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LIFE11 ENV/ES/000569 Acción B3. Desarrollo de una mezcla de bacterias apropiadas para la degradación de los ingredientes de la formulación de detergente Development of a bacterial consortium suitable for the degradation of detergent compounds + Mixture of Detergents and Microorganismes LIFE+ MINAQUA Proyecto de demostración de ahorro de agua en instalaciones de lavado de vehículos mediante el uso de detergentes innovadores y tratamiento natural de las aguas residuales Demonstration project for water in car wash premises using innovative detergents and soft treatment systems Julio, 2015
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LIFE11 ENV/ES/000569
Acción B3.
Desarrollo de una mezcla de bacterias apropiadas
para la degradación de los ingredientes de la
formulación de detergente
Development of a bacterial consortium suitable for the
degradation of detergent compounds + Mixture of
Detergents and Microorganismes
LIFE+ MINAQUA Proyecto de demostración de ahorro de agua en instalaciones de lavado
de vehículos mediante el uso de detergentes innovadores y tratamiento
natural de las aguas residuales
Demonstration project for water in car wash premises using innovative
detergents and soft treatment systems
Julio, 2015
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Acción B3. Microorganismos 3/29
ÍNDICE DE CONTENIDOS
1. INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 5
2. DESCRIPCIÓN Y PREPARACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS ..................................... 6
3. DESCRIPCIÓN DEL BIOREACTOR Y CONDICIONES DEL EXPERIMENTO. ........................ 7
4. ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS RECOGIDAS DEL REACTOR ............................................. 8
5. RESULTADOS ............................................................................................................. 9
6. CONCLUSIONES ....................................................................................................... 12
ANEXO 1. CROMATOGRAMAS ........................................................................................ 13
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1 Descripción de las muestras analizadas .............................................................. 8
Tabla 2. Relación de muestras analizadas provenientes del Bioreactor.......................... 8
Tabla 3. Condiciones cromatográficas de separación .................................................... 10
Tabla 4. Condiciones de trabajo del detector de masas ................................................ 11
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Bioreactor funcionando con muestra de agua residual de Montfullà .............. 7
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1. INTRODUCCIÓN
El racional de este paquete de trabajo es combinar una serie de cepas de lactobacillus,
seleccionadas en anteriores proyectos en el IQS con las formulaciones de detergentes
previamente optimizadas en la acción B1. La combinación de cepas estudiadas se
desarrolló para aguas residuales con un contenido mucho mayor en materia orgánica
(purines), y el objetivo es comprobar como se comportan en un ambiente con menos
carga contaminante.
La idea final es que el coctel de bacterias ayude a la biodegradación de la materia
orgánica presente y sobre todo a estabilizar la población bacteriana existente en las
aguas residuales provenientes del sistema de lavado de coches.
El plan de trabajado desarrollado se detalla a continuación:
1. Combinar las formulaciones de detergentes y ceras optimizadas en la acción B1
y B2, respectivamente, con el cocktail de microorganismos existentes en el IQS.
2. Incubación de la mezcla durante 2 semanas en un bioreactor a 20ºC y 36ªC. Se
planteó la posibilidad de trabajar a temperatura de 10ºC para simular las
condiciones de invierno. Se descartó esta hipótesis con la idea de observar el
comportamiento de los bióticos en las mejores condiciones experimentales. En
el caso que los resultados obtenidos hubieran sido más concluyentes se hubiera
realizado el experimento comentado
3. Recogida de muestra cada dos días y análisis de contenido en materia orgánica
de la muestra (TOC). Este experimento se realiza como control para comprobar
que no se ha producido un mal funcionamiento del microreactor durante los 7
días que dura el experimento
4. Evaluación de la degradación de los componentes de las formulaciones
mediante cromatografía de gases y cromatografía de líquidos acoplada a
espectrometría de masas (HPLC-MS)
5. Preparación de la mezcla de cepas para su uso en el sistema de lavado de
coches (acción B5).
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2. DESCRIPCIÓN Y PREPARACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS
La fórmula propuesta para el inóculo de microorganismos se basa en la mezcla de dos
tipos de cepas de lactobacilos:
Lactobacillus rhamnosus: Lactobacillus rhamnosus GG (LGG), ATCC 53103 fue
aislado originalmente a partir de muestras fecales de un adulto sano por Sherwood
Gorbach y Barry Goldwin, explicando su típica letras del apellido GG. Se identificó
como una potencial cepa probiótica debido a su resistencia al ácido y la bilis,
buenas características de crecimiento y la capacidad de adhesión a la capa epitelial
intestinal. Desde entonces, ha sido una de las cepas probióticas más ampliamente
estudiados, utilizados en una variedad de productos probióticos comercialmente
disponibles. Los efectos beneficiosos de esta cepa han sido ampliamente
estudiados en ensayos clínicos y estudios de intervención humana. En trabajos
anteriores en el IQS (no publicados) se demostró su elevada capacidad para
estabilizar la población microbiana en muestras de purines y de disminuir la carga
de materia orgánica.
Lactobacillus helveticus: Lactobacillus helveticus pertenece a un grupo de
organismos conocidos colectivamente como bacterias del ácido láctico (LAB). Se ha
utilizado tradicionalmente en la fabricación de queso y en la fermentación de
productos lácticos. Sin embargo, el Lactobacillus helveticus está ganando
importancia como componente activo en probióticos y nutracéuticos. Tiene el
potencial para producir péptidos bioactivos o bacteriocinas, y ejercer efecto
simbiótico cuando se asocia con prebióticos. Se muestra especialmente compatible
con el L. rhamnosus, y conjuntamente tienen una gran capacidad de establecer la
flora bacteriana en condiciones muy agresivas. En nuestro caso, las aguas
residuales provenientes del lavado de coches.
Los estudios previos realizados para el caso de la estabilización de purines, indicaron
que la proporción adecuada para conseguir un efecto sinérgico entre las dos cepas es
de un 75% Lactobacillus rhamnosus (A) y un 25 % de Lactobacillus helveticus (B).
Para su preparación para los experimentos con el bioreactor y posteriormente en
planta piloto, se diluyen en agua fría en una concentración del 4%, y se dejan reposar
durante 12 horas a 4ºC.
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3. DESCRIPCIÓN DEL BIOREACTOR Y CONDICIONES DEL EXPERIMENTO.
Para los experimentos se utiliza un Bioreactor Sartorius equipado con entrada de
oxígeno y CO2, y termoestable con capacidad de 3L.
Las muestras analizadas (ver Tabla 1 apartado 4), se introducen en el reactor diluidas a
1:20 en agua Milli-Q. Se recogen muestras a diferentes tiempos. La duración del
ensayo es de 7 días por muestra, que es el tiempo donde ser ecoge la última muestra.
En la Figuras 1 se presenta el estado del Bioreactor en los experimentos a 36ºC de la
muestra de agua residual proveniente del sistema de lavado de coches de Montfullà.
Figura 1. Bioreactor funcionando con muestra de agua residual de Montfullà
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4. ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS RECOGIDAS DEL REACTOR
Las muestras analizadas por cromatografía se detallan en las Tablas 1 y 2
Tabla 1 Descripción de las muestras analizadas
Nombre de la muestra Descripción
MUESTRA 1 Agua del decantador
MUESTRA 2 Jabón MinAqua
MUESTRA 3 Cera MinAqua
MUESTRA 4 Jabón Montfullà
Tabla 2. Relación de muestras analizadas provenientes del Bioreactor
MUESTRA 1 PUNTO 0 18:00 MUESTRA 3 PUNTO 0 18:00
MUESTRA 1 PUNTO 1 10:15 MUESTRA 3 PUNTO 1 10:15
MUESTRA 1 PUNTO 2 18:55 MUESTRA 3 PUNTO 2 18:55
MUESTRA 1 PUNTO 3 7 DÍAS MUESTRA 3 PUNTO 3 7 DÍAS
MUESTRA 2 PUNTO 0 18:00 MUESTRA 4 PUNTO 0 18:00
MUESTRA 2 PUNTO 1 10:15 MUESTRA 4 PUNTO 1 10:15
MUESTRA 2 PUNTO 2 18:55 MUESTRA 4 PUNTO 2 18:55
MUESTRA 2 PUNTO 3 7 DÍAS MUESTRA 4 PUNTO 3 7 DÍAS
Además, también se dispone de los patrones de APG y de resina
El análisis se ha realizado entre los días 23 y 26/03/2015 en el laboratorio de
Cromatografía del IQS.
En el Anexo, se adjuntan los monitogramas obtenidos al analizar las muestras. Se
incluyen:
- Los monitogramas obtenidos en modo SCAN tanto en positivo como en
negativo de todas las muestras.
- Para la muestra 2, los monitogramas obtenidos en modo SIR, seleccionando los
iones correspondientes al patrón de APG.
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- Para la muestra 3, los monitogramas obtenidos en modo SIR, seleccionando los
iones correspondientes al patrón de la resina.
- Los espectros de masas de los picos más significativos.
5. RESULTADOS
Muestra 1
En las cuatro muestras:
- Sólo se detectan picos en modo SCAN positivo.
- Se detectan 5 picos que parece que van disminuyendo ligeramente de la
muestra correspondiente al punto 0 a la del punto 3. [Se adjuntan los espectros
de masas correspondientes a cada pico].
- Los picos de mismo tiempo de retención tienen el mismo espectro de masas.
Muestra 2 (adicionada con patrón APG)
En las cuatro muestras:
- En SCAN positivo, se detectan dos picos mayoritarios que no aparecen en el
patrón de APG. Sus alturas son comparables en todas las muestras. [Se
adjuntan sus espectros de masas]
- El perfil obtenido en SCAN negativo es equivalente al del patrón de APG y, en
todas las muestras, las alturas de los picos son equivalentes.
- En SIR negativo, se confirma la presencia de APG.
Muestra 3 (adicionada con patrón de resina)
En las cuatro muestras:
- En SCAN positivo, se detecta un pico a 1,4 min que no aparece en el patrón de
la resina. En todas las muestras, su altura es equivalente. [Se adjunta su
espectro de masas]
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- El perfil obtenido en SCAN positivo en la zona del cromatograma de máximo
poder eluotrópico, es equivalente al del patrón de resina y, en todas las
muestras.
- En SIR positivo, se confirma la presencia de la resina.
Muestra 4
Tanto en SCAN positivo como en SCAN negativo el perfil de todas las muestras es
comparable.
Notas:
1.- Las muestras y los patrones se analizan directamente por UPLC-MS con ionización
por ESI (Electrospray).
La separación cromatográfica se realiza con una columna Acquity BEH C18 1,7 um
(2,1x50 mm).
Las condiciones cromatográficas de separación se presentan en la Tabla 3.
Tabla 3. Condiciones cromatográficas de separación
Parámetros Condiciones UPLC
Eluyente [A] 1,0 mL de ácido fórmico en 1L con agua
MilliQ.
[B] Acetonitrilo
Gradiente 0 min 30 % [B]
3 min 100 % [B]
5 min 100 % [B]
5,1 -7 min 30 % [B] (Estabilización a condiciones
iniciales).
Volumen de inicio del gradiente: 0 L
Flujo 0,7 mL/min
Temperatura Columna: 45ºC – Muestra: 10ºC
Volumen de
inyección
2 L
Presión de trabajo 8000 psi (Condiciones iniciales)
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Las condiciones del detector de masas utilizadas se presentan en la Tabla 4.
Tabla 4. Condiciones de trabajo del detector de masas
Parámetro Método cliente
Detector MS
Voltaje del capilar 2,5 kV
Temperatura de la fuente 150ºC
Temperatura
desolvatación 600ºC
Voltaje de cono 40 V
Flujo de gas de
desolvatación 1000 L/hr
Ionización ESI (positivo/negativo)
SCAN [+/-] m/z=120 -800 scan time= 0,10 s
SIR [APG] [-] m/z = 297,3; 311,3; 325,2; 339,3
[-] m/z = 337,3; 365,3
SIR [RESINA] [+] m/z = 282,6; 592,8; 601,9; 618,8; 623,9;
680,9; 702,8 s
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Acción B3. Microorganismos 12/29
6. CONCLUSIONES
La mezcla de cepas escogidas es funcional y puede trabajar en las dos temperaturas
escogidas, 20 y 36ºC.
En ausencia de cualquier otro microorganismo (muestras 2 Y 3, de Jabón y Cera,
respectivamente), el efecto de biodegradación es pequeño. Este resultado hizo que no
se planteara realizar el experimento a 10ªC
Sin embargo, en muestras reales de planta (muestra 1) los microorganismos actúan de
forma sinérgica con los ya existentes favoreciendo la biodegradación de la materia
orgánica presente en la muestra y reduciendo la materia orgánica.
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ANEXO 1. CROMATOGRAMAS
Se adjuntan las siguientes Figuras:
Figura 1. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 1 [PUNTO 0 a PUNTO 3]- SCAN/positivo. Escala 4,6E6. ....................................................................................................... 15
Figura 2. Espectro de MS: PICO 2,6 min [1] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 0]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas. .................................................. 16
Figura 3. Espectro de MS: PICO 2,8 min [2] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 0]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas. .................................................. 16
Figura 4. Espectro de MS: PICO 2,9 min [3] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 3]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas. .................................................. 17
Figura 5. Espectro de MS: PICO 3,0 min [4] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 0]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas. .................................................. 17
Figura 6. Espectro de MS: PICO 3,2 min [5] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 1]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas. .................................................. 18
Figura 7. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 1 [PUNTO 0 a PUNTO 3]- SCAN/negativo. ........................................................................................................................... 18
Figura 8. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 2 [PUNTO 0 a PUNTO 3]- SCAN/positivo. Escala 1,9E11. ..................................................................................................... 19
Figura 9. Espectros de MS: PICOS 2,67 y 3,06 min [1 y 2] obtenidos en lo MUESTRA 2. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas. .................................................. 20
Figura 10. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 2 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de APG- SCAN/negativo. Escala 3,0E9. ........................................................................................ 21
Figura 11. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 2 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de APG- SIR/negativo. Escala 4,7E7. ........................................................................................... 22
Figura 12. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 3 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de la RESINA- SCAN/positivo. Escala 1,64E11. Incluye ampliación de la parte central del monitograma. Zoom en la siguiente página. .............................................................................. 23
Figura 13. Espectro de MS: PICO 1,4 min [1] obtenido en lo MUESTRA 3. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas......................................................................... 25
Figura 14. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 3 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de RESINA- SIR/positivo. Escala 1,27E9. ...................................................................................... 26
Figura 15. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 3 [PUNTO 0 a PUNTO 3] - SCAN/negativo. Escala 2,9E9. ...................................................................................................... 27
Figura 16. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 4 [PUNTO 0 a PUNTO 3] - SCAN/positivo. Escala 1,49E10. ................................................................................................... 28
Figura 17. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 4 [PUNTO 0 a PUNTO 3] - SCAN/negativo. Escala 5,6E9. ...................................................................................................... 29
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15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80
%
0
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
4.66e10
0.21
0.162.982.932.82
2.655.723.313.20
6.14
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
4.66e10
0.21
0.16
2.84
2.65
2.33
3.022.93
3.205.69
3.31
6.02
15032509_M1_PUNT1_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
4.66e10
2.93
0.21
0.16 2.84
2.64
2.332.15
3.013.20
5.693.31
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
4.66e102.93
2.81
0.21
0.16 2.67
2.332.09 2.51
2.98
3.20
3.31 5.69
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3 1
2 3 4 5
Figura 1. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 1 [PUNTO 0 a PUNTO 3]- SCAN/positivo. Escala 4,6E6.
1 2 3 4 5
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Acción B3. Microorganismos 16/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 691 (2.648) Cm (677:697-380:489) 1: MS2 ES+ 1.83e7468.7
424.6
364.6279.5
279.0
275.5195.2144.2
125.3 185.4170.5 200.2 239.3214.7 256.7
363.8296.5
282.4
328.5
319.2
304.5
336.3 341.7
408.6380.6
407.8382.7
397.5
463.5441.6
441.2
438.6
512.5
485.4
469.5
470.6
507.7
496.6
556.7
556.4
529.6 551.8
530.3
600.6
557.7 573.9
595.2
644.7
614.7
617.7
688.6
658.8
661.7
686.8
732.6
702.9
703.5
716.9
777.0
746.7
747.6
760.6
790.8
793.2
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 692 (2.651) Cm (674:704-345:469) 1: MS2 ES+ 2.58e7468.8
424.6
363.7
280.6
279.5
279.0
275.4144.3125.0
185.0155.5 195.5239.4 263.7
319.5280.7 296.5
282.5
304.4
328.6 336.5
346.4
408.6
380.5
365.6
407.8
381.6
463.7
441.8
425.6
433.1
512.6
485.6
469.4
477.4
507.7
496.6
644.8600.7556.6
529.7
513.7
526.7
551.5
530.2
540.5
573.9
570.5
595.5
584.6
601.7
617.8 639.8
688.9
645.8
658.9672.8
732.8
689.8
702.5716.8
776.8
746.8
760.8
777.8
790.8797.6
15032509_M1_PUNT1_SCANPOSNEG 690 (2.644) Cm (678:702-383:462) 1: MS2 ES+ 2.31e7280.6
279.3
278.9172.5125.2
155.4 200.4 275.3256.5239.4228.7
468.5
296.5
282.6
424.6
364.4
341.4319.5297.5
318.0 354.4
408.6380.4
407.9
381.5 409.6
463.6452.6
426.5
512.6
485.5
482.6
507.7
496.5
556.7
556.2
513.3529.7
529.5
540.8
600.6
557.9570.6
573.4
644.6
601.5614.5
615.8628.5
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777.0
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754.2790.9
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG 696 (2.667) Cm (679:701-345:407) 1: MS2 ES+ 4.37e7280.6
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482.4
556.7
551.6529.6
600.8
557.7
570.7584.7
644.8
601.5614.6
628.5
688.7
645.8658.5
661.4
732.9
702.8 725.2776.8
746.8 754.0 790.7
Figura 2. Espectro de MS: PICO 2,6 min [1] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 0]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
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100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
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716.5
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791.0760.6
774.5
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 741 (2.839) Cm (723:752-254:428) 1: MS2 ES+ 4.68e7482.6
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318.3
422.7
346.3
329.5
394.7377.7
354.5 395.7423.6
470.7466.7
439.7
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526.7
492.8514.5
510.7
496.5
570.6
527.8
558.9
554.5
614.7
571.7
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658.7
615.6
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702.8
672.8
686.9
746.9
739.5716.8
790.8
760.8774.9
15032509_M1_PUNT1_SCANPOSNEG 742 (2.843) Cm (724:751-259:427) 1: MS2 ES+ 5.58e7256.5
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466.7439.5
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526.7
483.7
492.7 514.7
570.7
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571.6584.6
595.5
658.7
615.7628.7
649.7
702.8
672.8
689.8
747.0739.4724.9 791.0760.8
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG 734 (2.812) Cm (726:754-258:418) 1: MS2 ES+ 1.29e8256.5
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282.5
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318.3
482.7346.5
329.5
438.5
422.7394.6377.6
354.2
466.6
448.7
526.7
510.6492.8
570.7
540.8 554.6
614.8
584.1
658.7
628.8 650.0
702.8672.8
725.0 746.8 791.0760.8
Figura 3. Espectro de MS: PICO 2,8 min [2] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 0]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 17/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
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%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 764 (2.927) Cm (760:769-255:421) 1: MS2 ES+ 3.88e8282.5
279.5
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739.6
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 764 (2.927) Cm (761:768-262:422) 1: MS2 ES+ 6.17e8282.5
270.6
283.5
15032509_M1_PUNT1_SCANPOSNEG 764 (2.927) Cm (761:768-254:415) 1: MS2 ES+ 1.03e9282.5
283.5
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 764 (2.927) Cm (760:769-256:422) 1: MS2 ES+ 3.88e8282.5
279.5
283.5
739.6
Figura 4. Espectro de MS: PICO 2,9 min [3] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 3]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 779 (2.985) Cm (779:793-256:417) 1: MS2 ES+ 5.93e7496.6282.6
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279.0
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437.7
480.7453.5
455.8 482.6
540.6
497.5
524.7499.7
584.8
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628.9
598.6 606.8
672.8
629.8
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716.8
716.2686.6 715.1
739.4
731.0
760.8
775.0 788.9
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 788 (3.019) Cm (779:795-268:417) 1: MS2 ES+ 7.08e7282.5
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436.5
313.5283.5
296.6
408.6391.6
354.4331.5 364.5 433.5 437.8
480.6453.5
468.6481.5
540.6
497.7
524.7499.7
628.8584.7
541.7
568.8554.5
585.7
598.7 612.4
672.7
629.8
642.6 661.2
716.8
686.6700.6
760.7
739.5
730.8754.4
762.0
774.8 788.9
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG 779 (2.985) Cm (777:797-264:425) 1: MS2 ES+ 2.28e8282.5
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15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG 779 (2.985) Cm (776:795-265:421) 1: MS2 ES+ 2.38e8282.5
280.5256.6239.3
496.6452.6283.5
296.5 436.6408.6313.5 391.6354.5480.6
540.6
524.5
584.7628.7
612.2598.6672.8 716.8 725.0
760.8739.5
Figura 5. Espectro de MS: PICO 3,0 min [4] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 0]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 18/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 835 (3.200) Cm (831:841-256:427) 1: MS2 ES+ 4.41e7284.5
282.6
279.4
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466.5
354.5296.5
313.6 341.4318.3
405.6
355.6382.5
399.4
450.6
422.6
407.6
449.6
423.5 452.3
494.6
482.8
496.5
511.3
538.4524.7
555.6
595.2
594.9
568.5
642.8
599.5
607.2631.9618.2
739.8686.7
686.4
643.2
643.6
661.4 670.8
730.9
724.9
714.7689.5
774.9754.0
740.6754.9 775.7
798.2783.3
15032509_M1_PUNT1_SCANPOSNEG 834 (3.196) Cm (834-264:411) 1: MS2 ES+ 1.30e8284.6
282.4
282.3
280.3
214.6158.4
145.3 198.4170.6 194.2
278.9256.7
214.8 239.3 278.3
296.3 739.5510.3
466.7354.2
318.4297.6341.6328.1
422.9405.6355.3382.4 449.6
444.6
466.9494.7467.5
554.7
554.3511.0
511.5538.7
512.7
739.2555.0 725.2686.6598.9
595.2556.5
642.7599.2
650.1 687.5 707.9
740.0
754.4 775.1 787.0
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 836 (3.203) Cm (832:844-259:424) 1: MS2 ES+ 3.13e7282.5
279.1
171.4158.4144.4122.1
256.7196.1239.5200.5 217.6 270.6
284.4
739.6
739.4354.5
296.5
341.5313.4 318.4
328.6
739.1354.7
598.8554.7
510.7
466.6
382.7355.5
380.0
452.6422.7496.6
482.8
540.7
538.8524.9
595.6
594.6555.9584.5
606.8
672.6642.7607.4
631.7607.7
661.6 738.7686.8
714.6687.4
754.0
753.5754.6
768.4774.9
798.0
Figura 6. Espectro de MS: PICO 3,2 min [5] obtenido en lo MUESTRA 1 [PUNTO 1]. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032509_M1_PUNT2_SCANPOSNEG 835 (3.200) Cm (831:841-256:427) 1: MS2 ES+ 4.41e7284.5
282.6
279.4
158.4144.3136.3
171.5 256.6196.1 239.3200.1
265.4
598.9554.7
510.5
466.5
354.5296.5
313.6 341.4318.3
405.6
355.6382.5
399.4
450.6
422.6
407.6
449.6
423.5 452.3
494.6
482.8
496.5
511.3
538.4524.7
555.6
595.2
594.9
568.5
642.8
599.5
607.2631.9618.2
739.8686.7
686.4
643.2
643.6
661.4 670.8
730.9
724.9
714.7689.5
774.9754.0
740.6754.9 775.7
798.2783.3
15032509_M1_PUNT1_SCANPOSNEG 834 (3.196) Cm (834-264:411) 1: MS2 ES+ 1.30e8284.6
282.4
282.3
280.3
214.6158.4
145.3 198.4170.6 194.2
278.9256.7
214.8 239.3 278.3
296.3 739.5510.3
466.7354.2
318.4297.6341.6328.1
422.9405.6355.3382.4 449.6
444.6
466.9494.7467.5
554.7
554.3511.0
511.5538.7
512.7
739.2555.0 725.2686.6598.9
595.2556.5
642.7599.2
650.1 687.5 707.9
740.0
754.4 775.1 787.0
15032509_M1_PUNT3_SCANPOSNEG 836 (3.203) Cm (832:844-259:424) 1: MS2 ES+ 3.13e7282.5
279.1
171.4158.4144.4122.1
256.7196.1239.5200.5 217.6 270.6
284.4
739.6
739.4354.5
296.5
341.5313.4 318.4
328.6
739.1354.7
598.8554.7
510.7
466.6
382.7355.5
380.0
452.6422.7496.6
482.8
540.7
538.8524.9
595.6
594.6555.9584.5
606.8
672.6642.7607.4
631.7607.7
661.6 738.7686.8
714.6687.4
754.0
753.5754.6
768.4774.9
798.0
Figura 7. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 1 [PUNTO 0 a PUNTO 3]- SCAN/negativo.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 19/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
15032510_M2_PUNT3_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.61e112.67
0.210.16
3.06
2.93 3.395.69
15032510_M2_PUNT2_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.61e112.67
0.210.16
2.26
3.06
2.933.40
5.70
15032510_M2_PUNT1_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.61e112.67
0.210.16
3.06
2.98 3.403.17 3.27 5.69
15032510_M2_PUNT0_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.61e112.67
0.210.16
2.26
3.06
2.932.82 3.405.69
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
1 2
Figura 8. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 2 [PUNTO 0 a PUNTO 3]- SCAN/positivo. Escala 1,9E11.
2
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 20/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032510_M2_PUNT0_SCANPOSNEG 798 (3.058) Cm (787:805-411:522) 1: MS2 ES+ 3.25e8496.6
452.5
391.5
347.6
282.5
303.5313.4 369.5364.4
435.6
408.6
413.5
436.7
480.7
453.6
457.5
473.4
540.6
524.5
501.5
584.7
568.7
561.5
628.7
612.8
607.8
672.8
656.8649.8
716.7
700.8
760.9
754.0
15032510_M2_PUNT3_SCANPOSNEG 698 (2.674) Cm (685:705-414:498) 1: MS2 ES+ 3.87e8512.6468.6
363.5
319.5
275.6
424.6
407.6
380.6
408.5451.5
425.5
441.6
433.0
452.6
469.5
496.7
485.7
556.7
540.7
517.4
600.7
584.7577.5
644.7
628.5621.7
688.7
672.8665.6
732.8
716.8709.8
776.9
760.8
PICO 2
PICO 1
Figura 9. Espectros de MS: PICOS 2,67 y 3,06 min [1 y 2] obtenidos en lo MUESTRA 2. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
PICO 1
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 21/29
15032503_APG_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
15032503_APG_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
3.04e9
0.17
0.05
5.65
1.400.180.86
0.590.410.36 0.731.271.161.08
1.00
3.463.42
3.172.932.25
2.011.861.581.78 2.522.45 2.812.58 3.09
4.604.28 4.88
5.70
6.07
15032510_M2_PUNT3_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
3.04e9
0.17
0.21
1.400.36
1.15
0.580.50 1.120.72 0.861.27
5.673.47
3.322.522.25
2.001.553.223.17
2.683.06
2.79 2.93
3.54
4.89
5.72
6.056.40 6.88
15032510_M2_PUNT2_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
3.04e90.17
0.10
0.21
1.40
0.371.16
1.090.580.51 0.73 0.85 0.98
1.27
5.685.653.50
3.313.213.17
2.502.252.001.55 1.69
2.352.932.67 2.78
3.59
5.415.15
5.72
6.065.90 6.10 6.266.986.63 6.84
15032510_M2_PUNT1_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
3.04e90.17
0.211.40
0.37 1.16
1.090.500.59
0.73 0.86 0.99
1.27
5.673.573.46
2.512.251.99
1.54 1.58 2.383.162.67 2.78 3.06
5.72
6.085.91 6.206.60 6.886.75
15032510_M2_PUNT0_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
3.04e90.17
0.21
1.40
0.36 1.16
1.120.730.580.51 0.85
1.27
5.675.653.52
3.473.35
2.512.251.54 2.011.58 1.78
3.213.172.67 2.81 3.06
3.60
4.14 4.37 4.98 5.44
5.72
5.996.08 6.116.926.69
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
PATRÓN
APG
Figura 10. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 2 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de APG- SCAN/negativo. Escala 3,0E9.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 22/29
15032513_APG_SIR_NEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
15032513_APG_SIR_NEG SIR of 6 Channels ES- TIC
4.76e71.40
0.85
2.502.24
2.001.545.662.79
3.62
15032510_M2_PUNT3_SIR_NEG SIR of 6 Channels ES- TIC
4.76e71.40
0.851.02
2.502.24
1.542.001.57
2.342.78 5.66
3.63
15032510_M2_PUNT2_SIR_NEG SIR of 6 Channels ES- TIC
4.76e71.40
0.851.02
2.502.24
1.542.001.57 2.34
2.78 5.663.62
15032510_M2_PUNT1_SIR_NEG SIR of 6 Channels ES- TIC
4.76e71.40
0.851.02
2.502.24
1.54 2.001.572.34
2.782.62 5.66
3.63
15032510_M2_PUNT0_SIR_NEG SIR of 6 Channels ES- TIC
4.76e71.40
0.851.02
2.502.24
1.542.001.57 2.34
2.78 5.663.62
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
PATRÓN
APG
Figura 11. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 2 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de APG- SIR/negativo. Escala 4,7E7.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 23/29
15032504_CARNA_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
15032506_CARNA_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.64e11
3.31
2.935.69
15032511_M3_PUNT3_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.64e11
1.44
0.210.16
3.27
3.172.982.86
2.742.623.07 3.43
5.69
15032511_M3_PUNT2_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.64e111.44
0.210.16
3.29
2.93 3.54 5.69
15032511_M3_PUNT1_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.64e11
1.44
0.210.16
3.30
3.172.982.852.742.62
3.075.69
15032511_M3_PUNT0_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
1.64e11
1.44
0.210.163.31
2.932.82 5.69
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
PATRÓN
RESINA
1
Figura 12. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 3 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de la RESINA- SCAN/positivo. Escala 1,64E11.
Incluye ampliación de la parte central del monitograma. Zoom en la siguiente página.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 24/29
15032504_CARNA_SCANPOSNEG
Time2.00 2.05 2.10 2.15 2.20 2.25 2.30 2.35 2.40 2.45 2.50 2.55 2.60 2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10 3.15 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40 3.45 3.50 3.55 3.60 3.65 3.70 3.75 3.80 3.85 3.90 3.95 4.00 4.05 4.10 4.15 4.20 4.25 4.30 4.35
%
0
2.00 2.05 2.10 2.15 2.20 2.25 2.30 2.35 2.40 2.45 2.50 2.55 2.60 2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10 3.15 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40 3.45 3.50 3.55 3.60 3.65 3.70 3.75 3.80 3.85 3.90 3.95 4.00 4.05 4.10 4.15 4.20 4.25 4.30 4.35
%
0
2.00 2.05 2.10 2.15 2.20 2.25 2.30 2.35 2.40 2.45 2.50 2.55 2.60 2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10 3.15 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40 3.45 3.50 3.55 3.60 3.65 3.70 3.75 3.80 3.85 3.90 3.95 4.00 4.05 4.10 4.15 4.20 4.25 4.30 4.35
%
0
2.00 2.05 2.10 2.15 2.20 2.25 2.30 2.35 2.40 2.45 2.50 2.55 2.60 2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10 3.15 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40 3.45 3.50 3.55 3.60 3.65 3.70 3.75 3.80 3.85 3.90 3.95 4.00 4.05 4.10 4.15 4.20 4.25 4.30 4.35
%
0
2.00 2.05 2.10 2.15 2.20 2.25 2.30 2.35 2.40 2.45 2.50 2.55 2.60 2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10 3.15 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40 3.45 3.50 3.55 3.60 3.65 3.70 3.75 3.80 3.85 3.90 3.95 4.00 4.05 4.10 4.15 4.20 4.25 4.30 4.35
%
0
15032506_CARNA_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
8.20e103.31
2.93
2.822.68
2.993.39
3.57
15032511_M3_PUNT3_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
8.20e10
3.27
3.172.98
2.862.742.62
2.08
2.933.07
3.433.52
15032511_M3_PUNT2_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
8.20e103.29
2.93
2.812.98 3.54
15032511_M3_PUNT1_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
8.20e10
3.30
3.172.982.932.85
2.742.62
3.073.43
3.54
15032511_M3_PUNT0_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
8.20e10
3.31
2.932.82
2.67
2.983.56
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 25/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
m/z120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800
%
0
100
15032511_M3_PUNT3_SCANPOSNEG 375 (1.436) Cm (366:384-193:276) 1: MS2 ES+ 7.44e7636.8
632.2
631.9
627.1
618.8
610.2
608.5
597.1
637.0680.8
676.2656.4681.1
685.7
720.1685.9
700.6719.8720.2
724.9
729.8744.5
764.0 769.1
15032511_M3_PUNT3_SCANPOSNEG 375 (1.436) Cm (363:386-468:568) 1: MS2 ES+ 6.18e7636.7
632.2
631.9
627.1
626.9
617.1
610.2
610.0
601.4
680.8676.2
637.0
656.4
654.3
681.1
685.7
720.1686.0
700.5 719.8720.2
729.8 744.5
764.0 769.1
Figura 13. Espectro de MS: PICO 1,4 min [1] obtenido en lo MUESTRA 3. El mismo pico en todas las muestras tiene el mismo espectro de masas.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 26/29
15032514_CARNA_SIR2_POS
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
15032514_CARNA_SIR2_POS SIR of 7 Channels ES+ TIC
1.27e9
3.32
3.29
2.93
15032511_M3_PUNT3_SIR_POS SIR of 7 Channels ES+ TIC
1.27e9
3.323.292.93
1.43
1.391.45
15032511_M3_PUNT2_SIR_POS SIR of 7 Channels ES+ TIC
1.27e93.32
3.28
2.931.43
1.391.45
15032511_M3_PUNT1_SIR_POS SIR of 7 Channels ES+ TIC
1.27e9
3.32
3.292.93
1.43
1.391.45
15032511_M3_PUNT0_SIR_POS SIR of 7 Channels ES+ TIC
1.27e9
3.322.931.43
1.401.46
3.29
PATRÓN
RESINA
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
Figura 14. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 3 [PUNTO 0 a PUNTO 3] y el patrón de RESINA- SIR/positivo. Escala 1,27E9.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 27/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
9
15032511_M3_PUNT3_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
2.89e90.17
0.04
0.21
3.47
3.313.16
2.521.990.55 0.65 1.10 1.682.242.08 2.37 2.932.83
5.673.63
4.05 5.534.83
5.72
5.76
6.076.35 6.56 6.87
6.65
15032511_M3_PUNT2_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
2.89e90.18
0.03
0.21
3.46
3.313.16
0.292.922.522.372.242.011.581.31
2.802.632.99
5.675.653.58
5.43
5.72
5.996.37 6.73
15032511_M3_PUNT1_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
2.89e90.17
0.06
0.21
3.47
3.413.31
3.16
2.512.000.63 0.960.76 1.15 1.37 1.79
2.382.25 2.932.812.98
5.673.543.62
4.50 4.79 5.06 5.21
5.72
6.025.89 6.056.49 6.72 6.95
15032511_M3_PUNT0_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
2.89e9
0.17
0.21
3.47
3.160.293.06
2.982.802.531.970.74 1.501.18 2.392.25
5.673.59
4.19
5.72
6.01 6.36 6.58
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
Figura 15. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 3 [PUNTO 0 a PUNTO 3] - SCAN/negativo. Escala 2,9E9.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 28/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
0
15032512_M4_PUNT3_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
3.49e103.17
2.67
2.620.21
0.16
2.472.420.26
2.342.22
3.07
2.98
2.86
2.82
3.26 3.35
3.36
3.43
3.52
15032512_M4_PUNT2_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
3.49e102.67
0.21
0.16
2.62
2.55
2.470.26
2.342.22
3.213.062.93
2.822.99 5.693.31 3.40
6.02
15032512_M4_PUNT1_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
3.49e102.67
0.21
0.16
2.62
2.472.420.26
2.342.21
3.213.062.93
2.822.98 5.693.31 3.40
6.11
15032512_M4_PUNT0_SCANPOSNEG 1: MS2 ES+ TIC
3.49e102.67
0.21
0.16
2.62
2.472.430.26
2.352.22
3.212.93
2.82
3.06
2.98 5.703.31 3.40 5.72
6.07
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
Figura 16. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 4 [PUNTO 0 a PUNTO 3] - SCAN/positivo. Escala 1,49E10.
LIFE 11 ENV 569 MINAQUA
Acción B3. Microorganismos 29/29
15032509_M1_PUNT0_SCANPOSNEG
Time0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
5
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
5
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
5
0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00
%
5
15032512_M4_PUNT3_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
5.86e92.20
1.98
0.17
0.21 2.06
2.45
2.43
2.23
2.732.57
2.90
3.09 3.503.40 5.675.72
6.03
15032512_M4_PUNT2_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
5.86e92.20
1.97
0.17
0.21 2.06
2.462.212.43
2.34 2.732.51
2.58
2.91
3.09 3.513.413.31
3.55 5.675.72
6.02
15032512_M4_PUNT1_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
5.86e92.20
1.98
0.17
0.212.06
2.47
2.35 2.742.58
2.91
3.10 3.503.41 5.685.65 5.72
6.03
15032512_M4_PUNT0_SCANPOSNEG 2: MS2 ES- TIC
5.86e92.20
1.97
0.17
0.21 2.06
2.47
2.352.74
2.58
2.91
3.033.09
3.513.40 5.675.72
6.02
Punto 0
Punto 1
Punto 2
Punto 3
Figura 17. Monitogramas obtenidos al analizar la MUESTRA 4 [PUNTO 0 a PUNTO 3] - SCAN/negativo. Escala 5,6E9.
