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“Plataformas on-line de

sensibilidad a Botryticidas en

Arándanos: la base para el

diseño de programas de

Control”

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]

Ing. Agr. M.Sc. Marcela Esterio G.Universidad de Chile

Condiciones medioCondiciones medio--ambientales favorables para ambientales favorables para el desarrollo del hongoel desarrollo del hongo

GRAN VARIABILIDAD GENGRAN VARIABILIDAD GENÉÉTICA TICA AL MENOS DOS ESPECIES Y 4 GENOTIPOSAL MENOS DOS ESPECIES Y 4 GENOTIPOS

DinDináámica poblacional / poblaciones reaccionan mica poblacional / poblaciones reaccionan frente a condiciones de manejofrente a condiciones de manejo

POR ELLO POBLACIONES DEL HONGO PRESENTAN distinta agresividad y REACCIONAN

DIFERENTEMENTE FRENTE A cambios en EL MANEJO (FUNGICIDAS),

afectando el Controlafectando el Control Químico


0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 CSJ

UF913UF929U51 U6 U26 U32U29U49U75U68U61U9U149U46A1K22U83U56U77U1U4U11U5U14U200U2U7U134A61T70T71K21A2A3A4A51A62A63A50U42U41U36K1T20T27TF4T5T6T10T24T43T16T57T18T23T32T50K10K20K18K16K11K12K31K32K8UF619T31K28K29U57U13UF632A64

tttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttbbttttttttttttttttttbbvvvvbbbvvvb

A

B

C

Kiwi

Tomate

Arándano

Vid

Muñoz et al., 2002

(Thompson y Latorre, 1999; Giraud et al., 1999).

Diferenciación de aislados según hospederos en Chile√

Control químico

BotryticidasBotryticidas, 1970 , 1970 …… 2011 y 2011 y ……iprodione

EstrobilurinasEstrobilurinas

CyprodinilCyprodinilfenhexamid

Mezclas de activos

Fungicidas Orgánicos CÍTRICOSFungicidas biológicos

boscalid

fludioxonil

fluazinam

tebuconazole


PyrimethanilPyrimethanil

Otras herramientas … para el control

Control químico

Respiración β ‐tubulinaSíntesis de esteroles

Regul. osmótica

Síntesis de metionina

AnilinopyrimidinasBenzimidazolesCarboxamidas

Dicarboximidas Phenylpyrroles

Hydroxyanilidas

Fenhexamid(EC50< 0.1 ppm)

Fludioxonil(EC50< 0.1 ppm)

Iprodione(EC50< 1 ppm)

Boscalid(EC50< 0.5 ppm)

Pyrimethanil(EC50< 0.5 ppm)

Cyprodinil(EC50< 0.03 ppm)

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ [email protected]

• (i) alteración del sitio de acción, lo cual reduce o anula la unión o contacto con el fungicida;

• (ii) síntesis de una enzima alternativa capaz de sustituir la enzima patogénica bloqueada;• (iii) sobre producción de un metabolito que bloqueé al fungicida, y • (iv) por degradación metabólica del fungicida a través de producción de enzimas

secretadas por el patógeno.

(Gisi et al., 2000; Gullino et al., 2000, Fluit et al., 2001; MgGrath, 2001)

La resistencia a un fungicidaLa resistencia a un fungicida: modificación genética de un patógeno que le otorga una menor sensibilidad ……. adaptación estable y heredable (Leroux et al., 1998) y puede ser causada por varios mecanismos:



Resistencias Específicas y MDRs:

• La Resistencia específica, es consecuencia de:

- Un uso reiterado de una determinada molécula,- Utilización de Dosis inadecuadas- falta de conocimiento de las caract. de laspoblaciones locales

• MDRs:- Uso de moléculas de distinto modo de acción (> presión de selección)- Uso de formulaciones en Mezclas (Dosis <)- Falta de conocimiento de las poblaciones locales

Genotipos: Respuesta diferencial a fungicidasGenotipos: Respuesta diferencial a fungicidas

‐ B. cinerea transposa y flipper resistencia a dicarboximidas (Giraud et al.,

1999, Esterio et al., 2003) y a Fenhexamid (Esterio et al., no publicado)


FenhexamidFenhexamidNo presenta resistencia cruzada a: Benzimidazoles, Dicarboximidas y Anilinopyrimidinas.

Resistencia asociada a gen erg27. ‐ HydR1 (aislados vacuma alelo 1 gen Bc‐hch (Botrytis Grupo 1)), no presente en Chile / detoxifican importancia en el caso de fenotipos MDR.

‐ HydR2: sólo algunos aislados en Francia / detoxifican y de acuerdo a lo anterior posiblemente presente en Chile (0,4 ppm).

‐ HydR3: dos tipos de aislados según polimorfismo en erg27 (presentes en Chile): HydR3+:mutación en posición 412; (5 y + ppm)

HydR3‐: una a varias mutaciones (0,2 – 3,5 ppm)

Aislados chilenos


S/A

Aislados franceses

S/C

Fuente: Fillinger et al., 2008

Objetivo General: …. Generar > Conocimiento … dinámica poblacional y nivel de sensibilidad de las poblaciones del patógeno en arándano a algunos fungicidas (fenhexamid, iprodione, cyprodinil & fludioxonil y fludioxonil)…

Objetivos específicos:

Caract. Genotípica y comportamiento fenotípico de poblaciones de B. cinerea en:

2 Variedades: Legacy y Brighitta

3 Épocas: Floración / Precosecha temprana (Fruto pintón) y Precosecha Tardía /

3 Regiones Productoras: Zona Centro‐Sur (Del Maule, Bío‐Bío) y Sur (de los Ríos)

N= 63 var., época y predio‐zona


Genotípica: Correspondencia genotípica(Transposa, vacuma, boty, flipper)

mediante PCR‐duplex y uso de partidores específicos.

Fenotípica: sensibilidad fungicida: fenhexamid, iprodione, cyprodinil&fludioxonil y fludioxonil

Determinación de valores EC50 (crecimiento miceliar) en medio Sisler o APD).

Primeros resultados de sensibilidad de poblaciones de Botrytis cinerea recuperados desde Arándanos:

Incubación: 20ºC, oscuridad continua, 7 y 14 ds.

Cultivos monospóricos, 5 – 7 ds.

Obtención de aislados

Metodología

Determ. Valores EC50 (µg/mL) mediosSisler / APD ( Crecim. Miceliar) / Test de Probit


Diagnóstico de Resistencia a Fungicidas


Técnicas tradicionales (EC50):

Crecimiento miceliar, Germinación conidial, Elongación tubo germinativos Técnicas Moleculares: PCR; PCR‐

RFLP y Q‐PCR (SONDAS Y PARTIDORES ESPECÍFICOS)

2ºWorksho

p internaciona

lde Re

sisten

ciaa fungicidas

de acciónBo

tryticida

Categorías de sensibilidad

1 < LR < 2,99 ppm 3 < MR < 4,99 ppm AR > 5 ppm

Fenhexamid

Switch

Fludioxonil

Iprodione

Boscalid


0,1 < LR < 0,299 ppm 0,3 < MR < 2,99 ppm 3 < R < 9,99 ppm AR > 10 ppm



0,5 < LR < 1,35 ppm 1,36 < MR < 7,79 ppm 7,8 < R < 49,99 ppm AR > 50 ppm

Resultados valores EC50 fungicidas: promedios totales, por variedad y predios‐zonas / Temp. 2011‐2012

‐ Fenhexamid: poblaciones leve a moderadamente resistentes (EC50=0,485 μg/mL)

‐ Iprodione: poblaciones levemente resistentes (EC50=1,198 μg/mL)

‐ Cyprodinil & fludioxonil: poblaciones altamente sensibles (EC50=0,045 μg/mL)

‐ Fludioxonil: todos los aislados fueron altamente sensibles, sin detección de resistencia (EC50=0,021 μg/mL)


0,12

0,13

0,73

0,25

0,67

0,18

1,39

0,96

1,09

0,95

1,14

0,66

0,03

0,02

0,03

0,04

0,03

0,05

0,03

0,02

0,02 0,03

0,02

0,02

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

Talca Los Ángeles Río Bueno Talca Los Ángeles Río Bueno

Var. Legacy Var. Brigitta

EC50 Arándanos / Estadio: Floración

EC50 fenhex EC50 iprodione EC50 Switch EC50 fludioxonil

‐Fenhexamid: leve resistencia (EC50=0,35 μg/mL) (ambas variedades)

‐Switch y fludioxonil: todos los aislados sensibles (EC50=0,03; 0,02 μg/mL, respectivamente) (ambas variedades)

‐Iprodione: leve resistencia (EC50=1,15 μg/mL) en Legacy; sensibilidad (EC50=0,92 μg/mL) en Brigitta.


0,74

0,34

0,48

0,23

1,37

1,06

1,04 1,06

0,05

0,02

0,04

0,04

0,01

0,030,02

0,02

0,02

0,02

0,02

0,02

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

Talca Los Ángeles Río Bueno Talca Los Ángeles Río Bueno

Var. Legacy Var. Brigitta

EC50 Arándanos / Estadio: Precosecha Temprana

EC50 fenhex EC50 iprodione EC50 Switch EC50 fludioxonil

1,52

1,56

1,78

‐ Fenhexamid: moderada resistencia (EC50=1,27 μg/mL) en Legacy; leve resistencia (EC50=0,35 μg/mL) en Brigitta.

‐ Iprodione: leve resistencia (EC50=1,35 μg/mL) en ambas variedades

‐ Switch y fludioxonil: todos los aislados sensibles (EC50=0,03; 0,02 μg/mL, respectivamente)

1,77


1,77

Ambas variedades: Fenhexamid: leve resistencia (EC50=0,3 μg/mL); Iprodione: leve resistencia (EC50=1,21 μg/mL)

‐ Switch: Sensibilidad aceptable en Talca y Los Ángeles ( EC50=0,07) e inicio de pérdida de sensibilidad en Río Bueno;

‐ Fludioxonil: todos los aislados se comportaron como altamente sensibles (EC50= 0,02 μg/mL).


Ing. Agr. Julia Pinto

Director Proyecto

“PLATAFORMA DE APOYO A LA TOMA DE DECISIONES PARA EL CONTROL DE BOTRYTIS MEJORANDO LA COMPETITIVIDAD DE LA

INDUSTRIA DEL ARÁNDANO” Código Innova:

Proyecto FDF – Comité de Arándanos / InnovaChile de CORFO

ÁREA PRE Y POS COSECHA ‐ GERENCIA FRUTICULTURA ‐ FDF

Universidad Nacion

al de

Bogotà, Grupo CHIA

/Bayer

CropScience, Colom

bia Y

Lab. de Fitopatolog

ía Frutal y

Molecular Universidad

de Chile

Comité de Arándano

s,

FDF – ASOEX A.

G. /

Lab. de Fitopato

logía

Frutal y Molecular

Universidad de

Chile

Universidad DE

Chile

Lab. de Fitopa

tología Frutal

y

Molecular

Universidad de C

hile

Lab. de Fitopato

logía Frutal y

Molecular

Sistema Botrytis

SIG BDDITERNET

Usuarios

INTERNET

Ingreso Plataforma on line

https://botrytis.uchile.clhttps://botrytis.uchile.cl

https://https://arandanosarandanos........fdf.clfdf.cl


Sistema Botrytis

……Contraseña

…….Nombre Usuario

…….Razón Social

Evaluación de Sensibilidad a fungicidas …

Caracterización genotípica…

Niveles de Infección

Parámetros evaluados

Resultados de infecciónPrimera temporada


Razón social Predio Comuna

Sociedad Agrícola del Alto Pelarco Ltda. Talca

Campo K; Sector Las Camelias Retiro

Sol del Maule San Javier

Agrícola El Ensueño Cauquenes

1

3

42


Región del Maule

Región del Maule

TeldorBellis

Teldor / BC‐1000Comet / Bellis


Agrícola MyT Santa Bárbara

Agrícola Valle del Sol Quinchamalí

Agrícola Santa Carmen Ltda. Los Ángeles

Fundo Santa Ana; Agrícola Rinconada de Rihue Negrete

3

14

2

Región del Bío‐Bío


Región del Bío‐BíoNiveles de infección / estadio floración / (5)

1,0

6,5 7,5

0

5

10

15

20

25

30

35

40

7 días 14 días Total evaluaciones

Porcen

taje(%

) de

flores con bo

trytis

Teldor Serenade

Rovral + streptoplus Bellis


2

134


Agrícola Las Vertientes Ltda. Panguipulli

Fundo Vista Hermosa Río Bueno

Agrícola Patrón San José de la Mariquina

Río Negro Purranque


Región de Los Ríos

Región de Los Ríos

Switch 0.8 L/ha Cantus

Captan Mastercop


p+B T+bc B T T S R+Srep B S b C Mc


Conclusiones: • Niveles de infección varían según Predio y Zona,

• Respuesta fungicida puede ser consecuencia de niveles de sensibilidad de las poblaciones locales, como también de calidad de la aplicación (producto dosis y época adecuada; equipos y mojamiento)

• Resultado de eficacia a fungicidas (fenotipos), depende de población predominante (genotipos)..

• Diagnóstico certero debe considerar inicialmente al menos 2 temporadas(floración y precosecha), porque poblaciones son dinámicas y reaccionan frente al manejo;… y en tercera solo evaluar al momento de cosecha…

• Es importante que se evalué al término de cada temporada el nivel de pudrición final ….

• Resultados de predios Socio‐usuarios de Plataforma serán confidenciales, solo promedios regionales serán de libre disponibilidad en la web…. A mayor puntos de muestreos por Región mayor confiabilidad de resultados (mayor representatividad) …


Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular U. de Chile

Equipo Técnico LFM U de Chile

Comité de Arándanos, FDF – ASOEX A.G.

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sensibilidad a Botryticidas en

Arándanos: la base para el

diseño de programas de

Control”


Ing. Agr. M.Sc. Marcela Esterio G.Universidad de Chile

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