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“La modulación de la vía de señalización mTOR por
miRNAs podría estar implicada en la respuesta a
corticoides en pacientes con colitis ulcerosa activa”
Naves, Juan Enrique1; Manyé, Josep1; Loren, Violeta1; Mañosa, Miriam1; Moret, Inés 2; García-Jaraquemada, Arce1;
Bastida, Guillermo2; Beltran, Belén2; Cabré, Eduard1; Domènech, Eugeni1.
PI11/01691
• Los glucocorticoides (GC) son el tratamiento de elección de
los brotes moderados y severos de colitis ulcerosa (CU).
• Sin embargo, alrededor de un 40% de pacientes presentará
una respuesta inadecuada a los mismos.
• Existen variables clínicas y analíticas que aplicadas al tercer
día de tratamiento permiten predecir una mala respuesta, pero
no conocemos completamente los mecanismos moleculares
subyacentes responsables de refractariedad.
Colitis ulcerosa y glucocorticoides
Mecanismos de acción de los GC
Proteínas pro-inflamatorias
Mecanismos de acción de los GC
GC
GC GC
X Proteínas
pro-inflamatorias
miRNA
5’ 3’ RNAm
miRNAs (miR) y respuesta a GC
Proteínas pro-inflamatorias
miRNA
5’ 3’ RNAm
miRNAs (miR) y respuesta a GC
Proteínas pro-inflamatorias
miRNA
5’ 3’ RNAm RNAm miRNA
RNAm
RNAm
RNAm
RNAm
miRNA
miRNA
miRNA
miRNA
miRNAs (miR) y respuesta a GC
Proteínas pro-inflamatorias
• Estudiar el transcriptoma (miRNA- RNAm) de mucosa
rectal de pacientes con CU activa respondedores
(RE) y no respondedores (noRE) a GC.
Objetivo
Esteroides
1mg/Kg/día
Basal
Brotes moderados y severos de CU
Biopsias recto
3er día
Material y Métodos
Biopsias recto
Esteroides
1mg/Kg/día
Basal 7mo día Respondedores GC
Montreal S0 o S1
No respondedores GC
Montreal S2 o S3
Brotes moderados y severos de CU
Biopsias recto
3er día
Material y Métodos
Esteroides
1mg/Kg/día
Biopsias recto
Esteroides
1mg/Kg/día
Basal 7mo día Respondedores GC
Montreal S0 o S1
No respondedores GC
Montreal S2 o S3
Brotes moderados y severos de CU
Biopsias recto
3er día
Material y Métodos
Esteroides
1mg/Kg/día
Biopsias recto
24 pacientes
(48 muestras)
Esteroides
1mg/Kg/día
Basal 7mo día Respondedores GC
Montreal S0 o S1
No respondedores GC
Montreal S2 o S3
Brotes moderados y severos de CU
Biopsias recto
3er día
RIN > 8
30 muestras miRNA
RNAm Microarray
(+ PCR)
Material y Métodos
Esteroides
1mg/Kg/día
Secuenciación
Biopsias recto
RIN > 7
32 muestras
Expresión diferencial:
• p ajust < 0,05
•FC ≥1,5
24 pacientes
(48 muestras)
Flujo de trabajo
Respondedores basal
(n=8)
No respondedores 3 día
(n=6)
Respondedores 3 día
(n=9)
No respondedores basal
(n=7)
infraexpresado
sobreexpresado
Expresión diferencial de miR (secuenciación)
miR-1246
miR-183-5p
miR-5701
miR-625-3p
miR-3607-3p
miR-1246
miR-1291
miR-625-3p
miR-5701
miR-1246
miR-449a,b,c
miR-4770
Resultados
P ajustada < 0,05 FC ≥1,5
miR-1246
miR-4770
miR-449a
miR-145-3p
miR-1291
Respondedores basal
(n=8)
No respondedores 3 día
(n=6)
Respondedores 3 día
(n=9)
No respondedores basal
(n=7)
infraexpresado
sobreexpresado
Expresión diferencial de miR (secuenciación)
miR-1246
miR-183-5p
miR-5701
miR-625-3p
miR-3607-3p
miR-1246
miR-1291
miR-625-3p
miR-5701
miR-1246
miR-449a,b,c
miR-4770
Resultados
P ajustada < 0,05 FC ≥1,5
miR-1246
miR-4770
miR-449a
miR-145-3p
miR-1291
Respondedores basal
(n=8)
No respondedores 3 día
(n=6)
Respondedores 3 día
(n=9)
No respondedores basal
(n=7)
infraexpresado
sobreexpresado
Expresión diferencial de miR (secuenciación)
miR-1246
miR-183-5p
miR-5701
miR-625-3p
miR-3607-3p
miR-1246
miR-1291
miR-625-3p
miR-5701
miR-1246
miR-449a,b,c
miR-4770
Resultados
P ajustada < 0,05 FC ≥1,5
miR-1246
miR-4770
miR-449a
miR-145-3p
miR-1291
Respondedores basal
(n=8)
No respondedores 3 día
(n=6)
Respondedores 3 día
(n=9)
No respondedores basal
(n=7)
infraexpresado
sobreexpresado
Expresión diferencial de miR (secuenciación)
miR-1246
miR-183-5p
miR-5701
miR-625-3p
miR-3607-3p
miR-1246
miR-4770
miR-449a
miR-145-3p
miR-1291
miR-1246
miR-1291
miR-625-3p
miR-5701
miR-1246
miR-449a,b,c
miR-4770
Resultados
P ajustada < 0,05 FC ≥1,5
Respondedores basal
(n=8)
No respondedores 3 día
(n=6)
Respondedores 3 día
(n=9)
No respondedores basal
(n=7)
infraexpresado
sobreexpresado
Expresión diferencial de miR (secuenciación)
miR-1246
miR-183-5p
miR-5701
miR-625-3p
miR-3607-3p
miR-1246
miR-4770
miR-449ª
miR-145-3p
miR-1291
miR-1246
miR-1291
miR-625-3p
miR-5701
miR-1246
miR-449a,b,c
miR-4770
Resultados
P ajustada < 0,05 FC ≥1,5
Estudio in silico de miRNAs
miR-1246
miR-625
miR-1291
(*) Target Human Scan database (http://www.targetscan.org)
Potenciales targets (*)
miR-183
miR-3607
miR-145
miR-4770
miR-449
Estudio in silico de miRNAs
miR-1246
miR-625
miR-1291
3745 RNAm
(*) Target Human Scan database (http://www.targetscan.org)
Potenciales targets (*)
6658 RNAm
5618 RNAm
miR-183 4239 RNAm
miR-3607 6142 RNAm
miR-145 5464 RNAm
miR-4770 5497 RNAm
miR-449 5646 RNAm
Estudio in silico de miRNAs
miR-1246
miR-625
miR-1291
(*) Target Human Scan database (http://www.targetscan.org)
(**) GeneCodis web (http://www.genecodis.cnb.csic.es)
Potenciales targets (*) Potenciales vías enriquecidas (**)
miR-183
miR-3607
MAPKinasa; regulación del citoesqueleto; endocitosis.
MAPKinasa; endocitosis; vía de señalización del calcio.
MAPKinasa; regulación del citoesqueleto; endocitosis.
MAPKinasa; endocitosis; vía de señalización de insulina.
MAPKinasa; regulación del citoesqueleto; endocitosis.
miR-145 MAPKinasa; endocitosis; regulación del citoesqueleto.
miR-4770 Interacción citoquina-receptor; adhesión focal; endocitosis.
miR-449 MAPKinasa; adhesión focal; endocitosis.
3745 RNAm
6658 RNAm
5618 RNAm
4239 RNAm
6142 RNAm
5464 RNAm
5497 RNAm
5646 RNAm
Respondedores basal
(n=9)
No respondedores 3 día
(n=8)
Respondedores 3 día
(n=9)
No respondedores basal
(n=6)
DDIT4 o REDD1
ns
ns
ns
Expresión diferencial de RNAm (microarrays)
Resultados
P ajustada < 0,05 FC ≥1,5
Resultados de microarrays validados por PCR
Resultados
R2 lineal = 0,841
Validación de microarrays mediante PCR
secuenciación microarrays
Resultados
miR-1246
miR-625
miR-1291
miR-183
miR-3607
miR-145
miR-4770
miR-449
DDIT4 REDD1
DDIT4 REDD1
miR-1246
miR-625
miR-1291
miR-183
miR-3607
miR-145
miR-4770
miR-449
secuenciación microarrays
Resultados
miR-3607 miR-625 miR-183
DDIT4 / REDD1
Resultados
DDIT4 / REDD1 y la vía mTOR
DDIT4 / REDD1 y la vía mTOR
miR-625 miR-183 miR-3607
miR-183 miR-145
miR-183 miR-145
miR-183
miR-145
miR-145
miR-145
miR-145
miR-145
miR-1246 miR-183 miR-145 miR-449a
miR-1246 miR-1291 miR-4770 miR-3607
miR-1246 miR-1291 miR-625
miR-1246
miR-1246 miR-1291 miR-3607
miR-1246 miR-145
miR-1291 miR-625 miR-183 miR-4770 miR-1291
miR-625 miR-4770
miR-1291 miR-183 miR-625
miR-1291 miR-3607
miR-1291 miR-183 miR-145
miR-1291 miR-625 miR-3607
miR-1291
miR-625 miR-4770
miR-625 miR-1246
miR-625 miR-145
miR-625 miR-183 miR-3607
miR-145
miR-3607
miR-3607
DDIT4 / REDD1 y la vía mTOR
miR-1291
• Existe un perfil diferencial de miR en la mucosa rectal de
pacientes con CU activa RE y noRE a GC, incluso antes de
iniciar el tratamiento.
• La regulación de la expresión génica por miR podría
desempeñar un importante papel en la respuesta a GC.
• Los miR diferenciales entre RE y noRE podrían modular
diferentes genes de la vía mTOR, que podría a su vez estar
implicada en la respuesta a GC.
• Serán necesarios más estudio para confirmar estos hallazgos.
Conclusiones