“Plataformas on-line de

sensibilidad a Botryticidas en

Arándanos: la base para el

diseño de programas de

Control”

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Ing. Agr. M.Sc. Marcela Esterio G.Universidad de Chile

Condiciones medioCondiciones medio--ambientales favorables para ambientales favorables para el desarrollo del hongoel desarrollo del hongo

GRAN VARIABILIDAD GENGRAN VARIABILIDAD GENÉÉTICA TICA AL MENOS DOS ESPECIES Y 4 GENOTIPOSAL MENOS DOS ESPECIES Y 4 GENOTIPOS

DinDináámica poblacional / poblaciones reaccionan mica poblacional / poblaciones reaccionan frente a condiciones de manejofrente a condiciones de manejo

POR ELLO POBLACIONES DEL HONGO PRESENTAN distinta agresividad y REACCIONAN 

DIFERENTEMENTE  FRENTE A  cambios en EL MANEJO (FUNGICIDAS),    

afectando el  Controlafectando el  Control Químico 

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 CSJ

UF913UF929U51 U6 U26 U32U29U49U75U68U61U9U149U46A1K22U83U56U77U1U4U11U5U14U200U2U7U134A61T70T71K21A2A3A4A51A62A63A50U42U41U36K1T20T27TF4T5T6T10T24T43T16T57T18T23T32T50K10K20K18K16K11K12K31K32K8UF619T31K28K29U57U13UF632A64

tttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttbbttttttttttttttttttbbvvvvbbbvvvb

A

B

C

Kiwi

Tomate

Arándano

Vid

Muñoz et al., 2002

(Thompson y Latorre, 1999; Giraud et al., 1999).

Diferenciación de aislados según hospederos en Chile√

Control químico

BotryticidasBotryticidas, 1970 , 1970 …… 2011 y 2011 y ……iprodione

EstrobilurinasEstrobilurinas

CyprodinilCyprodinilfenhexamid

Mezclas de activos

Fungicidas Orgánicos CÍTRICOSFungicidas biológicos

boscalid

fludioxonil

fluazinam

tebuconazole

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

PyrimethanilPyrimethanil

Otras herramientas … para el control

Control químico

Respiración β ‐tubulinaSíntesis de esteroles

Regul. osmótica

Síntesis de  metionina

AnilinopyrimidinasBenzimidazolesCarboxamidas

Dicarboximidas Phenylpyrroles

Hydroxyanilidas

Fenhexamid(EC50< 0.1 ppm)

Fludioxonil(EC50< 0.1 ppm)

Iprodione(EC50< 1 ppm)

Boscalid(EC50< 0.5 ppm)

Pyrimethanil(EC50< 0.5 ppm)

Cyprodinil(EC50< 0.03 ppm)

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

• (i) alteración del sitio de acción, lo cual reduce o anula la unión o contacto con el fungicida;

• (ii) síntesis de una enzima alternativa capaz de sustituir la enzima patogénica bloqueada;• (iii) sobre producción de un metabolito que bloqueé al fungicida, y • (iv) por degradación metabólica del fungicida a través de producción de enzimas

secretadas por el patógeno.

(Gisi et al., 2000; Gullino et al., 2000, Fluit et al., 2001; MgGrath, 2001)

La resistencia a un fungicidaLa resistencia a un fungicida: modificación genética de un patógeno que le otorga una menor sensibilidad ……. adaptación estable y heredable (Leroux et al., 1998) y puede ser causada por varios mecanismos:

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

Resistencias Específicas y MDRs:

• La Resistencia específica, es consecuencia de:

- Un uso reiterado de una determinada molécula,- Utilización de Dosis inadecuadas- falta de conocimiento de las caract. de laspoblaciones locales

• MDRs:- Uso de moléculas de distinto modo de acción (> presión de selección)- Uso de formulaciones en Mezclas (Dosis <)- Falta de conocimiento de las poblaciones locales

Genotipos: Respuesta diferencial a fungicidasGenotipos: Respuesta diferencial a fungicidas

‐ B. cinerea transposa y flipper resistencia a dicarboximidas (Giraud et al., 

1999, Esterio et al., 2003) y a Fenhexamid (Esterio et al., no publicado)

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

FenhexamidFenhexamidNo presenta resistencia cruzada  a:  Benzimidazoles, Dicarboximidas y Anilinopyrimidinas.

Resistencia asociada a gen erg27.                               ‐ HydR1 (aislados vacuma alelo 1 gen Bc‐hch (Botrytis Grupo 1)), no presente en Chile / detoxifican importancia en el caso de fenotipos MDR.

‐ HydR2: sólo algunos aislados en Francia / detoxifican y de acuerdo a lo anterior posiblemente presente en Chile (0,4 ppm).

‐ HydR3: dos tipos de aislados según polimorfismo en erg27 (presentes en Chile):     HydR3+:mutación en posición 412;  (5 y + ppm)               

HydR3‐: una a varias mutaciones (0,2 – 3,5 ppm)

Aislados chilenos       

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

S/A

Aislados franceses

S/C

Fuente: Fillinger et al., 2008

Objetivo General: …. Generar > Conocimiento … dinámica poblacional y  nivel de sensibilidad de las poblaciones del patógeno en arándano a algunos fungicidas (fenhexamid, iprodione, cyprodinil & fludioxonil y fludioxonil)…

Objetivos específicos:

Caract. Genotípica y comportamiento fenotípico de poblaciones de B. cinerea en: 

2 Variedades: Legacy y Brighitta

3 Épocas: Floración / Precosecha temprana (Fruto pintón) y Precosecha Tardía / 

3 Regiones Productoras: Zona Centro‐Sur (Del Maule, Bío‐Bío) y Sur (de los Ríos)

N= 63 var., época y predio‐zona

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Genotípica: Correspondencia genotípica(Transposa, vacuma, boty, flipper) 

mediante PCR‐duplex y uso de partidores específicos.

Fenotípica: sensibilidad fungicida: fenhexamid, iprodione, cyprodinil&fludioxonil y fludioxonil

Determinación de valores EC50 (crecimiento miceliar) en medio Sisler o APD).

Primeros resultados de sensibilidad de poblaciones de Botrytis cinerea  recuperados desde Arándanos:

Incubación: 20ºC, oscuridad continua, 7 y 14 ds.

Cultivos monospóricos, 5 – 7 ds. 

Obtención de aislados

Metodología

Determ. Valores EC50 (µg/mL)  mediosSisler / APD ( Crecim. Miceliar) / Test de Probit

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Diagnóstico de Resistencia a Fungicidas

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

Técnicas tradicionales (EC50):                                

Crecimiento miceliar, Germinación conidial, Elongación tubo germinativos Técnicas Moleculares: PCR; PCR‐

RFLP y Q‐PCR (SONDAS Y PARTIDORES ESPECÍFICOS)                        

2ºWorksho

p internaciona

lde Re

sisten

ciaa fungicidas

de acciónBo

tryticida

Categorías de sensibilidad

1 < LR      <   2,99 ppm 3  < MR < 4,99 ppm AR   > 5 ppm

Fenhexamid

Switch

Fludioxonil

Iprodione

Boscalid

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

0,1   < LR  <  0,299 ppm 0,3 < MR  < 2,99 ppm 3  < R  <  9,99 ppm AR   > 10 ppm

0,1   < LR  <  0,299 ppm 0,3 < MR  < 2,99 ppm 3  < R  <  9,99 ppm AR   > 10 ppm

0,1   < LR  <  0,299 ppm 0,3 < MR  < 2,99 ppm 3  < R  <  9,99 ppm AR   > 10 ppm

0,5  < LR  <  1,35 ppm 1,36  <  MR  <  7,79 ppm 7,8 < R  <  49,99 ppm AR  > 50  ppm

Resultados valores EC50 fungicidas: promedios totales, por variedad y predios‐zonas / Temp. 2011‐2012

‐ Fenhexamid: poblaciones leve a moderadamente resistentes (EC50=0,485 μg/mL)   

‐ Iprodione: poblaciones levemente resistentes (EC50=1,198 μg/mL)

‐ Cyprodinil & fludioxonil: poblaciones altamente sensibles (EC50=0,045 μg/mL)

‐ Fludioxonil: todos los aislados fueron altamente sensibles, sin detección de resistencia (EC50=0,021 μg/mL) 

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

0,12

0,13

0,73

0,25

0,67

0,18

1,39

0,96

1,09

0,95

1,14

0,66

0,03

0,02

0,03

0,04

0,03

0,05

0,03

0,02

0,02 0,03

0,02

0,02

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

Talca Los Ángeles Río Bueno Talca Los Ángeles Río Bueno

Var. Legacy Var. Brigitta

EC50 Arándanos / Estadio: Floración

EC50 fenhex EC50 iprodione EC50 Switch EC50 fludioxonil

‐Fenhexamid: leve resistencia (EC50=0,35 μg/mL) (ambas        variedades)

‐Switch y fludioxonil: todos los aislados sensibles (EC50=0,03; 0,02 μg/mL, respectivamente) (ambas variedades)

‐Iprodione: leve resistencia (EC50=1,15 μg/mL) en Legacy; sensibilidad (EC50=0,92 μg/mL) en Brigitta.

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

0,74

0,34

0,48

0,23

1,37

1,06

1,04 1,06

0,05

0,02

0,04

0,04

0,01

0,030,02

0,02

0,02

0,02

0,02

0,02

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

Talca Los Ángeles Río Bueno Talca Los Ángeles Río Bueno

Var. Legacy Var. Brigitta

EC50 Arándanos / Estadio: Precosecha Temprana

EC50 fenhex EC50 iprodione EC50 Switch EC50 fludioxonil

1,52

1,56

1,78

‐ Fenhexamid: moderada resistencia (EC50=1,27 μg/mL)          en Legacy; leve resistencia (EC50=0,35 μg/mL) en Brigitta.

‐ Iprodione: leve resistencia (EC50=1,35 μg/mL) en ambas variedades

‐ Switch y fludioxonil: todos los aislados sensibles (EC50=0,03;  0,02 μg/mL, respectivamente)

1,77

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

1,77

Ambas variedades:   Fenhexamid:  leve resistencia (EC50=0,3 μg/mL);  Iprodione: leve resistencia (EC50=1,21 μg/mL)

‐ Switch: Sensibilidad aceptable en Talca y Los Ángeles ( EC50=0,07) e inicio de pérdida de sensibilidad en Río Bueno; 

‐ Fludioxonil: todos los aislados se comportaron como altamente sensibles (EC50= 0,02 μg/mL).

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Ing. Agr.  Julia Pinto 

Director Proyecto

“PLATAFORMA DE APOYO A LA TOMA DE DECISIONES PARA  EL CONTROL DE BOTRYTIS MEJORANDO LA COMPETITIVIDAD DE LA 

INDUSTRIA DEL ARÁNDANO” Código Innova: 

Proyecto FDF – Comité de Arándanos / InnovaChile de CORFO

ÁREA PRE Y POS COSECHA ‐ GERENCIA FRUTICULTURA ‐ FDF

Universidad Nacion

al de 

Bogotà, Grupo CHIA

 /Bayer

CropScience, Colom

bia Y

Lab. de Fitopatolog

ía Frutal  y 

Molecular Universidad

                        

de Chile

Comité de Arándano

s,                       

FDF – ASOEX A.

G. / 

Lab. de Fitopato

logía

Frutal y Molecular

 

Universidad de

 Chile

Universidad DE

 Chile 

Lab. de Fitopa

tología Frutal 

y 

Molecular

Universidad de C

hile 

Lab. de Fitopato

logía Frutal y 

Molecular

Sistema  Botrytis

SIG BDDITERNET

Usuarios

INTERNET

Ingreso Plataforma on line

https://botrytis.uchile.clhttps://botrytis.uchile.cl

https://https://arandanosarandanos........fdf.clfdf.cl

Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ mesterio@uchile.cl

Sistema Botrytis

……Contraseña

…….Nombre Usuario

…….Razón Social

Evaluación de Sensibilidad a fungicidas …

Caracterización genotípica…

Niveles de Infección

Parámetros evaluados

Resultados de infecciónPrimera temporada

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Razón social Predio Comuna

Sociedad Agrícola del Alto Pelarco Ltda. Talca

Campo K; Sector Las Camelias Retiro

Sol del Maule San Javier

Agrícola El Ensueño Cauquenes

1

3

42

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Región del Maule

Región del Maule

TeldorBellis

Teldor / BC‐1000Comet / Bellis

Razón social Predio Comuna

Agrícola MyT Santa Bárbara

Agrícola Valle del Sol Quinchamalí

Agrícola Santa Carmen Ltda. Los Ángeles

Fundo Santa Ana; Agrícola Rinconada de Rihue Negrete

3

14

2

Región del Bío‐Bío

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Región del Bío‐BíoNiveles de infección / estadio floración / (5)

1,0

6,5 7,5

0

5

10

15

20

25

30

35

40

7 días 14 días Total evaluaciones

Porcen

taje(%

) de

 flores con bo

trytis 

Teldor Serenade

Rovral + streptoplus Bellis

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

2

134

Razón social Predio Comuna

Agrícola Las Vertientes Ltda. Panguipulli

Fundo Vista Hermosa Río Bueno

Agrícola Patrón San José de la Mariquina

Río Negro Purranque

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Región de Los Ríos

Región de Los Ríos

Switch 0.8 L/ha Cantus

Captan Mastercop

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

p+B T+bc B T T S R+Srep B S b C Mc

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Conclusiones: • Niveles de infección varían según Predio y Zona, 

• Respuesta fungicida puede ser consecuencia de niveles de sensibilidad de las poblaciones locales, como también de calidad de la aplicación (producto dosis y época adecuada; equipos y mojamiento)

• Resultado de eficacia a fungicidas (fenotipos), depende de población predominante (genotipos)..

• Diagnóstico certero debe considerar inicialmente al menos 2 temporadas(floración y precosecha), porque poblaciones son dinámicas y reaccionan frente al manejo;… y en tercera solo evaluar al momento de cosecha…

• Es importante que se evalué al término de cada temporada el nivel de pudrición final ….

• Resultados de predios Socio‐usuarios de Plataforma serán confidenciales, solo promedios regionales serán de libre disponibilidad en la web…. A mayor puntos de muestreos por Región mayor confiabilidad de resultados (mayor representatividad) …

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular U. de Chile

Equipo Técnico LFM U de Chile

Comité de Arándanos,                       FDF – ASOEX A.G.

“Plataformas on-line de

sensibilidad a Botryticidas en

Arándanos: la base para el

diseño de programas de

Control”

Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / mesterio@uchile.cl

Ing. Agr. M.Sc. Marcela Esterio G.Universidad de Chile