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Microbiología

CULTIVOS MICROBIANOS

El cultivo o mantenimiento de los microorganismos enlaboratorio requiere la preparación de unos medios de cultivo ylas condiciones adecuadas para su crecimiento.

aislamiento cultivo CrecimientoEstudio e

identificación

Medios de cultivo

Esterilización y condiciones asépticas

Para obtener un cultivo puro de una estirpe microbiana se inocula una única célula enun medio de cultivo apropiado. En condiciones favorable, la célula se multiplicaoriginando un clon.

Una colonia es una población clonal lo suficientemente grande como para serobservada a simple vista sobre la superficie de un medio sólido. Un colonia de tamañomedio contiene alrededor de 109 células.

El aislamiento suele realizarse sobre un medio sólido y consiste en la separación de lascélulas a partir del inóculo inicial por distintos procedimientos

Aislamiento de microorganismos

Medio líquido, en matraz o en tubo de ensayo

Medio sólido, en placa de Petri (agar)

Medios de cultivo

Métodos de cultivo

2. Manipulando los cultivos en condiciones asépticas. Cuando se destapan y manipulan los cultivos debe evitarse la entrada de aire o el contacto con elementos que puedan estar contaminados. Por eso, la transferencia de un medio a otro se realiza en la proximidad de la llama de un mechero con un asa de siembra

Debido a su pequeño tamaño y a su ubicuidad, los microorganismos que se encuentran en el aire, en las manos o en el material de laboratorio pueden contaminar fácilmente los medios de cultivo.Para evitarlo, se mantienen en todo momento condiciones asépticas

1. Esterilizando los medios de cultivo y el material utilizado

La esterilización consiste en eliminar totalmente los microorganismos de los medios de cultivo, el material y los utensilios de laboratorio.

Los métodos de esterilización pueden ser físicos (calor, radiaciones, …) o químicos (microbicidas como lejía). En este último caso es importante que el compuesto utilizado sea volátil para que se pueda eliminar fácilmente del objeto esterilizado.

Técnicas de esterilización

En condiciones ambientales favorables (temperatura, disponibilidad de nutrientes, …) la poblaciones de microorganismos experimentan un incremento rápido en el número de células.

La mayoría de los cultivos microbianos en laboratorio se llevan a cabo en cultivo cerrado, de modo que ni se añaden nutrientes ni se retiran desechos. En estas condiciones el ciclo de crecimiento presenta cuatro fases.

Crecimiento microbiano

Observación de microorganismosLa observación de los microorganismos debe realizarse almicroscopio.

Para la preparación de las muestras pueden emplearse técnicas depreparación en fresco o tinciones.

Entre estas suele utilizarse la Tinción de Gram, una tincióndiferencial que permite distinguir entre dos tipos de bacterias enfunción de la composición y estructura de su pared. Las Grampositivas retienen el colorante fundamental (crista violeta) y lasGram negativas lo pierden al lavarlas con alcohol y se tiñen con elcolorante de contraste (safranina)

Glosario

Esterilización: Eliminación de toda forma de vida microbiana, incluidas las esporas

Antibióticos: Sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo

Antisépticos: Sustancias químicas que previenen el crecimiento o acción de los microorganismos, ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad

Clon: Un conjunto de seres genéticamente idénticos que descienden de un mismo individuo por mecanismos de reproducción asexual

Asepsia: Técnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo

Inocular: Introducir un inóculo, es decir, una pequeña cantidad de microorganismos en un medio de cultivo

Microbicida: Agente que mata formas vegetativas, pero no necesariamente las esporas de un microorganismo

Microbiostático: Agente que inhibe el crecimiento de microorganismo