METODO GRIESS PARA LA METODO GRIESS PARA LA DETECCION DE TB MDRDETECCION DE TB MDR

LabLab. Nac. de Referencia de . Nac. de Referencia de MicobacteriasMicobacterias

CNSP/INSCNSP/INS

LUIS ASENCIOS S.

RETOS PARA EL LABORATORIO

Desarrollar una prueba simple, precisa, rDesarrollar una prueba simple, precisa, ráápida, pida, de bajo costo y que puede ser desarrollada en de bajo costo y que puede ser desarrollada en el nivel de atenciel nivel de atencióón primaria y que produzcan n primaria y que produzcan resultados rresultados ráápidos en el mismo dpidos en el mismo díía.a.

Simplificar el Simplificar el DxDx de TB, incluyendo los BK(de TB, incluyendo los BK(--) y ) y TB extrapulmonar con el diseTB extrapulmonar con el diseñño de una prueba o de una prueba de mayor Sensibilidad y de mayor Sensibilidad y EspecificiadadEspecificiadad y tenga y tenga majormajor accesibilidad.accesibilidad.

RETOS PARA EL LABORATORIO

Prueba para realizar monitoreo del tratamientoPrueba para realizar monitoreo del tratamiento

Prueba para identificar rPrueba para identificar ráápidamente la pidamente la resistencia a drogas de 1ra y 2da lresistencia a drogas de 1ra y 2da lííneanea

Prueba para Prueba para DxDx. infecci. infeccióón latente y determinar a n latente y determinar a la progresila progresióón a la enfermedad activa.n a la enfermedad activa.

OMS :Global Plan VIOMS :Global Plan VI

Para fin de 2015, se espera que los Para fin de 2015, se espera que los paisespaisesrealicen realicen PSPS al 20% de los casos nuevos al 20% de los casos nuevos con riesgo de TB MDR y en 100% de los con riesgo de TB MDR y en 100% de los casos con antecedentes de tratamiento.casos con antecedentes de tratamiento.

Tuberculosis Tuberculosis multidrogomultidrogo--resistente resistente (TB MDR(TB MDR))

La OMS, define la TB MDR como resistencia simultLa OMS, define la TB MDR como resistencia simultáánea nea por lo menos, por lo menos, isoniacidaisoniacida y rifampicina (ny rifampicina (núúcleo del cleo del tratamiento de la TB primaria).tratamiento de la TB primaria).

La TB MDR es una forma emergente de la enfermedad La TB MDR es una forma emergente de la enfermedad que es mque es máás difs difíícil de tratar y curarcil de tratar y curar

El tratamiento es mEl tratamiento es máás largo (aproximadamente 18 a 24 s largo (aproximadamente 18 a 24 meses)meses)

El tratamiento es con medicamentos de 2da El tratamiento es con medicamentos de 2da LineaLinea..

Pruebas RPruebas Ráápidaspidas

Son Pruebas que detectan la resistencia a Son Pruebas que detectan la resistencia a isoniacidaisoniacida y rifampicina de 1 a 4 semanas. y rifampicina de 1 a 4 semanas.

Son pruebas directas se realizan a partir de Son pruebas directas se realizan a partir de muestras de esputo, sin necesidad del muestras de esputo, sin necesidad del aislamiento de la bacteria por cultivo. aislamiento de la bacteria por cultivo.

De esta forma, las pruebas rDe esta forma, las pruebas ráápidas, facilitan pidas, facilitan la eleccila eleccióón de un esquema adecuado de n de un esquema adecuado de tratamiento al diagnosticar o descartar la TB tratamiento al diagnosticar o descartar la TB MDR en forma precozMDR en forma precoz

• El método Griess se basa en la determinación de la actividad enzimática de la bacteria M. tuberculosis, que en cultivos de crecimiento activo reduce el nitrato a nitrito que es detectada al incorporar el reactivo de Griessdando como resultado una reacción colorimétrica.

MetodoMetodo GriessGriess--FundamentoFundamento

Brindar un técnica sencilla, confiable, “rápida” y económico que permita examinar un gran número de muestras a fin de seleccionar a aquellos pacientes que pudieran estar potencialmente infectados con cepas M. tuberculosis resistente o multirresistente(MDR).

Objetivo.-

Captación SR (PS, CS, Hospital)

1. Nunca Tratado

2. Antes Tratado (Recaídas, abandonos recuperados )

FluxogramaDel P.S /C.S. al Lab. DISA que procesa Prueba Rápida.

Laboratorio implementado con prueba Griess

INS PS 1ra y 2 da Linea

BK(+)

Laboratorio

C.S.

Llenar Solicitud de Investigación Bacteriológica

Solicitud

MDR

NetLab

GestiGestióón en Enfermern en EnfermerííaaDetecciDeteccióón del Sintomn del Sintomáático Respiratoriotico Respiratorio

Examinar al sintomático respiratorio identificado y capacitar para la recolección de la muestra.

GestiGestióón en Enfermern en EnfermerííaaDetecciDeteccióón del Sintomn del Sintomáático Respiratoriotico Respiratorio

Es la actividad de salud

pública orientada a

identificar precozmente

a las personas que

contagian la

tuberculosis.

LABORATORIOLABORATORIO

DIGESTIONDIGESTION-- DESCONTAMINACION E DESCONTAMINACION E INOCULACION A MEDIOSINOCULACION A MEDIOS

-Para cada muestra, preparar un set de 5 tubos de medio L-J

3 tubos – control de crecimiento 1 tubo – con RIF1 tubo – con INH2 tubos – L-J para otras pruebasIncubar a 37 C (leer a los 14, 21 y 28 días,

según sea necesario) (Ej. Si el control no es positivo a los 14 días, leer a los 21 días, etc.)

Siembra de la Muestra

INTERPRETACION DE INTERPRETACION DE RESULTADOSRESULTADOS

1. Se considera que un aislamiento es sensible a la droga, si al comparar el tubo “control” con los tubos que contienen droga no se observa ningún cambio de color o el cambio es muy leve.

2. Un aislamiento se considera resistente, si hay cambio de color en el tubo que contiene la droga igual o mayor al del tubo “control”.

Continuación …

3. La prueba no se consideraráválida, si no hay ningún cambio de color en el tubo control. Estas muestras se deberán cultivar por métodos de la rutina.

C INH SM EMB RMP

Cepa M. tuberculosis H37Rv, sensible a las cuatro drogas estudiadas.

C INH RMP

Cepa M. tuberculosis resistente a INH y sensible al resto de las drogas.

C INH RMP

Cepa M. tuberculosisresistente a INH - RMP .

Solicitud de Prueba de Sensibilidad en pacientes con sospecha de TB MDR según normas de la Estrategia

de Control de Tuberculosis

GRIESSPacientes ,Baciloscopìas positivas (+, ++ o +++)

MDRRIF= Resistente

INH=Resistente

RIF= Sensible

INH= Sensible

RIF= Resistente

INH= Sensible

RIF= Sensible

INH=Resistente

Enviar cepa al INS para PS 1ra y 2da.

Línea. El resultado al EE

SS

Enviar el resultado al

EE SS

Enviar cepa al INS para PS 1ra y 2da. Línea y resultado al

EE SS

Enviar cepa al INS para PS 1ra a y 2da. Línea y resultado al

EE SS

RIFAMPICINA: S= 100% E=100%

ISONIACIDA: S=97% E=96%

RIFAMPICINA: S= 100% E=100%ISONIACIDA: S=93% E=100%

RIFAMPICINA: S= 94% E=100% VPP = 100% VPN= 92%

ISONIACIDA: S=99.1% E=100% VPP= 100% VPN=98%

Ventajas del MVentajas del Méétodo todo GriessGriess sobre otras sobre otras pruebas rpruebas ráápidaspidas

Simplicidad de la tSimplicidad de la téécnicacnica Bajo costo (2 dBajo costo (2 dóólares)lares) Bioseguridad Bioseguridad Equipos convencionalesEquipos convencionales Tiempo de obtenciTiempo de obtencióón del resultado de 2 a n del resultado de 2 a

4 semanas4 semanas

Desventajas de Desventajas de GriessGriess

• Se requieren muestras de esputo positivos.

• No se puede calcular con precisión la concentración de las UFC.

• Como es una muestra directa puede estar sujeta a contaminación.

MUCHAS GRACIAS

e-mail: luisasencioss@yahoo.es