Mass Spectrometry - Inti 24 Mayo 2013
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Espectrometría de masasEspectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 1
Espectrometría de masasEspectrometría de masas
Agenda
� Breve Introducción a la espectrometría de Masas.
� Principios y fundamentos teóricos
� Ionización a Presión Atmosférica: Electrospray, Ionización Química, Fotoionización, APGC
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 2
Fotoionización, APGC
� Analizadores: Cuadrupolo vs Tiempo de vuelo
� Instrumentación disponible en el mercado
� Alcances de la técnica
� Aplicaciones de interés
Espectrometría de Masas (MS)
Es un método utilizado para Medición de pesos moleculares de sustancias en fase gaseosa, que permite su identificación o
estudio estructural
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 3
La espectrometría de masas trabaja con Iones en fase gaseosa
Antes de obtener el espectro correspondiente, la sustancia debe ser ionizada (de no encontrarse en ese estado)
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 4
Las moléculas pueden ser ionizadas por adición o eliminación de un electrón (e-)
M + e- � M +. + 2 e-
(M + e- � M - . ) ---- raramente usado
En ambos casos, el ion obtenido posee una masa igual a su peso molecular
Alternativamente, las moléculas pueden ser ionizadas por adición (o substracción) de un ion
[ M + X ] + or [ M + X ] –
I_____________________________I
Ion quasi molecular
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 5
La masa del ion difiere del peso molecular del fragmento que le dio origen
Los iones son acelerados en el vacío a través de un campo magnético y/o electrico para ser separados de acuerdo a su relación masa / carga (m/z), donde
m/z = m porque generalmente, z = 1
Los iones con la apropiada relación m/z pasan a través delanalizador para impactar en el detector, generando la señalcorrespondiente
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 6
La señal obtenida se denomina espectro de masas, y en el segrafica la intensidad relativa de los iones vs. m/z
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 7
Espectrometría de masas
Todos los picos restantes, se reportan
Pico Base (pico de mayor señal en el espectro,
corresponde al fragmento principal o mas estable)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 8
Generalmente se observa la presencia de pequeños picos adyacentes a los demayor intensidad, debidos a la abundancia natural isotópica de los elementos(12C, 13C o 1H, 2H, etc.)
Todos los picos restantes, se reportan
en relación al pico base
M+ Ion molecular
Espectrometría de masas
100
%
124.0
121.0
96.3
100.0
142.0
135.0
147.1
400.0O
HO
H H
H O
NO
OH
142H2O-
124
+
+ H
+[M+H]
21-Hidroxi Deflazacort
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 9
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440m/z0
100
%
0
100.0 135.0
171.0 225.0
397.1
337.1
309.1
291.1
237.1147.1
319.1
327.2
355.1
379.1
415.1
435.2
+ H
HF H2O- -415 397
+
O
HO
F H
H
OHO
O
O +[M+H]
21-Aceto Dexametasona
� Tres funciones básicas:
� transformación de una muestra a iones en fase gaseosa (fuente de ionización)
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 10
� separación de estos iones según su relación masa/carga (analizador)
� detección de los iones separados (detector)
� Instrumentos para aplicaciones orgánicas y bioquímicas
Espectrometría de masas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 11
� Espectrómetros de masas para análisis de relaciones isotópicas
� sistemas para análisis de elementos traza
MS por si sola, puede no ser ideal para el análisis de mezclas
Espectrometría de masas, Limitaciones
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 12
El espectro de masas de una mezcla, es la resultante de la superposición de los espectros individuales de cada componente
Mobile phase carrying mixture of components
LC - MS
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 13
Identificación de compuestos previamente separados
Fuente de Ionización
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 14
Las moléculas, en estado gaseoso, son bombardeadas porelectrones energetizados para producir su ionización, estocausa disociaciones o fragmentaciones secundarias. Un excesoconstante de energía (70 eV) asegura reproducibilidad en lafragmentación
Impacto de electrones (EI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 15
fragmentación
M + e M +2e- + -.
F F F1 2 3
Impacto de Electrones
Introducción
Filamento
Ion
-Repeller
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 16
MIntroducciónde muestra
Colector Sistema de enfoquede iones
Ion
Al Analizador-
Espectro de Ionización por Impacto de Electrones y de Biblioteca
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 17
Consiste en hacer reaccionar las moléculas de interés con un
gas reactivo (previamente ionizado por EI y que halla reaccionado
con una molécula neutra del mismo)
Ionización Química (CI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 18
CH4 + e- -----> CH4+. + 2e-
Metano Metano radical cationico
CH4+. + CH4 -----> CH5
+ + CH3.
Ion reactivo
M + CH5+ -----> MH+ + CH4
Muestra Ion Quasi molecular
Electrospray: Es una tecnica de ionizacion a presion atmosferica que permite elingreso de la muestra desde el LC y su ionizacion en forma conjunta
� Utiliza un campo eléctrico para producir la nebulización de la muestra
Electrospray (ESI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 19
� La muestra ingresa a través de un capilar, en cuyo extremo se aplica unpotencial negativo o positivo
� Este alto potencial sumado al pequeño radio de curvatura del capilar genera unfuerte campo eléctrico que causa que el liquido emergente sea una mezcla depequeñas gotas y vapor (nebulización)
Contraelectrodo
CapilarCaudal
LC
Electrospray (ESI): Overview
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 20
Fuente de alto voltaje
Mayor abundancia de
iones negativos
Electrospray (ESI)
Mayor abundancia de
iones positivos
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 21
Caudal
LC
Capilar a alto voltaje
Cono de TaylorGotas cargadas
positivamente
� Las gotas producidas en la nebulización tienen carga superficial
� Al evaporarse el solvente estas gotas reducen su tamaño, incrementando la repulsión de cargas
Electrospray (ESI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 22
� Cuando la repulsión de cargas es mayor que la tensión superficial se produce una fisión generando gotas muy pequeñas cargadas eléctricamente.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+ +
++
+
+
+
+
+Fisión
Coulombica
+
+
+
Evaporación
de solvente
�Mecanismo de desorción iónica
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
+
+
+
+++
+++
++++
+
+
++
Electrospray (ESI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 23
� Mecanismo de carga residual
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+ ++++
+
+
+
++
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+ +
NN C H3
O
CH 3
H
+ H+
Lidocaina
NN C H3
O
CH 3
H
+
H
Iones positivos - ESI
Electrospray (ESI): Formación de iones
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 24
CH 3 CH 3
C H 3
O
OH
C H 3
CH 3
C H 3
O
O
C H 3
CH 3
+ H+
Ibuprofen
Iones negativos - ESI
Muestra
Venteo
Gas de cono
ESIProbe
Presión atmosférica
Vacio moderado
Alto vacio
Electrospray (ESI): Fuente de ionización
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 25
Gas de nebulización
Gas de desolvatación
Bomba rotativa Bomba turbomolecularCono extractor
Cono de muestra
Válvula deaislamiento
Lentes RF(Hexápolo) Cuadrupolo
Fragmentos Multi-cargados
Electrospray tiene tendencia a producir iones multi-cargados, permitiendola determinación de pesos moleculares elevados que estarían fuera delrango de trabajo del sistema.
Electrospray (ESI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 26
Cuando se forman iones multi-cargados m/z ≠ m debido a que z ≠ 1
Para z > 1 resulta m/z < m, la masa aparente del ion es mucho menor quela verdadera
Hemoglobina
1001681.6
A +9A chain (+10, +9, +8)A chain + Heme (+10, +9, +8)B chain (+10, +9, +8)B chain + Heme (+10, +9, +8)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 27
1475 1500 1525 1550 1575 1600 1625 1650 1675 1700 1725 1750 1775 1800 1825 1850 1875 1900 1925 1950 1975 2000 2025m/z0
%
1587.6
1513.6
1575.2
1515.8 1649.31589.9
1764.0
1750.1
1684.1
1891.7
1832.41766.4
1968.81984.3
A +10
B +10
B +9A +8
B +8
A +8heme
B +9heme
A +9heme
B +10heme
A +10heme
� Desventajas
� Fragmentación limitada
� Limitada a bajos caudales de
trabajo
� Ventajas
� Confirmación de pesos
moleculares
� Indicada para analitos iónicos,
muy polares y proticos
Electrospray (ESI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 28
� Si bien las interfaces (ZSpray)
permiten el trabajo con buffer no
volátiles, altas concentraciones de
modificadores iónicos reducen la
sensibilidad
muy polares y proticos
� Buena sensibilidad
� Moléculas de alto peso molecular
pueden ser determinadas a través
de la formación de fragmentos
multicargados
� Acoplable a cromatografía
liquida, cromatografía capilar y
electroforesis capilar
APcI – Overview
� El liquido es forzado a pasar por un capilar de diámetro pequeño a efectos de proporcionarle una gran velocidad lineal
� La calefacción de la sonda combinada con el gas de nebulización vaporiza el liquido
� Los vapores del solvente y del analito pasan a través de la zona de descarga eléctrica para producir los iones en fase gaseosa
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 29
Caudal
LC
Gas de nebulización
APcI Calefactor
(400-650°C)
Vaporizacion
Aguja de descarga
Cono de muestra
Corona de descarga
Vapores de
solvente y analito
APcI – Ionizacion en fase gaseosa
H2O+
H3O+
H2O
N
Region de descarga(Plasma)
Cono de muestra
e-
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 30
H2O+
N2+
++
++
+
e- e-
N2+
N2+ H2O
+
H3O+
N2+
H2O
H2O
N2
N2
N2
Corona de descarga2-5 µA
(Plasma)e-
Iones positivos APcI:Mecanismos de formación
1. Protón, transferencia: H3O+ + M (M+H)+ + H2O
CH3OH2+ + M (M+H)+ + CH3OH
CH3CNH+ + M (M+H)+ + CH3CNNH4
+ + M (M+H)+ + NH3+
2. Formación de aductos: NH + + M (M+ NH )+
Más probable
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 31
2. Formación de aductos: NH4+ + M (M+ NH4)
+
CH3CNH+ + M (M+ CH3CNH)+
CH3OH2+ + M (M+ CH3OH2)
+
H3O+ + M (M+ H3O)+
3. Intercambio de cargas: N2+. + M M+. + N2
H2O+. + M M+. + H2O
Menos probable
1. Protón, extracción: HO- + M (M-H)- + H2OCH3O
- + M (M-H)- + CH3OHCH2CN- + M (M-H)- + CH3CN
2. Formación de aductos: Cl- + M (M+ Cl)-
Iones negativos APcI:Mecanismos de formación
Más probable
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 32
2. Formación de aductos: Cl- + M (M+ Cl)-
CH3COO- + M (M+ CH3COO)-
3. Intercambio de cargas: O2-. + M M-. + O2
4. Captura de electrones: e- + M M-.
Menos probable
Muestra
Venteo
Gas de cono
APCI
Probe
APcI calefactorCorona de descarga Presión atmosférica
Vacio moderado
Alto vacio
APcI: Fuente de ionización
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 33
Gas de nebulización
Gas de desolvatación
Gas de cono
Bomba rotativa Bomba TurbomolecularCono extractor
Cono de muestra
Válvula de
aislamiento
RF Lentes
(Hexápolo) Cuadrupolo
� Desventajas
� Fragmentación limitada
� Valores de ruido químico muy
intensos para bajos valores de
� Ventajas
� Confirmación de pesos
moleculares
� Indicada para analitos neutros
Ionización Química a Presión atmosférica (APcI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 34
masas
� No es adecuada para moléculas
muy poco volátiles
y polares
� Buena sensibilidad
� Robustez, la posición del
capilar y el pin corona no es
critica
� Permite trabajar con caudales
de hasta 2 mL/min.
Fotoionización (APPI)
� APPI utiliza la misma punta de ionizacion que APcI con el agregado de una fuente de luz UV en lugar de la corona de descarga
� Al igual que en APcI:
� El liquido es forzado a pasar a traves de un capilar para obtener una alta velocidad lineal
� La calefaccion y el gas de nebulizacion vaporizan el caudal del liquido
� La ionizacion se produce en forma directa o quimica en la region de la luz UV
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 35
Caudal LCCalefactor
Vaporización
Fuente UV
Cono de muestra
Vapores de
Solvente y analito
Electrodo
Repeller
hν
� La ionizacion se produce en forma directa o quimica en la region de la luz UV
Fotoionización (APPI)
Direct APPI
M + hv → M+
M + S → MH + S[-H]
El analito M es ionizado a su ion
molecular M+. (Esto ocurre si el
potencial de ionización del analito esta
por debajo de la energía del fotón)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 36
M+ + S → MH+ + S[-H]
Dopant APPI
D + hv → D+
D+ + M → MH+ + D[-H]D+ + M → M+ + D
En presencia de solventes proteicos
M+ puede extraer un átomo de
hidrogeno para formar MH+.
Un dopante fotoionizable es agregado
en alta concentración para generar
iones D+
D+ provoca la ionización de M por
transferencia de un protón o electrón
PhotoMateTM
Kripton 10.0 eV, 10.6 eV
Potenciales de Ionización (IP)
Antraceno 7.4 eV
IP Dopantes (solventes)
Tolueno 8.82 eV
Fotoionización (APPI)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 37
Antraceno 7.4 eV
Fluorantreno 7.8 eV
Cafeina 8.0 eV
4-Nitrotolueno 9.5 eV
Tolueno 8.82 eV
Acetona 9.70 eV
Metanol 10.85 eV
Acetonitrilo 12.19 eV
Agua 12.61 eV
10. eV
Muestra
Venteo
Gas de cono
APCI
Probe
Calefactor Luz UVRepeller
Electrodo
APPI: Fuente de ionización
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 38
Gas de nebulización
Gas de desolvatación
Gas de cono
Bomba rotativa Bomba TurbomolecularCono extractor
Cono de muestra
Valvula de
aislamiento
RF Lentes
(Hexápolo) Cuadrupolo
Modo de Ionización vs Polaridad
ESI
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 39
APcI
APPI
API: Interface ZSpray
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 40
API: Interface ZSpray
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 41
Z-Spray
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 42
API Interface
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 43
Puntas de Ionización
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 44
Fragmentación: Información Estructural
Los iones pueden ser inducidos a fragmentarse, incrementando elpotencial eléctrico (voltaje de cono).
CID: Interface ZSpray
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 45
La aceleración de estos iones ocasiona que colisionen con mayorfuerza con las moléculas neutras, causando una mayorfragmentación. (Collision induced decomposition CID)
El estudio de estos fragmento permite el estudio desde el punto devista estructural, posibilitando la confirmación de la presencia de unasustancia
Extraction ConeExtraction Cone
8,000
10,000
12,000
NH
N
N
CH 3
CH3
NH 2 S
O
O
Sulfamethazine
[M+H]+
4,000
6,000
8,000
10,000
12,000Parent Ion Region
MW 278Positive ion mode, ESI, 2 ul/min, 50%MeOH:49%H2O:1% HOAc
CID: Interface ZSpray
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 46
100 150 200 250 3000
2,000
4,000
6,000
8,000
m/z
Inte
nsit
y
Sample ConeSample Cone
30V30V
HexapoleHexapole
ionion--bridgebridge
277 278 279 280 281 282
2,000
4,000
m/z
H2O:1% HOAc
ExtractionExtraction ConeCone
NH
N
N
CH 3
CH3
NH 2 S
O
O
Sulfamethazine
10,000 8,000
10,000
Fragment Ion Region
MW 186C6H8N3O2S
92156
186
CID: Interface ZSpray
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 47
Collision induced Collision induced molecular ion molecular ion dissociation priordissociation priorto mass analysisto mass analysis
Sample ConeSample Cone
70V70V
100 150 200 250 3000
2,000
4,000
6,000
8,000
m/z
Inte
nsit
y
HexapoleHexapole
ionion--bridgebridge
[M+H]+
183 184 185 186 187 188
2,000
4,000
6,000
m/z
LC/MS y CIDGeneración de fragmentos y librerías
[MH][MH][MH][MH]++++ Ion molecularIon molecularIon molecularIon molecular
+15 Volts
+30 Volts
[M[M[M[M----H]H]H]H]----
-15 Volts
-30 VoltsMW: 355 CAS# 86-42-0 C20H22ClN3O (toxm l180804) Am odiaquine [ESI+ @ 15V]
100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 3800
50
100
179199
356
NCl
HN
OH
N
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 48
FFFF++++
Fragmentación totalFragmentación totalFragmentación totalFragmentación total
+45 Volts
+60 Volts
+75 Volts
+90 Volts
Información
estructural
FFFF----
-45 Volts
-60 Volts
-75 Volts
-90 Volts
MW: 355 CAS# 86-42-0 C20H22ClN3O (toxm l180804) Am odiaquine [ESI+ @ 90V]
100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 3800
50
100
118
128
136
163
177 205
219
228
240
255
268
283
356
NCl
HN
OH
N
100
0
100
%
0
100
%
236
207180
179158
181190196
208 235 237282
282
236
208176235 237
254283
282
ESI+@90V
ESI+@70V
ESI+@50V
NITRAZEPAMNITRAZEPAMNITRAZEPAMNITRAZEPAM
CCCC15151515HHHH11111111
NNNN3333OOOO3333
MW 281.27 (Nominal 281)MW 281.27 (Nominal 281)MW 281.27 (Nominal 281)MW 281.27 (Nominal 281)
CAS# 146CAS# 146CAS# 146CAS# 146----22222222----5555
NH
O
LC/MS y CIDGeneración de fragmentos y librerías
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 49
160 180 200 220 240 260 280 300m/z0
100
%
0
100
%
0
100
%
0
% 283
252222
194
166 195 206 223 280253281
252
222
253280
280
252 281
ESI-@90V
ESI-@70V
ESI-@50VAlgunas moléculas presentan una adecuada respuesta en
ESI para iones positivos y negativos facilitando su
inequívoca identificación
NN+
O-
O
Waters APGC/MS Interface
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 50
� APGC
— Atmospheric pressure GC interface
� Mayor rango de compuestos
— LC & GC en un solo instrumento
Waters APGC/MS Interface
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 51
— LC & GC en un solo instrumento
— Rápido intercambio de la fuente de
ionización
— Espectro APCI
— APGC no es un reemplazo de los
modos tradicionales de ionización
EI o CI en GC/MS
� Transferencia de carga
� N2+ y N4+ se forma en la region del plasma
– N2++M > M+. + N2
– N4++M > M+. + 2N2
� Protonación
� En presencia de trazas de agua.
SOURCE ENCLOSURE
Ion Chamber Corona Discharge
Transfer Line Tip
Cone Column
Modifier Reference
Waters APGC/MS Interface
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 52
� En presencia de trazas de agua.
�H3O+
– H3O+ + M > MH+ + H20
� modificadores (H2O o MeOH) pueden ser añadidos a efectos de favorecer la protonación
� Ionización mas “blanda” que EI, siendo el ion molecular generalmente predominante y
la fragmentación reducida significativamente.
� La fragmentación para análisis estructural se obtiene a través de CID o MSMS.
Biblioteca NIST
(mainlib ) Benzene, 1,4-dinitro-
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 1800
50
100
12 16
28
30
32
38
43 46
50
53
64
75
79 82 86
92
106
122
138152
168
O
N
O
N
OO
Ionización APGC: Protonación
1,4 Dinitrobenzene
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 53
Espectro
Obtenido M+
Teorico M+.
13:28:17
m/z50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200
%
0
100
%
0
100
APGC160408RUN007_8270 1358 (6.105) Cm (1356:1362-1300:1353) TOF MS AP+ 464169.0248
122.025275.0228
64.0296 76.028694.0407123.0290
152.0225170.0253
APGC160408RUN007_8270 (0.021) Is (1.00,0.10) C6H4N2O4 TOF MS AP+ 9.20e12168.0171
169.0199
1,4-Dinitrobenzene
(mainlib ) Phenol, 2,6-dimethyl-
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 1300
50
100
15 1826
27
29 31
38
39
40
41
42
43
45 47 49
50
51
53
55 60 62
63
64
65
6668 74 76
77
78
79
8082 86 89
91
93
95 98
103
107
122
OH
2,4-Dimetilfenol
Ionización APGC: Transferencia de cargas
Biblioteca NIST
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 54
13:28:17
m/z55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130
%
0
100
%
0
100
APGC160408RUN007_8270 998 (4.491) Cm (995:1001-(965:986+1007:1053)) TOF MS AP+ 2.98e3122.0723
107.0498
121.0658 123.0782
APGC160408RUN007_8270 (0.021) Is (1.00,0.10) C8H10O TOF MS AP+ 9.12e12122.0732
123.0766
2,4-Dimethylphenol
Espectro
Obtenido M+
Teorico M+.
�Mayor de 4 ordenes
�Ejemplo para benzo(g,h,i)perileno 2 pg to 10000 pg
Compound name: Benzo(g,h,i)perylene
Correlation coefficient: r = 0.998814, r^2 = 0.997629
Calibration curve: 0.104709 * x + 0.228912
Response type: External Std, Area
Curve type: Linear, Origin: Include, Weighting: Null, Axis trans: None
0.0
5.0
Compound name: Benzo(g,h,i)perylene
Correlation coefficient: r = 0.992916, r 2̂ = 0.985883
Calibration curve: 0.167382 * x + -82.0944
Response type: External Std, Area
Curve type: Linear, Origin: Include, Weighting: Null, Axis trans: None
0.0
5.0
Waters APGC/MS Interface: Performance
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 55
pg0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Re
sp
on
se
0
20
40
60
80
100
pg
Re
sid
ua
l
-20.0
-15.0
-10.0
-5.0
pg0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000
Re
sp
on
se
0
250
500
750
1000
1250
1500
pg
Re
sid
ua
l
-25.0
-20.0
-15.0
-10.0
-5.0
�Los compuestos indicados exhiben LOD en el rango de fg a pg
�PAH’s
�Anilina y compuestos relacionados
�Halo aromáticos
�Halo carbonados
Waters APGC/MS InterfaceTipo de Compuestos
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 56
�Halo carbonados
�Ftalatos
�Nitroso-benzenos y productos relacionados
�Fenoles y clorofenoles
�Eteres fenilicos
�Dibenzofuranos
� Isophorone
�Azobenzenos
Luego que los iones son producidos, son separados de acuerdo asu relación masa / carga (m/z) por un analizador
Analizador
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 57
Tipos de Analizadores:
- Magneticos
- Electrostaticos
Analizador
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 58
- Tiempo de Vuelo (ToF)
- Cuadrupolos (Q)
- Trampa Iónica (IT)
Principales características
- Rango de trabajo: Rango de m/z que pueden separarse
Analizador
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 59
- Transmisión: relación entre el numero de iones producidospor la fuente de ionización y los que llegan al detector
- Resolución: capacidad para separar la señal de dos ionescon pequeñas diferencias de masa.
Un cuadrupolo consiste de dos pares de barras de molibdeno exactamenteparalelas entres si, controladas por la combinación de potenciales deradio frecuencia (rf) y corriente continua (dc).
Cuadrupolo
Solo un ion de una masa especificapuede pasar a través del cuadrupolo
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 60
puede pasar a través del cuadrupolocuando se aplica un campo oscilatoriode rf y dc, llegando al detector(generalmente un multiplicador deelectrones o un foto multiplicador).El tiempo de vida de un ion desde suformación hasta su detección es de 50 a100 microsegundos.
Cuadrupolo
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 61
Cuadrupolo
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 62
El principio es muy similar al
cuadrupolo
Trampa de Iones
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 63
Los iones son atrapados por
campos RF & DC
Barrido de un campo puede
eyectar iones de un m/z
específico
Por aplicación de una rampa delvoltaje de RF, o por la aplicación deun voltaje suplementario sobre loselectrodos, o por combinación deambos, es posible:
� Desestabilizar los iones yeyectarlos en forma progresiva dela trampa
Trampa de Iones
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 64
� Retener solo un ion con undeterminado valor m/z en la trampay luego eyectarlo para observarloespecíficamente
� Retener solo un ion con undeterminado valor m/z en la trampa,fragmentarlo por vibracionesinducidas y observar susfragmentos (MS/MS “in time”)
� Repetir esta ultima operación variasveces en forma progresiva. Esto sedenomina MS/MSn
ToF: Resolución
RESOLUTION: 500
m/z 130
Standard internoMuestra
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 65
RESOLUTION: 5000
m/z 130.083
Masas exactas: Introducción
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 66
� Todos los elementos encontrados en la naturaleza tienen una única masa.
� Los elementos se combinan entre si para producir compuestos con distintas masas y propiedades fisicoquímicas.
� Estos compuestos pueden se detectados a través de la espectrometría de masas y sus masas medidas
� Si la masa de un compuesto puede ser medida con suficiente exactitud, una única composición elemental puede ser deducida.
�Carbono Tiene una masa igual a 12
�Hidrogeno Tiene una masa igual a 1
�Oxigeno Tiene una masa igual a 16
Masas exactas: Introducción
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 67
�Oxigeno Tiene una masa igual a 16
�Nitrógeno Tiene una masa igual a 14
� Estas son masas nominales, que no son exactas
�Carbono Tiene una masa de 12.0000
�Hidrogeno Tiene una masa de 1.0078
�Oxigeno Tiene una masa de 15.9949
�Nitrógeno Tiene una masa de 14.0031
Masas exactas: Introducción
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 68
� Es posible la existencia de diferentes combinaciones de átomos con igual masa nominal y diferente masa exacta
�Nitrógeno Tiene una masa de 14.0031
�CO = 27.9949
�N2 = 28.0061
�C2H4 = 28.0313
Masas exactas: Introducción
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 69
�Todas las moléculas tienen igual masa nominal y diferentes masas exactas
�Por medición de masas nominales no es posible distinguirlas
�Si un compuesto difiere en su composición elemental en algunas deestas moléculas, para su determinación estructural es necesariorecurrir a la medición de masas exactas.
� En los instrumentos la exactitud de masas que poseen, es medidacomo la diferencia (error) entre el valor determinado y la masaverdadera calculada
� La exactitud es medida en
� milliDaltons (1mDa = 0.001 unidades de masa)
� ppm = partes por millon = ∆m/m x 106
Masas exactas: ppm
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 70
� ppm = partes por millon = ∆m/m x 106
Masa verdadera = 400.0000
Masa medida = 400.0020
Diferencia = 0.0020 ( 2 mDa)
0.0020.002
400400x 106x 106ppm error =ppm error = = 5 ppm= 5 ppm
= 500
Ancho de pico 50% = 0.05Da
Resolución (FWHM) = 500 = 10000
Masa 100%
50%
Masas exactas: Resolución espectral
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 71
Resolución (FWHM) = 500 = 10000
0.05
FWHM = Full Width Half Maximum
500.0 500.1499.9
50%
0.05 Da
m/z
%
20
40
60
80
100 319.8965 319.9329
Resolution = 10,000
Resolución - Cuadrupolo y ToF
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 72
319.8 319.9 320.0 320.1 Mass
0
319.8 319.9 320.0 320.1 Mass
%
0
20
40
60
80
100 Resolution = 1,000
Iones
P
u
s
h
eV1
V2
Tiempo de vuelo (ToF)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 73
e
r
MCP
Espejo “W”
V1
V1 > V2
LockSpray Integrado
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 74
LockSpray Integrado
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 75
Una vez que los iones de interés son separados, estos deben ser convertidosen una señal fácilmente interpretable por el sistema de adquisición dedatos. Esta función la cumplen los detectores
Tipos de detectores:
- Multiplicador de electrones (Dynodos)
Detectores
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 76
- Multiplicador de electrones (Dynodos)
- Multicanales
- Fotomultiplicadores
Fotomultiplicador Dynolite
�Los iones provenientes del analizador son convertidos en electrones (conversion dynode)
�Estos electrones colisionan con una placa de fósforo que al ser excitada emite fotones
�Los fotones colisionan con un foto cátodo, ubicado en el frente del fotomultiplicador,donde se liberan electrones y se amplifica la señal producida.
�El fotomultiplicador se encuentra encerrado en un ambiente de vacío a efectos deprevenir posibles contaminaciones e incrementar su tiempo de vida.
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 77
El software es el corazón del sistema
• Adquisición de datos
• Procesamiento
• Identificación de espectros
• Control absoluto del sistema
Adquisición y procesamiento de datos
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 78
Opciones orientadas a diferentes aplicaciones:
QuanLynx (Cuantificación)
ProteinLynx (Identificación y secuenciación de Proteínas
MetaboLynx (Identificación de metabolitos)
NeoLynx (screenig de neonatos)
TargetLynx (Cuantificación, confirmación y limites permitidos)
Cono demuestra
Enfoquede iones Prefiltro Posfiltro
ConversionDynode
API, Simple cuadrupolo MS
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 79
Cono deExtracción
Fuente de ionesZ-Spray
Cuadrupolo
DETECTOR
Fósforo
Fotomultiplicador
ACQUITY UPLC + SQD 2
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 80
LC-ToF MS
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 81
LC-MS: Aplicaciones
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 82
Análisis de CarbamatosMonitoreo de residuos en aguas y suelos
Carbamatos: EPA M531.1
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 83
Carbamatos, derivatización
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 84
Derivatización postcolumna
Bomba
Columna
DetectorCamara mezcladora
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 85
Inyector
Bomba reactivo
Reactor
Carbamatos
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 86
LC – MS Condiciones
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 87
Cromatogramas, TIC y PDA
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 88
Methomyl, linealidad
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 89
Methomyl en diferentes matrices
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 90
m/z 233
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 91
Carbamatos, resumen
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 92
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 93
LCLC--MS/MS MS/MS Sistemas Sistemas TandemTandem
� Mayor Selectividad
� Reduce o elimina las interferencias debidas
a la matriz de trabajo
� Mayor Sensibilidad
LC-MS/MS vs LC-MS
� MS/MS Modos de trabajo
� Full Scan (Barrido)
� Single Ion Recording (SIR)
� Product Ion Scan
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 94
� Determinaciones a nivel de trazas, permite
alcanzar menores limites de detección y
confirmación
� Exactitud en análisis cuantitativos
� Reproducibilidad, estabilidad y rango
dinámico
� Cuantificación precisa a muy bajos niveles
de detección sobre matrices complejas
� Robustez
� Reducción del Clean Up de muestras, aun
en matrices complejas
� Precursor Scan
� Constant Neutral Loss
� Multiple Reaction Monitoring (MRM)
API, Cuadrupolo Tandem MS/MS
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 95
XEVO TQ-S: Cuadrupolo tandem
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 96
API, Cuadrupolo – Tiempo de vuelo QToF
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 97
XEVO G2-S QToF
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 98
Cuadrupolo Tandem: Usos
Impurezas, sustancias de degradación
Targets
Confirmación- Compara los tiempos de retención con el Standard
- Relación entre iones específicos SIR/MRM vs Standard
- Cuantificación - trazas
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 99
Impurezas, sustancias de degradación Compara los tiempos de Retención con el Standard
- Screening de rutina
- Espectros MS de sustancias conocidas
(Biblioteca)
Confirmación de
estructuras
Sustanciasdesconocidas
Interpretación- Peso Molecular
- Composición elemental
- Elucidación de estructuras
- Secuenciación
QQCuadrupolo Tandem
Rutina:Cuantificación
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 100
TOFTiempo de vuelo
Q TOF
Rutina:Screening dirigidos
Análisis de investigación
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 101
Cuadrupolo Tandem: Full Scan Mode
Q1 Modo RF Q2 Scan
Celda de colisión(sin gas)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 102
� El sistema esta operando como un sistema LC-MS de simple cuadrupolo
� Realiza un barrido dentro de un rango especificado m/z
306
250 300 350 400
321
380
200 500
306
250 300 350 400
321
380
200 500
Q2 Scan 200 - 500
Cuadrupolo Tandem: Single Ion Recording (SIR)
Celda de colisión(sin gas)
Q1 Modo RF Q2 Estático
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 103
� El sistema esta operando como un sistema LC-MS de simple cuadrupolo
� Se monitorean iones de relación m/z seleccionada
306
250 300 350 400
321
380 Q2 selecciona 306 m/z
306
Cuadrupolo Tandem:Multiple Reaction Monitoring (MRM)
Q1 Estático Q2 Estático
Celda de Colisión(Ar gas)
Fragmentación
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 104
� El sistema esta trabajando en modo selectivo, permite que solamente un ion determinado llegue a la celda de colisión para su fragmentación y un fragmento especifico sea detectado.
� Esto modo de trabajo se utiliza principalmente con fines cuantitativos
� Múltiples MRM pueden ser usados, también, como confirmatorios de la presencia de una sustancia.
306
250 300 350 400
321
380 Q1 selecciona 306 m/z
150 300
158
306
158
158
Q2 selecciona 158 m/z
Fragmentación
Multiple Reaction Monitoring: Selectividad
� MS/MS reduce o elimina las interferencias de matriz
MRM
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 105
SIR
Celda de colisión: Cambios de energía
100
%
0
100
%
275
275
230
Energía de colisión = 5 eV
(M + H)+
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 106
150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290m/z0
100
%
0
100
%
0
% 230
230
275
230
Energía de colisión = 10 eV
Energía de colisión = 12 eV
Energía de colisión = 17 eV
100
0
100
%
230
Energía celda de colisión = 17 eV
(M + H)+
Celda de colisión: Cambios de energía
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 107
150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290m/z0
100
%
0
100
% 167230
201180 202
167
201180 194 230
Energía celda de colisión = 30 eV
Energía celda de colisión = 38 eV
Product Ion Spectrum: Pirimiphos-methyl
Transición de confirmación
Transición de cuantificación
305 → 290
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 108
confirmación305 → 180
TargetLynx: Relación de iones
Peak Area
Ratio 0.616
272 → 237
Transición de
cuantificación
Criterios de confirmación
• Dependiendo de la abundanciarelativa de dos transiciones
(Heptachlor)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 109
Ratio 0.616
274 → 239
Transición de
confirmación
� > 0.5 ± 10%
� > 0.2 < 0.5 ± 15%
� > 0.1 < 0.2 ± 20%
• Esta relación es usada para confirmar o rechazar resultados positivos
Relación : 0.554 – 0.678 (0.616 ±±±±10%)
Ciclos de tiempo en MRM
� El tiempo de una transición MRM esta compuesto por dos parámetros principales:
1. Dwell time: Tiempo durante el cual una transición es monitoreada
2. Inter-channel delay: periodo que transcurre entre el monitoreo de transiciones MRMsucesivas, su función es permitir eliminar todos los iones de la celda de colisión
� Después del inter-channel delay, la celda debe ser llenada rápidamente con los iones de lasiguiente transición.
� Si esto no ocurre con la suficiente rapidez (por ejemplo cuando el dwell time es demasiadocorto) la señal puede disminuir en intensidad
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 110
corto) la señal puede disminuir en intensidad
100 ms Dwell Time, 10 ms Delay
%
0.63
%
0.63 Peak Width = 1.8 s
Points Across Peak = 7
Convert the x axis to scan number
Ciclos de tiempo en MRM
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 111
Peak Width 1.8 s
0 100 105 110 115 120 125 130Scan0
Time0.25 0.75 1.25 1.75
Points Across Peak = 60
0.25 0.75 1.25 1.75Time0
%
0.63
1100 1200 1300 1400Scan0
%
0.63
5 ms Dwell Time, 5 ms Delay
Convert the x axis to scan number
�Cross Talk
� Cuando el “dwell times” y el ”inter-channel delay” son demasiadoscortos, puede ocurrir que no todos los iones sean eliminados de lacelda de colisión.
Ciclos de tiempo en MRM
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 112
� Fragmentos de una transición están en la celda de colisióncuando la próxima transición empieza a ingresar.
� Cuando esto ocurre y las sucesivas transiciones tienen fragmentos(hijas) similares pueden generarse falsos positivos en laidentificación de compuestos estructuralmente relacionados opatrones de fragmentación diferentes a los reales.
Señal y Ciclos MRM: Celda T-Wave
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 113
Métodos MS/MS: MRM
�Funciones MRM
� Mayor flexibilidad en el uso de “dwell time”
� Mayor cantidad de transiciones por función
� Mayor definición del pico e incremento de la relación Señal / Ruido
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 114
Porque, a veces, son necesarias técnicas full scan ?
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 115
Porque, a veces, son necesarias técnicas full scan ?
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 116
Porque, a veces, son necesarias técnicas full scan ?
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 117
Cuadrupolo Tandem: Product Ion Scanning
Q1 Estático Q2 Scan
Celda de colisión(Ar gas)
Fragmentación
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 118
� El sistema permite seleccionar un ion de m/z definida, el cual es fragmentado en lacelda de colisión y se detectan todos los fragmentos (product ions).
� Se utiliza principalmente con fines cualitativos
306
250 300 350 400
321
380 Q1 selecciona 306 m/z
150 300
158
306Q2 Scan 100 -310
150 300
158
306
Fragmentación
Product ion scan
Espectro de fragmentación de la reserpina 609m/z
� Puede ser usado en el
desarrollo de métodos para
identificar los fragmentos de
cuantificación y confirmación
en el modo MRM
Parent Ion
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 119
Fragmentos: Péptidos
100286.12
340.17
R SDY F I A T M Y" MAXI
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 120
100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200m/z0
%
215.08
160.08
86.09
157.13
802.36
800.39
689.29389.21
417.21
542.24
487.07
418.22
455.22
609.29
608.77668.32
690.28
785.36
986.48803.36
915.43
913.44
804.39
916.47987.48
1087.55
1088.52
(M+2H)2+
MS/MS of m/z 608.8/609.8 (M+2H)2+ peptide annotated with y" ion sequenceFigure 2.
Que es MSE ??
Baja energía de colisión
produce el ion precursor MS
%
MS
%
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 121
Alta energía de colisión
Produce fragmentación
m/z
MSE
%
m/z
m/z
MSE
%
m/z
time
%
time
%
Cuadrupolo Tandem: Precursor Ion Scan
Q2 EstáticoQ1 Scan
Celda de colisión(Ar gas)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 122
� El primer cuadrupolo permite pasar todos los iones (dentro de un rango de barrido especificado)para su fragmentación y luego se detecta un ion de m/z determinada (product ions).
� Se utiliza principalmente con fines cualitativos o screening de sustancias estructuralmenterelacionadas
Se ven todos losIones que producenEl fragmento m/z 79
OH
NH2+
OH
NH2+
OH
NH2+
Iones de m/z = 116 producido por la ruptura del enlace indicado por
Precursor Ion Scan
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 123
OH
O
O
OH
O
OH
O
NH
PropranololMW=259
MetoprololMW=267
PindololMW=248
Precursor Ion Scan
100
%
MIX_MS 1 (1.025) Scan ES+ 1.56e9235
268
260249267
280
295
MS Scan de la mezcla
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 124
230 240 250 260 270 280 290 300m/z0
100
%
0MIX_PAR 1 (2.070) Parents of 116ES+
5.63e7249
260268
Iones precursores del ion m/z=116
Metoprolol
PropranololPindolol
Cuadrupolo Tandem: Constant Neutral Loss
Q2 ScanQ1 Scan
Celda de colisión(Ar gas)
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 125
� El primer y segundo cuadrupolo trabajan en el modo de barrido dentro de un rango determinado demasas, pero el segundo cuadrupolo permite que únicamente los iones que difieren en una determinadamasa (equivalente a la perdida de un fragmento neutro) respecto de Q1 sean transmitidos hacia eldetector.
� Se utiliza principalmente para el screening de familias de compuestos
� Los ácidos carboxílicos se fragmentan perdiendo una molécula neutra de dióxido de carbono CO2
equivalente a una variación de masa de 44 Da o unidades de masa atómica.
� Principalmente utilizado con fines cualitativos
� Se utiliza estratégicamente en trabajos de screening
NN
O
SO O
O
N
O
O
Glu Cys Gly
Glutathione 307.33 daltons
Constant Neutral Loss
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 126
NN
O
SO O
O
N
O
O OH
NCOCH3
NN
O
SO
O
OH
NCOCH3
ON
O
O
Perdida de una molécula de
Acido piroglutámico: –129.0426
Interferencias isobáricasPerdida de acido piroglutámico –129.0426
Constant Neutral Loss
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 127
GSH Adduct
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 128
Movilidad IónicaMovilidad IónicaCuadrupoloCuadrupolo / / IMSIMS / / ToFToF
SYNAPT™ HDMS™ Cuadrupolo / Movilidad Ionica IMS / ToF
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 129
DriftScope™
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 130
DriftScope – Superposición de datos
Retention TimeRetention Time
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 131
Retention Time
Mass
DriftDrift
Mass
Retention Time
Guía de Iones: TriWave
�Triwave esta constituida por tres T-Wave™
� TRAP
� Separación por Movilidad Iónica(IMS)
� TRANSFER
TRAP
T-Wave
IMS
T-Wave
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 132
� TRANSFER
�TRAP y TRANSFER pueden ser utilizadas para CID
� CID/IMS
� IMS/CID
� CID/IMS/CID (TAPfragmentation)
TRANSFER
T-Wave
CID
Experimento IMS MS
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 133
Drift time
Iones separados por IMS
m/z
oa-ToF
Drift time
m/z
Transfer: Fragmentación
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 134
Drift time
Iones precursores
m/z
Precursores y fragmentos
Drift time
m/z
Iones precursores
Trap: fragmentación
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 135
Iones Precursores
y fragmentos
Drift time
Iones separados por IMS
m/z
oa-ToF
Drift time
m/z
Time Aligned Parallel Fragmentation (TAP)
Q1
Precursores
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 136
Drift time
Fragmentos separados
por IMS
m/z
Iones precursores
fragmentados
Drift time
m/z
Precursores y fragmentos,
igual drift time
SYNAPT HDMS y MS
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 137
Consultas ???Consultas ???Consultas ???Consultas ???Consultas ???Consultas ???Consultas ???Consultas ???
Mayo 2013 - D’Amico Sistemas S.A.Diapositiva 138
D’Amico Sistemas S.ADaniel [email protected]