CITOLOGIA VAGINAL EXFOLIATIVA

Metodología de toma de muestra

En la bibliografía consultada hay reportes de varios métodos para recoger las muestras para realizar frotis vaginales. El método seleccionado se basa en cumplir algunos principios básicos:

a) Debe ser simple de realizar y económico. b) No debe ser doloroso. c) Debe poderse realizar en presencia o ausencia de descarga vaginal. d) Debe ser realizable por los dueños después de un breve aprendizaje. e) Debe ser realizable, a pesar del tamaño o temperamento de la perra.

Lo ideal es que el técnico se acostumbre a una metodología exitosa. En lo que a mí respecta, recomiendo la utilización de la técnica del hisopo de algodón porque cumple con los criterios anteriores.

Técnica del Hisopo

La perra debe colocarse de pie, mientras un asistente le sostiene la cabeza con una mano y la cola con la otra mano. Los labios de la vulva son separados suavemente con una mano del operador. Con la otra mano se sostiene un hisopo de algodón estéril de 15 cm de longitud. El hisopo es pasado por la comisura dorsal de la vulva, avanzando en dirección cráneo-dorsal hasta que se pasa el arco isquiático por la región dorsal de la vagina de manera de evitar la fosa del clítoris. La distancia que se debe introducir el hisopo depende de las dimensiones del animal, teniendo en cuenta que se debe alcanzar el canal pélvico. Luego de rotarlo sobre la pared dorsal hacia lateral, éste se retirara tratando de no arrastrarlo por la región ventral. Todo este procedimiento abarca solo unos segundos y es raro que sea doloroso. Si la perra no presenta descarga, puede manifestarse desconforme con la manipulación, por lo que seria conveniente que se humedezca el hisopo con unas gotas de solución salina fisiológica para lubricar y facilitar la toma de muestra. No es recomendable la utilización de agua destilada o del grifo porque altera las células. Una vez que es retirado el hisopo, el mismo es girado suavemente a lo largo de un portaobjeto, realizando tres impresiones lineales separadas entre sí. Se debe realizar dos frotis de cada muestra. Cada portaobjeto es secado al aire y posteriormente sumergido en alcohol absoluto o alcohol 95°GL para fijar las células. Este frotis puede ser coloreado en el momento o guardados para ser coloreados posteriormente.

Coloración

6

Existen múltiples técnicas para colorear el frotis e incluso está descrita la observación de los mismos con un microscopio de contraste de fase. La técnica a utilizar debería ser fácil de realizar, económica, que permanezca sin modificarse por un tiempo considerable y quizás en forma permanente por varios años. Las coloraciones más utilizadas son las siguientes:

• May Grunwald Giemsa o Wright-Giemsa, Diff-Quick, • Azul de Metileno nuevo • Azul de Toluidina o Violeta de Genciana • Papanicolao o Harris-Shorr

Se realizó una comparación de tres técnicas de coloración para la colpocitología vaginal, Azul de Metileno (AM), Azul de Toluidina (AT) y Harriis-Shorr (HS), frente a 10 perras a lo largo de su ciclo estral. En función de los resultados obtenidos, se observó la sencillez y practicidad de dos de la técnicas (AM y AT). Si comparamos estas dos técnicas, la permanencia en el tiempo de la coloración de AT frente al AM. Si observamos los resultados frente a una técnica control específica (HS), los resultados no presentan diferencias estadísticas. Por lo anterior se seleccionó la técnica de Azul de Touidina por su practicidad, sencillez, permanencia y su efectividad en pruebas de campo. Sin ser en desmedro de estas técnicas sencillas de trabajo en la clínica, en el caso de ser necesario es recomendable utilizar la técnica de Harris-Shorr. Azul de Toluidina 1- Secar el frotis al aire 2- Colocar el colorante sobre el porta 3- Dejar actuar dos minutos 4- Volcar el excedente de colorante 5- Dejar secar al aire 6- Evaluar

Usos Clínicos

Manejo de la monta normal

7

En este contexto, se utiliza para ayudar a los dueños o criadores a determinar el momento óptimo para la monta de una perra. Es una excelente ayuda para distinguir entre proestro, estro o diestro dentro del ciclo estral de la perra. Para realizar esto, es recomendado realizar 2-3 frotis en el entorno de 4 a 7 días. Como rutina recomendamos comenzar a realizar el frotis al tercer día de que la perra es identificada en celo (presencia de descarga vaginal), y luego continuar cada 48 horas realizando 3 frotis por perra para poder observar la evolución del epitelio vaginal y determinar claramente el momento de comienzo del estro.

Ciclos inusuales

Todas aquellas perras que en su ciclo estral no se comportan como una perra promedio (o sea que no se cumple que el estro comience al día 10 de iniciado el proestro), realmente causan errores al intentar preñarlas. Esto correspondería a perras que en forma normal presentan sus proestros cortos (3-5 días) o proestros largos (21-25 días), estos animales están dentro de los rangos normales de duración de las etapas del ciclo estral en caninos. Se debe tener en cuenta la variabilidad, o sea el rango de duración, de cada etapa del ciclo.

Ciclos anovulatorios

Parea determinar esta patología es necesario realizar un seguimiento desde el inicio del celo. Realizando esto podemos determinar que de la mitad del proestro se produce la transición al diestro, por lo que nos orienta hacia una maduración folicular incompleta.

Predecir el momento del parto

La duración de la preñez en la perra suele ser un rango variable desde 57-72 días desde el momento de la monta. Pero si nosotros determinamos claramente el momento de inicio del estro (coincidiría con el pico de LH), la duración de la preñez en relación con el pico de LH varia de 63-65 días de duración.

Problemas de infertilidad

La citología vaginal es el reflejo de los niveles de estrógeno plasmático y de la función folicular.

Por intermedio de esta técnica se puede determinar si existieron problemas de manejo (momento erróneo de monta), nivel de estrógeno inadecuado (pobre desarrollo folicular), u otros desórdenes menos comunes.

Patologías

8

Puede colaborar en el diagnóstico de algunas patologías como ser: quistes foliculares, vaginitis, tumores vaginales, piómetra, y metritis aguda.

Utilización de Progestágenos

Los mejores resultados con la utilización de los mismos se manifiesta cuando el animal está en anestro, lo que se solucionaría con un frotis vaginal realizando la terapéutica, disminuyendo los riesgos de piómetra. El de mejor resultado a la utilización a inicio del ciclo es la proligestona (Covinan), pero aún sería recomendable la utilización de esta técnica teniendo en cuenta no pasarnos de la mitad del proestro.

Limitaciones de la colpocitología Esta técnica es una herramienta muy utilizada en la reproducción canina. Hay que tener en cuenta que es muy sencilla, a pesar de ello, la observación del frotis implica entrenamiento para un correcto diagnóstico. Hay que tener presente que con un solo frotamiento no se puede identificar el día de la ovulación o el momento óptimo para la monta, así como tampoco el día del parto. También se debe tener en cuenta, que esta técnica no debería sustituir la anamnesis, el estudio de la sintomatología y del comportamiento en las diferentes etapas del ciclo estral de la perra. La utilización de esta técnica implica una complementariedad con lo antes mencionado.

Clasificación de las células del epitelio vaginal.

Las modificaciones que ocurren en la mucosa vaginal son un resultado de las variaciones de la concentración plasmática de estrógeno, remarcado especialmente en el proestro y estro como vía indirecta de detección. La nomenclatura de las células vaginales está basada en su morfología, algunos autores las describen diferenciándolas en queratinizadas y no queratinizadas o cornificadas y no cornificadas. En lo particular, prefiero una descripción celular basada en su morfología y en el propio proceso de muerte celular. Cuando las células vivas redondeadas se mueren, modifican su morfología hacia una forma más irregular y aumenta su tamaño. También los núcleos celulares reflejan los cambios de la muerte celular, estos se tornan cada vez más pequeños, picnóticos, antes de convertirse en una figura fantasma o desaparecer dejando a este tipo celular como anucleado. Encontramos entonces, varios tipos celulares: Parabasales, Intermedias, Superficiales, Escamosas, Metaestrales y Espumosas. Intermedias

Superficiales nucleadas Superficiales Anucleadas o

Parabasales

El estudio del ciclo estral mediante el hisopado vaginal es un procedimiento antiguo pero aún imbatible por costo, practicidad, tiempo y utilidad. De igual forma el hisopado vaginal nos da muchos más alcances respecto al estado del tracto reproductivo pues puede determinar infecciones, inflamación y neoplasia. Se sabe que un estudio vaginal bien realizado no es menos fiable que un dosaje de progesterona. Estoy seguro que muchos tienen preferencias por determinadas pruebas pero desde nuestra columna deseamos que todos los veterinarios de animales menores puedan realizar un examen citológico del ciclo estral sin complicaciones en su propia clínica o consultorio.

Fig.1.1 Secuencia del correcto hisopado de la vagina en las perras. Nótese que el hisopo contacta la pared caudal dorsal de la vagina.

TÉCNICA

Se introduce un hisopo limpio y si es posible estéril en la vagina de la perra asegurándose no tocar la vagina ventral, más bien debe ser orientado hacia la vagina dorsal o caudal. Sobar la zona, retirar el hisopo y rodarlo sobre una lámina portaobjeto nueva y limpia. La técnica de tinción es la misma que para cualquier otra muestra citológica. Algunos prefieren humedecer el hisopo con solución salina para favorecer la adherencia celular y hacer el proceso menos incómodo para el paciente. En mi experiencia cualquier tinción es buena para el estudio, desde las tinciones hematológicas (Diff Quick, Wright), azul de toluidina, azul de metileno, papanicolau, Shorr, H y E, hasta la tinta China.

Fig.2 Tipos celulares epiteliales a reconocer durante un hisopado vaginal. Mnemotecnia PISA

TIPOS CELULARES EPITELIALES

No debemos olvidar que para evaluar el ciclo estral debemos evaluar exclusivamente células epiteliales. La presencia de eritrocitos y células inflamatorias son igualmente una gran ayuda. Las células epiteliales a evaluar son:

* Células Basales

* Células Parabasales

* Células Intermedias

* Células Superficiales

Células Basales

Las células Basales son las precursoras de las células parabasales características del periodo de Anestro. Muy rara vez pueden observarse en un estudio citológico. Se aprecian como células casi redondas, pequeñas, uniformes con poco citoplasma basofílico.

Células Parabasales

Las células parabasales son las células más pequeñas que se encuentran de manera rutinaria en un hisopado vaginal. Son de forma redondeada con un núcleo grande y una relación núcleo:citoplasma alta. Son células de tamaño uniforme que se observan en los periodos de proestro temprano, diestro y anestro. Se obtienen muchas sábanas de células en perras que no han llegado a la pubertad, no confundirlas con células neoplásicas.

Células Intermedias

Son células parabasales intermedias con un tamaño mayor (muchas veces el doble) al de las células parabasales. Presentan un aumento en el tamaño del citoplasma más no del núcleo por lo que la relación núcleo:citoplasma baja. El citoplasma puede tornarse de un

azul grisáceo pálido con ligeras irregularidades por la keratinización temprana. Éste proceso se hace más evidente a medida que pasa el tiempo y se acerca el periodo estral. También se les conoce como células transicionales o superficiales intermedias.

Células superficiales

Son células grandes con un núcleo pequeño que se ha reducido de tamaño y a medida que siguen madurando lo pierden por completo. El citoplasma es amplio con muchas irregulairdades y dobleces. En su estado más maduro presentan ausencia total de núcleo y es el estadío mas tardío de las células epiteliales vaginales.

Estadíos Citológicos del Ciclo reproductivo de las Perras

* Proestro

* Estro

* Diestro

* Anestro

Fig. 3 Imagen citológica de proestro. Células epiteliales parabasales e intermedias en presencia de eritrocitos y algunos neutrófilos. Las células epiteliales comienzan a

formar ángulos a medida que comienza la queratinización.

Proestro

El proestro esta relacionado con un aumento del nivel de estradiol en sangre y la maduración folicular. El epitelio vaginal prolifera y se produce un escape de eritrocitos por diapedesis a través de los capilares tisulares. Todos estos cambios originan una imagen citológica característica del proestro. Los principales componentes celulares son las células parabasales y células intermedias con escasas células superficiales. La presencia de eritrocitos nos brinda una referencia vaga, no es un requisito. El fondo donde descansan las células es de un azul tenue por exceso de mucus. Se observan neutrófilos en cantidad moderada. A medida que va madurando el proestro van

disminuyendo los eritrocitos y los neutrófilos con el consiguiente aumento de las células superficiales. Dependiendo del porcentaje de células superficiales podemos segmentar el proestro en proestro temprano, proestro intermedio y proestro tardío. En los pacientes felinos, específicamente en el gato, la única diferencia es la ausencia de eritrocitos y neutrófilos, las bacterias pueden estar presentes.

Fig. 4 Imagen característica de estro. Las células epiteliales superficiales no presentan núcleo, hay presencia de bacterias y algunas células con núcleo picnótico.

Anestro

La observación de frotis obtenidos en el anestro es relativamente constante. A una primera observación se encuentran células parabasales e intermedias. Los glóbulos rojos y las bacterias están generalmente ausentes, y los neutrófilos pueden o no estar presentes.

Proestro

Para interpretar los resultados de la colpocitología durante el proestro se debe dividir el mismo en tercios, proestro temprano, mitad del proestro y final del proestro. En el proestro temprano lo que se observa en el frotis sería similar a lo que se observa en el anestro. Pero, en general, el proestro temprano presenta una cantidad variable de glóbulos rojos, una cantidad abundante de células parabasales y un porcentaje bajo de células intermedias y superficiales. Esto significa que las células intermedias, superficiales y escamosas oscilan entre 20-40 %. Puede dar una imagen "sucia" debido a la presencia secreciones vaginales o cervicales en pequeñas cantidades. En la mitad del proestro, se refleja sobre el tracto genital, los primeros efectos de la presencia predominante de estrógenos en sangre. Incluye la desaparición de los neutrófilos y la aparición de abundante cantidad de glóbulos rojos. Además, las células superficiales comienzan predominar sobre las células parabasales e intermedias. Esto significa que las células superficiales y escamosas oscilan entre 40-60 %. En el final del proestro no se observa neutrófilos, pero hay una cantidad variable de glóbulos rojos, y cambia la predominancia a células intermedias, superficiales y escamosas. Esto significa que las células superficiales y escamosas oscilan entre 60-80 %.

PROESTRO (Azul de Toluidina) 10

Estro

Una vez que comienza esta etapa, el frotis se convierte en una imagen relativamente constante, ya que las células que predominan, son las superficiales y escamosas, que se aproximan a un 100%. Los glóbulos rojos pueden o no estar presentes, y en general los neutrófilos se encuentran ausentes. En las últimas 24 horas del estro, se produce una caída dramática de las células del epitelio observables encontrando un 20 % de células superficiales y escamosas anucleadas.

Diestro

El frotis obtenido de una perra en esta etapa, es claramente diferente a lo observado en el estro. El cambio es bien marcado y aparecen células que solo se observan en esta etapa. Pueden reaparecer los neutrófilos. Ocasionalmente aparecen células metaestrales que nos permiten identificar claramente la diferencia entre el inicio del proestro y el inicio del diestro. Las células metaestrales son células epiteliales vaginales "parabasales o intermedias" que en su citoplasma presentan incluidos uno o dos neutrófilos. Las células espumosas son células epiteliales vaginales que presentan un citoplasma espumoso o vacuolado. Las células epiteliales que predominan en esta etapa son las células intermedias y las células parabasales.

ESTRO:Comparación de tamaño de una celula superficial anucleada con un neutrófilo 11

Más del 90% de las células que se exfolian durante el estro son células superficiales y en algunas perras puede llegar al 100%. Los neutrófilos se muestran ausentes (su presencia indica inflamación) y la presencia de eritrocitos es nula con frecuencia aunque se pueden presentar estros con eritrocitos en cantidad moderada. Como se mencionó, las células superficiales son grandes, con núcleo picnótico muy pequeño y en algunos casos ausente en el 100% de las células. El momento de máxima cornificación células es variable. Puede suceder entre el día 06 antes del pico de LH o 03 días después del pico de LH. El estro es el periodo de ovulación y suele ocurrir en los días 1 al 3 después del pico de LH. Se suele encontrar gran número de bacterias sobre las superficies de las células. El en promedio dura 09 días aunque hay reportes de 03 hasta 21 días. Cuando encontramos cambios citológicos compatibles con estro en la perra podemos asumir que es un buen momento para realizar la cruza con el macho. Los felinos poseen un porcentaje menor de células superficiales durante el estro (40%-80%) con un porcentaje de hasta 40% de células superficiales totalmente anucleadas, los eritrocitos son ausentes.

Fig. 5 Diestro. Células epiteliales parabasales e intermedias. Las células presentan bordes más redondeados, núcleo visible, presencia de eritrocitos y células epitelilales con neutrófilos en su interior (células metestrales).

Diestro

Comienza cuando nos percatamos que el número de células superficiales comienza a descender y las células parabasales e intermedias suben hasta un 50% de representatividad. Las células superficiales descienden en más de 20%. Los neutrofilos suelen reaparecer luego de varios días de ausencia, igualmente puede aparecer eritrocitos. El diestro aparece en promedio a los 08 días luego del pico de LH. Es muy difícil diferenciar un PROESTRO de un DIESTRO citológicamente. Se necesitan varias muestras y mucha información respecto del paciente, tamaño de la vulva y percepción macroscópica. Los felinos presentan un diestro con ausencia de eritrocitos, neutrófilos ausentes o en cantidad baja. Los cambios en las células epiteliales son similares en perras y gatas.

Anestro

La imagen citológica del anestro esta conformada por abundantes células parabasales e intermedias. Se pueden observar neutrófilos y bacterias. En la gata los neutrófilos están ausentes, el resto de cambios son similares.

* Juan Manuel Lajara Larrea.Director del Laboratorio Patológico Veterinario San Isidro. Lima –  Perú.Via: http://laboratoriosanisidro.blogspot.com/

Citologia vaginal en perras 

Diagnóstico del ciclo estral en la perra

La citología vaginal es un método complementario económico y de simple realización orientativa para determinar en que etapa del ciclo estral se encuentra una determinada perra. Esto permite emplear la inseminación artificial precisando el momento más adecuado para llevar a cabo dicha técnica ya que la ovulación ocurre al inicio del estro y por lo tanto, es importante identificar esta etapa. También ayuda a detectar patologías del aparato reproductor femenino.

Fundamento de la citología vaginal

El principio de la citología vaginal exfoliativa se basa en determinar el tipo y cantidad de células de las diferentes etapas del ciclo estral ya que los cambios hormonales que sufre la mucosa vaginal durante el ciclo estral, se reflejan en la morfología de sus células epiteliales. Al inicio del ciclo, la célula epitelial está en contacto con la irrigación sanguínea Conforme los niveles de estrógenos se incrementan el epitelio vaginal se va engrosando ocasionando que la célula epitelial se vaya separando del aporte sanguíneo dando como resultado una transformación celular que va de célula parabasal a célula anucleada o escama.

Clasificación de las células vaginales

En cuanto al tipo de células vaginales estas se clasifican en:

Célula parabasal: Es una célula de forma oval o redonda con núcleo aparente y pequeña cantidad de citoplasma. Esta célula se desprende de la capa de células germinales cercana a los vasos sanguíneos y predomina en el anestro y principios del proestro.

Célula intermedia: Es una célula grande de bordes irregulares con núcleo más pequeño o más grande que la parabasal pero con mayor cantidad de citoplasma. La presencia de esta célula indica la etapa anterior a su transformación a superficial, predomina a la mitad del proestro.

Célula superficial: Es una célula de bordes angulosos, con núcleo de menor tamaño que las anteriores. Es característica del final del proestro y todo el estro, que es cuando la vagina se encuentra bajo la influencia del pico estrogénico.

Célula anucleada: También se le conoce como escama, es una célula, sin núcleo, de bordes angulosos e irregulares que predomina en el estro y marca el final del proceso de descamación de la célula parabasal.

Observación e interpretación de los resultados

La interpretación de los extendidos se realiza de acuerdo al predominio de los distintos tipos celulares presentes, los cuales pueden ser orientativos de los diferentes momentos del ciclo estral canino. No obstante es imprescindible hacer un seguimiento de la evolución del cuadro celular a través del ciclo estral, ya que un preparado aislado podría resultar compatible con distintos momentos del ciclo estral de la perra.

Proestro: se caracteriza por la presencia de neutrófilos, abundantes glóbulos rojos, células intermedias grandes y pequeñas y escasas células superficiales. En tanto que un frotis obtenido hacia el final del proestro se caracteriza por la disminución del número de neutrófilos y predominio de células intermedias y superficiales. Los eritrocitos pueden ser abundantes o estar marcadamente disminuidos en el frotis vaginal.

Estro: durante el no se observan neutrófilos, disminuyendo asimismo la cantidad de glóbulos rojos, si bien debe tenerse en cuanta que en algunas perras pueden observarse glóbulos rojos durante todo el estro y aún en principios del diestro. Mas del 90% de las células observadas en un frotis de una hembra en estro son células superficiales anucleadas (queratinizadas) o con núcleo picnótico. El fondo del frotis de una perra en estro es limpio y libre de detritus celulares. Cuando se realizan frotis seriados durante el estro, un cambio abrupto en el número relativo del tipo de células epiteliales marca el comienzo del diestro.

Diestro: Durante dicho período el número de células superficiales disminuye mientras que las células parabasales e intermedias se incrementan marcadamente. Asimismo, en los 7 - 10 días iniciales del diestro reaparecen los neutrófilos en número variable, lo cual usualmente coincide con el incremento en el número de células parabasales e

intermedias. Es importante reconocer como normal esta aparición de neutrófilos en los extendidos de diestro temprano a fin de diferenciarlo de posibles cuadros infecciosos. En algunas perras pueden no observarse los neutrófilos en frotis del diestro. Puesto que los glóbulos rojos pueden presentarse en extendidos vaginales obtenidos durante principios del diestro, es imposible diferenciar el proestro del diestro basándose exclusivamente en la citología vaginal.

Anestro: se caracteriza por un predominio células parabasales y de células intermedias. Si bien pueden hallarse algunos neutrófilos, su número es muy inferior al observado durante el principio del diestro.

Toma de muestras:

Para tomar muestras para una citología vaginal se recomienda el uso de guantes y se introduce un hisopo estéril por la comisura dorsal de los labios vulvares (previa limpieza de estos). Se debe hacer suavemente hasta atravesar el cingulum (unión vestíbulo - vaginal) para llegar a la porción caudal de la vagina, en la cual, mediante movimientos circulares del hisopo, se colectará el material celular. Hecho esto, se retira el hisopo y se hace un frotis por rodamiento en un cubreobjetos, se fija en alcohol al 95 % durante 5 a 10 minutos y se tiñe para observarla al microscopio. Existen técnicas de tinción como la de Papanicolau, Diff-Quick, Giemsa, Wright y Shorr que pueden ser utilizadas para teñir muestras de citología vaginal

Todas las tinciones para procesar las muestras pueden ser de utilidad. Sin embargo, el veterinario debe usar aquella técnica que resulte práctica, barata, que no se deteriore al almacenar los frotis por mucho tiempo y que proporcione una buena observación de la morfología celular para llegar a un diagnóstico efectivo.

CITOLOGÍA VAGINAL EXFOLIATIVA ¿CUÁNDO Y PARA QUÉ SIRVE? Verónica Garza Medina SERVICIO INTEGRAL VETERINARIO veropop7@ yahoo.com.mx 58 63 71 66 04455 10 04 10 55 Fundamento La toma de una citología vaginal exfoliativa (CVE) es un procedimiento seguro, rápido, económico y confiable. Conforme se adquiere experiencia, toda la técnica, desde tomar la muestra, hasta su evaluación, puede tardar no más de diez minutos. Este procedimiento se basa en la obtención de las células descamadas del epitelio vaginal para su estudio microscópico. Para una adecuada interpretación es importante considerar que se deben observar detalladamente los siguientes criterios celulares: Forma y tamaño de las células Forma y tamaño de los núcleos Fondo de la laminilla Cuando es utilizada para determinar las etapas del ciclo estral, se debe observar el tipo y la cantidad de células presentes durante sus diferentes etapas, ya que la mucosa vaginal durante este periodo sufre muchas transformaciones debidas a los cambios hormonales: al inicio del ciclo, las células epiteliales están en contacto con la irrigación sanguínea; conforme aumentan los estrógenos, el epitelio vaginal se va engrosando, lo que ocasiona que las células epiteliales se vayan separando del aporte sanguíneo, lo que da como resultado una transformación de células parabasales a células anucleadas. No obstante, es importante resaltar que la CVE también puede ser una valiosa y sencilla herramienta para diagnosticar: Vaginitis Piómetra Neoplasias (principalmente tumor venéreo transmisible TVT) Gestación, etc. Material necesario para la CVE Algodón Hisopos largos con punta de algodón y mango de plástico Portaobjetos Alcohol décnica para obtener una CVE de buena calidad 1. Limpiar la vulva con un algodón humedecido con agua 2. Abrir un poco los labios vulvares con los dedos para introducir el hisopo por la comisura dorsal de éstos. 3. |Introducir de verticalmente el hisopo hasta llegar al cingulum, que es un estrechamiento que une al vestíbulo con la parte caudal de la vagina 4. Levantar la vulva y desplazar el hisopo horizontalmente hacia el interior de la vagina, lo más profundo que se pueda. Consideraciones: El hisopo debe ser de mango de plástico largo, pues para alcanzar la vagina de la perra se tiene que recorrer una distancia larga y no se consigue hacerlo con los hisopos que se utilizan comúnmente para la limpieza auricular. También se debe corroborar que el algodón esté bien adherido a la punta del hisopo para que no se desprenda en el interior de la vagina. 5. Hacer movimientos circulares de la muñeca, con el fin de obtener una muestra de las paredes vaginales 6. Sacar el hisopo de la misma manera en que se introdujo. 7. Rodar el hisopo sobre una laminilla, tratando de que queden 3 líneas. 8. Fijar la laminilla en alcohol de 96° durante 10 minutos. 9. Teñir con la tinción de elección. Células que se pueden observar en la CVE La vagina tiene un epitelio estratificado plano no queratinizado. Las células que lo forman desde la membrana basal hacia la superficie son: Células de reserva Células basales Células parabasales Células intermedias Células superficiales Células anucleadas

Células basales Son pequeñas redondas u ovales, de tamaño uniforme, con núcleo evidente, central, de cromatina granular, y ocasionalmente se observa en mitosis. Su citoplasma es escaso. A partir de ellas se lleva a cabo la regeneración del epitelio. Se observan en casos de atrofia, vaginitis o en úlceras en la mucosa. Células parabasales Son originadas en la capa profunda del epitelio escamoso estratificado, se encuentran cerca del aporte sanguíneo, por lo que son las más saludables y pequeñas del epitelio vaginal, tienen forma redonda u oval. La cantidad de citoplasma varía según el grado de maduración, pero en general es escaso, y en él se pueden observar ocasionalmente vacuolas o glucógeno. Su núcleo es central, grande, redondo u oval y puede ocupar casi toda la superficie celular. La relación núcleo citoplasma es equitativa. e 96° TincionesEstas células se encuentran durante el proestro, diestro y anestro. Algunas veces, las células parabasales e intermedias contienen leucocitos en su interior y reciben el nombre de células del diestro. Se observan en diestros tempranos o en vaginitis. Células intermedias Las células intermedias son una transición entre las parabasales y las superficiales. Tienen contornos bien definidos y forma poligonal con bordes irregulares, ovales a redondeados y doblados. Su núcleo es más pequeño y vesiculado con mayor cantidad de citoplasma. Se presentan en el proestro y diestro. Las células intermedias, bajo la influencia hormonal de progesterona, pueden sufrir cambios morfológicos y reciben el nombre de: Células naviculares: Son alargadas con forma de bote o barco. Tienen importancia en la citología de hembras preñadas donde además tienen gran cantidad de glucógeno. Células de metaestro o espumosas: Son células intermedias que pueden tener en su citoplasma vacuolas o leucocitos polimorfonucleares. Células superficiales Provienen de la capa madura más externa del epitelio escamoso estratificado. Son células muertas, sin irrigación, se observan solas, tienen forma poligonal con bordes citoplasmáticos angulosos y doblados. Su citoplasma es delgado, traslúcido, sin vacuolas. La relación núcleo citoplasma es de aproximadamente 20:80. Su núcleo se encuentra en posición central, es muy pequeño y picnótico, propio de actividad estrogénica, por lo que estas células son observadas durante el estro. En su citoplasma se pueden encontrar pequeños gránulos lipídico, perinucleares o periféricos, estrógeno-dependientes. Células anucleadas o escamas: Estas células están muertas debido al proceso de engrosamiento del epitelio vaginal en respuesta al aumento de las concentraciones séricas de los estrógenos y por lo tanto, carecen de núcleo, son células grandes, de bordes irregulares y angulosos. Representan la etapa final de la maduración del epitelio vaginal y por ende, son producto de un proceso que empezó con las células parabasales, redondas y saludables. Células endocervicales Son células cilíndricas, ciliadas, con citoplasma finamente vacuolado; núcleo basal, y uno o dos nucleolos pequeños. Se pueden ver aisladas o en grupos. Suelen verse en los frotis de procesos inflamatorios, de metaplasia y displasia y en atrofia