[INFORME DE BIOQUIMICA PRACTICA N.1]

[[INFORME DE BIOQUIMICA PRACTICA N.1]]14 DE ABRIL DE 2015

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA: MEDICINACTEDRA: BIOQUMICA PRCTICA IIDOCENTE: DRA. ROSA ELISA CRUZPERIODO ACADEMICO:MARZO - AGOSTO 2015DATOS GENERALES:SEMESTRE: SEGUNDOPARALELO: BGRUPO: C1. ATACUSHI ROSERO SHIRLEY MICHELLE2. FIALLOS CASTILLO PAMELA PRISCILA (COORDINADOR)3. PATIO BRAVO KARLA VANESSA4. MEDINA GAVIDIA KAREN STHEFYINFORME No. 1FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA: Martes 14 de abril de 2015FECHA DE PRESENTACIN DEL INFORME: Martes 28 de abril de 2015

1. TEMA: Medicin de la actividad enzimtica de (TGO/AST y TGP/ALT) enzimas de importancia Biomdica en suero Humano2. OBJETIVO(S)2.1 OBJETIVO GENERALAnalizar la importancia de la determinacin de la actividad enzimtica de transaminasas como auxiliares en el diagnstico mdico.

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS Analizar la estructura bioqumica de las enzimas. Identificar el mtodo de anlisis utilizado en esta determinacin. Calcular la actividad enzimtica de GOT/AST y GPT/ALT en una muestra de suero humano y compararlo con los valores normales. Correlacionar los resultados obtenidos con la importancia biomdica. Expresar los resultados obtenidos en unidades SI (kat/L) que representa kat/L. Analizar la importancia de la determinacin de la actividad enzimtica de transaminasas como auxiliares en el diagnstico mdico.

3. FUNDAMENTO TEORICO

Las cantidades de enzima pueden ser expresadas en moles, como las de cualquier otro compuesto qumico, o pueden ser cuantificadas en trminos de actividad enzimtica. La actividad enzimtica es una medida de la cantidad de enzima activa presente y del nivel de actividad de la misma, por lo que la medida de la actividad es dependiente de las condiciones, que deben ser especificadas cuando se dan valores de actividad. La actividad expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad de tiempo, teniendo en cuenta el volumen de reaccin.En el Sistema Internacional de Unidades la unidad para la actividad cataltica es el katal (kat), pero es una unidad demasiado grande y suele usarse la unidad de actividad enzimtica (UI).Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones bioqumicas. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Las transaminasas (o aminotransferasas) son enzimas transferasas que catalizan la reaccin de transferencia del grupo amino (-NH2) de un aminocido a un -cetoglutarato (un -cetocido). Las transaminasas ms conocidas son:

Glutamato-oxalacetato transaminasa (GOT), llamada tambin aspartato aminotransferasa (AST). Glutamato-piruvato transaminasa (GPT), o bien alanina aminotransferasa (ALT).

Las transaminasas estn por todo el organismo. La GOT o AST est en el hgado, miocardio, rin, encfalo y musculatura esqueltica. La GPT o ALT est presente en concentraciones mucho ms elevadas en el hgado que en los dems tejidos.

La GOT cataliza la siguiente reaccin: Aspartato + -Cetoglutarato Oxalacetato + GlutamatoLa GPT cataliza esta otra reaccin: Alanina + -Cetoglutarato Piruvato + Glutamato

MTODO ANALISIS: ENZIMTICO UV, CINETICO

CONDICIONES DE REACCION: DISMINUCIN DE ABSORBANCIAAST/GOT(EC 2.6.1.1)La aspartato aminotransferasa o ASAT, antes conocida como transaminasa glutmico-oxalactica (GOT), tambin llamada aspartato transaminasa (AST)

La aspartato aminotransferasa (AST/GOT) cataliza la transferencia del grupo amino del aspartato al cetoglutarato con la formacin de glutamato y oxalacetato. Este ltimo es reducido a malato por la malato deshidrogenasa (MDH) en presencia de nicotinamido adenin dinucletido reducido (NADH). La reaccin se controla cinticamente a 340 nm a travs de la disminucin de la absorbancia resultante de la oxidacin del NADH a NAD+, proporcional a la actividad AST en la muestra

ALT/GPT EC 2.6.1.2La Alanina aminotransferasa (ALAT), anteriormente conocida como Transaminasa glutmico-pirvica (TGP), tambin llamada alanina transaminasa (ALT),

La alanina aminotransferasa (ALT/TGP) cataliza la transferencia del grupo amino de la alanina al cetoglutarato con la formacin de glutamato y piruvato. Este ltimo es reducido a lactato por la lactato deshidrogenasa (LDH) en presencia de nicotinamido adenin dinucletido reducido (NADH). La reaccin se controla cinticamente a 340 nm a travs de la disminucin de la absorbancia resultante de la oxidacin del NADH a NAD+, proporcional a la actividad ALT en la muestra.

VALORES DE REFERENCIA (TGO/AST y TGP/ALT)En suero o plasma:ALTHombre Hasta 40U/L

MujeresHasta 32U/L

AST Hombre Hasta 38U/L

MujeresHasta 31U/L

Neonatos y nios doblan los valores observados en adultos acercndose a stos aproximadamente a los seis meses de edad. El diagnstico clnico no debe realizarse nicamente con los resultados de un nico ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clnicos del paciente.SIGNIFICADO CLINICO

El grupo de enzimas denominados transaminasas se hallan presentes en tejidos de muchos rganos. La actividad necrtica en estos rganos es la causante de la liberacin de cantidades anormales de enzimas en la sangre donde son medidas. Al ser el tejido cardaco rico en AST se presentan niveles sricos aumentados en pacientes tras un infarto de miocardio, as como en pacientes con enfermedades musculares, distrofia muscular y dermatomiositis. El hgado es especialmente rico en ALT, siendo la determinacin de este enzima empleado principalmente como prueba analtica en la hepatitis infecciosa y txica, aunque pueden hallarse niveles elevados de ambas enzimas, AST y ALT, en casos de dao celular heptico y pancreatitis aguda, situacin que parece indicar que la obstruccin del rbol biliar por un pncreas edematoso y la presencia de una enfermedad heptica asociada pueden contribuir a los elevados aumentos de AST en estos pacientes. Aumentos entre ligeros y moderados de AST y ALT pueden observarse tras la ingesta de alcohol y tras la administracin de ciertos frmacos, tales como salicilatos, opiceos y ampicilina.METODO DE ANALISIS VALORES DE REFERENCIA Plasma.MTODO: Enzimtico Ultravioleta cinticoREACTIVOS:ALT:R1 Tampn: TRIS pH 7.8, L-AlaninaR2 Sustrato: NADH, Lactato deshidrogenasa (LDH) -cetoglutarato.AST:R1 Tampn: TRIS pH 7.8, L-Aspartato.R2 Sustrato: NADH, Malato deshidrogenasa (MDH) -cetoglutarato.PROCEDIMIENTO Preparar el reactivo de trabajo: Tomar en cuenta los siguientes parmetros:PARMETROALTAST

LIMITE DE DETECCIN1,20 U/L5,44 U/L

LINEALIDAD262 U/L260U/L

Pre incubar el reactivo de trabajo, muestras y controles a la temperatura de reaccin. Ajustar a 0 el espectrofotmetro con agua destilada.

Pipetear en un tubo de ensayo:Temperatura de Reaccin37C

Reactivo de trabajo1000L

Muestra o Control100L

Mezclar suavemente por inversin, Insertar el tubo de ensayo en el compartimiento termostatado del instrumento y poner el cronmetro en marcha. Incubar durante 1 minuto, y anotar la absorbancia inicial. Repetir las lecturas exactamente a los 1,2 y 3 minutos. Calcular la diferencia entre absorbancias. Muestras con A/min superiores a 0,160 a 340 nm deben diluirse 1:10 con solucin salina y repetir el ensayo. Multiplicar los resultados por 10. Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio promedio en absorbancia por minuto (A/min).Para expresar los resultados en unidades SI: U/L x 0,01667 = kat/L4. CALCULOS ALT 0,0150,0150,310,61 3

0,020 X 1750= 35 U/L

AST0,0130,0370,0080,0583 0,19 X 1750 = 33,83 U/L

5. RESULTADOS Y DISCUCIONES Datos del Paciente Nombre: Mara Elizabeth Haro Cardona Edad: 19Sexo: MujerFecha de anlisis: Martes 14 de abril de 2015Hora: 09h00 amTipo: AST-ALTMuestra: SueroAyunas: SiAntecedentes Familiares: NoPatologia en especial: Ninguna

ALTAST

A1: 1,772A1: 1,779

A2: 1,782A2: 1,766

A3: 1,763A3: 1,729

A4: 1,736A4: 1,721

Los resultados de los exmenes demuestran un aumento en los valores normales de AST Y ALT mismos que pueden indicar alguna alteracin heptica 6. OBSERVACIONES

Al colocar una pequea cantidad de reactivo AST y ALT en la muestra de suero al cabo de un minuto comenz a descender sus valores. Observamos que los valores referenciales de ALT Y AST en las mujeres es ms bajo que en la de los hombres.7. CONCLUSIONES Al terminar esta prctica determnanos que el aumento o disminucin de los valores referenciales de AST Y ALT pueden indicar una alteracin heptica Tras tomar la muestra de sangre y luego de centrifugarla fue posible obtener el suero necesario para realizar la practica AST y ALT son enzimas transaminasas que se hallan presentes en tejidos de muchos rganos.8. RECOMENDACIONES Es importante tomar las medidas de precaucin correctas por lo que se sugiere usar bien las herramientas del laboratorio ya que puede alterar los resultados Se debe pipetear de manera correcta pues el resultado depende mucho de cmo se pipetee la muestra. Para obtener la muestra de sangre el paciente obligatoriamente se debe encontrar en ayunas 9. CUESTIONARIO10. ANEXOS

Michelle Atacushi procediendo a pipetear el plasma sanguneoMichelle Atacushi procediendo a pipetear el plasma sanguneoPamela Fiallos obteniendo valores de Absorbancia

Dra. Rosa Cruz dando explicacin de la prctica