Post on 22-Jan-2016
Entrenamiento de la Practica:Prueba de modificación genética de
alimentos mediante PCR
Principio de preparación de una PCR
10`, 72 °CCompleting
60``, 94 ° Denaturation
40 cycles
120``, 94°C Denaturation
60``, 55°CAnnealing
120``, 72 °CElongation
I. Extracción de ADN
1. Preparación
1.1 Etiqueta la parte superior de 2 tubos con tapa de rosca con:
- No-GMO (- GMO)- muestra de comida (T)y el número de tu grupo.
1.2 Pipetea 500 µl de homo-geneizado InstaGene-Matrix dentro de cada tubo
Alli debe haber la misma cantidad de gotas en los dos tubos
sobrenadante
gotas
2. Extracción de ADN de alimento no modificado
genéticamente (no-GMO)
2.1 Pesa 1 g de alimento no-OGM y ponlo dentro del mortero
2.2 Añade 5 ml de H2O destilada!
2.3 Homogeniza la mezcla durante unos cinco minutos
2.4 Añade 5 ml de H2Odest. y
machaca hasta que esté lo suficientemente fluido como para pipetear la mezcla
2. 2. Extracción de ADN de alimento no modificado
genéticamente (non-GMO)
2.5 Pipetea 25 µl del alimento mezclado dentro del líquido del tubo con tapón enroscado etiquetado como “-GMO”!
2.6 Cierra el el tubo y agítalo bien golpeandolo ligeramente con los dedos!
Para evitar la contaminación con material„+GMO DNA“ „-GMO material“ debería ser extraido primero
El mortero y su mano deberían ser limpiados con un detergente y enjuagados con H2O destilada!
3. Extracción de ADN de una muestra de alimento
3.1 Pesa 1 g de muestra de comida para ser testada (T) y ponla en el mortero !
3.2 Añade 5 ml de H2Odest.!
Por favor, usa guantes!!!
3.3 Homogeniza la mezcla durante unos cinco minutos!
3.4 Añade de nuevo 5 ml de H2Odest. y
machaca hasta que esté lo suficientemente fluido como para pipetear la mezcla
3. Extracción de ADN de una muestra de alimeto
3.5 Pipetea 25 µl de la mezcla de alimento dentro del líquidodel tubo con tapón de rosca etiquetado como “T”!
3.6 Cierra el tubo y agítalo bien mediante suaves golpes con los dedos en el tubo!
4. Desnaturalización de enzimas a 95°C
4.1 Coloca los dos tubos con tapón de rosca en un baño con agua a 95oC durante 5 minutos!
4.2 Centrifuga los tubos durante 5 minutos a 13000 rpm!
4.3 Pon 50 µl de sobrenadante dentro de nuevos tubos que han sido etiquetados antes!
Atención: Coge solo el sobrenadante sin las gotas de InstaGene, retirándolo del ADN de alimento control y del test de ADN del alimento.
II. Preparación: PCR y electroforesis en grupo de trabajo
Según la tarea asignada a cada grupo, este prepara una parte de la PCR y de la electroforesis para los demás grupos .
III. Preparación y desarrollo de la PCR
1. Preparación de los tubos de PCR
1.1 Numera tus tubos de PCR del 1-6! 1.2 Pipetea las preparaciones de PCR
según la siguiente tabla!
1.3 Mezcla tus preparaciones de PCR pipeteando hacia arriba y abajo!
1.4 Enfría tus preparaciones de PCR en hielo hasta empezar la PCR!
Nr Mezcla maestra
ADN
1 10 µl PMM 10 µl -GMO food control DNA
2 10 µl GMM 10 µl -GMO food control DNA
3 10 µl PMM 10 µl Test food DNA (T)
4 10 µl GMM 10 µl Test food DNA (T)
5 10 µl PMM 10 µl +GMO control DNA
6 10 µl GMM 10 µl +GMO control DNA
Desarrolla la PCR según el programa de temperatura del termociclador!
Presta atención a la posición de tus muestras en el termociclador para evitar confusiones! Asegurate de que tus tubos están adecuadamente cerrados!
2. Desarrollo de PCR
Cycler-Program
Overview of the tubes in the cycler
IV. Evidencia de productos PCR por electroforesis (Agarosa/PAGE)
Según tu tarea asignada haz evidentes los productos PCR, por medio del desarrollo de electrophoresis en gel de Agarosa o en gel de Poliacrilamida
1. Según tu tarea tiñe tus geles y analízalos!
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