Metodología y técnicas para el estudio de enfermedades ... · PDF...

Metodologa y tcnicas para el estudio de enfermedades musculares
Dolores Moreno Len. Tcnico Superior Anatoma Patolgica y CitologaINP (Instituto Neuropatologa)IDIBELLHUB (Hospital Universitari de Bellvitge). LHospitalet de Llobregat.CIBERNED

Msculo esqueltico
Fascculo
Fibra muscular(varios mm a varios cm)
BIOPSIA MUSCULAR Introduccin
Anatoma del msculo esqueltico

Anatoma del msculo esqueltico
Fibras tipo I y tipo II, y contraccin muscular
Tipo I rojas +++ lenta, +++ mitocondrias+++ actividad oxidativa+++ mioglobina +++ gotas lipdicas
Tipo IIb blancas +++ rpida, +++ glucgeno+++ miofibrillas
IIa intermedias ++ rpidas
IIIc regenerativas
Fibra muscularTipo I
MotoneuronaTipo I Miofibrillas
Fibra muscularTipo II
MotoneuronaTipo II
Miofibrillas

Ncleo
Caveolina
ComplejoSarcoglicanos
Distrofina
Miofibrillas
B-cristalinaMiotilinaTeletonina
ComplejoDistroglicano
Actina asociadaal esqueleto
Lamina A/C
Emerina
Banda Z-actina
Desmina
Sarcoplasma
Sarcolema
MiosinaTitina
Mitocondrias
Glucgeno
lpidos
sarcmero
BT
B
BT
T
Laminina 21 1
2
ActinaTroponinaTropomiosinaNebulina
Esquema fibra muscular

Ncleo
Caveolina
Distrofina
Miofibrillas
Lamina A/C
Emerina
Banda Z-actina
Desmina
Sarcoplasma
Sarcolema
MiosinaTitina
Mitocondrias
Glucgeno
lpidos
Protenas membrana:Patrn distrfico
sarcmero
BT
B
BT
T
Laminina 21 1
2

Ncleo
Caveolina
Distrofina
Miofibrillas
ComplejoDistroglicanoLaminina 2
1 12
Lamina A/C
Emerina
Banda Z-actina
Desmina
Sarcoplasma
Sarcolema
MiosinaTitina
Mitocondrias
Glucgeno
lpidos Protenasde sostn:patrn MFM
sarcmero
BT
B
BT
T
MFM= miopatia miofibrilar

Ncleo
Caveolina
Distrofina
Miofibrillas
Lamina A/C
Emerina
Banda Z-actina
Desmina
Sarcoplasma
Sarcolema
MiosinaTitina
Mitocondrias
Glucgeno
lpidosFallo en el metabolismode la fibra:enfermedades metablicas
sarcmero
BT
B
BT
T
Laminina 21 1
2

Ncleo
Caveolina
Distrofina
Miofibrillas
Lamina A/C
Emerina
Banda Z-actina
Desmina
Sarcoplasma
Sarcolema
MiosinaTitina
Mitocondrias
Glucgeno
lpidos
sarcmero
BT
B
BT
T
InfiltradosInflamatorios: miositis
Laminina 21 1
2

- La mayora son de carcter gentico y generalmente hereditarias
- Son enfermedades crnicas y progresivas
- Afectan a la musculatura y al sistema nervioso perifrico
- Su aparicin puede producirse en el nacimiento o en otras etapas de la vida
- Las caractersticas ms importantes son la prdida progresiva de fuerza muscular, y la degeneracin de los msculos y de los nervios perifricos
Las enfermedades neuromusculares

Enfermedades neuromusculares
Motoneurona Perifrica(Asta anterior de la mdula espinal)
Hereditarias:.-Amiotrfias espinalesAdquiridas:.-Virales: poliomielitis.-Degenerativas: Esclerosis lateral amiotrfica(ELA)
Nervio perifrico (fibra nerviosa) Unin Neuromuscular
Fibra Muscular
Neuropatas sensitivo-motoraHereditarias:.-Enfermedad Charcot-Marie-Tooth.-LeucodistrfiasAdquiridas:.-Inflamatorias: S. Guillain Barr, polineuropatadesmielinizante crnica inflamatoria (PCDI)
.-Infecciosas
.-Txicas
.-Metablicas (e.j. diabetes)
Enfermedades de la unin neuromuscularHereditarias: SndromesmiastnicosCongnitosAdquiridas:Miastenia gravis
DISTROFIAS MUSCULARES CONGNITAS
DISTROFIAS MUSCULARES
GLUCOGENOSIS
MITOCONDRIALES METABLICAS
MIOPATAS LIPDICAS
MIOSITIS
MFM (Miopatia Miofibrilar)
MIOPATAS CONGNITAS
MIOPATAS DISTALES
MIOTONAS CONGNITAS
PARLISIS PERIDICA
DISTROFIAS MIOTNICAS

FLNC,autosmica dominante, 7q32.0
autosmica dominante, 4q35
Zaspautosmica dominante 10q22.3-23.2espordica
(Miopata de Landouzy-Djrine)
Miotilinaautosmica, dominante 5q31
inclusion body myositis)Distrofia muscular facioescapulo-humeral
Alfa-B-cristalina autosmica dominante, 11q21-23
Miositis por cuerpos de inclusin (IBM oautosmica recesiva, 2p13-p16
Desminaautosmica dominante 2q35
adquiridas(LGMD 2B)
Miopatias Miofibrilares (MFM)
Dermatomiositisautosmica dominante, 5q22-q34adquiridas(LGMD 1A)
autosmica recesiva, 17q225 (maltasa cida)
PolimiositisDistrofias musculares de cinturas
Enfermedad de Pompe
inflamatoriasautosmica recesiva, 15q15 (calpaina 3)
(fosfofructoquinasa)
Enfermedades musculares(LGMD 2A)
autosmica recesiva, 12q13.3
Distrofia muscular de cinturas tipo Erb
Enfermedad de Tauriautosmica dominante, 14q11.2q13
autosmica recesiva, 5q33 (deltasarcoglicano)
(fosforilasa muscular)
Distrofia muscular oculofarngeadeltasarcoglicano (LGMD 2F)
autosmica recesiva, 11q13autosmic recesivoDistrofia muscular con dficit en
Enfermedad de McArdleenfermedad de Santavuori)autosmica recesiva, 13q12 (gammasarcoglicano)
Glucogenosis musculares:Sndrome MEB (Msculo-Ojo-Cerebro ogammasarcoglicano (LGMD 2C)
deshidrogenasa)autosmica recesivaDistrofia muscular con dficit en
autosmica recesiva, 12q22-qter (acil CoASndrome de Walker-Warburgautosmica recesiva, 4q12 (betasarcoglicano)
deshidrogenasa43 DAG y de merosina)betasarcoglicano (LGMD 2E)
Lipidosis con dficit en acil CoAautosmica recesiva, 9q31 q32 (dficit parcial deDistrofia muscular con dficit en
(carnitina palmitiltransferasa)Fukuyamaalfasarcoglicano)
autosmica recesiva, 1p32Distrofia muscular congnita de tipoautosmica recesiva, 17q12-q21 (adhalina o
palmitiltransferasa de tipo II (CTP II)autosmica recesiva, 6q22 23 (merosina)de alfasarcoglicano (LGMD 2D)
Miopatas con dficit de carnitinamerosinaDistrofia muscular con dficit de adhalina o
autosmica recesivaDistrofia muscular congnita con dficit derecesivas ligadas a X, Xp21,2(distrofina)Miopatas con dficit de carnitinaa2 del colgeno VI) 2q37Distrofinopatas menores
Lipidosis musculares:autosmica dominante, 21q22,3 (sub-unidades a1 yrecesiva ligada a X, Xp21,2(distrofina)autosmica recesiva ligada a X, espordicaMiopata de BethlemDistrofia muscular de Becker
transmisin materna, autosmica dominante,recesiva ligada a X, Xq28 (emerina)recesiva ligada a X, Xp21,2(distrofina)Miopatas mitocondrialesDistrofia muscular de Emery-DreifussDistrofia muscular de Duchenne
Miopatas metablicasDistrofias musculares IIDistrofias musculares I

BIOPSIA MUSCULAR
Recepcin de la biopsia muscular
Recepcin
Historia clnica. Pruebas complementarias
Biopsia muscular
Congelacin/OCT Reserva s/mM.E.
Extraccin de protenas
Extraccin ADN Banco ADN
Cortes criostato
PCRwestern blotting
Estudio ultraestructural
Estudio EHQ/HQ/IHQ
DIAGNSTICO Consejo Gentico
Banco Tejidos

BIOPSIA MUSCULAR
- Comprobacin de datos del paciente y nmero de registro
- Separacin de diferentes fragmentos para sus diferentes estudios:- OCT- Reserva sin montar para western blotting y/o ADN- PFA 4% (paraformaldehdo)- m.e. (microscopa electrnica)
- Congelacin de la biopsia muscular al corte transversal en isopentano enfriado en nitrgeno lquido y posterior montaje en OCT
- Conservar la muestra a -80C
- Cortes de criostato entre 6 y 8 m. Montaje en portas pretratados
Recepcin

BIOPSIA MUSCULAR Recepcin
Orientar las fibras en la misma direccin
Seleccionar los diferentes fragmentos
Comprobarcin de los datos y nmero de laboratorio
Fibras sin orientar
Mantener el nmero asignado durante todo el proceso de congelacin

BIOPSIA MUSCULAR Congelacin
Congelacin de la biopsia muscular
Diferentes pasos de la congelacin de la muestra
Inclusin en OCT con la orientacin transversal al corte
N2
Metilbutano
Congelacin durante 10en metilbutano frio
Bloque de OCT
Reserva sin montar

BIOPSIA MUSCULAR
-H-E (hematoxilina-eosina)
-T. Gomori (Tricrmico de Gomori)
-PAS, PAS+D (cido periodico de Schiff, ms diastasa)
-NADH (nicotin-adenina deshidrogenasa)
-AT

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