Post on 05-Oct-2021
Biol 3725 L
Laboratorio # 7 Supervivencia de diferentes bacterias en el ambiente
Objetivos Determinar qué factores pueden afectar la
supervivencia de los microorganismos.
Conocer qué estrategias desarrollan los organismos para supervivencia.
Evaluar si diferentes organismos tienen la misma capacidad de sobrevivir en diferentes ambientes.
Area of wood contaminated with small bacteria
Introducción Los microorganismos
son capaces de adaptarse a una gran variedad de factores ambientales. ◦ La adaptación de los
microorganismos es un ajuste complejo en su bioquímica y genética que le permiten largos periodos de supervivencia y crecimiento.
Para muchos microorganismos factores ambientales afectan las funciones de las enzimas metabólicas (controlan crecimiento microbiano).
Es importante saber diferenciar entre crecimiento en un ambiente y tolerancia (supervivencia sin crecimiento).
Crecimiento y Tolerancia Crecimiento de bacteria:
Producir biomasa y mecanismos necesarios para sobrevivir. Es el desarrollo y replicación del organismo.
Tolerancia a un ambiente:
Capacidad de un organismo de permanecer con vida en condiciones no favorables
Ejemplo: producción de esporas
Factores que afectan la supervivencia Factores físicos
Temperatura
Rango óptimo es variable para cada organismo
Psicrófilos (temperaturas bajas: 4-15 °C)
Mesófilos (Temperatura ambiente: 20- 45 °C)
Termófilos (Temperaturas altas: mas de 45 °C)
Requerimiento de Gases
Oxígeno y CO2
Aerobios, Anaerobio Facultativos y estrictos
Presión Osmótica
Mayoría existen en condiciones isotónicas o hipotónicas.
Staphylococcus aureus puede crecer en NaCl en concentraciones de 0.1% hasta 20%
pH
Acidofílos y alcalinofílos
Factores que afectan la supervivencia
Factores Nutricionales
Fuente de Carbono
azúcares
Nutrientes
Nitrógeno
Fósforo
Minerales y Vitaminas
Estrategias de supervivencia Asociaciones microbianas
Simbióticas Mutualismo
Los dos se benefician Comensalismo
Uno de los dos se beneficia, el otro ni se perjudica ni se beneficia
Parasitismo Uno de los dos se beneficia,
el otro se perjudica
No simbióticas Sinergismo
Miembros cooperan y comparten nutrientes
Antagonismo Algunos inhiben o destruyen
a otros
Desarrollo de estructuras de supervivencia
Esporas
Bacillus spp.
Desarrollo de mecanismos de protección
Agentes antimicrobianos
Ejemplo: B- lactamasa
Esporas
A 48-hr-old culture of a large spore-forming bacterium with unusually large spores. Isolated from contaminated adhesive. Spore stain preparation
A 48-hr-old culture of a large spore-forming bacterium. Isolated from contaminated adhesive. Stained with phenol cotton blue
Desarrollo de biopelículas
Biopelícula de S. aureus en un catéter.
Biopelículas: comunidades complejas de microorganismos y polímeros extracelulares, con capacidad de colonizar y posteriormente fijarse y desarrollarse sobre superficies.
Se pueden encontrar en todos los medios donde existan bacterias: en el medio natural, clínico o industrial
Requerimientos: entorno hidratado y una mínima presencia de nutrientes para desarrollarse.
Productores más comunes de biopelículas:
Bacillus - contaminantes habituales del medioambiente.
Enterobacteriaceae - contaminantes fecales
Pseudomonas - contaminantes habituales del agua y de alimentos proteicos, especialmente los de origen animal.
Staphylococcus - contaminantes de la piel de animales y humanos.
Biopelícula de Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas spp
Práctica Se utilizarán dos microorganismos por sección de
laboratorio.
El material está estéril
Inocular los cuadritos el primer día y transferir uno
Usando técnicas asépticas
Cada semana transferir otro cuadrito a un nuevo tubo
Observar supervivencia por 4 semanas!
Creció en el tubo de TBS
Práctica Supervivencia de microorganismos
1 2 3 4 5 6 1- Staphylococcus epidermidis 2- Enterococcus faecium 3- Escherichia coli 4- Serratia marcescens 5- Bacillus cereus 6- Klebsiella spp. 7- Salmonella 8- Proteus 9- Citrobacter 10- Staphylococcus aureus 11- Pseudomonas 12- Morganella
7 8 9 10 11 12
PBS
Inocular cuadrito de esponja con 50ul de cultivo
usando tecnicas asepticas
E. coli
50 ul
Cada semana se remueve un cuadrito y se coloca
en un tubo esteril que contiene TSB
0 7 14 21 28 dias
1
semana
2
semana
3
semana
4
semana
Todos los cuadritos se
Inoculan el mismo dia y
permanecen a temperatura
ambiente
Los tubos se incuban a 37C por 24 o 48 hrs
Placa
Petri
esteril
Placa
Petri
esteril
Control Negativo Estos cuadritos NO serán inoculados, pero si
Transferidos semanalmente a tubos de TBS.
0 7 14 21 28 días
1
semana
2
semana
3
semana
4
semana
Los tubos se incuban a 37C por 24 o 48 hrs
Resultados: 0 7 14 21 28
1- Staphylococcus epidermidis 2- Enterococcus faecium 3- Escherichia coli 4- Serratia marcescens 5- Bacillus cereus 6- Klebsiella spp. 7- Salmonella 8- Proteus 9- Citrobacter 10- Staphylococcus aureus 11- Pseudomonas 12- Morganella 13- Negative control
Leyenda:
+ Crecimiento = turbidez
- No crecimiento = no cambio
Repaso ¿Qué factores pueden afectar la supervivencia de una
bacteria?
¿ Qué estrategias puede desarrollar un microorganismo para sobrevivir en el ambiente?
¿ Qué es una biopelícula?
¿ Cuál es su hipótesis con relación a los microorganismos y los materiales inoculados?