Examenes de laboratorio para Hepatitis B y C 2015

Dr. Eliecer Villagra Cornejo Sección Virus Hepáticos y Emergentes Subdepartamento Enfermedades Virales Laboratorio Biomédico Nacional de Referencia.

Virus Hepatitis B

Antígeno “e” (HBeAg)

Antígeno core (HBcAg) Antígenos de

superficie (HBsAg)

ADN Polimerasa

ADN

Generalidades

• La hepatitis B es una enfermedad causada por VHB.

• Alrededor de 400 millones de personas persisten con

una infección crónica, con riesgo de evolucionar a

falla hepática, cirrosis y carcinoma hepatocelular

• Se estima que al año, es responsable de un millón de

muertes

Prevalencia HBsAg en el Mundo

• Es una enfermedad de distribución universal que se presenta

en forma endémica en todo el mundo, en nuestro país la

endemia es baja

• La prevalencia de HBsAg (+), estimada para la población

adulta chilena de 17 a 45 años de edad es de 0.15% (*).

*Ministerio de Salud de Chile. Encuesta Nacional de Salud 2009.

Evolución de la infección

por VHB

Niños

• 98% Crónico

• 2% Aguda

Adultos

• 1-10% Crónico

• 90-99% Agudo

Métodos diagnósticos VHB

• Detección de Antígeno

• Dispositivos individuales

Test Rápido: Inmunocromatografía

• Detección Antígeno o Anticuerpo

• Pueden ser automatizados, semiautomatizados o manual.

Inmunoensayo: EIA y CLIA

• Detección de partículas del ADN viral, independientemente de la fase de la enfermedad

Nucleic Acid Testing (NAT)

Algoritmo Confirmación

HBsAg

Antígeno de superficie (HBsAg)

Anti-Core Total (Anti-HBc total)

Neutralización HBsAg

Sero

logía

HBsAg

Tit

ulo

Semanas post a la exposición

0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100

Anti-HBc Total

HBeAg Anti-HBe

Síntomas

ADN

Perfil serológico de los

marcadores (Fase Aguda)

HBsAg

Tit

ulo

Semanas post a la exposición

0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Años

Anti-HBc Total

HBeAg Anti-HBe

ADN

Perfil serológico de los

marcadores (Fase Crónica)

Marcadores virales

* Puede encontrarse positivo en individuos crónicos.

§ vacunación reciente VHB (1-2 semanas), los test pueden dar un falso positivo.

Marcadores

Período

incubación

Inf.

aguda

Inf. pasada/

resuelta

Inf.

crónica

Vacunación

HBsAg ± + - + - §

Anti-HBs - - + - +

Anti-HBc Total - ± + + -

Anti-HBc IgM - + - ±* -

HBeAg ± + - ± -

Anti-HBe - - ± ± -

Resultado Confirmación

HBsAg

2012-2014

Algoritmo confirmación de HBsAg

Tamizaje HBsAg “A”

Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo

Informe:

Negativo HBsAg

Positivo Negativo

Técnica Confirmatoria “A”

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo

Informe: No

concluyente

Doble Tamizaje HBsAg

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo

Informe: Positivo

HBsAg

Algoritmo confirmación de HBsAg

Tamizaje HBsAg “A”

Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo

Informe:

Negativo HBsAg

Positivo Negativo

Técnica Confirmatoria “A”

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo

Informe: No

concluyente

Doble Tamizaje HBsAg

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo

Informe: Positivo

HBsAg

Algoritmo confirmación de HBsAg

Tamizaje HBsAg “A”

Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo

Informe:

Negativo HBsAg

Positivo Negativo

Técnica Confirmatoria “A”

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo

Informe: No

concluyente

Doble Tamizaje HBsAg

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo

Informe: Positivo

HBsAg Informe:

Negativo HBsAg

Algoritmo confirmación de HBsAg

Tamizaje HBsAg “A”

Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo

Informe:

Negativo HBsAg

Positivo Negativo

Técnica Confirmatoria “A”

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo

Informe: No

concluyente

Doble Tamizaje HBsAg

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo

Informe: Positivo

HBsAg Informe:

Negativo HBsAg

Algoritmo confirmación de HBsAg

Tamizaje HBsAg “A”

Reactividad ≥ 2.000 Reactividad < 2.000 Negativo

Informe:

Negativo HBsAg

Positivo Negativo

Técnica Confirmatoria “A”

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo

Informe: No

concluyente

Doble Tamizaje HBsAg

Anti-HB Core Total

Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo

Informe: Positivo

HBsAg Informe:

Negativo HBsAg

EVALUACIÓN TECNICAS

COMERCIALES DE HBsAg (1)

TECNICA

FABRICANTE

RECOMENDADO

BS LAB.

Murex HBsAg version 3 Murex X X

Bioelisa HBsAg Biokit S.A. X X

HBsAg Uni Form II Organon Teknika X X

IMX HBsAg Abbott X X

Merck Magia HBsAg Biotrol Diagnostic X X

ETI-MAK-4 (HBsAg) Dia Sorin s.r.l. X X

Inmulite (**) Diagnostic Products

Corporation

X X

Hepatitis B sAg/eAg (**) Glaxo SmithKline X

Hepatitis B (HBsAg) Elisa Wiener Lab. X X

EVALUACIÓN TECNICAS

COMERCIALES DE HBsAg (2)

AÑO

TECNICA

FABRICANTE

RECOMENDADO

BS LAB.

1999 Axsym System HBsAg Abbott X X

1999 HBsAg ELISA Test System3 Ortho X X

2000 Cobas core HBsAg II EIA Roche X X

2001 Vitros Kit HBsAg Ortho X X

2003 Bioelisa HBsAg colour Biokit S. A. X X

2003 VIDAS HBsAg Ultra Biomerieux X X

2004 Monolisa AgHBs Plus Bio-Rad X X

EVALUACIÓN TECNICAS

COMERCIALES DE HBsAg (3)

AÑO

TECNICA

FABRICANTE

RECOMENDADO

BS LAB.

2004 Monolisa HBsAg Ultra Bio Rad X X

2005 Architect HBsAg Abbott X X

2005 Hepanostika HBsAg Ultra Biomerieux X X

2007 Vikia HBsAg (**) Biomerieux X X

2008 Smart Comb HBsAg (**) Orgenics Ltd. X X

2008 Cobas-Elecsys HBsAg Roche X X

2008 Boioelisa HBsAg 3.0 Biokit S.A. X X

2012 Architect HBsAg II * Abbott X X

2013 Liaison XL Murex HBsAg Quant DiaSorin X X

2013 Access HBsAg Galénica X X

Virus Hepatitis C (VHC)

Familia Flaviviridae. Género Hepacivirus

55 -60 nm

Características VHC

Familia Flaviviridae. Género Hepacivirus

Descrito por Choo y Hougton en 1989

Su genoma:

Una molécula de RNA monohebra lineal.

Polaridad positiva.

9.600 bases de longitud

Virus de Hepatitis C

El VHC es el agente más importante causante de las hepatitis no A no B postransfusionales

Vía de transmisión parenteral (principalmente)

Primera causa de transplante hepático

Región estructural Región no estructural

Knipe, David M.; Howley, Peter M

2007 Lippincott Williams & Wilkins

Diagnóstico de Infección por VHC

• Detección de anticuerpos: ELISAs (3ª

generación)

• Detección de Ag/Ac: ELISAs (4ª generación)

• Técnicas suplementarias: RIBA o LIA

• Detección genómica: RT-PCR

ELISAS VHC 3 GENERACIÓN

ELISAS VHC 4 GENERACIÓN

INMUNOBLOT VHC (Técnica suplementaria) INNOLIA

RT-PCR VHC

•Amplificación de la parte más conservada del genoma (región 5’ UTR o 5’ no codificante)

Evolución de la infección por VHC

Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 2006 Dec;14(6):1238-43.

[Stability of hepatitis C virus RNA in various processing and storage conditions].

Liu CL1, Ren FR, Lü QS, Liu JH, Zhuang H.

Author information 1Department of Blood Transfusion, General Hospital of PLA, Beijing 100853, China.

Estabilidad de las muestras de Suero y Plasma para

realización de algoritmo de confirmación de VHC

Reducción del titulo de RNA en plasma guardado a 4ºC y 25ºC por 7 días

Tº 4ºC 25ºC

% RNA

70,9% 25,1%

- Luego de 4 ciclos de congelación - descongelación del plasma el

RNA viral se redujo a 61,9%

RESULTADOS INDETERMINADOS CON TECNICAS

SUPLEMENTARIAS DE INMUNOBLOT

- Los resultados indeterminados en poblaciones de baja prevalencia

tales como los donantes de sangre pueden estar relacionados con

reactividades cruzadas con antígenos virales o con anticuerpos en

caso de desordenes inmunológicos.

- Resultados falsos – negativos pueden obtenerse en pacientes

inmunodeprimidos, pacientes con VIH, pacientes receptores de

órganos solidos, hipoglobulinemia o agamaglobulinemia y

pacientes en hemodialisis.

EVALUACIÓN TECNICAS

COMERCIALES DE VHC(1)

TECNICA

FABRICANTE

RECOMENDADO

BS LAB.

ETI-AB-HCVK-3 (anti-VHC) Dia Sorin S. A. X X

Cobas Core Anti-VHC EIA II Roche X X

Monolisa Anti-HCV plus (V2) Bio-Rad X X

Test ELISA para Hepatitis C Bios Chile I.G.S.A X X

EVALUACIÓN TECNICAS

COMERCIALES DE VHC (2)

AÑO

TECNICA

FABRICANTE

RECOMENDADO

BS LAB.

1998 Serodia-HCV (**) Fujirebio inc. X X

1999 Enzymuntest HCV Boehriger X X

1999 HCV 3.0 Elisa Ortho Ortho X X

1999 IMX HCV 3.0 Abbott X X

1999 Axsym System HCV 3.0 Abbott X X

1999 Murex anti HCV 4.0 Abbott X X

2000 Cobas Core Anti-VHC EIA Roche X X

2001 Vitros Anti-VHC Ortho X X

EVALUACIÓN TECNICAS

COMERCIALES DE VHC (3)

AÑO

TECNICA

FABRICANTE

RECOMENDADO

BS LAB.

2006 Architect anti-VHC Abbott X X

2006 Murex HCV Ag/Ab combination Abbott X X

2006 Hepanostika HCV Ultra Biomerieux X X

2006 Advia Centaur Anti-HCV Bayer X X

2006 Monolisa HCV Ag/Ab ultra Bio-Rad X X

2008 Bioelisa HCV Biokit X X

2008 SmartComb HCV (**) Organics. Ltd. X X

2008 Cobas Elecsys Anti-HCV Roche X X

2009 Test ELISA HCV Acon X X

2012 Cobas Elecsys Anti –HCV II Roche X X

2012 Vidas Anti-VHC Biomerieux X X

2013 Liaison XL Murex HCV Ab DiaSorin X X

2014 Access VHC Galenica X X