HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA

PROTOCOLO DE TRABAJO PARA EL DIAGNOSTICO Y CONTROL DE LA TUBERCULOSIS

HOSPITAL DE APOYO DE HUANTALABORATORIO DE ANALISIS CLINICO

Huanta - Per 2012

Seor DoctorEDGARDO ARTURO GARCIA RAMOSDIRECTOR DEL HOSPITAL DE APOYO HUANTA

Seora BilogaROSA MARIA BAUTISTA MARTINEZJEFA DEL SERVICIO DE LABORATORIO

Seor BilogoWALTER RAL RAMOS VALDIVIARESPONSABLE DEL PROGRAMA DE TUBERCULOSIS

TABLA DE CONTENIDOS

ASPECTOS GENERALES1.LA MUESTRA DE ESPURO: METODOS DE OBTENCION1.1EXPECTORACION NATURAL1.2EXPETORACION INDUCIDA2.MUESTRAS EXTRAPULMONARES ORINA JUGO GASTRICO LIQUIDO DE SEROSAS (PLEURA-PERITONEO) LIQUIDO CEFALORAQUIDEO BIOPSIAS Y MATERIALES RESECADO.3.BACILOSCOPIA3.1PREPARACION DEL EXTENDIDO3.2COLORACION (TCNICA DE ZIEHL NEELSEN)3.3OBSERVACION MICROSCOPICA3.4METODO DE LECTURA4.INFORME DE RESULTADOS DE BACILOSCOPIA5.CONSEVACION Y ELIMINACION DE LAS LMINAS6.CULTIVO PARA Mycobacterium tuberculosis PARA DIAGNOSTICO PARA CONTROL6.1MUESTRA PARA CULTIVO6.2DESCONTAMINACION DE LA MUESTRA6.3LECTURA DE CULTIVOS6.4INFORME DE RESULTADOSDEL CULTIVO7.BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPIA Y CULTIVOS.7.1.DEL AMBIENTE Y LA INFRAESTRUCTURA DE LOS LABORATORIOS7.2.DE LA CONDUCTA DEL PERSONAL EN EL LABORATORIO.7.3.DEL VESTURARIO DEL PERSONAL7.4.DEL ASEO DE PISOS, MESAS DE TRABAJO Y CABINA DE BIOSEGURIDAD.7.5.MANEJO DE DESECHOS7.6DEL PROCESAMIENTO8.ANEXO PREPARACION DE REACTIVOS

ASPECTOS GENERALES

La tuberculosis ha causado y sigue causando estragos en el gnero humano, de preferencia en la poblacin de escasos recursos, por lo que se le llama la enfermedad de los pobres.La tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada por un bacilo denominado Mycobacterium tuberculosis, que se transmite a travs de las gotitas de saliva que los enfermos eliminan al exterior al hablar, toser o escupir. Esta enfermedad ataca preferentemente a los pulmones, pero puede afectar tambin a otros rganos del cuerpo humano.Segn cifras de la Organizacin Mundial de la Salud, esta enfermedad cada ao mata a cerca de dos millones de personas en el mundo. En el 2008 se calcul que ms de tres millones de mujeres contrajeron la tuberculosis y de ellas 700 mil murieron por esa enfermedad. De stas, 200 mil tambin eran portadoras del VIH.El Per es el segundo pas con ms enfermos de TBC, despus de Brasil, donde un 60 % de los enfermos se encuentran registrados en Lima.Unos 34 mil peruanos son afectados con este mal, y que las causas para que siga creciendo este mal es sobre todo el nivel de pobreza y desnutricin, en varios lugares del pas. El 52 % de los pacientes son hombres entre las edades de 15 a 60 aos.

1.LA MUESTRA DE ESPUTO: METODOS DE OBTENCIN

1.1 EXPECTORACION NATURAL

A) CALIDAD

Una buena muestra es aquella que proviene del rbol bronquial, y es obtenida despus de un esfuerzo de tos. Sin embargo, una muestra con apariencia de saliva puede ser positivo.

B) CANTIDAD

Para ser considerado suficiente, la muestra debe tener un volumen aproximado de 5 a 10 ml. Si el enfermo tiene escasa secrecin, la muestra no debe ser inferior al esputo obtenido de tres expectoraciones sucesivas, salvo justificadas excepciones.

C) NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTOS DE RECOLECCION.

Se recomienda analizar dos o tres muestras de cada sintomtico respiratorio. La primera muestra debe obtenerse en el momento de la consulta y la segunda al da siguiente, al despertar por la maana. Sin embargo, puede ser necesario una tercera muestra obtenida al momento de entregar al laboratorio la segunda muestra.Para el control del tratamiento examinar una muestra mensualmente mientras dure la terapia antituberculosa.

D) OBTENCION DE LA MUESTRA

En el momento de la consulta. Tomar un envase limpio para esputo y anotar el nmero de orden en el cuerpo del envase. Entregar el envase rotulado al paciente, pero conservar la tapa. Llevar al paciente al Ambiente de Recoleccin Inmediata del Esputo (ARIES), Este lugar debe tener buena ventilacin y debe prohibirse la presencia de otras personas con el paciente en el momento de la toma de muestra. Debe explicarse en forma sencilla e instruir al paciente para que produzca esputo respirando profundamente, reteniendo aire y lanzndolo violentamente. Repetir el procedimiento hasta obtener la cantidad adecuada. Evitar siempre que se derrame el esputo.

Muestra matinalDebe darse al paciente otro recipiente numerado, el que llevar a su domicilio, con instrucciones para que escupa en su interior al levantarse por la maana y siempre antes del desayuno.

1.2 EXPECTORACIN INDUCIDACuando el paciente no logra expectorar y es necesario el examen del esputo, puede inducirse la obtencin de muestra de la siguiente forma:

Hisopado larngeoLavado BronquialNebulizacinObtencin postural

2 MUESTRAS EXTRAPULMONARES

Debe procesarse por cultivo, pues la escasa cantidad de bacilos as como la presencia de Mycobacterias saprofitas, hacen que la baciloscopa no sea concluyente.

ORINA

La muestra ms recomendada es al muestra de orina obtenida en la primera miccin de la maana, previa higiene externa con agua y jabn. Es preferible recolectar entre 300 a 500 ml., en un envase limpio y estril de boca ancha, que facilite la recoleccin directa.La muestra debe ser procesada inmediatamente siempre por cultivo. Se sugiere cultivar por lo menos tres muestras seriadas.Debe recordarse que la prueba de baciloscopa efectuada al sedimento urinario no necesariamente es diagnstico concluyente de tuberculosis, por cuanto existen mycobacterias saprofitas en orina, que pueden producir resultados falsos positivos en el examen de baciloscopa.

JUGO GSTRICO

La recoleccin se hace por la maana con el paciente en ayunas, utilizando una sonda nasogstrica por la que se aspira el jugo gstrico. Utilizando una jeringa de 20 a 50 ml. Vaciar la muestra en un envase limpio de 50 a 100 ml., de capacidad. Cultivar de inmediato conservar en refrigeracin no ms de 6 horas. Mnimo debe tomarse 3 muestras. Su utilizacin es ms frecuente en nios. Este trabajo es realizado por personal de Enfermera.

LIQUIDO DE SEROSAS (PLEURA PERITONEO)

La muestra debe ser obtenida por el personal mdico. El cultivo debe hacerse lo ms rpido posible, as como el estudio baciloscpico. Debe procesarse todo el lquido extrado por aspirado en jeringa de 50 a 100 ml.

LIQUIDO CEFALORAQUIDEO.

La obtencin de la muestra est reservada al personal mdico. Obtenida la muestra en un volumen de aproximadamente 5 ml., esta se dividir en dos partes iguales; una de las cuales se centrifugar y cultivar inmediatamente, no precisando descontaminacin previa. La segunda se conservar en refrigeracin a 4 C. Si la primera parte de la muestra est contaminada, la otra parte se siembra luego de su descontaminacin. Si el volumen de la muestra es pequeo, se siembra toda la muestra. En todos los casos se har baciloscopa del sedimento luego de centrifugar la muestra.

BIOPSIAS Y MATERIAL RESECADO.

Se utiliza un envase estril. La muestra se divide en dos partes: una parte se enva de inmediato al laboratorio para el cultivo y la otra se conserva o enva para el estudio histopatolgico en un frasco con formol al 10 %.

3.LA BACILOSCOPIA

Es la herramienta fundamental rutinaria para el diagnostico de la tuberculosis y el seguimiento del tratamiento de los pacientes con tuberculosis pulmonar.Deber emplearse en toda muestra pulmonar o extrapulmonar y para el control mensual del tratamiento y retratamiento antituberculoso, y previamente en toda muestra que se decida derivar a cultivo.El examen directo de esputo (baciloscopa) tiene una mayor confiabilidad diagnstica (especificidad del 98 %) y capacidad de deteccin (sensibilidad del 60 80%) que el criterio clnico y radiolgico.

3.1PREPARACIN DEL EXTENDIDO

Colocar sobre la mesa de trabajo una hoja doble de papel peridico o una bandeja de fierro enlozado o acero inoxidable (dimensiones recomendadas: 60 x 40 x 10 cm) con papel peridico, humedecido con fenol al 5 %. Numerar las lminas portaobjetos empleando un lpiz graso, con el cdigo respectivo del registro de muestras para investigacin Bacteriolgica en tuberculosis. Deber trazarse una lnea en cada lmina portaobjeto empleando el lpiz graso, la que dividir la superficie en una tercera parte destinada a la numeracin y dos terceras partes para hacer el extendido. Esta lnea debe trazarse en la cara inferior de la lmina a fin de evitar que se borre la numeracin al momento de efectuar la coloracin. Destapar cuidadosamente el envase de la muestra que se va a procesar, manteniendo la boca del envase cerca del mechero encendido.HOSPITAL DE APOYO DE HUANTA

Laboratorio Clnico21 Programa de Tuberculosis

Dividir un aplicador de madera (bajalengua) en dos o tres partes y tomarlo entre el pulgar y el ndice de la mano, para luego seleccionar y extraer la partcula til, que es la porcin muco-purulenta de color amarillo verdoso del esputo, enrollndola en el aplicado.

Colocar la partcula til sobre el portaobjeto y extenderla, haciendo movimientos de vaivn, hasta lograr que el extendido sea homogneo (ni muy fino ni muy grueso), que no llegue a los bordes de la lmina. Por ningn motivo debe calentarse la lmina mientras se haga el extendido, debido a que por el calor se forman crculos concntricos y precipitados granulosos. Pasar por la llama del mechero los bordes de la lmina extendida, colocar sobre el soporte de madera y dejar secar a temperatura ambiente. Fijar cada lmina una vez seca, mediante dos o tres pasajes rpidos sobre la llama del mechero con el extendido hacia arriba.

3.2COLORACIN (TCNICA DE ZIEHL NEELSEN)

Colocar sobre el soporte de coloracin (alambre o varilla de vidrio)la serie de lminas fijadas con el extendido hacia arriba, el nmero hacia el operador y la varilla prxima al operador ligeramente ms alta que la otra.

Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con el colorante fucsina bsica fenicada. Calentar suavemente con la llama del mechero de alcohol o un hisopo de algodn humedecido en alcohol hasta la emisin de vapores, repetir el proceso por tres veces, no debe hervir la preparacin. Si el volumen del colorante disminuye por evaporacin, debe agregarse ms hasta cubrir totalmente el extendido y dejar enfriar. El tiempo mnimo de coloracin con fucsina es de 5 minutos. Eliminar la fucsina tomando la lmina por el extremo numerado, entre el dedo pulgar y el ndice o con una pinza, inclinndola hacia delante y dejando caer el agua corriente a baja presin sobre la parte que no tiene el extendido. Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solucin de alcohol cido durante dos minutos, hasta obtener una coloracin rosa plido. De ser necesario decolorar nuevamente, efectuando movimientos en vaivn de la lmina. Una vez eliminado el alcohol cido lavar nuevamente la lmina con agua a baja presin, cuidando de no desprender la pelcula que form el extendido. Cubrir la superficie del extendido con el colorante azul de metileno previamente filtrado, durante 30 segundos a un minuto. Eliminar el azul de metileno y lavar cada lmina con agua a baja presin, por ambos lados. Dejar secar las lminas al medio ambiente.

3.3OBSERVACIN MICROSCPICA

Para la observacin se debe emplear un microscopio compuesto con el objetivo de inmersin 100x, colocando una gota de aceite de inmersin sobre el extendido.Cada campo microscpico, se debe observar en superficie y en profundidad, para lo cual se utilizar permanentemente el tornillo micromtrico.

3.4METODO DE LECTURA

Los bacilos aparecen como bastoncitos delgados, ligeramente curvos, teidos de rojo, generalmente con grnulos ms coloreados en su interior, aislados, en pareja o en grupo sobre un fondo azul claro.

Es aconsejable seguir una pauta uniforme de observacin, avanzando de izquierda a derecha del extendido, y observando un mnimo de 100 campos tiles, lo que un bilogo capacitado hace en aproximadamente 5 minutos. Se considera campo microscpico til aquel en el cual se observa elementos celulares de origen bronquial (leucocitos, fibras mucosas y clulas ciliadas). Los campos en que no aparecen dichos elementos no deben contabilizarse en la lectura.

El observador ir tomando nota del nmero de bacilos observados y del nmero de campos microscpicos a observarse, que variar segn la cantidad de bacilos que contenga la muestra.

Si en una lmina se encuentra slo de 1 a 9 bacilos en 100 campos microscpicos observados, debe ampliarse la lectura a otros 100 campos ms. Si persistiese el resultado, realizar otro extendido de la misma muestra e informar lo encontrado y solicitar nueva muestra.

Al trmino de la lectura retirar la lmina de la platina del microscopio, limpiar el aceite de inmersin de la lmina con tolueno y guardar la lmina.Limpiar el exceso de aceite del objetivo de inmersin del microscopio con papel lente humedecido en alcohol antes de realizar la siguiente lectura.

4.INFORME DE RESULTADOS DE BACILOSCOPIA

Negativo ( - )No se encuentra bacilos cido alcohol resistentes (BAAR) en 100 campos microscpicos observados.

Positivo ( + )Menos de 1 BAAR promedio por campo en 10 campos observados (10 99 bacilos en 100 campos).

Positivo ( ++ )De 1 a 10 BAAR promedio por campo en 50 campos observados.

Positivo ( +++ )Ms de 10 BAAR promedio por campo en 20 campos observados.

En caso de encontrar de 1 a 9 bacilos cido alcohol resistentes en 100 campos microscpicos observados, se adoptar la siguiente conducta. Leer 100 campos tiles ms por la zona del extendido en busca de positividad. Si persiste la observacin, realizar otro extendido de una porcin ms representativa de la misma muestra en bsqueda de positividad. Si persiste la observacin o no se encuentran ms BAAR, la muestra se interpreta e informa como negativa, ya que podra tratarse de micobacterias saprofitas. El hallazgo se anota slo en el registro. De inmediato se deriva la muestra problema a cultivo para su confirmacin bacteriolgica. En el formato de resultados, en observaciones, indicar que se est derivando la muestra a cultivo y sugerir el envo de ms muestras.

5.CONSEVACION Y ELIMINACION DE LAS LMINAS

El sistema nacional de garanta de calidad de las baciloscipas requiere que las lminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su lectura.Las lminas ledas se limpian con un algodn embebido en alcohol pasndolo por la superficie con leve presin, se comprueba que se mantenga visible la numeracin y se las guarda con sus resultados.Luego del mes, de no serles solicitadas puede limpiar las lminas dejando las negativas en las que no se observen ralladuras para preparar nuevos extendidos y enviando los positivas a otra seccin del laboratorio.La limpieza se realiza de la siguiente manera:

Separe las lminas positivas de las negativas y lvelas por separado

Coloque las lminas en un recipiente con una solucin de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 30 % durante 48 horas.

Lave con abundante agua

Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un pao antes de volverlas a usar.

6.CULTIVO PARA Mycobacterium tuberculosis

El cultivo de Mycobacterium tuberculosis permite diagnosticar los casos que presentan baciloscopa negativa, y aportar hasta un 20 % ms de confirmacin bacteriolgica (especificidad del 100 % y sensibilidad del 80 90 %).

Indicaciones para el cultivo de Mycobacterium tuberculosis:PARA DIAGNOSTICO

La segunda muestra del sintomtico respiratorio con radiografa de pulmones sospechosa de TB (Rx anormal) en seguimiento diagnstico. Muestra paucibacilar de baciloscopa; es decir cuando se encuentra de 1 a 9 BAAR en 100 campos microscpicos observados. Muestras extrapulmonares: todas las muestras de biopsias, piezas anatmicas, tejidos y fluidos (exudados, orina, lquido cefalorraqudeo, lquido sinovial, etctera) de casos con sospecha de tuberculosis extrapulmonar, debern ser sometidas a estudios bacteriolgicos mediante baciloscopa directa y cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Toda muestra pulmonar o extrapulmonar de los pacientes portadores del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH positivos) y sospecha de tuberculosis, se cultivar. Muestra de baciloscopas negativas en menores de 15 aos para diagnstico de tuberculosis pulmonar.

PARA CONTROL:

Muestra de pacientes con sospecha de fracaso al esquema primario (Uno) de tratamiento, por persistencia de baciloscopa directa positiva al cuarto mes de tratamiento o cuando presenta baciloscopas positivas en dos controles sucesivos despus de un perodo de negativizacin de dos meses. Muestra de pacientes con sospecha de fracaso al esquema secundario (Dos) de tratamiento, por persistencia de baciloscopa directa positiva al cuarto mes de tratamiento o cuando presenta baciloscopas positivas en dos controles sucesivos despus de un perodo de negativizacin de dos meses. Muestra de pacientes con TB MDR en retratamiento para el control del tratamiento. Muestra de pacientes crnicos multitratados (ms de dos tratamientos completos previos) y con persistencia de positividad a la baciloscopa directa. En forma excepcional, el laboratorio derivar a cultivo muestras a pedido y bajo responsabilidad de los mdicos, quienes debern indicar en observaciones de la Solicitud de Investigacin Bacteriolgica en Tuberculosis las condiciones del paciente que ameriten la prueba, que sean diferentes a las antes mencionadas.

6.1LA MUESTRA PARA EL CULTIVO

Muestra contaminadaMuestra obtenida aspticamente

Procedimiento para muestras obtenidas aspticamente:

Las muestras obtenidas aspticamente, que recolectadas en un recipiente estril pueden cultivarse prescindiendo del proceso de descontaminacin incluyendo a: Muestras obtenidas por puncin: Lquido cefalorraqudeo, pleural, peritoneal y articulares. Si se cuenta con volmenes suficientes deben ser centrifugados y el sedimento se sembrar en varios tubos de cultivo, si la cantidad de la muestra es pequea se sembrar toda la muestra. Materiales de biopsia pleura, heptica y ganglionar: Fraccionar el material biolgico con instrumento quirrgico esterilizado en un mortero de porcelana previamente esterilizado. Agregar agua destilada, hasta obtener una suspensin, sembrar directamente en el medio de cultivo.

Procedimiento a seguir para muestras contaminadas:

Muestras como: esputo, orina, contenido gstrico, entre otras, deben ser descontaminadas.

Muestras de orina como contenido gstrico, se debern centrifugar el volumen total a 3000 3500 RPM, durante 20 a 30 minutos. Eliminar el sobrenadante. Descontaminar y sembrar el sedimento.

6.2DESCONTAMINACION DE LA MUESTRA SIN CENTRIFUGACION Y EMPLEO DEL MEDIO OGAWA ACIDIFICADO

En una cabina de Bioseguridad o frente al mechero de Bunsen, colocar las muestras debidamente rotuladas en una bandeja. Trasvasar 1 ml. de muestra de esputo a un tubo de 25x150 tapa rosca estril. Agregar 4 ml. De solucin estril de hidrxido de sodio (NaOH) al 4 %. Poner los tubos en estufa o bao mara a 37 C por 20 minutos. Retirar los tubos de la estufa o bao mara y homogenizar. Inocular 0.1 ml. en cada uno de los tubos con medio Ogawa, tratando de baar toda la superficie del medio. Colocar los tubos con la tapa ajustada, inclinados en un bandeja. Incubar en estufa a 37 C. Revisar los cultivos a las 48 y 72 horas para observar si existe contaminacin, alcalinizado (color blanco amarillento) o acidificado (color azul oscuro) por mala neutralizacin de la muestra. Realizar la lectura a los 7, 15, 30 y 60 das respectivamente. El desarrollo de colonias antes de 48 horas es indicativo de contaminacin, algunas veces el medio se licua por accin de grmenes proteolticos.

6.3LECTURA DE CULTIVOS

El desarrollo de Mycobacterium tuberculosis generalmente aparecen luego de 2 a 3 semanas. Las colonias tpicas son de color crema, secas, rugosas de aspecto de coliflor y de borde irregular.

6.4INFORME DE RESULTADOS DEL CULTIVO

Negativo ( - )No se observa colonias.

N de coloniasNmero total de colonias, si hay menos de 20.

Positivo ( + )De 20 a 100 colonias.

Positivo ( ++ )Colonias separadas ms de 100.

Positivo ( +++ )Colonias confluyentes (se observa desarrollo en toda la superficie del medio).

( C )Cultivo contaminado.

Se debe realizar frotis y coloracin Ziehl-Neelsen de las colonias que no tienen morfologa tpica. De observarse BAAR, se enviar el cultivo para su tipificacin al I.N.S.

PRUEBA DE SENSIBILIDAD

Identificacin para la prueba de sensibilidad a frmacos antituberculosos de primera lnea: Cepa del cultivo positivo que sirvi para el diagnstico de fracaso al esquema primario (Uno). Cepa del cultivo positivo que sirvi para el diagnstico de fracaso al esquema secundario (Dos). Cepas de cultivos positivos de pacientes con infeccin VIH o SIDA/TB. Con fines de investigacin, cuando se est realizando encuestas nacionales de vigilancia a la resistencia a los medicamentos antituberculosos en el Per. Cepas del cultivo positivo de paciente con tuberculosis pulmonar frotis positivo, contacto de caso ndice con TB MDR, comprobada por prueba de sensibilidad. En esta situacin se requiere una cuidadosa evaluacin por el CERI correspondiente. Cepa del cultivo positivo de personal de salud, con tuberculosis pulmonar frotis positivo, que labore en contacto con enfermos de tuberculosis.

Indicaciones para la prueba de sensibilidad a frmacos antituberculosos de segunda lnea.

Cepa del cultivo positivo a partir del sexto mes (150 dosis recibidas) de retratamiento estandarizado para TB MDR, a medicamentos antituberculosos de primera y segunda lnea. Cepa del cultivo positivo de pacientes crnicos multitratados que recibieron frmacos anti antituberculosos de segunda lnea al momento del diagnstico.

7.BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPIAS Y CULTIVOS

7.1.DEL AMBIENTE Y LA INFRAESTRUCTURA DE LOS LABORATORIOS.

Se debe utilizar pintura epxica (lavable) en el pintado de las paredes. Asimismo, la unin del cielo-raso con la pared y de sta con el piso no deber terminar en ngulo recto sino en forma cncava para facilitar su limpieza. Los laboratorios debern contar con extinguidores de incendio de anhdrido carbnico. No deber instalarse telfono en el ambiente fsico donde se encuentra el rea de procesamiento de baciloscopas y/o cultivos.

7.2.DE LA CONDUCTA DEL PERSONAL EN EL LABORATORIO Se deber prohibir el ingreso de personas ajenas al servicio de laboratorio. Anualmente, el personal de laboratorio deber pasar por una evaluacin mdica, ajustndose a la norma vigente para el control de la tuberculosis. Toda persona que labora en el laboratorio y que en cualquier momento cumpla con la definicin de sintomtico respiratorio deber ser investigado con baciloscopa, segn norma nacional. En el laboratorio est terminantemente prohibido comer, beber, fumar, guardar alimentos, guardar utensilios de cocina, aplicarse cosmticos. El personal de laboratorio deber mantener obligatoriamente las uas cortas, limpias y sin esmalte. Est terminantemente prohibido colocar o almacenar bebidas o alimentos en las refrigeradoras y estufas de laboratorio. Mientras est procesando las muestras, deber evitar tocarse los ojos, nariz, boca, y la piel descubierta con las manos enguantadas. Cada vez que el Bilogo interrumpa su trabajo o se contamine, deber lavarse las manos con abundante agua y jabn germicida (lquido o en barras pequeas) por 15 a 30 segundos, y secarse con toallas descartables o unipersonales.

7.3.DEL VESTUARIO DEL PERSONAL

Para el procesamiento de las muestras, el personal deber usar gorro descartable o de tela, respirador para uso en bacteriologa de la tuberculosis ajustado a la nariz, guantes quirrgicos descartables y mandilones cerrados por detrs (mandiln tipo quirrgico), de mangas largas, los mismos que no se usarn fuera del laboratorio. Los mandilones debern ser hervidos o esterilizados en autoclave y luego lavados con detergente o jabn. No se deber guardar la ropa de uso diario en los ambientes de trabajo del laboratorio. El personal que usa cabello largo deber mantenerlo amarrado hacia atrs y utilizar gorro obligatoriamente. El cabello largo puede ser peligroso en el laboratorio, particularmente alrededor del fuego de mecheros. Tambin accidentalmente puede ser echado de lado por manos contaminadas con material infeccioso. El personal deber quitarse brazaletes, aretes y collares largos antes de comenzar a trabajar ya que stos pueden producir accidentes en la mesa de trabajo o contaminarse fcilmente con material infeccioso. Los zapatos debern cubrir totalmente los pies para protegerlos de eventuales derrames de cidos y de sustancias infecciosas. Asimismo, debern evitarse los tacos altos en la medida que facilitan cadas y otros accidentes.

7.4.DEL ASEO DE PISOS, MESAS DE TRABAJO Y CABINA DE BIOSEGURIDAD

El personal de limpieza del establecimiento de salud deber ser obligatoriamente capacitado, y estrictamente supervisado en el correcto aseo de pisos y mesas de trabajo. Los pisos de los laboratorios debern limpiarse todos los das con soluciones desinfectantes al final de la jornada de trabajo, utilizando un trapeador. Nunca barrer el piso en seco ni encerar. Los laboratorios que no dispongan de mesas de trabajo con superficies lisas y de fcil lavado (frmica), debern efectuar la limpieza con mayor prolijidad, particularmente las hendiduras, grietas u otros lugares que puedan retener material contaminado. Est terminantemente prohibido guardar material de limpieza dentro del ambiente de trabajo del laboratorio (baldes, escobillas, escobillones, etctera). La limpieza de las cabinas de bioseguridad deber realizarse al culminar la jornada de trabajo con etanol al 70 %.

7.5.MANEJO DE DESECHOS

La adecuada eliminacin del material de laboratorios es responsabilidad del personal a cargo del procesamiento de las muestras. Los recipientes (tachos de basura) debern contener bolsas plsticas de color rojo para desechar el material contaminado. El procedimiento ideal para la eliminacin de envases para esputo es la descontaminacin previa en autoclave o la incineracin.

Donde no se disponga de autoclave ni de alguna facilidad de incineracin, se realizar la desinfeccin previa de las muestras de esputo, aadiendo el envase fenol al 5% o leja al 1% por 30 minutos, en cantidades suficientes para que cubra totalmente la muestra, y luego deber inutilizarse el envase para que no sea reutilizado. Las pipetas usadas y el material de trabajo desechable debern ser tratados con un desinfectante adecuado, por ejemplo fenol al 5%, al que estarn expuestos (sumergidos) durante dos horas, siendo posteriormente esterilizados por autoclave.

7.6.DEL PROCESAMIENTO

Los procedimientos para efectuar baciloscopas y cultivo de Mycobacterium tuberculosis deben realizarse de acuerdo a las normas tcnicas vigentes, tratando de reducir al mnimo la formacin de gotitas, aerosoles, salpicaduras o derrames. Mientras se realiza los procedimientos tcnicos, la puerta del laboratorio deber mantenerse cerrada. Se tendr especial cuidado para no producir aerosoles al destapar los envases, abrir tubos, preparar muestras, transferir cultivos utilizando pipetas, al centrifugar muestras, al agitar tubos y cuando algn tubo con cultivo se rompa accidentalmente. Asimismo, al realizar el extendido de la muestra y durante el calentamiento de la lmina con fucsina fenicada. Si ocurriera un derrame accidental, el personal deber cubrir inmediatamente con papel u otro material absorbente la zona del derrame. Luego se aplicar en dicha zona un desinfectante lquido (fenol al 5%) y se le dejar actuar durante 30 minutos evacuando a todo el personal de la zona. Finalmente se proceder a su limpieza. Se notificar al Jefe inmediato superior todo derrame, accidente o exposicin real a material infeccioso. Se har un informe por escrito de tales accidentes e incidentes y se deber realizar una evaluacin de la ocurrencia a fin de evitar que se vuelva a repetir, as como el seguimiento y tratamiento si resultara necesario. Se deber usar pipetas o bombillas de jebe; no utilizar las pipetas con la boca.

ANEXO 1

PREPARACIN DE REACTIVOS

Para preparar un litro de fucsina fenicada se necesitan 3 g. De fucsina bsica y 100 ml. De alcohol de 95. Se disuelve por agitacin y se agregan 55 ml. De fenol acuoso. Se agita y se agrega agua destilada hasta completar un litro. Se deja reposar 24 horas y se filtra (el fenol acuoso se prepara agregando a 100 g. De fenol cristalizado, 10 ml. De agua destilada. Se calienta en bao mara hasta la completa disolucin y se enfra. El fenol acuoso se mantiene lquido).

Para preparar un litro de azul de metileno se emplea 1 g. De azul de metileno y 100 ml. De alcohol de 95. Se disuelve por agitacin y se agrega agua destilada hasta completar un litro. Se deja reposar 24 horas y se filtra antes de usar.

Para preparar un litro de solucin decolorante se requiere 30 ml., de cido clorhdrico para anlisis y 970 ml., de alcohol de 95. Con la pipeta se deja escurrir el cido clorhdrico por las paredes del matraz, que contiene el alcohol, y se agita suavemente.