Manual de toxicologia

Laboratorio de Toxicologa

PROGRAMADEAPOYOAPROYECTOSPARALAINNOVACINYMEJORAMIENTODELAENSEANZA 1

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE QUMICA

DEPARTAMENTO DE FARMACIA

Manual de guiones experimentales para la enseanza y aprendizaje del laboratorio de Toxicologa (clave 1614)

Alejandra Quijano Mateos

Araceli Prez Vzquez Bernardo Lucas Florentino

Carlos Prez Muoz Eduardo Hernndez Vzquez

Francisco Hernndez Luis Francisco Snchez Bartez

Jorge Cornejo Garrido Jos Alberto Rivera Chvez

Juan Francisco Palacios Espinosa

Manuel Gutirrez Aguilar Mara Elena Bravo Gmez

Mariana Flores Torres Martha Leyte Lugo

Paulina Del Valle Prez Perla Carolina Castaeda Lpez Silvia Graciela. Dvila Manzanilla Sitlali del Rosario Olgun Reyes

Sol Cristians Niizawa Viridiana Morales Snchez

Facultad de Qumica, UNAM Mxico, D.F. 2014

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NDICE

Pgina PRLOGO

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REGLAMENTO DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA LOS LABORATORIOS DE LA FACULTAD DE QUMICA

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REGLAMENTO DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA LOS LABORATORIOS DEL DEPARTAMENTO DE FARMACIA

9

REGLAMENTO PARA LOS ESTUDIANTES Y PROFESORES DE LOS CURSOS EXPERIMENTALES DEL DEPARTAMENTO DE FARMACIA

10

REPORTE DE SEGURIDAD E HIGIENE 12

HOJA DE SEGURIDAD DE REACTIVOS 13

HOJA DE VALORACIN PARA LA EVALUACIN DEL BIENESTAR DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIN

15

IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE TXICOS NO VOLTILES EN UNA MUESTRA PROBLEMA

16

CUANTIFICACIN DE CIANURO DE HIDRGENO, COMO TXICO VOLTIL, A PARTIR DE GLUCSIDOS CIANOGNICOS

30

DETERMINACIN DEL MECANISMO DE ACCIN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE COMPUESTOS DE ORIGEN NATURAL

40

DETERMINACIN DE MUTGENOS AMBIENTALES A TRAVS DE LA PRUEBA DE AMES

55

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD GENOTXICA DE LA CICLOFOSFAMIDA UTILIZANDO LA TCNICA DE MICRONCLEOS EN MDULA SEA

69

EFECTO TXICO DE LA ADMINISTRACIN DE PLOMO EN RATAS

80

EFECTO DEL pH EN LA LIBERACIN DE PLOMO POR UTENSILIOS DE BARRO VIDRIADO

94

DETERMINACIN DE ETANOL EN UNA MUESTRA PROBLEMA

100

GUIONES COMPLEMENTARIOS 108 EXTRACCIN Y CUANTIFICACIN DE TXICOS NO VOLTILES EN UNA MUESTRA PROBLEMA

109

DETERMINACION DE MALATION RESIDUAL 123

PRODUCCION DE METAHEMOGLOBINA POR NITRITOS Y EFECTO PROTECTOR DEL AZUL DE METILENO IN VIVO

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PRLOGO A partir del semestre 2006-I se inici la implementacin gradual del mapa curricular del plan de estudios vigente de la carrera de Qumica Farmacutico Biolgica (QFB). En este mapa curricular, se ubic en el sexto semestre la asignatura terico-experimental de Toxicologa, con clave 1614. El diseo del contenido programtico de la asignatura, consider revisar los conocimientos bsicos de toxicologa como son citotoxicidad, bioactivacin txica, estrs oxidante, mutagnesis, carcinognesis y teratognesis, para integrarlos al estudio del riesgo de exposicin, as como a la toxocintica y toxodinamia de las reacciones adversas ocasionadas por xenobiticosfrmacos, metales pesados y sustancias de abuso. Acorde a lo antes sealado, se consideraron guiones experimentales que permitieran la aplicacin e integracin de los conocimientos adquiridos en diversas asignaturas de semestre previos y de manera importante, los obtenidos en la clase terica de la asignatura. En el ao 2012 se contaba con el Manual de guiones experimentales para la enseanza y aprendizaje del laboratorio de Toxicologa, constituido por diez guiones experimentales diseados de acuerdo a la Reforma de la Enseanza Experimental. Dos de estos guiones, se implementaron con el apoyo del proyecto PE202006 a travs del Programa de Apoyo a Proyectos para la Innovacin y Mejoramiento de la Enseanza (PAPIME), lo que permiti la adquisicin de equipos, materiales y reactivos para la enseanza experimental de esta asignatura. Posteriormente, el grupo de profesores de toxicologa, en forma colegiada, decidi continuar con la revisin del curso prctico, incluyendo temas de inters actual en esta asignatura como toxicologa ambiental y estrs oxidante; y rediseando dos de los guiones existentes con la finalidad de mejorar el aprendizaje hacindolos ms completos e integrales. Con esta intencin, se implementaron tres guiones experimentales con apoyo de otro proyecto (PE201111) del mencionado programa: a) Identificacin y cuantificacin de txicos no voltiles en una muestra problema, b) Determinacin del mecanismo de accin antioxidante de compuestos de origen natural y sinttico, ambos resultado del rediseo de prcticas incluidas en el manual del 2012; y c) Determinacin de mutgenos ambientales a travs de la prueba de Ames para integrar el tema de toxicologa ambiental. Es as que los autores de esta nueva edicin presentamos el Manual de guiones experimentales para la enseanza y aprendizaje del laboratorio de Toxicologa (clave 1614). Este manual est constituido por once guiones experimentales tres de los cuales, estn incluidos en la seccin de

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Guiones experimentales complementarios, mismos que permiten reforzar los conocimientos en toxicologa analtica y en el caso de uno de ellos, evidenciar efectos txicos. Cabe destacar que todos los guiones del manual permiten cubrir las unidades temticas del curso terico (Tabla 1) y propician tambin su aplicacin a la resolucin de problemas en esta rea. Asimismo, la secuencia de los guiones experimentales est en concordancia con las clases tericas lo que favorece el proceso de enseanza-aprendizaje de los alumnos. Tabla 1. Relacin entre las unidades temticas del curso terico y los guiones experimentales. Curso laboratorio Guin experimental

Curso terico Unidad temtica

Identificacin y cuantificacin de txicos no voltiles en una muestra problema

Introduccin a la Toxicologa

Cuantificacin de cianuro de hidrgeno, como txico voltil, a partir de glucsidos cianognicos

La biotransformacin de xenobiticos y su importancia toxicolgica.

Determinacin del mecanismo de accin antioxidante de compuestos de origen natural

El estrs oxidante

Determinacin de mutgenos ambientales a travs de la prueba de Ames

Mutagnesis, Carcinognesis y Teratognesis y Toxicologa ambiental

Cuantificacin de microncleos en eritrocitos de mdula sea como indicador de genotoxicidad

Mutagnesis, Carcinognesis y Teratognesis

Efecto txico de plomo en ratas Toxicidad de metales pesados Efecto del pH en la liberacin de plomo por utensilios de barro vidriado

Toxicidad de metales pesados

Determinacin de etanol en una muestra problema

Toxicidad de sustancias de abuso

GUIONES COMPLEMENTARIOS Extraccin y cuantificacin de txicos no voltiles en una muestra problema

Introduccin a la toxicologa

Determinacin de malatin residual La biotransformacin de xenobiticos y su importancia toxicolgica

Produccin de metahemoglobina por nitritos y efecto protector del azul de metileno in vivo

La biotransformacin de xenobiticos y su importancia toxicolgica.

Cabe recordar que los guiones experimentales se elaboraron siguiendo los criterios establecidos por la Reforma de la Enseanza Experimental, donde la adquisicin del conocimiento se da a la luz de las

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evidencias observables o medibles de los fenmenos que ocurren en el laboratorio. El estudiante es enfrentado a los mismos a travs de un problema bien definido, el cual debe ser resuelto encontrando las relaciones causa-efecto a travs del trabajo experimental. Cada uno de los guiones est estructurado de la siguiente manera: OBJETIVO ACADMICO. Se establece para reforzar y enriquecer los conocimientos adquiridos en el curso terico, as como el desarrollo de habilidades en el manejo de materiales y empleo de tcnicas analticas usadas comnmente para determinar y/o identificar la presencia de xenobiticos. PROBLEMA Se plantea con la intencin de enfrentar al estudiante con fenmenos de inters en el rea que le permitan adquirir los conocimientos planteados en el OBJETIVO ACADMICO a travs del trabajo experimental; encontrando las relaciones causa-efecto y relacionando estos hallazgos con el riesgo de intoxicacin y/o el potencial toxicolgico.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Describe el procedimiento y tcnicas utilizadas para el desarrollo y obtencin de resultados que permitan resolver el PROBLEMA. CUESTIONARIO Se incluye con la intencin de dirigir al estudiante hacia la resolucin del PROBLEMA, resaltando los aspectos vivenciales de la experiencia en el laboratorio y, de esta forma, reforzar el proceso cognoscitivo. APNDICE I : CONOCIMIENTOS PREVIOS ste apndice contiene un listado de los conceptos indispensables para que el estudiante comprenda el guin y sea capaz de resolver el PROBLEMA planteado. APNDICE II: PREPARACIN DE REACTIVOS En este apndice se indican las cantidades necesarias para la preparacin de los reactivos a emplear en el DESARROLLO EXPERIMENTAL. APNDICE III: DISPOSICIN DE RESIDUOS Considerando que en cada sesin de laboratorio se generan un nmero importante de residuos, se contempl la necesidad de indicar puntualmente cada uno de ellos as como la manera en que debern ser confinados y etiquetados para su posterior tratamiento.

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Los autores consideramos importante tambin incluir el presente material: x Reglamento de Higiene y Seguridad de la Facultad y del Departamento de Farmacia, para concientizar a los alumnos de la relevancia y carcter obligatorio de ambos, promoviendo de esta forma el desarrollo de actitudes apropiadas para un profesional en el rea de las ciencias biolgicas y de la salud. x Formato de Reporte de Seguridad e Higiene y la Hoja de Seguridad de Reactivos, para que los alumnos se familiaricen con el rombo de comunicacin de riesgos y de esta forma, puedan identificar el equipo de proteccin personal para el manejo de sustancias qumicas y el grado de riesgo de sustancias peligrosas. x Hoja de valoracin para la evaluacin del bienestar de los animales de experimentacin, con base en la recomendacin emitida por el Comit Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (CICUAL), misma que permitir realizar una revisin de la salud animal peridica posterior a la administracin del xenobitico en los guiones en donde se emplean animales de experimentacin. Con esta medida se evitar causarles sufrimiento innecesario y, en su caso, se aplicar adecuadamente el punto final humanitario del experimento.

Finalmente, los autores agradecemos el apoyo brindado a travs del proyecto PAPIME No.

PE201111 de la Direccin General de Asuntos del Personal Acadmico (DGAPA) de la UNAM para la

implementacin de tres guiones experimentales y la elaboracin de esta segunda edicin. Asimismo,

agradecemos a los becarios de este proyecto Carolina Rivera Santiago, Jos Guadalupe Becerril

Vega, Valeria Abigail Rosales Zariana, Marcela Alejandra Lpez Snchez y Rodrigo Hernndez por

sus valiosas aportaciones y dedicacin para lograr el desarrollo e implementacin de los nuevos

guiones.

Hernndez Luna, M. y Llano Lomas, M. Propuesta de Reforma de la Enseanza Experimental. Revista del IMIQ, Ao XXV, vol. 07, 1994, pp. 5-7.

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Reglamento de Higiene y Seguridad para los Laboratorios de la Facultad de Qumica

ARTCULO 1. El presente Reglamento es aplicable en todos aquellos espacios de la Facultad de Qumica donde se realice trabajo experimental, sea de docencia o de investigacin. Estos sitios, para efectos del presente Reglamento, sern denominados laboratorios.Su cumplimiento es obligatorio para el personal acadmico, administrativo y alumnos y no excluye otra reglamentacin que resulte aplicable. Deber exhibirse en un lugar visible en cada laboratorio de la Facultad de Qumica.

ARTCULO 2. Es necesario que el personal que trabaja en cada laboratorio conozca los sistemas de alerta, las zonas de menor riesgo, las rutas de evacuacin, el equipo para combatir siniestros y las medidas de seguridad en cada laboratorio, as como los procedimientos establecidos para actuar en caso de presentarse una emergencia.

ARTCULO 3. Los laboratorios debern estar acondicionados, como mnimo, con lo siguiente:

a. Un control maestro para energa elctrica b. Un botiqun de primeros auxilios c. Extintores d. Un sistema de ventilacin adecuado e. Agua corriente f. Drenaje g. Un control maestro para suministro de gas en los lugares donde se utilice h. Sealamientos de proteccin civil

Todos los laboratorios que trabajen con sustancias qumicas (NOM-018.STPS-2000) http://www.stps.gob.mx/bp/secciones/dgsst/normatividad/normas/Nom-018.pdf, debern tener adems:

i. Regadera j. Lavaojos k. Polvo para derrames

ARTCULO 4. Cada uno de los Departamentos y Unidades Acadmicas de la Facultad debern nombrar al menos a un responsable de seguridad.

ARTCULO 5. En los laboratorios de enseanza de Licenciatura, al realizar actividades experimentales, nunca deber estar una persona sola. El nmero mnimo de personas deber ser de dos y al menos una de ellas deber ser parte del personal acadmico de la Facultad. En el caso de los laboratorios de investigacin el nmero mnimo de personas que debern permanecer es de dos, sin importar su nombramiento.

ARTCULO 6. Para trabajar en los laboratorios, es obligatorio usar bata, lentes de seguridad y en caso de ser necesario guantes; es responsabilidad del usuario contar con el equipo mencionado. Queda prohibido el uso de lentes de contacto, pelo suelto y zapatos abiertos.

ARTCULO 7. Queda prohibido fumar y consumir alimentos o bebidas en los laboratorios.

ARTCULO 8. Todas las reas donde se realice trabajo con material radiactivo debern estar claramente identificadas. Para poder manipular este material radiactivo, es indispensable aprobar el curso de capacitacin, as como la obtencin del dosmetro correspondiente.

ARTCULO 9. Para poder realizar trabajo experimental con Organismos Genticamente Modificados (OGMs), se deber informar a la Comisin Interna de Bioseguridad. El manejo y disposicin adecuada de estos organismos, se llevar a cabo de acuerdo con el reglamento interno de cada Departamento.

ARTCULO 10. En caso de trabajar con compuestos que contengan azufre, selenio y fsforo o cualquier sustancia olorosa se deber informar a la Coordinacin de Seguridad Prevencin de Riegos y Proteccin Civil para su conocimiento. Para el manejo de las mencionadas sustancias debern seguirse las recomendaciones establecidas en las hojas de seguridad correspondientes que estarn disponibles en cada laboratorio (NOM 018.STPS-2000). http://www.stps.gob.mx/bp/secciones/dgsst/normatividad/normas/Nom-018.pdf

ARTCULO 11. Las puertas de acceso y salidas de emergencia debern estar siempre libres de obstculos y en posibilidad de ser utilizadas ante cualquier eventualidad. El responsable del rea deber verificar el cumplimiento de este artculo.

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ARTCULO 12. Las regaderas debern funcionar correctamente, contar con el drenaje adecuado, estar lo ms alejadas posible de instalaciones o controles elctricos y libres de todo obstculo que impida su uso. El responsable del rea deber verificar el cumplimiento de este artculo.

ARTCULO 13. La localizacin de los controles maestros de energa elctrica y suministros de gas en cada laboratorio, deber estar sealada adecuadamente, de manera que puedan ser identificados con facilidad.

ARTCULO 14. Las tuberas de cada laboratorio debern estar sealadas de acuerdo con la norma oficial mexicana correspondiente (Norma Oficial Mexicana NOM-0026 STPS 1998). http://www.stps.gob.mx/bp/secciones/dgsst/normatividad/normas/Nom-026.pdf

ARTCULO 15. Cada laboratorio deber contar con un botiqun de primeros auxilios. Su contenido ser el siguiente: apsitos estriles, vendas elsticas. tela adhesiva, abatelenguas, frulas de cartn de 15 x 50 cm, mascarilla para respiracin artificial (Tipo mascarilla nariz boca con fuelle, sin contacto directo de boca a boca o un equipo de funcin semejante), algodn, alcohol en gel o alcohol lquido desnaturalizado, termmetro axilar y tijera recta. El responsable se har cargo de revisarlo peridicamente.

ARTCULO 16. Los extintores de incendios debern ser de CO2 y de polvo qumico seco, segn lo determine el Departamento de Prevencin y Combate de Siniestros de la UNAM. Debern ser recargados peridicamente de conformidad con los resultados de la supervisin que se realiza regularmente o despus de haber sido utilizados. En caso de que un extintor sea utilizado, deber informarse a la Coordinacin de Seguridad, Prevencin de Riesgos y Proteccin Civil para obtener un extintor de reemplazo temporal. El extintor debe tener la fecha de la ltima recarga y cuando se le debe de dar mantenimiento.

ARTCULO 17. Todo el personal acadmico, administrativo y estudiantes debern de tener conocimiento de los procedimientos de seguridad establecidos para emergencias ocasionadas por incendios, derrames o personas accidentadas. Estos procedimientos se deben de tener a la vista en cada laboratorio.

ARTCULO 18. Los sistemas de extraccin de gases debern mantenerse sin estorbos ni impedimentos para su correcto funcionamiento. Se les deber proporcionar el mantenimiento preventivo o correctivo que solicite el responsable de cada rea.

ARTCULO 19. Los sistemas de suministro de agua corriente y de drenaje, debern recibir el mantenimiento preventivo o correctivo que solicite el responsable de cada rea, tan pronto como sea posible.

ARTCULO 20. Los lugares donde se almacenen reactivos, disolventes, equipos, materiales, medios de cultivo y todo aquello relacionado o necesario para el funcionamiento correcto de los laboratorios, estarn sujetos a este Reglamento en su totalidad.

ARTCULO 21. Queda prohibido desechar sustancias o materiales al drenaje, a la basura municipal o al medio ambiente. Todos los laboratorios debern contar con procedimientos bsicos para la disposicin adecuada de los residuos y del personal responsable de su tratamiento.

ARTCULO 22. Queda prohibido pipetear directamente con la boca cualquier lquido.

ARTCULO 23. Al finalizar las actividades cotidianas, el responsable o el profesor correspondiente en los laboratorios de enseanza deber verificar que queden cerradas las llaves de gas, agua, vaco, etc., as como apagar todos los equipos que se hayan utilizado. En caso de requerir que algn equipo trabaje continuamente, debern indicarse tanto en el interior como en el exterior del laboratorio correspondiente, en forma claramente visible y legible, las precauciones que deben seguirse, as como la informacin para localizar al responsable.

ARTCULO 24. Queda prohibido dejar experimentos bajo condiciones de calentamiento a reflujo toda la noche, fines de semana y en periodo vacacional excepto cuando cuenten con un sistema de recirculacin de agua.

ARTCULO 25. En cada laboratorio de la Facultad debern exhibirse, visible y legiblemente, los telfonos de emergencia a los cuales llamar en caso de requerirlo.

ARTCULO 26. Los anaqueles, libreros y muebles de oficina que puedan caerse, debern estar sujetos. Los cilindros vacos o que contengan gases debern estar asegurados individualmente para prevenir accidentes.

ARTCULO 27. Queda prohibido que menores de edad permanezcan en el laboratorio sin la autorizacin por escrito del responsable del rea.

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ARTCULO 28. El personal (acadmicos, administrativos o estudiantes) que labora, o realiza sus actividades en los laboratorios, debe informar al responsable del rea o a su jefe inmediato si padece alguna enfermedad que requiera atencin especial y pueda generar incidentes dentro del rea.

ARTCULO 29. A todas las Unidades, Centros o Departamentos que estn certificados se regirn por el reglamento general y ser complementado por su reglamento interno.

ARTCULO 30. Todas aquellas cuestiones que no estn especficamente sealadas en el presente Reglamento debern ser resueltas por la Coordinacin de Seguridad, Prevencin de Riesgos y Proteccin Civil, la cual se apoyar en la Direccin de la Facultad.

ARTCULO 31. Cualquier alteracin de las condiciones de seguridad, o en el cumplimiento del presente Reglamento, deber ser reportada la Coordinacin de Seguridad, Prevencin de Riesgos y Proteccin Civil.

ARTCULO 32. Las personas que sean sorprendidas haciendo mal uso de equipos, materiales, instalaciones, etc., propias de los laboratorios, o de las sealizaciones instaladas para proteccin civil, sern sancionadas conforme a la Legislacin Universitaria, segn la gravedad de la falta cometida.

ARTCULO 33. En el caso de los alumnos, las sanciones aplicables sern las que decida el H. Consejo Tcnico de la Facultad, conforme a las disposiciones de la Legislacin Universitaria.

ARTCULO 34. Si se trata de personal acadmico o administrativo, se levantarn las actas correspondientes y se dictarn las sanciones conforme a las disposiciones de la Ley Federal del Trabajo.

ARTCULO 35. Cada rea acadmica deber tener un Reglamento Interno de Higiene y Seguridad que ser complementario al presente Reglamento, en tanto no lo contravengan.

ARTCULO 36. Se informar de este reglamento, as como de los particulares, a los usuarios de cada rea acadmica, quienes debern firmar de enterado.

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Reglamento de Higiene y Seguridad de los Laboratorios del Departamento de Farmacia ARTCULO 1. El presente Reglamento es complementario del Reglamento de Higiene y Seguridad, para Laboratorios de la Facultad de Qumica de la UNAM, aprobado por el H. Consejo Tcnico el 28 de abril de 1994. Su observancia es obligatoria para el personal acadmico, alumnos y trabajadores administrativos, y no excluye otra reglamentacin que resulte aplicable. ARTCULO 2. REGLAS DE SEGURIDAD 2.1 Seguir todas las indicaciones de seguridad que se sealan en cada equipo o reactivo, as como las sealadas en cada prctica. 2.2 Queda prohibido correr dentro del laboratorio. 2.3 Todas las lesiones sufridas dentro del laboratorio, no importa qu tan insignificantes sean, debern darse a conocer al coordinador del laboratorio. 2.4 Antes de desarmar o limpiar un aparato elctrico, debe asegurarse de que est desconectado de la corriente elctrica. Nunca opere un equipo que desconoce, pregunte primero al laboratorista o al profesor. 2.5 No debe usarse material de vidrio roto o despostillado. 2.6 Si en su rea o equipo se va a efectuar algn servicio de mantenimiento, asegrese de dar aviso oportuno a todos los involucrados y comunquelo a la Coordinacin de Seguridad. 2.7 El alumno que necesite salir por cualquier motivo, deber comunicarlo a los profesores. 2.8 El alumno que acta como supervisor de cada equipo de trabajo, deber verificar, al finalizar la prctica, el orden y la limpieza de cubculos y equipos. 2.9 Al finalizar cada sesin prctica, los alumnos entregarn al profesor responsable de la asignatura o al laboratorista en turno, los cubculos y equipos empleados, limpios y en buen estado; asimismo debern informar cualquier defecto o anomala detectada en los mismos. 2.10 Deber colocar sus artculos personales en el sitio que para tal efecto se asignar en cada laboratorio. ARTCULO 3. MANUFACTURA DE MEDICAMENTOS 3.1 Todo el personal involucrado en la manufactura de medicamentos, deber cubrir totalmente su cabello con una cofia limpia y en buen estado. 3.2 Deber usar guantes de cirujano y cubrebocas limpios, en buen estado, cuando el proceso lo indique (por ejemplo, surtido y pesado de materias primas, etc.). 3.3 De preferencia debe portar zapatos cerrados con suela antiderrapante. 3.4 Queda prohibido introducir alimentos, bebidas o golosinas, excepto cuando as se requiera (Biofarmacia). 3.6 Quedan prohibidas las visitas. 3.7 Las puertas de los cubculos deben permanecer cerradas. ARTCULO 4. DISPOSICIN DE RESIDUOS BIOLGICOS 4.1 En caso de romper o derramar material contaminado, se deber agregar fenol al 5% y dejar actuar el desinfectante por 10 minutos. 4.2 Queda estrictamente prohibido arrojar medio de cultivo, disolventes orgnicos o productos biolgicos, al sistema de drenaje, as como a los colectores de basura; estos residuos se debern incorporar a recipientes que se localizan en cada laboratorio, para ser dispuestos adecuadamente. 4.3 Los cultivos deben esterilizarse antes de ser desechados; si se encuentran en material desechable, ste debe depositarse en los recipientes que se localizan en cada laboratorio. Estos residuos sern reciclados. 4.4 Otros desechos orgnicos (alimentos, animales, muestras biolgicas) se depositarn en los recipientes etiquetados que para este propsito se encuentran en cada laboratorio. 4.5 El material de plstico se depositar en otro recipiente especial. 4.6 El material de vidrio se colectar aparte, en el recipiente indicado. 4.7 El papel limpio de desecho se depositar en otra caja para ser reciclado. ARTCULO TRANSITORIO NICO. El presente Reglamento entrar en vigor al da siguiente de su aprobacin por el H. Consejo Tcnico de la Facultad.

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REGLAMENTO PARA LOS ESTUDIANTES Y PROFESORES DE LOS CURSOS EXPERIMENTALES DEL DEPARTAMENTO DE FARMACIA

Para realizar las actividades experimentales en los laboratorios del Departamento de Farmacia, se debern observar las siguientes indicaciones:

1. Es indispensable que el alumno cuente con el Guin o Manual actualizados de los

experimentos, el Calendario de Prcticas y los tiles o materiales adicionales que le hayan sido solicitados por su profesor(a).

2. Para tal efecto es necesario que los coordinadores de la asignatura enven, en el periodo sealado para esta actividad, el Calendario de Prcticas que se elabor de manera colegiada y de acuerdo al formato vigente que les enva la Coordinacin de Laboratorios de Docencia previo al inicio del semestre.

3. Las actividades que se registren en el calendario de prcticas deben estar asociadas a un espacio fsico en donde se desarrollar la actividad. Si durante el semestre, surge alguna modificacin en la ubicacin de las actividades se deber comunicar a la Coordinacin de los Laboratorios al menos una sesin antes de que realice la actividad en la que hay modificaciones al calendario.

4. Al finalizar el curso prctico de cada asignatura los profesores subirn las calificaciones a la pgina de escolares: escolares.quimica.unam.mx/profesor, en tiempo y forma de acuerdo al Calendario de Actividades vigente y de acuerdo a la forma en la que cada asignatura haya definido de manera colegiada la forma en la que deben aparecer sin que quede duda entre los estudiantes. Los alumnos que adeudan material ya estarn sealados en el recuadro correspondiente y solamente la Coordinacin de los Laboratorios de Docencia podr eliminar la seal de adeudo. Se entregar en la Coordinacin una copia del Acta de Calificaciones del grupo con las firmas de los profesores que impartieron la asignatura.

5. SOLICITUD DE MATERIAL: Al solicitar el material para las sesiones prcticas, y antes de firmar de conformidad la papeleta de solicitud, el alumno, deber revisar el material cuidadosamente en la presencia del laboratorista y si es el caso anotar las observaciones pertinentes en la papeleta. Al finalizar las actividades prcticas, el material se entregar limpio y en el mismo estado en que se recibi. No olvide recoger la papeleta de SOLICITUD DE MATERIAL que firm. En caso de haber roto material, el alumno deber llenar correctamente, firmar y entregar al laboratorista un VALE DE ADEUDO DE MATERIAL. El material roto y que sea irreparable, se debern depositar en el contenedor identificado para tal funcin en cada uno de los laboratorios.

6. REPOSICIN DE MATERIAL Para la reposicin de material roto o extraviado, el estudiante deber comprarlo de las mismas especificaciones y entregarlo, con la factura de compra, en la Coordinacin de los

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Laboratorios de Docencia de Farmacia, a ms tardar en la siguiente sesin de laboratorio o en su defecto y de acuerdo al costo la semana anterior a la entrega de calificaciones finales de las asignaturas Terico-Prcticas. La calificacin de la Enseanza Experimental no aparecer en listas hasta que se liquide el adeudo de acuerdo a las especificaciones mencionadas en este reglamento.

7. SOLICITUD DE EQUIPO E INSTRUMENTOS: La solicitud del uso del equipo e instrumentos, as como la bitcora de uso, deber llevar la firma del alumno y al menos uno de los profesores de la asignatura como co-responsable del equipo, quien deber sealar a los estudiantes el uso de tales equipos e instrumentos y supervisar en todo momento que el estudiante lo est utilizando adecuadamente. Al finalizar las actividades prcticas, los equipos e instrumentos se entregarn en el mismo estado en que se recibieron. No olvide recoger la papeleta de SOLICITUD DE MATERIAL que firm. En caso de haber perdido o roto alguno de los insumos del equipo o instrumento, el alumno deber llenar correctamente, firmar y entregar al laboratorista un VALE DE ADEUDO DE MATERIAL de acuerdo a las instrucciones que en su momento se le indique en la Coordinacin de los laboratorios de docencia.

Atentamente: JEFATURA DEL DEPARTAMENTO DE FARMACIA.

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REPORTE DE SEGURIDAD E HIGIENE Fecha: Grupo : Equipo: Responsable: Guin: Integrantes: UTILIZACIN DE REACTIVOS

Reactivo Cantidad empleada (por equipo) Observaciones anormales

(contaminado, ms de una fase, coloracin anormal, precipitados)

VIGILANCIA DE EQUIPO

Equipo Hora de inicio de

uso/ trmino

Condiciones de uso (Cantidad pesada1, longitud de

onda2, rpm3, tiempo4, temperatura5, disolvente

utilizado6, aumento7, volumen8)

Observaciones (Sucio, no funciona adecuadamente, sin

observaciones, anotar el nmero de equipo o inventario cuando

considere que requiere mantenimiento)

Balanza1 Espectrofotmetro2 Centrfuga3,4 Microcentrfuga3,4 Estufa4,5 Rotaevaporador5,6 Microscopio7 Lmpara de luz UV2 Incubadora4,5 TRATAMIENTO DE RESIDUOS

Residuo (R) Observaciones (contenido, estado fsico, si hay ms de una fase o tiene precipitado) CRETIB+

C R E T I B C R E T I B C R E T I B C R E T I B C R E T I B

+ Marque con una X, la(s) letra(s) correspondiente de acuerdo al sistema CRETIB (Corrosivo, Reactivo, Explosivo, Txico, Inflamable, Biolgico-Infeccioso)

_______________________________________________________________ (Nombre y firma del encargado de seguridad)

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HOJA DE SEGURIDAD DE REACTIVOS

Investigue los siguientes datos (MSDS, Merck Index) y complete las siguientes tablas para cada sustancia a emplear. Posteriormente, en el Rombo de comunicacin de riesgos, indique el valor de 0 a 4, correspondiente a cada riesgo (Salud, Inflamabilidad, Reactividad y Caractersticas especficas) de acuerdo a la Clasificacin y grados de riesgo de las sustancias peligrosas (ANEXO 1 DEL REPORTE DE SEGURIDAD E HIGIENE). Reactivo: DL50/CL50 (rata): Punto de ignicin: Reactividad / Incompatibilidad: Caractersticas especficas: Equipo de proteccin personal: Reactivo: DL50/CL50 (rata): Punto de ignicin: Reactividad / Incompatibilidad: Caractersticas especficas: Equipo de proteccin personal: Reactivo: DL50/CL50 (rata): Punto de ignicin: Reactividad / Incompatibilidad: Caractersticas especficas: Equipo de proteccin personal: Reactivo: DL50/CL50 (rata): Punto de ignicin: Reactividad / Incompatibilidad: Caractersticas especficas: Equipo de proteccin personal: Reactivo: DL50/CL50 (rata): Punto de ignicin: Reactividad / Incompatibilidad: Caractersticas especficas: Equipo de proteccin personal: En Equipo de proteccin personal indique la(s) letra(s) de identificacin correspondiente(s) con base en la tabla del ANEXO 1.

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ANEXO 1 DEL REPORTE DE SEGURIDAD E HIGIENE CLASIFICACIN Y GRADOS DE RIESGO DE LAS SUSTANCIA QUMICAS

LETRAS DE IDENTIFICACIN PARA EL EQUIPO DE PROTECCIN PERSONAL Letra Equipo de proteccin personal

A Anteojos de seguridad B Anteojos de seguridad y guantes C Anteojos de seguridad, guantes y mandil D Careta, guantes y mandil E Anteojos de seguridad, guantes y respirador para polvos F Anteojos de seguridad, guantes, mandil y respirador para vapores G Anteojos de seguridad, guantes y respirador para vapores H Gafas de seguridad para salpicaduras, guantes, mandil y respirador para vapores I Anteojos de seguridad, guantes y respirador para polvos y vapores

J Gafas de seguridad para salpicaduras, guantes, mandil y respirador para polvos y vapores

K Capucha con lnea de aire o equipo SCBA, guantes, traje completo de proteccin y botas

X Consulte con el supervisor las indicaciones especiales para el manejo de estas sustancias

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Efecto txico de plomo en ratas Hoja de valoracin para la evaluacin del bienestar de los animales de experimentacin

Debido a que el trabajo experimental del guin se desarrollar en cuatro sesiones de laboratorio y en tres de ellas, los animales de experimentacin sern administrados con acetato de plomo va intraperitoneal, por recomendacin expresa del CICUAL, se realizar la revisin de los mismos posterior a la administracin del xenobitico. Para tal efecto, debern reportar las caractersticas enunciadas en los recuadros presentados a continuacin, con la finalidad de identificar a los animales que puedan presentar dao provocado por una inadecuada administracin del acetato de plomo. En caso de detectar cualquier dao se deber reportar a los Profesores de laboratorio, para que se realice la eutanasia1 del animal.

Fecha de inicio:_______________________ Fecha de trmino: ______________________________

Fecha Macroequipo responsable Hora Actividad2 Aislado3 Pelo Erizado3 Frecuencia de respiracin4 Acicalamiento en el punto de administracin3

Presencia de herida o irritacin en la zona de aplicacin3

Inquisitivo o alerta al momento de sujetarlo3

Orificios sucios (diarrea u orina)3 Coloracin anormal de los ojos3 Extremidades azules3 Observaciones adicionales:

Nombre del revisor 1. Se recomienda recuperar 3 mL de sangre y guardarla en un tubo heparinizado. 2. En caso de que uno o varios animales presenten poca actividad con respecto a la del control, anote los nmeros de las ratas correspondientes. 3. En caso de que la respuesta sea S, anote el nmero de rata. Compare con los animales control. 4. (#Rata) + R = rpida; D = dbil. Compare con los animales control.

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PROGRAMADEAPOYOAPROYECTOSPARALAINNOVACINYMEJORAMIENTODELAENSEANZA

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IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE TXICOS NO VOLTILES EN UNA MUESTRA PROBLEMA

OBJETIVOS ACADMICOS

Que el alumno emplee mtodos de extraccin cida y bsica para separar txicos no voltiles de

naturaleza cida y bsica en una muestra problema.

Que el alumno emplee reacciones coloridas y cromatografa en capa fina (CCF) para la identificacin

de txicos no voltiles en una muestra problema.

Que el alumno cuantifique un txico no voltil en una muestra problema. PROBLEMA

Separar e identificar escopolamina, paracetamol, cido 4-hidroxibenzoico y cido barbitrico de una

muestra problema; y cuantificar el cido barbitrico presente.

REACTIVOS

Hidrxido de amonio (NH4OH) Solucin de NaOH al 10%*

Metanol (MeOH) Acetato de etilo (AcOEt)

cido actico glacial (AcOH) Escopolamina

Reactivo de Dragendorff * Diclorometano (CH2Cl2)

Reactivo de Dille-Koppanyi * cido barbitrico

Paracetamol cido 4-hidroxibenzoico

cido tartrico * Solucin acuosa de cido actico 2 M*

Solucin saturada de nitrito de sodio (NaNO2) * cido clorhdrico (HCl) concentrado

cido clorhidrico 1N* Sulfato de sodio anhdro (Na2SO4)

Acetato de etilo (AcOEt) Solucin de NaHCO3 al 10%

*Ver APNDICE II

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EQUIPO

Rotaevaporador Bomba de aspersin

Lmpara de luz ultravioleta Espectrofotmetro

Parrilla de calentamiento

MATERIAL POR E QUIPO (Primera sesin)

Embudo de separacin de 250 mL 2 Agitador de vidrio 1

Embudo de cola corta 2 Probeta de 10 mL 2

Matraz Erlenmeyer de 125 mL 6 Pipeta graduada de 10 mL 2

Matraz de bola de 50 mL 2 Anillo metlico 2

Vaso de precipitados de 250 mL 5 Tubos de ensayo 8

Vaso de precipitados de 100 mL 4 Anillos de corcho 2

Vidrio de reloj de 9 cm 2 Pipeta Pasteur 4

MATERIAL PARA LA CURVA (Primera sesin)

Matraz volumtrico de 25 mL 1 Pipeta volumtrica de 4 mL 1

Matraz volumtrico de 10 mL 4 Micropipetas de 100-1000 PL 1 Pipetas volumtricas de 5 mL 2

MATERIAL POR E QUIPO (Segunda sesin)

Cromatoplacas 1 Tubos capilares 3

Vasos de precipitados de 100 mL 4 Pipeta graduada de 10 mL 2

NOTA: El profesor proporcionara las celdas para las lecturas

DESARROLLO EXPERIMENTAL

El profesor proporcionar una muestra problema de 30 mL, la cual contiene los txicos no voltiles

escopolamina, paracetamol, cido 4-hidroxibenzoico y cido barbitrico.

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PRIMERA SESIN

A) EXTRACCIN CIDA

1. A 15 mL de la muestra problema se agrega una solucin acuosa de cido tartrico al 10% hasta

llegar a pH = 2. La muestra acidificada se trasvasa a un embudo de separacin y se extrae con dos

porciones de 15 mL de AcOEt; se colectan las fases orgnicas y se renen en un matraz. Guardar y

etiquetar la fase orgnica y la acuosa y tratar segn lo indicado en los incisos 2 y 3

respectivamente.

2. Tratamiento de la fase orgnica:

2.1 La fase orgnica se extrae con dos porciones de 15 mL de una solucin de bicarbonato de sodio

(NaHCO3) al 10%; reunir las fases acuosas en un matraz y tratarlas de acuerdo a lo indicado

en el inciso 2.3.

2.2 A la fase orgnica obtenida en el inciso 2.1 se le adiciona sulfato de sodio anhidro para

eliminar el exceso de agua en la muestra, posteriormente la fase orgnica se filtra a travs de

algodn y se concentra in vacuo; el residuo final se reconstituye con 2 mL de AcOEt. Etiquetar

como fraccin A1.

2.3 La fase acuosa que se reuni en el inciso 2.1 se acidifica con HCl concentrado hasta llegar a un

pH = 1 y posteriormente se extrae con dos porciones de 15 mL de AcOEt; las fases orgnicas

se renen en un matraz, se elimina el exceso de agua adicionando sulfato de sodio anhidro y

filtrando a travs de algodn, finalmente la fase orgnica se concentra in vacuo y el residuo

obtenido se reconstituye con 2 mL de AcOEt. Etiquetar como fraccin A2. Nota: La fase

acuosa se desecha de acuerdo a lo indicado en R0 (Apndice disposicin de residuos).

3. Tratamiento de la fase acuosa:

3.1 Adicionar gota a gota (aproximadamente 5 gotas), una solucin de NaOH al 10% hasta pH = 10.

La solucin bsica se trasvasa a un embudo de separacin y se extrae con dos porciones de 15 mL

de CH2Cl2; las fases orgnicas se renen en un matraz, se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se

concentra in vacuo y el residuo final se reconstituye con 2 mL de CH2Cl2. Etiquetar como

fraccin A3.

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3.2 A la fase acuosa obtenida en el inciso 3.1, se adiciona gota a gota, HCl concentrado hasta llegar a

pH = 2. Etiquetar como fraccin A4.

4. Tomar 2 mL de la fraccin A4 y llevar a sequedad con ayuda de una parrilla de calentamiento; el

residuo obtenido se reconstituye con 2 mL de MeOH y se conserva para su posterior anlisis con

las pruebas de identificacin.

5. El remanente de la fraccin A4 se conserva para la cuantificacin de cido barbitrico de acuerdo

al procedimiento indicado en el apartado C (Cuantificacin).

B) EXTRACCION BSICA

A 15 mL de la muestra problema se agrega gota a gota una solucin de NaOH al 10% hasta llegar a un pH = 10 (aproximadamente 10 gotas). La solucin bsica se trasvasa a un embudo de separacin

y se extrae con dos porciones de 15 mL de CH2Cl2; se separan las fases orgnicas y renen en un

matraz. Guardar y etiquetar la fase orgnica y la acuosa y tratar segn lo indicado en los incisos 2 y

3 respectivamente.

Tratamiento de la fase orgnica: Adicionar sulfato de sodio anhidro para eliminar el exceso de agua, filtrar sobre algodn y

concentra in vacuo. El residuo obtenido se reconstituye en 2 mL de MeOH. Etiquetar como

fraccin B3.

Tratamiento de la fase acuosa: 3.1 Adicionar gota agota, una solucin de HCl 1N hasta pH = 7. La solucin resultante se trasvasa a

un embudo de separacin y se extrae con dos porciones de 15 mL de AcOEt

3.2 A la fase orgnica obtenida se le adiciona sulfato de sodio anhidro, se filtra a travs de algodn

y se concentra in vacuo, el residuo final se reconstituye en 2 mL de AcOEt. Etiquetar como

fraccin B1.

3.3 La fase acuosa neutra del inciso 3 se lleva a pH = 2 adicionando HCl 1N, se trasvasa a un

embudo de separacin y se extrae con dos porciones de 15 mL de AcOEt. A la fase orgnica

obtenida se le agrega sulfato de sodio anhidro, se filtra a travs de algodn, se concentra a

presin reducida y el residuo final se reconstituye en 2 mL de AcOEt. Etiquetar como fraccin

B2.

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3.4 La fase acuosa remanente de la extraccin anterior, se etiqueta como fraccin B4.

Tomar 2 mL de la fraccin B4 y llevar a sequedad con ayuda de una parrilla de calentamiento; el

residuo obtenido se reconstituye en 2 mL de MeOH y se conserva para su posterior anlisis.

El remanente de la fraccin B4 se conserva para la cuantificacin de cido barbitrico.

Nota: El disolvente recuperado al final de la concentracin in vacuo se depositar en el contenedor

etiquetado como R1 para A3 y B3 y en R2 para A1-2 y B1-2. Los residuos de sulfato de sodio

anhidro se depositan en el contenedor etiquetado como R3.

C) CUANTIFICACIN DE CIDO BARBITRICO

PREPARACIN DE LA CURVA PATRN DE CIDO BARBITRICO

La curva patrn de cido barbitrico se prepara colocando en matraces volumtricos de 10 mL los

volmenes de la solucin patrn de cido barbitrico indicados en la Tabla 1 y llevando al aforo con

agua destilada:

Tabla 1. Curva patrn de cido barbitrico No. de tubo Alcuota de la

solucin patrn de cido barbitrico (mL)

Concentracin

de cido barbitrico (mg/mL)

1 0.0 BLANCO

2 1.5 0.45

3 3 0.90

4 6 1.80

5 8 2.40

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TRATAMIENTO DE LAS FRACCIONES QUE CONTIENEN CIDO BARBITRICO:

MUESTRA PROBLEMA, CURVA PATRN Y BLANCO

1. Colocar en tubos de ensaye 1 mL de cada una de las fracciones que contienen cido barbitrico

(muestra problema, curva patrn y blanco).

2. Adicionar a cada uno de los tubos de ensaye 0.5 mL de la solucin saturada de NaNO2, 0.1 mL de la

solucin de AcOH 2M y 2.4 mL de agua destilada.

3. Determinar la absorbancia de cada una de las muestras en el espectrofotmetro a 530 nm, utilizando

como blanco el tubo nmero 1 de la curva (ver Tabla 1).

4. Despus de haber realizado la lectura de cada una de las muestras colocarlas en un contenedor

etiquetado como R12.

SEGUNDA SESIN

D) IDENTIFICACIN

Cromatografa en capa fina

Solicitar a los profesores 4 placas para cromatografa en capa fina (CCF). Los anlisis por CCF se

realizan en cromatoplaca de 5 cm X 2.5 cm, que consisten en placas de aluminio recubiertas con una

capa de gel de slice (slica Kieselgel 60 F254 Merck)

1. Previamente, se aplicar en el lado izquierdo de una cromatoplaca (placa 1) la referencia de

escopolamina, en la placa 2 la de cido barbitrico, en la placa 3 la referencia de paracetamol y en la

4 la de cido 4-hidroxibenzoico. Colocar la muestra de los residuos reconstituidos previamente

aplicndolas en el lado derecho de cada una de las placas de acuerdo al siguiente esquema.

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Esquema 1. CCF de las muestras en estudio.

2. Para la identificacin de la escopolamina emplear como sistema de elucin una mezcla de

CH2Cl2-MeOH- NH4OH (9:1:0.1). Nota: Para preparar este sistema de elucin es necesario

mezclar el hidrxido de amonio y metanol y posteriormente verter la mezcla resultante en el

CH2Cl2.

3. Para la identificacin del cido barbitrico emplear como sistema de elucin una mezcla de

AcOEt-MeOH-AcOH glacial (7:2:1). Agitar vigorosamente la fase mvil antes de eluir la placa.

4. Para la identificacin de paracetamol utilizar como sistema de elucin una mezcla de CH2Cl2-

MeOH (9:1).

5. Para la identificacin de cido 4-hidroxibenzoico utilizar como sistema de elucin una mezcla

de CH2Cl2-MeOH (9:1) + 10 gotas de AcOH glacial, por cada 10 mL de mezcla.

6. Saturar las cmaras durante 10 minutos antes de eluir las muestras en las cromatoplacas.

7. Eluir hasta la lnea limite de elucin indicada en el esquema 1.

8. Visualizar la presencia de las sustancias con una lmpara de luz U.V. a 254 nm y

posteriormente, revelar las cromatoplacas utilizando la solucin etiquetada como solucin

reveladora de reactivo de Dragendorff para el caso del alcaloide (escopolamina), con una

cmara de yodo para el cido barbitrico, y con sulfato crico amoniacal/H2SO4 para el

paracetamol y cido 4-hidroxibenzoico.

Ref Mta1 Mta2 0.5cm

0.3cm

d1

d2

Rf=d1/d2

Ref=alcaloideobarbitrico Mta=Reconstituido

Lmitedeelucin

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9. Calcular el factor de retencin (Rf) para cada sustancia de acuerdo al esquema 1 y comparar el

valor obtenido con el de la referencia correspondiente.

10. Una vez identificados las sustancias, desechar los sistemas de elucin de la siguiente forma:

depositar la mezcla CH2Cl2-MeOH-NH4OH (9:1:0.1) en el contenedor etiquetado como R4;

depositar la mezcla AcOEt-MeOH-AcOH glacial (7:2:1) en el contenedor etiquetado como R5;

depositar las mezclas que contengan CH2Cl2-MeOH-AcOH en el contenedor etiquetado como

R6. Depositar las cromatoplacas en una bolsa de plstico etiquetada como R7

Identificacin por reacciones de color

Con el excedente de las fracciones reconstituidas realizar los ensayos respectivos.

Escopolamina: reactivo de Dragendorff

1. Colocar 10 gotas de la fraccin reconstituida correspondiente a escopolamina en un tubo de ensayo

y agregar 2 gotas de solucin reveladora de Dragendorff.

2. Realizar un control positivo con la muestra de referencia y un control negativo con CH2Cl2 para esta

reaccin.

Barbitricos: reactivo de Dille-Koppanyi

1. Colocar 10 gotas de la fraccin reconstituida correspondiente a barbitricos en un tubo y agregar dos

gotas del reactivo A y una gota del reactivo B (Dille-Koppanyi).

2. Realizar un control positivo con la muestra de referencia y un control negativo con MeOH para esta

reaccin.

3. Una vez identificadas TODAS las fracciones desechar de la siguiente manera: Depositar las

fracciones A4, B4 y los residuos de la reaccin de Dille-Koppanyi en el contenedor etiquetado

como R8. Depositar las fracciones A3, B3 y los residuos de la reaccin de Dragendorff en el

contenedor etiquetado como R9.

Nota: Los residuos de paracetamol y cido 4-hidroxibenzoico se depositarn en los contenedores

etiquetados como R10 y R11, respectivamente.

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CUESTIONARIO.

1. En el caso de emplear una muestra biolgica indique cul es el objetivo de adicionar cido tartrico

adems de ajustar el pH?

________________________________________________________________________________

2. Una vez desarrollado el guin qu puntos del proceso y propiedades fisicoqumicas considera que

son crticos para la extraccin eficiente de un xenobitico?

________________________________________________________________________________

3. Reporte en la siguiente tabla los resultados que obtuvo en las pruebas de identificacin. Marque con

una cruz si la reaccin fue positiva y un guin si fue negativa.

Tabla 1. Resultados de las pruebas de identificacin

Referencia escopolamina

Residuo reconstituido

de escopolamina

Referencia barbitrico

Residuo reconstituido

de cido barbitrico

Dragendorff Dille-Koppanyi

Rf Rf

4. Indique si su muestra contena cido barbitrico. Explique su respuesta.

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

5. Indique si su muestra contena escopolamina. Explique su respuesta.

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

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6. Indique si su muestra contena cido 4-hidroxibenzoico y paracetamol. Explique su respuesta.

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

7. En la extraccin en medio cido cual es la finalidad de utilizar la solucin de NaHCO3 al 10%.

________________________________________________________________________________

8. Cules son los puntos que considera crticos para la adecuada identificacin de los componentes en

la muestra problema? Explique su respuesta.

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

9. Reporte en la siguiente tabla los valores de absorbancia obtenidos, e indique los valores de la

regresin lineal.

Tabla 1. Absorbancias de la curva patrn Concentracin de cido

barbitrico [mg/mL] Absorbancia

0.0

0.45

0.9

1.8

2.4

Pendiente (m)

Ordenada al origen (b)

Coeficiente de correlacin (r)

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10. Interpole los valores de absorbancia en la curva y calcule la concentracin de cido barbitrico en

la muestra. Indique el procedimiento.

___________________________________________________________________________________

___________________________________________________________________________________

___________________________________________________________________________________

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.

Clark E.E. Isolation and Identification of Drugs. Vol. I y II. Pharmaceutical Press, London, 1972. Bowman W.C. y Rand M.J. Farmacologa. Bases Bioqumicas y Patolgicas. (2 ed). Ed.

Interamericana, Mxico, 1984. pp 42.2542.32. Blanke R.V. y Decker W.J. Analysis of Toxic substances. En Burtis C.A., Edward R.A. (Eds.)

Textbook of clinical chemistry. Saunders, Philadelphia, 1986. pp 16701744. Benko A. (1985). Toxicological Analysis of Amobarbital and Glutethimide from Bone Tissue. Journal

of Forensic Sciences 30, 708714, Cochin, J., Daly, J.W. (1963). The Use of Thin-Layer Chromatography for the Analysis of Drugs.

Isolation and Identification of Barbiturates and Nonbarbiturates Hypnotics from Urine, Blood and Tissues. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 139, 154159.

Bruneton J. Alcaloides, Generalidades. En: Farmacognosia. Fitoquimica, Plantas Medicinales. Ed. Acribia, Zaragoza, Espaa, 2001, pp 775792.

Aydn, A., Ercan ., Tacolu S. (2005). A novel method for the spectrophotometric determination of nitrite in water. Talanta 66, 11811186.

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APNDICE I: CONOCIMIENTOS PREVIOS.

1. Efectos txicos de la escopolamina, cido barbitrico, cido 4-hidroxibenzoico y paracetamol.

2. Relacin del grado de disociacin de una sustancia con el pH del medio en el que se encuentra

disuelto en funcin del valor de su pKa.

3. Valores de pKa de la escopolamina, cido barbitrico, cido 4-hidroxibenzoico y paracetamol.

4. Forma ionizada y no ionizada de cada uno de ellos.

5. Solubilidad de una sustancia inica en medio acuoso y en un disolvente orgnico.

6. Densidad de los disolventes a emplear.

7. Fundamento de una extraccin mltiple y selectiva.

8. Sustancias que pueden precipitar protenas.

9. Especificar las especies qumicas que se encuentran en cada una de las fases obtenidas en los

tratamientos cido y bsico

10. Objetivo de adicionar una solucin de NaOH 2.5 N en el proceso de extraccin cida.

11. Objetivo de adicionar una solucin de HCl 1N en el proceso de extraccin bsica.

12. Fundamento y esquema de la reaccin de Dragendorff.

13. Fundamento y esquema de la reaccin de Dille-Koppanyi.

14. Fundamento de cromatografa en capa fina como herramienta de identificacin de sustancias

qumicas utilizando luz UV, Yodo y reactivo de Dragendorff como agentes reveladores.

15. Reaccin involucrada en la cuantificacin de cido barbitrico.

16. Ley de Lambert y Beer

17. Sugiera un esquema de separacin para la siguiente mezcla de sustancias no voltiles, indicando

los reactivos y disolventes utilizados, los valores de pH y la naturaleza de las sustancias durante

las diferentes etapas del proceso.

COOH

OH

OHOH

cido glico [A, pKa 3.0]

O

CH3OH

cido propanico [B, pKa 4.36] CH3

NH-CH3

OH

Efedrina [C, pKa 9.36]

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APENDICE II: PREPARACION DE REACTIVOS

Solucin de sulfato crico amoniacal en cido sulfrico.

Pesar 12 g de sulfato crico amoniacal y adicionarlos lentamente y con agitacin constante sobre 350 g

de hielo, posteriormente, adicionar 12.5 mL de H2SO4 concentrado manteniendo la agitacin. Una vez

obtenida la solucin se filtra a travs de algodn. Guardar la solucin anterior en un frasco mbar.

Reactivo de Dragendorff (Solucin reveladora)

Solubilizar 2.6 g de carbonato de bismuto y 7.0 g de yoduro de sodio en 25 mL de cido actico glacial,

calentar por 10 minutos a 40oC para solubilizar el reactivo. Dejar reposar por 12 horas y posteriormente

filtrar la solucin. 20 mL del filtrado (solucin rojo-caf) se mezclan con 8 mL de acetato de etilo, la

solucin anterior guardarla en un frasco mbar (la cual es estable por 6 meses).

Reactivo A (Dille-Koppanyi)

Solubilizar 1 g de acetato de cobalto tetrahidratado en 100 mL de metanol absoluto.

Reactivo B (Dille-Koppanyi)

Mezclar 5.0 mL de isopropilamina con 95 mL de metanol absoluto

Solucin de hidrxido de sodio al 10%

Disolver 10 g de NaOH en 100 mL de agua destilada.

Solucin de cido clorhdrico 1 N

Colocar 83 mL de HCl concentrado en un matraz aforado y adicionar agua destilada hasta 1 L.

Solucin de cido tartrico al 10%

Colocar 10 g en 100 mL de agua destilada.

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Solucin patrn de cido barbitrico 3 mg/mL

Pesar 75.0 mg de cido barbitrico y transferir la pasada cuidadosamente a un matraz volumtrico de

25 mL, llevar al aforo con agua destilada.

Solucin saturada de nitrito de sodio. (NaNO2)

Pesar 82 g de NaNO2 y disolver en 100 mL de agua destilada.

Solucin de cido actico 2 M.

Medir 1.14 mL de cido actico glacial (densidad 1.049 g/mL) y agregarlos a 5 mL de agua, vaciar en

un matraz volumtrico de 10 mL y aforar en seguida con agua destilada.

APNDICE III: DISPOSICIN DE RESIDUOS

R0: Residuo acuoso extraccin cida. Desechar en la tarja.

R1: Residuos de escopolamina en diclorometano.

R2: Residuos de acetato de etilo.

R3: Sulfato de sodio anhidro.

R4: Mezcla CH2Cl2-MeOH (9:1) + 7 gotas de NH4OH

R5: Mezcla MeOH-acetato de etilo-cido actico

R6: Mezcla CH2Cl2-MeOH-cido actico

R7: Cromatoplacas

R8: Reactivo de Dille-Koppanyi, cido barbitrico (fracciones A4 y B4), acetona y MeOH

R9: Reactivo de Dragendorff, escopolamina (fracciones A3 y B3), CH2Cl2 y MeOH

R10: Residuos de paracetamol.

R11: cido 4-hidroxibenzoico.

R12: cido barbitrico, NaNO2, AcOH, acetona y MeOH

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