios de exclusión o evaluaciones que indiquen una falta de buena
salud.
Decidir sobre un número apropiado de individuos de referencia en
consideración de límites de confianza deseados.
Preparar, correcta y coherentemente, a las personas seleccionadas para
la recolección de muestras para la medición de un analito dado de acuerdo
con la práctica de rutina para los pacientes.
Recolectar y manejar las muestras biológicas de manera apropiada y de
manera consistente con la práctica de rutina para las muestras de
pacientes.
39
Recolectar los valores de referencia mediante el análisis de las muestras
de acuerdo con la metodología analítica respectiva en condiciones bien
definidas y de acuerdo con la práctica habitual de las muestras de
pacientes.
Inspeccione los datos del valor de referencia y prepare un histograma para
evaluar la distribución de datos.
Identificar posibles errores de datos y/o valores atípicos.
Analice los valores de referencia, es decir, seleccione un método de
estimación y estime los límites de referencia y el intervalo de referencia
Documente todos los pasos y procedimientos mencionados anteriormente.
(CLSI C28 A3c)
40
2.2. Glosario
Adenosín trifosfato: Es una molécula utilizada por todos los organismos vivos
para proporcionar energía en las reacciones químicas.
Apolipoproteína: Proteína componente del complejo lipoproteico.
Arteriosclerosis: Es una enfermedad de las arterias que genera una
acumulación de colesterol en sus paredes que puede ocasionar un infarto de
miocardio o un accidente cerebrovascular
Circulación entero hepática: Es el proceso de secreción y recaptación.
Comienza con la secreción de ácidos biliares por el hígado para pasar al intestino
donde son absorbidos y luego continúan su camino hacia la circulación portal, de
donde son extraídos por el hígado para ser secretados nuevamente en la bilis.
Clatrina: Es una proteína que forma el recubrimiento de las microcavidades de
membranas celulares donde se sitúan receptores de lipoproteínas. Son receptores
de lipoproteínas (LDL) y se encuentran especialmente en hígado y otros tejidos
periféricos como ovarios y corteza adrenal.
Colesterol: Es una sustancia grasa natural presente en todas las células del
cuerpo humano necesaria para el normal funcionamiento del organismo. La mayor
parte del colesterol se produce en el hígado y de algunos alimentos.
Colestiramina: Es una resina de intercambio aniónico, utilizada para tratar la
hipercolesterolemia.
41
Enfermedad cardiovascular: Describe cualquier enfermedad que afecta al
sistema cardiovascular, es utilizado comúnmente para referirse aquellos
relacionados con la arterosclerosis.
HDL: Lipoproteínas de alta densidad. “High-Density Lipoprotein”. Estos
complejos lipo-proteicos se llaman también alfa-lipoproteínas y son las más
densas de las lipoproteínas. Se llama colesterol "bueno" porque transporta el
colesterol de otras partes de su cuerpo a su hígado.
Hipercolesterolemia Familiar: La hipercolesterolemia familiar (HF) es una
enfermedad hereditaria que se expresa desde el nacimiento, y que cursa con un
aumento en las concentraciones plasmáticas de colesterol, principalmente del
colesterol transportado por las lipoproteínas de baja densidad (c-LDL).
IDL: Lipoproteínas de densidad intermedia. “Intermediate-Density Lipoprotein”.
Este complejo lipoproteico tiene una densidad entre VLDL y LDL, es de una vida
media relativamente corta, y en la sangre de una persona sana están en muy bajas
concentraciones. En personas con disbetalipoproteínemia su concentración en
sangre es elevada.
Individuo de referencia: Persona seleccionada, con unos criterios definidos
específicamente; por ejemplo, si es sana o bien tiene alguna enfermedad, la edad,
el sexo y las condiciones en que se realiza la obtención del espécimen.
Intervalos de Referencia: Límites de los valores de laboratorio de una
población sin enfermedad; se debe definir además mediante otras variables como
género, edad, herencia y otros factores epidemiológicos.
LDL: Lipoproteínas de baja densidad. “Low-Density Lipoprotein”. Este
complejo lipoproteico es también llamado beta-lipoproteína y es el producto final
del catabolismo de la VLDL. Es el mayor transportador del colesterol. Se llama
42
colesterol "malo" porque un nivel alto de LDL lleva a una acumulación de colesterol
en las arterias.
Límite de Referencia: Límite que se obtiene a partir de la distribución de
referencia para su utilización con fines descriptivos.
Lipoproteínas: Son moléculas compuestas de proteínas y de grasa,
encargadas de trasladar el colesterol y otras sustancias grasas similares a través
de la sangre.
Macrófagos: Es un tipo de fagocito, que es una célula responsable de detectar,
de engullir y de destruir patógeno y las células apoptotic. Los Macrófagos se
producen con la diferenciación de los monocitos, que giran en macrófagos cuando
salen de la sangre. Los Macrófagos también desempeñan un papel en alertar el
sistema inmune a la presencia de invasores.
Placas de ateroma: Es un cúmulo de colesterol en la pared de una arteria.
Población de Referencia: Grupo formado por todos los individuos de
referencia. La población de referencia generalmente es un número indeterminado
de personas por lo que es una entidad hipotética.
Quilomicrones: Grandes complejos lipoproteicos formados en el intestino y
que tienen una importante función en el transporte de grasas (mayormente
triglicéridos dietarios).
Rango de Referencia: Es el rango completo (desde los mínimos hasta los
máximos valores medidos) de valores de laboratorio de un grupo de personas no
enfermas.
43
Saludable o Sano: Término relativo que debe ser definido para cada población
de referencia.
Valor de Referencia: El valor (resultado de la prueba) obtenido de un individuo
de referencia mediante la observación o medición de un compuesto analizado
particular. Los valores de referencia se obtienen de un grupo de la muestra de
referencia.
VLDL: Lipoproteínas de muy baja densidad. “Very Low-Density Lipoprotein”.
Es también llamado pre-beta-lipoproteína. Son grandes complejos lípido-proteicos
que transportan triglicéridos de síntesis endógena.
44
2.3. Definición de Siglas.
ACAT: Acil-CoA-colesterol-acil transferasa
Acetoacetil-CoA: Acetoacetil coenzima-A
Acetil-CoA: Acetil coenzima-A
Apo: Apolipoproteína
Apo-A-I: Apolipoproteína A-I
Apo-A-II: Apolipoproteína A-II
Apo-A-IV: Apolipoproteína A-IV
Apo-A-V: Apolipoproteína A-V
Apo-B100: Apolipoproteína B100
Apo-B48: Apolipoproteína B48
Apo-C-I: Apolipoproteína C-I
Apo-C-II: Apolipoproteína C-II
Apo-C-III: Apolipoproteína C-III
Apo-D: Apolipoproteína D
Apo-E: Apolipoproteína E
ATP: Adenosín trifosfato
β-lipoproteína: Beta lipoproteína
C-HDL: Colesterol de lipoproteínas de alta densidad
C-LDL: Colesterol de lipoproteínas de baja densidad
C2O: Dióxido de carbono
CoA: Coenzima A
DNA: Ácido desoxirribonucleico,
EC: Esteres de colesterol
ECV: Enfermedades cardiovasculares
EPTRV: Panel de Expertos en Teoría de Valores de Referencia
45
HDL: High Density Lipoproteins (Lipoproteínas de alta densidad)
HMG CoA: 3-hidroxi-metilglutaril-Coenzima-A)
HMG CoA reductasa: 3-hidroxi-metilglutaril-Coenzima-A reductasa)
HMG CoA sintasa: 3-hidroxi-metilglutaril-Coenzima-A sintasa)
ICSH: Consejo Internacional de Normalización en Hematología
IDL: Lipoproteínas de densidad intermedia
IFCC: Federación Internacional de Química Clínica
INEN: Servicio Ecuatoriano de Normalización
IR: Intervalos de Referencia
LCAT: Lecitina colesterol acil transferasa
LDL: Low Density Lipoproteins (Lipoproteínas de baja densidad)
LDLoxi: Lipoproteínas de baja densidad oxidadas
mRNA: ARN mensajero
NADPH: Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato
QM: Quilomicrones
VLDL: Very Low Density Lipoproteins (Lipoproteínas de muy baja densidad)
46
Capitulo III
3. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
Con la finalidad y establecer los Intervalos de Referencia Biológicos del
Colesterol Total y sus fracciones HDL-Colesterol y LDL-Colesterol, se llevó a cabo
lo siguiente:
3.1. Métodos científicos empleados en la investigación
Métodos: descriptivo, transversal y observacional.
3.2. Metodología
Gráfico XVII. Diagrama de flujo de Investigación
1. Selección de los criterios de inclusión y exclusión del individuo de
referencia.
2. Decisión del número apropiado de individuos de referencia para el
estudio a realizar.
3. Elaboración del consentimiento informado para los individuos de
referencia
4. Elaboración de la encuesta, con preguntas claras y precisas.
5. Preparación correcta del individuo para la recolección del
espécimen biológico.
6. Obtención de los espécimenes biológicos
7. Ejecucion de los análisis bioquimicos correspondientes.
8. Analisis estadistico de los resultados
47
3.3. Tipo de Investigación
Es aplicada y analítica
3.4. Población y muestra
3.4.1. Población
La población fue conformada por los pacientes que asisten al Laboratorio José
Darío Moral de la Facultad de Ciencias Químicas de la Ciudad de Guayaquil en el
año 2018 y que de acuerdo a las encuestas realizadas resultaron aptos para el
estudio.
3.4.2. Muestra
Se realizaron 123 encuestas, siguiendo las directrices que se encuentran
establecidos en la Guía CSLI C28-A3, para la selección de los individuos de
referencia que son aptos para el estudio.
No se realizó un muestreo, dado que, se consideraron las 123 personas adultas
jóvenes de 18 – 25 años de edad que asistieron al Laboratorio José Darío Moral
de la Facultad de Ciencias Químicas en la ciudad de Guayaquil, que cumplieron
con los criterios de selección en el período 2017 – 2018.
3.5. Técnicas de Investigación
3.5.1. Protocolo CLSI C28A3
Selección de individuos de referencia.
Recolección y tratamiento de muestras sanguíneas.
Determinación de Colesterol, HDL-Colesterol y LDL-Colesterol.
48
Determinación del Intervalo de Referencia.
3.5.2. Selección de Individuos de Referencia
La selección de la población de referencia se realizó mediante una encuesta
(ver anexo 2), que permitió averiguar ciertas características de los participantes, a
los cuales se les dio a conocer los objetivos del trabajo a realizar, a fin de que
faciliten el consentimiento informado de intervenir en este estudio (ver anexo 1).
3.5.2.1. Criterios de Exclusión
Los criterios de exclusión que se tomaron en cuanta en el ensayo son:
Tabla II.-Criterios de Exclusión
Consumo de alcohol Lactancia
Transfusión Obesidad
Presión sanguínea elevada Ocupación laboral
Abuso de drogas Anticonceptivos orales
Prescripción de drogas Embarazo
Factores genéticos Cirugía
Hospitalización reciente Consumo de tabaco
Enfermedad reciente Abuso de vitaminas
Problemas de tiroides Individuos de raza negra
Ciclo menstrual Sueros hemolizados
Ejercicio físico en exceso Muestras lipémicas
Fuente: Guía CLSI EP28-A3c 3era edición (2010) & Reyes J.
49
3.5.2.2. Criterios de Inclusión
Tabla III.-Criterios de Inclusión
Grupo de edad (adultos jóvenes de
18 a 25 años)
Grupo de cualquier sexo.
Sueros obtenidos de personas en
ayunas no menor de 10 horas, no
hemolizados, y que sean procesados
dentro de las 4 horas a la extracción.
Personas que hayan firmado
voluntariamente el consentimiento
informado.
Elaborado por: Reyes J.
3.5.2.3. Índice de masa corporal
Con la finalidad de completar la información necesaria se obtuvieron de los
participantes sus medidas antropométricas como son el peso y la talla, calculando
así el IMC (Índice de masa corporal) para saber si tienen o no un peso aceptable
utilizando la siguiente Tabla.
Tabla IV.- Índice de Masa Corporal
CATEGORÍA INTERVALO Kg/m2
Bajo peso ≤ 18,5
Aceptable 18,5 – 24,9
Sobrepeso ≥ 25
Obesidad ≥ 30
Fuente: Organización Mundial de la Salud
3.5.3. Recolección y Tratamiento de la muestra sanguínea
La persona estaba sentada, en una posición cómoda, recostada sobre el
espaldar; se seleccionó el sitio para la venopunción.
50
Las muestras sanguíneas se obtuvieron por punción venosa previo ayuno 8
horas en tubos de sistema al vacío de 8,5 mL sin anti-coagulante, con gel y
activador de coagulación.
Luego en una centrifuga se procedió a separar el suero del plasma. Las
muestras fueron procesadas en el analizador automático HumaStar 100
3.5.4. Determinación de Colesterol Total, HDL-Colesterol y LDL-
Colesterol
3.5.4.1. Colesterol Total
El método se basa después de la hidrólisis enzimática y la oxidación. El
indicador es la quinoneimina formada por el peróxido de hidrogeno y 4-
aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.
El principio de la reacción es el siguiente: Los Esteres de colesterol y agua
reaccionan con el Colesterol Esterasa (CHE) obteniendo Colesterol + ácidos
grasos. El colesterol y Oxigeno reaccionan con el Colesterol Oxidasa (CHO)
obteniendo Colestene-3-ona y Peróxido de Hidrógeno. Dos moléculas de Peróxido
de hidrógeno con el 4-amino-antipirina y el fenol reaccionan con la Peroxidasa
(POD) obteniendo quinoneimina y cuatro moléculas de agua.
𝐸𝑠𝑡𝑒𝑟𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝐻2𝑂 →𝐶𝐻𝐸
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + á𝑐𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑜𝑠
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 + 𝑂2 →𝐶𝐻𝑂
𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑛𝑒 − 3 − 𝑜𝑛𝑎 + 𝐻2𝑂2
2 𝐻2𝑂2 + 4 − 𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜 − 𝑎𝑛𝑡𝑖𝑝𝑖𝑟𝑖𝑛𝑎 + 𝑓𝑒𝑛𝑜𝑙 →𝑃𝑂𝐷
𝑞𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑒𝑖𝑚𝑖𝑛𝑎 + 4 𝐻2𝑂
51
3.5.4.2. HDL-Colesterol
El método consiste en que los quilomicrones, VLDL (lipoproteínas de muy baja
densidad) y LDL (lipoproteínas de baja densidad) se precipitan por adición de
ácido fosfotúngstico y cloruro de magnesio. Después de centrifugar, el
sobrenadante contiene las HDL (lipoproteínas de alta densidad), en las que se
determina HDL colesterol con el equipo HUMAN CHOLESTEROL liquicolor.
3.5.4.3. LDL-Colesterol
El método se basa en dos pasos: el 1º. Paso se eliminan específicamente los
quilomicrones y los colesteroles VLDL y HDL por reacciones enzimáticas. El 2º.
Paso, se determina el colesterol LDL restante a través de reacciones enzimáticas
especificas bien establecidas en presencia de surfactantes específicos para LDL.
El principio de las reacciones es el siguiente:
1º. Reacción:
El HDL-C, VLDL-C y Quilomicrones reaccionan en condiciones específicas con
el Colesterol Esterasa (CHE) + Colesterol Oxidasa (CHO) obteniendo
Colestenona + Peróxido de Hidrógeno (H2O2). Dos moléculas de Peróxido de
Hidrógeno (H2O2) reaccionan con la Catalasa obteniendo dos moléculas de agua
(H2O) + una molécula de Oxígeno (O2).
𝐻𝐷𝐿, 𝑉𝐿𝐷𝐿 𝑦 𝑞𝑢𝑖𝑙𝑜𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑛𝑒𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑠⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ 𝐶𝐻𝐸+𝐶𝐻𝑂 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑛𝑜𝑛𝑎 + 𝐻2𝑂2
2 𝐻2𝑂2 →𝐶𝑎𝑡𝑎𝑙𝑎𝑠𝑎
2 𝐻2𝑂 + 𝑂2
2º. Reacción:
El LDL-C reacciona en surfactantes específicas con el Colesterol Esterasa
(CHE) + Colesterol Oxidasa (CHO) obteniendo Colestenona + Peróxido de
52
Hidrógeno (H2O2). Dos moléculas de Peróxido de Hidrógeno (H2O2) + Cromógeno
reaccionan con la Peroxidasa dando como resultado colorante quinona.
𝐿𝐷𝐿 𝑠𝑢𝑟𝑓𝑎𝑐𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑠⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ ⃗⃗ 𝐶𝐻𝐸+𝐶𝐻𝑂 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑛𝑜𝑛𝑎 + 𝐻2𝑂2
2 𝐻2𝑂2 + 𝑐𝑟𝑜𝑚ó𝑔𝑒𝑛𝑜 →𝑃𝑒𝑟𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑠𝑎
𝑐𝑜𝑙𝑜𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑞𝑢𝑖𝑛𝑜𝑛𝑎
3.5.5. Gestión del Intervalo de Referencia
Los datos fueron procesados utilizando la aplicación EP Evaluator versión 12
en período de prueba, (Data Innovations, 2018). Este software es un conjunto de
módulos estadísticos para la estimación, validación y verificación de métodos.
3.6. Equipos
El equipo que se utilizó para la determinación de Intervalos de Referencia para
Colesterol Total, HDL-Colesterol y LDL-Colesterol fue el Analizador de Química
Clínica automático HumaStar 100 de marca HUMAN.
53
Capitulo IV
4. RECOLECCIÓN DE DATOS, ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS.
Los resultados obtenidos de las encuestas fueron organizados en una tabla de
datos que se presenta a continuación. Se realizaron 123 encuestas a personas
que acudieron al laboratorio y previamente aceptaron participar en el estudio.
Tabla V.- Resultados de las Encuestas
PREGUNTAS SI NO
1.- ¿Se considera usted una persona sana? 103 20
2.- ¿Hace usted ejercicio en exceso? 5 118
3.- ¿Ha estado enfermo recientemente? 18 105
4.- ¿Está tomando algún medicamento? 16 107
5.- ¿Sufre de problemas de presión arterial? 0 123
6.- ¿Sufre de problemas de tiroides? 2 121
7.- ¿Está tomando suplementos vitamínicos? 20 103
8.- ¿Consume usted una dieta especial? 5 118
9.- ¿Usted bebe alcohol frecuentemente? 17 106
10.- ¿Usted bebió alcohol las últimas 24 horas? 0 123
11.- ¿Usted fuma? 3 119
12.- ¿Usted consume drogas? 0 123
13.- ¿Actualmente se encuentra con cuidados médicos? 8 115
14.- ¿Ha sido hospitalizado recientemente? 1 122
15.- ¿Existen trastornos de salud en su familia? 55 68
16.- ¿Usted se automedica? 16 107
17.- ¿Ha tomado algún medicamento para el resfriado? 10 113
18.- ¿Ha tomado algún medicamento para la alergia? 15 108
19.- ¿Está tomando usted pastillas para adelgazar? 1 122
20.- ¿Ha tomado antiácidos recientemente? 9 114
Elaborado por: Reyes J.
54
De los 123 participantes, 82 fueron mujeres, a las cuales se les hicieron
preguntas específicas.
Tabla VI.- Resultados de preguntas realizadas a mujeres
PREGUNTAS SI NO
1.- ¿Está usando implantes o anticonceptivos orales? 0 82
2.- ¿Está menstruando? 14 68
3.- ¿Está embarazada? 0 82
4.- ¿Está dando de lactar? 1 81
Elaborado por: Reyes J.
4.1. Tratamiento estadístico de los datos para la obtención de
los Intervalos de Referencia de los analitos de Colesterol
Total, HDL-Colesterol y LDL-Colesterol
De los 123 individuos potenciales de referencia, se seleccionó una muestra de
grupo de referencia basados de acuerdo a los resultados de la encuesta, la
evaluación de las medidas antropométricas y la aplicación de criterios de exclusión
tales como factores genéticos, consumo de alcohol, tabaco, drogas, embarazo,
lactancia entre otras, se obtuvieron 103 individuos sanos obteniendo los siguientes
datos:
De los 103 valores para Colesterol Total, se extrajeron los valores atípicos o
aberrantes por medio de la prueba de Dixon, mediante el software XLSTAT 2018,
obteniendo así 100 individuos potenciales de referencia.
55
Gráfico XVIII
Elaborado por: Reyes J. (Software XLSTAT 2018).
Los valores que pasaron la prueba de Dixon fueron ingresados al software EP
Evaluator versión 12 modo de prueba.
La siguiente tabla muestra los Límites de confianza para el método de índice
no paramétrico calculado por formula exacta.
Tabla VII.- Límites de confianza para el método NO paramétrico para
Colesterol Total
INTERVALO CENTRAL 95%
(N=100)
INFERIOR SUPERIOR RELACIÓN DE
CONFIANZA Valor 90 % CI Valor 90 % CI
Paramétrico 108 102 a 113 186 180 a 191 0,14
Alternativas
Índice no paramétrico 111 <108 a 114 184 178 a >186 >0,10
Transformado
paramétrico - - - - -
Fuente: EP Evaluator (Anexo 4)
-2,5
-2
-1,5
-1
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
1 4 7
10
13
16
19
22
25
28
31
34
37
40
43
46
49
52
55
58
61
64
67
70
73
76
79
82
85
88
91
94
97
10
0
10
3
Z-s
co
re
Observaciones
Valores Atípicos para Colesterol Total
56
La siguiente tabla muestra el análisis estadístico de los resultados obtenidos
para Colesterol Total, donde se observa el Intervalo para el grupo de referencia.
Tabla VIII.- Estadísticas de Tendencia central para Colesterol Total
Análisis estadístico
Media 146,7
SD 19,9
Mediana 147,5
Rango 108 – 186
Fuente: EP Evaluator (Anexo 4)
Según los resultados del EP Evaluator la distribución de los analitos de
Colesterol Total, se distribuyen según la distribución No paramétrica.
Gráfico XIX
Histograma de Colesterol Total
Fuente: EP Evaluator (Anexo 4).
Copyright 1991-2017 Data Innovations LLC
Page 1Default Printed: 16 sep. 2018 11:19:18
EP Evaluator 12.0.0.11
COLESTEROL TOTAL
<Your Department> -- <Your Institution> COLESTEROL TOTAL
Central 95% Interval(N = 100)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Parametric 108 102 to 113 186 180 to 191 0,14
Alternatives
Nonparametric Index 111 <108 to 114 184 178 to >186 >0,10
Transformed Parametric -- -- -- -- --
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
CO
LE
ST
ER
OL
TO
TA
L
180
160
140
120
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
No transformation found
that significantly improves
fit to Gaussian distribution
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 146,7
SD 19,9
Median 147,5
Range 108 to 186
N 100 of 100
Distinct Values 53
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 98,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
COLESTEROL TOTAL
25020015010050
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent --
Constant --
Accepted by:
DateSignature
57
Gráfico XX
Diagrama de Probabilidad (Datos originales)
Fuente: EP Evaluator (Anexo 4)
De los valores para HDL-Colesterol, se extrajeron los valores atípicos o
aberrantes por medio de la prueba de Dixon, mediante el software XLSTAT 2018,
obteniendo así 99 individuos potenciales de referencia.
Gráfico XXI
Elaborado por: Reyes J. (Software XLSTAT 2018).
Copyright 1991-2017 Data Innovations LLC
Page 1Default Printed: 16 sep. 2018 11:19:18
EP Evaluator 12.0.0.11
COLESTEROL TOTAL
<Your Department> -- <Your Institution> COLESTEROL TOTAL
Central 95% Interval(N = 100)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Parametric 108 102 to 113 186 180 to 191 0,14
Alternatives
Nonparametric Index 111 <108 to 114 184 178 to >186 >0,10
Transformed Parametric -- -- -- -- --
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
CO
LES
TER
OL
TOTA
L
180
160
140
120
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
No transformation found
that significantly improves
fit to Gaussian distribution
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 146,7
SD 19,9
Median 147,5
Range 108 to 186
N 100 of 100
Distinct Values 53
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 98,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
COLESTEROL TOTAL
25020015010050
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent --
Constant --
Accepted by:
DateSignature
-4
-3
-2
-1
0
1
2
3
4
1 4 7
10
13
16
19
22
25
28
31
34
37
40
43
46
49
52
55
58
61
64
67
70
73
76
79
82
85
88
91
94
97
100
103Z-s
co
re
Observaciones
Valores Atípicos para HDL-Colesterol
58
Los valores que pasararon la prueba de Dixon fueron ingresados al software
EP Evaluator versión 12 modo de prueba.
La siguiente tabla muestra los Límites de confianza para el método de índice
no paramétrico calculado por formula exacta.
Tabla IX.- Límites de confianza para el método NO paramétrico para HDL-
Colesterol
INTERVALO CENTRAL 95%
(N=99)
INFERIOR SUPERIOR RELACIÓN DE
CONFIANZA Valor 90 % CI Valor 90 % CI
Paramétrico 24,2 21,6 a 26,8 60,2 57,6 a 62,8 0,14
Alternativas
Índice no paramétrico 24,0 <23,0 a 28,0 63,0
57,0 a
>64,0 >0,15
Transformado
paramétrico - - - - -
Fuente: EP Evaluator (Anexo 5)
La siguiente tabla muestra el análisis estadístico de los resultados obtenidos
para HDL-Colesterol, donde se observa el Intervalo para el grupo de referencia.
Tabla X.- Estadísticas de Tendencia central para HDL-Colesterol
Análisis estadístico
Media 42,23
SD 9,17
Mediana 41,0
Rango 23,0 – 64,0
Fuente: EP Evaluator (Anexo 5)
59
Según los resultados del EP Evaluator la distribución de los analitos de HDL-
Colesterol, se distribuyen según la distribución No paramétrica.
Gráfico XXII
Histograma de HDL-Colesterol
Fuente: EP Evaluator (Anexo 5).
Gráfico XXIII
Diagrama de Probabilidad (Datos originales)
Fuente: EP Evaluator (Anexo 5)
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EP Evaluator 12.0.0.11
HDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> HDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Parametric 24,2 21,6 to 26,8 60,2 57,6 to 62,8 0,14
Alternatives
Nonparametric Index 24,0 <23,0 to 28,0 63,0 57,0 to >64,0 >0,15
Transformed Parametric -- -- -- -- --
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
HD
L C
OL
ES
TE
RO
L
60
50
40
30
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
No transformation found
that significantly improves
fit to Gaussian distribution
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 42,23
SD 9,17
Median 41,00
Range 23,0 to 64,0
N 99 of 99
Distinct Values 37
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
HDL COLESTEROL
806040200
25%
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent --
Constant --
Accepted by:
DateSignature
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EP Evaluator 12.0.0.11
HDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> HDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Parametric 24,2 21,6 to 26,8 60,2 57,6 to 62,8 0,14
Alternatives
Nonparametric Index 24,0 <23,0 to 28,0 63,0 57,0 to >64,0 >0,15
Transformed Parametric -- -- -- -- --
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
HD
L C
OLE
ST
ER
OL
60
50
40
30
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
No transformation found
that significantly improves
fit to Gaussian distribution
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 42,23
SD 9,17
Median 41,00
Range 23,0 to 64,0
N 99 of 99
Distinct Values 37
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
HDL COLESTEROL
806040200
25%
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent --
Constant --
Accepted by:
DateSignature
60
De los valores para LDL-Colesterol, se extrajeron los valores atípicos o
aberrantes por medio de la prueba de Dixon, mediante el software XLSTAT 2018,
obteniendo así 99 individuos potenciales de referencia.
Gráfico XXIV
Elaborado por: Reyes J. (Software XLSTAT 2018).
Los valores que pasararon la prueba de Dixon fueron ingresados al software
EP Evaluator versión 12 modo de prueba.
La siguiente tabla muestra los Límites de confianza para el método de índice
Paramétrico calculado por formula exacta.
-3
-2
-1
0
1
2
3
1 4 7
10
13
16
19
22
25
28
31
34
37
40
43
46
49
52
55
58
61
64
67
70
73
76
79
82
85
88
91
94
97
10
0
10
3
Z-s
co
re
Observaciones
Valores Atípicos para LDL-Colesterol
61
Tabla XI.- Límites de confianza para el método Paramétrico para LDL-
Colesterol
INTERVALO CENTRAL 95%
(N=99)
INFERIOR SUPERIOR RELACIÓN DE
CONFIANZA Valor 90 % CI Valor 90 % CI
Transformado
Paramétrico 57,5 53,5 a 61,8 140,2
132,3 a
148,5 0,15
Alternativas
Paramétrico 52,4 46,4 a 58,4 135,3
129,3 a
141,3 0,14
Índice no paramétrico 56,4
<52,9 a
61,9 136,6
132,7 a
>139,3 >0,10
Fuente: EP Evaluator (Anexo 6)
La siguiente tabla muestra el análisis estadístico de los resultados obtenidos
para LDL-Colesterol, donde se observa el Intervalo para el grupo de referencia.
Tabla XII.- Estadísticas de Tendencia central para LDL-Colesterol
Análisis estadístico
Media 93,83
SD 21,14
Mediana 92,60
Rango 59,2 – 139,3
Fuente: EP Evaluator (Anexo 6)
Según los resultados del EP Evaluator la distribución de los analitos de LDL-
Colesterol, se distribuyen según la distribución Paramétrica.
62
Gráfico XXV
Histograma de LDL-Colesterol
Fuente: EP Evaluator (Anexo 6).
Gráfico XXVI
Diagrama de Probabilidad (Datos originales)
Fuente: EP Evaluator (Anexo 6).
El EP Evaluator realizó la transformación de los valores para normalizar los
datos.
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EP Evaluator 12.0.0.11
LDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> LDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Transformed Parametric 57,5 53,5 to 61,8 140,2 132,3 to 148,5 0,15
Alternatives
Parametric 52,4 46,4 to 58,4 135,3 129,3 to 141,3 0,14
Nonparametric Index 56,4 <52,9 to 61,9 136,6 132,7 to >139,3 >0,10
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LD
L C
OL
ES
TE
RO
L
120
100
80
60
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LD
L C
OL
ES
TE
RO
L
129,7
111,6
95,4
81,0
68,3
57,2
Parametric
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 93,83
SD 21,14
Median 92,60
Range 52,9 to 139,3
N 99 of 99
Distinct Values 84
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
LDL COLESTEROL
200150100500
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent 0,25
Constant 0,00
Accepted by:
DateSignature
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EP Evaluator 12.0.0.11
LDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> LDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Transformed Parametric 57,5 53,5 to 61,8 140,2 132,3 to 148,5 0,15
Alternatives
Parametric 52,4 46,4 to 58,4 135,3 129,3 to 141,3 0,14
Nonparametric Index 56,4 <52,9 to 61,9 136,6 132,7 to >139,3 >0,10
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LDL
CO
LES
TE
RO
L
120
100
80
60
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LDL
CO
LES
TE
RO
L
129,7
111,6
95,4
81,0
68,3
57,2
Parametric
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 93,83
SD 21,14
Median 92,60
Range 52,9 to 139,3
N 99 of 99
Distinct Values 84
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
LDL COLESTEROL
200150100500
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent 0,25
Constant 0,00
Accepted by:
DateSignature
63
Gráfico XXVII
Diagrama de Probabilidad (Datos transformados)
Fuente: EP Evaluator (Anexo 6)
Copyright 1991-2017 Data Innovations LLC
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EP Evaluator 12.0.0.11
LDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> LDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Transformed Parametric 57,5 53,5 to 61,8 140,2 132,3 to 148,5 0,15
Alternatives
Parametric 52,4 46,4 to 58,4 135,3 129,3 to 141,3 0,14
Nonparametric Index 56,4 <52,9 to 61,9 136,6 132,7 to >139,3 >0,10
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LDL
CO
LES
TER
OL
120
100
80
60
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LDL
CO
LES
TER
OL
129,7
111,6
95,4
81,0
68,3
57,2
Parametric
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 93,83
SD 21,14
Median 92,60
Range 52,9 to 139,3
N 99 of 99
Distinct Values 84
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
LDL COLESTEROL
200150100500
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent 0,25
Constant 0,00
Accepted by:
DateSignature
64
CONCLUSIONES
El Intervalo de Referencia definido es válido para ser utilizado en el Laboratorio
José Darío Moral para que sea reportado dentro de los informes.
Se analizaron los valores de Colesterol Total dando como resultado un
intervalo de 108 – 186 mg/dL, para HDL-Colesterol 23 – 64 mg/dL y para LDL-
Colesterol 52,9 – 139,3 mg/dL.
Los resultados obtenidos permitirán determinar con seguridad que los
Intervalos de referencia encontrados son aplicables a la población en estudio y así
entregar un resultado confiable a los pacientes.
65
RECOMENDACIONES
Cada laboratorio debe determinar los intervalos de referencia propios a su
grupo de pacientes, para que los resultados emitidos por medio de comparaciones
con los mismos sean confiables, siendo éstos de gran apoyo al médico tratante
que emite un criterio diagnóstico al evaluar dichos resultados del paciente,
garantizando y asegurando así la salud de cada persona que acude al laboratorio
clínico.
Se debería realizar un estudio a gran escala con el fin de establecer Intervalos
de Referencia propios a nuestra población.
66
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36. Sabán Ruiz, J., & Monge Maillo, B. (2012). El Colesterol HDL como factor
polivalente en la protección del endotelio. En J. Sebán Ruíz (Ed.), Control
Global del Riesgo Cardiometabólico (Días de Santos ed., Vol. 1, pág. 532).
Madrid. Recuperado el 10 de Enero de 2018, de
https://books.google.com.ec/books?id=Fh9GK1Uvm3oC&pg=PA531&dq=
ldl+y+hdl&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwi9nt3evc3YAhVE0VMKHa9WB7IQ6AEILzAB#
v=onepage&q=ldl%20y%20hdl&f=false
37. Stryer, L., Berg, J. M., & Tymoczko, J. L. (2014). Bioquímica. Barcelona,
España: Reverté, S.A.
38. Yofre, P., Fuentealba, S., Torrent, M., Finocchietto, P., Robelli, M.,
Borquéz, F., Loscar, S., Allassia, E. (Enero- marzo de 2012). Reference
intervals of biochemical determinations in the central laboratory in Trelew
Hospital. Acta Bioquím Clín Latinoam, 46(1), 15-22. Recuperado el 08 de
72
diciembre de 2017, de Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana. Vol. 46:
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-
29572012000100003
73
ANEXOS
Anexo # 1
CONSENTIMIENTO INFORMADO
Guayaquil, del 2018
Yo, ……………………………………….., voluntariamente autorizo que mi
muestra de sangre sea utilizada para la participación en el estudio de
investigación: Intervalos de Referencia Biológico para Colesterol, HDL
Colesterol y LDL Colesterol en población adulta joven en el Laboratorio
José Darío Moral.
f.____________________
C.I #
74
Anexo # 2
ENCUESTA PARA EL TRABAJO DE TITULACIÓN
TEMA: INTERVALOS DE REFERENCIA BIOLÓGICO PARA COLESTEROL, HDL COLESTEROL Y LDL COLESTEROL EN POBLACIÓN ADULTA JOVEN.
Toda la información solicitada es estrictamente confidencial y se usa exclusivamente para determinar intervalos de referencia para el diagnóstico de las enfermedades cardiovasculares de la población que asisten al laboratorio clínico Guayaquil.
PACIENTE # MUESTRA # C.I.:
APELLIDOS: NOMBRE: TELÉFONO:
DIRECCIÓN:
PROVINCIA: CANTÓN:
EDAD: SEXO: M F RAZA:
ALTRURA: PESO:
OCUPACIÓN:
¿SE CONSIDERA UD. UNA PERSONA SANA?
SI NO
¿HACE UD. EJERCICIO REGULARMENTE? SI NO
SI ES ASÍ, CON QUE FRECUENCIA?
1 vez a la semana
3 veces a la
semana
1 vez al día
Toda la semana
¿CUÁNTO TIEMPO? QUÉ EJERCICIO
REALIZA?
¿HA ESTADO ENFERMO RECIENTEMENTE?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿CUÁNDO? ¿QUÉ TUVO?
¿ESTÁ TOMANDO ALGÚN MEDICAMENTO? SI NO
75
¿CUÁL?
¿ESPECIFÍQUE CUÁL ES LA RAZÓN?
¿SUFRE DE PROBLEMAS DE TENSIÒN ARTERIAL?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿QUÉ MEDICAMENTO TOMA?
¿SUFRE DE PROBLEMAS DE TIROIDES? SI NO
SI ES ASÍ, ¿QUÉ MEDICAMENTO TOMA?
¿ESTÁ TOMANDO SUPLEMENTOS VITAMÍNICOS?
SI NO
SÍ ES ASÍ ¿CUÁL?
¿CONSUME UD. ALGUNA DIETA EN ESPECIAL?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿POR FAVOR DESCÍBALA?
¿UD. BEBE ALCOHOL FRECUENTEMENTE? SI NO
SÍ ES ASÍ, ¿CON QUÉ FRECUENCIA?
¿UD, BEBIÒ ALCOHOL LAS ÚLTIMAS 24 HORAS?
SI NO
¿UD. FUMA? SI NO
SI ES ASÍ, ¿CON QUÉ FRECUENCIA?
¿UD, CONSUME DROGAS? SI NO
SI ES ASÍ, CON QUÉ FRECUENCIA?
¿QUÉ TIPO DE DROGA?
¿ACTUALMENTE SE ENCUENTRA CON CUIDADOS MÉDICOS?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿POR QUÉ?
¿HA SIDO HOSPITALIZADO RECIENTEMENTE?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿POR QUÉ?
¿CUÁNDO?
76
¿EXISTEN TRASTORNOS DE SALUD EN SU FAMILIA?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿DESCRÍBALA?
¿UD. SE AUTOMEDICA? SI NO
SI ES ASÍ, ¿QUÉ MEDICAMENTO TOMA?
¿CON QUÉ FRECUENCIA?
¿ESTÀ USANDO IMPLANTES O ANTICONCEPTIVOS ORALES?
SI NO
SI ES ASÌ ¿CUÁL?
¿HA TOMADO ALGÚN MEDICAMENTO PARA EL RESFRIADO?
SI NO
SI ES ASÍ ¿CUÁL?
¿CUÁNDO?
¿HA TOMADO ALGÚN MEDICAMENTO PARA LA ALERGIA?
SI NO
SI ES ASÍ, CUÁL?
¿CUÁNDO?
¿ESTÁ TOMANDO UD. PASTILLAS PARA ADELGAZAR?
SI NO
¿HA TOMADO ANTIÁCIDOS RECIENTEMENTE?
SI NO
SI ES ASÍ, ¿CUÁL?
¿CUÁNDO?
¿ESTA MENSTRUANDO? SI NO
SI ES ASÍ, ¿CUÁNDO?
¿CUANDO FUE SU ULTINO PERIODO?
¿ESTA EMBARAZADA? SI NO
¿ESTA DANDO DE LACTAR? SI NO
77
Anexo # 3
RESULTADOS DE LAS ENCUESTAS DE LA INVESTIGACIÓN
CODIGO SEXO EDAD TALLA
mt PESO
Kg IMC COL HDL-c LDL-c
UGTM06 Hombre 23 1,69 59,2 20,7 167 44 97,7
UGTM07 Mujer 24 1,46 50,5 23,6 160 57 94,5
UGTM08 Mujer 23 1,51 46,5 20,39 129 42 68,3
UGKC10 Hombre 23 1,61 60,1 23,2 144 36 100,5
UGKP17 Mujer 23 1,55 57 23,7 157 39 114,5
UGKP20 Hombre 23 1,60 53,3 20,82 165 24 126,8
UGKP22 Hombre 23 1,65 57,7 21,2 160 34 103
UGGG25 Hombre 22 1,69 65 22,7 148 37 133,2
UGGG29 Mujer 23 1,54 46,8 19,7 149 44 106,1
UGEC34 Mujer 22 1,50 43,5 19,3 164 48 102
UGEC35 Hombre 21 1,60 55,5 21,6 144 34 125
UGG038 Hombre 22 1,67 64,6 23,1 117 35 60,4
UGG042 Hombre 22 1,73 72,7 24,2 170 38 136,2
UGMM49 Mujer 23 1,60 59 22,9 126 41 78
UGES58 Mujer 22 1,54 46,4 19,5 154 39 86,4
UGES60 Mujer 22 1,55 58,8 24,47 109 63 66,5
UGBG69 Hombre 23 1,79 66,3 20,7 153 42 121,9
DM001 Mujer 20 1,61 63 24,3 148 37 99
78
DM002 Mujer 18 1,55 49 20,4 141 55 79,1
DM003 Mujer 20 1,60 49,5 19,3 124 38 76
DM004 Mujer 23 1,50 49,5 21,9 115 35 58,4
DM006 Hombre 23 1,79 79 24,6 124 28 103,8
DM007 Hombre 22 1,65 68 24,9 102 30 83
DM008 Mujer 21 1,63 65 24,4 113 23 71,3
DM009 Mujer 23 1,68 70 24,8 133 34 78,9
DM010 Hombre 24 1,64 67 24,9 124 32 90,8
DM011 Mujer 20 1,56 60 24,6 127 40 73,3
DM012 Mujer 19 1,57 51 20,6 126 42 83
DM013 Mujer 20 1,60 48,5 18,9 117 43 67,1
DM014 Hombre 22 1,65 68 24,9 178 58 128
DM015 Hombre 20 1,66 59 21,4 165 52 94,5
DM017 Mujer 20 1,54 59 24,8 139 37 78
DM018 Mujer 19 1,61 51 19,6 142 40 73
DM020 Mujer 20 1,63 54 20,3 119 43 61,9
DM021 Hombre 22 1,69 70 24,5 124 32 79,3
DM022 Mujer 23 1,57 60 24,3 143 24 120,1
DM023 Mujer 22 1,53 50 21,3 102 31 52,9
DM024 Mujer 20 1,59 46 18,1 163 55 93,2
DM026 Hombre 21 1,70 58 19,9 116 44 68,2
DM027 Mujer 20 1,62 53 20,1 148 39 92,6
DM029 Mujer 20 1,51 57 24,9 108 30 71,7
79
DM030 Mujer 25 1,60 62 24,2 102 35 54,3
DM031 Hombre 22 1,66 55 19,9 144 52 98,4
DM032 Hombre 22 1,72 65 21,9 155 47 93,4
DM034 Mujer 23 1,65 50,9 18,7 151 47 92,2
DM035 Mujer 23 1,55 55 22,8 123 25 69,7
DM036 Hombre 24 1,72 73 24,6 138 57 76,7
DM037 Hombre 18 1,71 65 22,2 146 43 90,4
DM038 Hombre 22 1,60 61 23,8 157 39 107
DM039 Mujer 22 1,55 47 19,5 151 42 89
DM040 Mujer 21 1,65 65 23,8 132 39 79
DM041 Mujer 22 1,65 57,7 21,1 171 53 80
DM042 Mujer 24 1,58 62 24,8 157 36 90
DM044 Mujer 25 1,49 55 24,7 177 50 91,9
DM046 Hombre 20 1,66 60 21,7 157 38 90
DM047 Mujer 22 1,61 64 24,6 141 36 81
DM048 Mujer 21 1,60 56 21,8 163 37 73
DM050 Mujer 20 1,48 52 23,7 166 47 93
DM051 Hombre 25 1,80 80 24,6 127 29 102
DM052 Mujer 22 1,55 52 21,6 145 35 97
DM054 Mujer 20 1,48 49 22,3 124 54 153
DM055 Mujer 25 1,54 56 23,6 147 41 98
DM056 Mujer 21 1,65 60 21,9 151 64 72
DM057 Mujer 21 1,68 66 23,3 151 46 101
80
DM058 Mujer 18 1,55 48 19,9 179 63 94
DM059 Hombre 20 1,74 75 24,7 185 40 73
DM061 Mujer 23 1,55 50 20,8 153 51 91
DM062 Mujer 22 1,59 59 23,3 139 53 141
DM063 Mujer 18 1,61 55 21,2 155 50 87
DM064 Mujer 19 1,54 45 18,9 163 74 104
DM065 Mujer 22 1,62 63 23,9 145 55 60
DM066 Mujer 22 1,72 56 18,9 153 50 76
DM067 Mujer 21 1,62 64 24,3 114 38 73
DM068 Hombre 21 1,70 70 24,2 178 51 125,9
DM069 Hombre 25 1,63 60 22,5 172 55 111,6
DM070 Mujer 20 1,61 62 23,9 169 30 111,6
DM071 Mujer 19 1,53 45 19,2 138 49 83
DM072 Mujer 20 1,63 61 22,9 128 42 69,9
DM074 Hombre 18 1,77 78 24,8 183 47 128
DM075 Mujer 24 1,58 50 19,9 147 41 98
DM076 Mujer 22 1,50 52 23,1 163 41 130,2
DM077 Mujer 18 1,50 54,4 24,1 162 43 142,6
DM078 Hombre 21 1,79 80 24,9 160 35 139,3
DM079 Hombre 22 1,69 62 21,7 145 37 112,4
DM080 Mujer 23 1,62 65 24,7 177 39 136,2
DM081 Mujer 22 1,48 48 21,9 164 73 110
DM082 Mujer 22 1,62 65 24,7 120 35 97,8
81
DM083 Mujer 19 1,60 55 21,4 141 47 98,4
DM084 Mujer 21 1,72 60 20,2 186 66 142,8
DM085 Hombre 22 1,75 76 24,8 142 57 96,1
DM087 Mujer 21 1,55 49 20,3 154 71 100
DM088 Mujer 21 1,49 52 23,4 113 42 78,6
DM089 Mujer 19 1,54 59 24,8 114 54 92,3
DM090 Mujer 25 1,55 51 21,2 133 48,5 91,3
DM091 Hombre 21 1,70 60 20,7 124 55,5 75,6
DM092 Hombre 24 1,70 70 24,2 183 48 124
DM093 Hombre 25 1,65 68 24,9 164 28 129,1
DM095 Mujer 20 1,60 62 24,2 144 43 95,6
DM096 Mujer 18 1,55 49 20,3 125 52 87,3
DM097 Mujer 19 1,47 54 24,9 163 42 125,1
DM098 Hombre 18 1,80 72 22,2 173 37,4 137
DM099 Mujer 21 1,55 51 21,2 163 33 132,7
DM100 Hombre 22 1,60 55 21,4 130 37 97,4
82
Anexo # 4
REPORTE DE LA APLICACIÓN EP EVALUATOR
Copyright 1991-2017 Data Innovations LLC
Page 1Default Printed: 16 sep. 2018 11:19:18
EP Evaluator 12.0.0.11
COLESTEROL TOTAL
<Your Department> -- <Your Institution> COLESTEROL TOTAL
Central 95% Interval(N = 100)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Parametric 108 102 to 113 186 180 to 191 0,14
Alternatives
Nonparametric Index 111 <108 to 114 184 178 to >186 >0,10
Transformed Parametric -- -- -- -- --
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
CO
LE
ST
ER
OL
TO
TA
L
180
160
140
120
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
No transformation found
that significantly improves
fit to Gaussian distribution
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 146,7
SD 19,9
Median 147,5
Range 108 to 186
N 100 of 100
Distinct Values 53
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 98,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
COLESTEROL TOTAL
25020015010050
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent --
Constant --
Accepted by:
DateSignature
83
Anexo # 5
REPORTE DE LA APLICACIÓN EP EVALUATOR
Copyright 1991-2017 Data Innovations LLC
Page 1Default Printed: 16 sep. 2018 11:39:41
EP Evaluator 12.0.0.11
HDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> HDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Parametric 24,2 21,6 to 26,8 60,2 57,6 to 62,8 0,14
Alternatives
Nonparametric Index 24,0 <23,0 to 28,0 63,0 57,0 to >64,0 >0,15
Transformed Parametric -- -- -- -- --
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
HD
L C
OL
ES
TE
RO
L
60
50
40
30
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
No transformation found
that significantly improves
fit to Gaussian distribution
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 42,23
SD 9,17
Median 41,00
Range 23,0 to 64,0
N 99 of 99
Distinct Values 37
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
HDL COLESTEROL
806040200
25%
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent --
Constant --
Accepted by:
DateSignature
84
Anexo # 6
REPORTE DE LA APLICACIÓN EP EVALUATOR
Copyright 1991-2017 Data Innovations LLC
Page 1Default Printed: 16 sep. 2018 11:49:14
EP Evaluator 12.0.0.11
LDL COLESTEROL
<Your Department> -- <Your Institution> LDL COLESTEROL
Central 95% Interval(N = 99)
Lower UpperValue 90% CI Value 90% CI Ratio
Confidence
Transformed Parametric 57,5 53,5 to 61,8 140,2 132,3 to 148,5 0,15
Alternatives
Parametric 52,4 46,4 to 58,4 135,3 129,3 to 141,3 0,14
Nonparametric Index 56,4 <52,9 to 61,9 136,6 132,7 to >139,3 >0,10
Confidence Limits for Nonparametric Index method computed by exact formula.
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LD
L C
OLE
ST
ER
OL
120
100
80
60
Nonparametric 90% CI Parametric
(Original Data)
Probability Plot
True Gaussian SDI
3210-1-2-3
LD
L C
OLE
ST
ER
OL
129,7
111,6
95,4
81,0
68,3
57,2
Parametric
(Transformed Data)
Probability Plot
Reference Interval Estimation: Combined
Selection Criteria
Bounds None
Filter None
Statistics
Mean 93,83
SD 21,14
Median 92,60
Range 52,9 to 139,3
N 99 of 99
Distinct Values 84
Zeroes 0
Central 95% Index 2,5 to 97,5
Analyst JOSELYN
Expt Date 16 sep. 2018
LDL COLESTEROL
200150100500
20%
15%
10%
5%
0%
Histogram
Normalizing Transformation
Exponent 0,25
Constant 0,00
Accepted by:
DateSignature
85
Anexo # 7
INSERTO COLESTEROL TOTAL
86
Anexo # 8
INSERTO HDL-COLESTEROL
87
Anexo # 9
INSERTO LDL-COLESTEROL
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