Manual de Inmunohematologia

5/10/2018 Manual de Inmunohematologia - slidepdf.com

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FACULTAD DE BIOANALISIS

LIC. QUIMICA CLINICA.

NOMBRE: MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.

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INMUNOHEMATOLOGIA.

CATEDRATICA: Q.C. RUTH ESTRADA MARQUEZ

CONTENIDO:

1. “DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RH”

2. DETERMUNACION DE SUBGRUPOS

3. DETERMINACION DE RH

4. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL

5. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD

6. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGÍNEA (TÉCNICA SALINA)

7. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA (TÉCNICA ALBUMINA)

8. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

9. DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

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10. IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Practica No. 1“Determinación de grupo sanguíneo ABO y Rh”

Introducción:

Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre quedependen de los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de lasangre.

Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto alsistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rhnegativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinacionesposibles entre ambos sistemas.

Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccióninmunológica que puede desembocar en muerte.

Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A ensu superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.

Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenosde tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre.

Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en lasuperficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientrasque las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ningunode los dos anticuerpos.

A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema acualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO.

Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- escompatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal.Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y sedice que es un receptor universal.

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http://es.wikipedia.org/wiki/Sangre

http://es.wikipedia.org/wiki/Ant%C3%ADgeno

http://es.wikipedia.org/wiki/Gl%C3%B3bulo_rojo

http://es.wikipedia.org/wiki/Suero

http://es.wikipedia.org/wiki/Muerte

http://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerpo

http://es.wikipedia.org/wiki/Donaci%C3%B3n_de_sangre

http://es.wikipedia.org/wiki/Sangre

http://es.wikipedia.org/wiki/Ant%C3%ADgeno

http://es.wikipedia.org/wiki/Gl%C3%B3bulo_rojo

http://es.wikipedia.org/wiki/Suero


http://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerpo

http://es.wikipedia.org/wiki/Donaci%C3%B3n_de_sangre



Material y equipo:

• 40 tubos de ensayo de 12 x 75

• 4 pipetas Pasteur

• 1 gradilla de unicel

• 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA

• 1 tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante• Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *

• Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O

• 1 centrifuga

*Reactivos:

Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal LafonLote:9662 Lote: 8764Cad: 09NOV08 Cad: 31OCT08Aspecto: transparente Aspecto:transparenteColor: azul Color: incoloro

Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE Lote: 9762A Lote: NDMG04305

Cad:09NOV08 Cad: 29MAR08Aspecto: transperente Aspecto: transperenteColor: amarillo Color: incoloro

Técnica:

Método directo

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números

en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que yatraía la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo: 1,13, Anti-A; 1,13, Anti-AB, etc. El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes.

3. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada,de cada muestra. La dilución tomara un color rojo tenue, similar a la sangría.

4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de eritrocitos preparada y unagota de antisuero, según corresponda.

5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos

a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo(formación de un botón).

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http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:ABO_sangre_tipo.svg



6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando losdatos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Metodo inverso

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y eltubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números

en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que yatraía la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A 1, A2, B y O.Ejemplo: 1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestrasrestantes.

3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según corresponday una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.

4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundosa una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo(formación de un botón).

5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando losdatos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

Resultados:

Muestra Método directo Método inverso Grupo yRhAnti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O

1 - - - + + + + - O +2 - + + + + + - - B +

3 + + - + - - + - A +

4 + + + + + - - - AB +

Interpretación:Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción antigeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con losanticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan aglutinación querrádecir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que elantigeno esta ausente en esos eritrocitos. De ahí que pueda observarse que una muestra

sanguínea muestre un solo tipo de antígenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B),ambos antígenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; alpresentarlo (Rh +) o no (Rh -).Para el método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacciónantigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerposque reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven de reactivo paraesta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método definitivamente indica que elpaciente no tiene eritrocitos con antígenos que reaccionarían con los anticuerpos de su plasma.De ahí que el método se le nombre inverso.

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Conclusión:Concluyo que Para realizar una transfusión sanguínea se debe tomar en cuenta la sangre deldonante y la del receptor. Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre acualquier otro grupo sanguíneo, porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor. Las personas del grupo AB pueden recibir sangre decualquier grupo, ya que carecen de anticuerpos

PRACTICA Nº 2DETERMUNACION DE SUBGRUPOS

Anti- A1 Lectina(Dolichos biflorus)

Lectina de grupo sanguíneo

INTRODUCCION:

El sistema de grupos sanguíneos ABO sigue siendo el primeroa tener en cuenta en el momento de realizar una transfusiónde sangre. Los antígenos A y B son productos génicosfácilmente detectables y constituyen marcadoresgenéticos de gran valor. Entre los individuos A, se

distinguen 2 categorías: A1y A2.

La diferenciación entre ambas se realiza mediante lautilización de anticuerpos monoclonales y lectinasespecíficas de grupo sanguíneo Dolichos biflorus (anti A1)y Ulex europaeus (anti H).

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Uso: Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar células rojas A1 de otros

subgrupos A en pruebas en tubo o en placa.

MATERIAL Y EQUIPO:• Tubos de ensaye de 10/75 mm.

• Cronometro

• Marcador

• Centrifuga serológica

MUESTRA BIOLOGICA:• Células rojas de donador o paciente

REACTIVO:• Inmucor anti-A1 Lectin en gotero

MARCA: INMUCOR. INC

LOTE: SN2132

CADUCIDAD: 2007-12-14

TECNICA:

1. Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados.

2. Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en

salina. Mezcle completamente el contenido del tubo.

3. Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm.

4. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botón celular. Examine las reacciones

resultantes macroscópicamente. Registre resultados.

RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION

GRUPOSANGUINEO

Anti-A Anti-A1 Porciento

A1 + + 80% DE TODOSLOS GRUPOS A

A1b + + 80% DE TODOSLOS GRUPOS AB

A2 + 0 20% DE TODOSLOS GRUPOS A

A2B + 0 20% DE TODOSLOS GRUPOS AB

A1NT + +DEBIL NO COMUNA3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN

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ANTI-H (LECTINA)

Ulex europeaus

Para la determinación de del estado secretor y tipificación de las células rojas

INTRODUCCION:La mayoría de los grupos sanguíneos ABO que se determinanen el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas deantígenos y anticuerpos recíprocos para ese sistema.

Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuodesde el momento en que son capaces de tener una respuestainmunológica y se producen contra los antígenos A y B.

Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad

de antígeno presente en los eritrocitos y en la saliva delos secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen másrelevancia clínica los de A, que los de B. Al utilizarlectinas se definen los subgrupos: A1 y A2: con el extractode Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1, perono los de A2; y el anti H, semilla Ulex europeus, aglutinaeritrocitos que tienen antígeno H.

MATERIAL Y EQUIPO:• Tubos de ensaye de 10/75mm.

• Cronometro

• Marcador

• Centrifuga serológica

MUESTRA BIOLOGICA:• Células rojas de donador o paciente

REACTIVO:• Inmucor anti-H (Lectina) en gotero

MARCA: GANMA.

LOTE: ML1581

CADUCIDAD: 2007-11-14

TECNICA:

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1. Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en

salina en tubos adecuadamente marcados.

2. Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del

tubo.

3. incube durante 5 minutos a temperatura ambiente.

4. Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm.5. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botón celular. Examine las reacciones

resultantes macroscópicamente. Registre resultados.

INTERPRETACIÓN:

PROBLEMA: ANTI A1 ANTI H

(ANTI A2)

RESULTADO

SUBGRUPO:

PACIENTE 1 + - ANTI A1

PACIENTE 2 - + ANTI A2

• Prueba positiva: Aglutinación de las células rojas.

Nota: La hemólisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto

puede indetificarse como contaminación del reactivo.

• Prueba negativa: Ausencia de aglutinación de las células rojas.

CONCLUSIONES:

Concluyo que para realizar unatransfusión sanguínea se debe tomar encuenta los subgrupos del donante y delreceptor. Los subgrupo con mayorfrecuencia y tienen más relevanciaclínica los de A, que los de B. Y seidentifican por medio de utilizarlectinas. Los subgrupos A másimportantes son: A1 y A2.

PRACTICA # 3DETERMINACION DE Rh

INTRODUCCIÓN:

El factor Rh es una clase de proteína que se encuentra enlos glóbulos rojos de la sangre, cuando alguien tiene esaproteína se le considera “Rh Positivo”. Cuando no la tienees “Rh Negativo”. El factor Rh es hereditario y setransmite en dos genes. El Factor Rh positivo es dominante,es decir si una persona tiene un gen positivo y otronegativo, su factor Rh será positivo.

Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio

de la eritroblastosis fetal, en la que los glóbulosrojos del niño se encuentran sensibilizados con

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anticuerpo materno. Es útil también en el diagnosticode la anemia hemolítica adquirida (anticuerpos sobrelos glóbulo rojos del mismo paciente), así como ladeterminación de eritrocitos sensibilizados en sangreusados para transfusión.

Las dos clasificaciones más importantes para describirgrupos sanguíneos en humanos son los antígenos y el factorRh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatiblespueden provocar una reacción inmunológica que puededesembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, omuerte.

MATERIAL:

• Tubos de ensayo de 12 x 75

• Pipetas Pasteur

• Gradilla

EQUIPO:

• Centrifuga

MUESTRA BIOLÓGICA:

• Eritrocitos lavados 3-5% del paciente

REACTIVOS:

• Antisuero Anti-D

• Suero anti globulina humana.• Suero reactivo control

Antisuero D monoclonal NOVACLONELote: NDMG04305CAD: 29MAR08Aspecto: transparenteColor: incoloroSuero anti globulina HumanaLote: 405CAD: 06-NOV-08Aspecto: transparenteColor: verde

Reactivo control GAMMA-CLONELote: GCM115-3CAD: 2008-12-08Aspecto: transparenteColor: incoloro

TÉCNICA:

Determinación de Rh

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http://es.wikipedia.org/wiki/Hem%C3%B3lisis

http://es.wikipedia.org/wiki/Anemia

http://es.wikipedia.org/wiki/Fallo_renal

http://es.wikipedia.org/wiki/Shock


http://es.wikipedia.org/wiki/Hem%C3%B3lisis

http://es.wikipedia.org/wiki/Anemia

http://es.wikipedia.org/wiki/Fallo_renal

http://es.wikipedia.org/wiki/Shock




• Prepare una suspensión de glóbulos rojos al 3-5 % en solución salina. Los glóbulos deben serlavados previamente 5 veces con el objeto deeliminar las proteínas del plasma.

• Rotular 3 tubos, para la previa identificación

de Rh.• Ponga 1 gota de la suspensión lavada en cada

tubo.

• Añada una gota de anti suero D monoclonal.

• Mezcle y centrifugue 15 seg. Y observe si hayaglutinación.

Preparación del control negativo

• Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5 %

• Añada una gota de reactivo control.

•

Centrifugue 15 seg. y observe si hay aglutinación

Detección de sangre Du

Nota: esta técnica se le realizo a los tubos problemasque no aglutinaron .

• Los tubos que no tuvieron aglutinación en ladeterminación de Rh se incuban 15 min, yposteriormente se lavan 3 veces con sol. Salina

• Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suero deCOOMBS.

• Centrifugar 15 seg y observar, desprender boton

ESQUEMAS:

RESULTADOS: problemas Aglutinación resultado2 positiva Rh +10 negativa Rh -11 negativa Rh -

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Paciente 2 código 021612 plata Lugo JavierPaciente 10 código 021620 Hernández López GuillermoPaciente 11 código 021621 camarillo Sonia rebeca

INTERPRETACIÓN:Para el primer método:Aglutinacion: Rh positivoNo aglutinación: realizar prueba de detección desangre Du.

Detección de sangre DuAglutinación. D débil (Du positivo)No aglutinación: Rh negativo

CONCLUSIONES:Con el descubrimiento del sistema Rh, se denominan Rhpositivos los hematíes que son aglutinados por esteanticuerpo y tienen, por tanto, el antígeno Rh en lasuperficie. Se denominan Rh negativos los que no sonaglutinados y que, por tanto, no poseen el antígeno Rh ensu superficie.

De la misma manera que en el sistema ABO, en el sistema Rh

no se puede transfundir el antígeno Rh a las personas queno lo tienen, ya que podría originar la producción deanticuerpos Rh en el receptor. Los sujetos Rh negativossólo podrán recibir sangre de donantes Rh negativos.

PRACTICA 4INMUNOHEMATOLOGIA

DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL

INTRODUCCION:

El sistema utilizado en inmunohematología para investigar e identificar antígenos y

anticuerpos antieritrocitarios. Es de tecnología de microtipificación en gel se basa en la

separación por tamaño de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de

centrifugación en un gel poroso.

Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los

aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeños quedan

distribuidos a lo largo de la columna.

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Esta técnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reacción antígeno-

anticuerpo con facilidad y repetitividad. Así como la estandariza del uso de reactivos,

tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador.

OBJETIVO: determinación de los antigenos del sistema ABO,Rh (D) y determinacion

del grupo serico , en tecnica de gel.

FUNDAMENTOS:

El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y. Lapierre para la

deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies. La aglutinacion se produce

al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes.

La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos. Cada

microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersion/incubacion.

La tecnología de microtipificación en gel se basa en la separación por tamaño de los

eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugación en un gel poroso.

Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los

aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeños quedan

distribuidos a lo largo de la columna.

MATERIAL

Pipeta automática 10 ul, 50ul, 1 ml.

Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios

DEG sol

Centrifugas para tarjetas DG gel

Hematies de reactivos para grupo inverso.

MUESTRA BIOLOGICA:Células rojas de donador o paciente

REACTIVO:

Placa de gelReactivo de gel sol

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TECNICA1.- determinacion de los antigenos del sistema ABO/Rh.

-preparar una suspension de hematies al 5 % de DG sol. Asegurar la resuspencion de lso

hematies antes de utilizar.

Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5%.

2.- determinacion de l grupo serico.-homogenizar los hematies recativos A1/B

- dispersar el microtubulo N /a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo N/b

50 ul de hematies reactivos B.

-añadir suero o plasma.

3.- centrigugar en centrifuga para DG sol.

Leer los resultados.

RESULTADOS

NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna, resto de la columna sin

aglutinados

POSITIVO

+/- Escasoa glutinados de pequeño tamaña d ela columna.

1+ Algunos aglutinados pequeñso en la columna

2+ aglutinados pequeñso en la columna o mediano a lo largo de la columna

3+ Banda superior de aglutinado

4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna.

DP Doble poblacion (doble banda de hematies , en el fondo y en la parte

superior.

INTERPRETACION DE RESULTADOS.

GRUPO HEMATICO GRUPO SERICOmicrotubo

Amicrotubo

Bmicrotubo

ABmicrotubo

CTL

MICROTUBUBON+ a1

MICROTUBUBON+ B

ABOGRUPO

0 0 0 0 + + 0+ 0 + 0 0 + A

0 + + 0 + 0 B

+ + + 0 0 0 AB

SISTEMA RhMicrutubo D Micrutubo

D”MicrutuboCTL

INTERPRETACION

+ + 0 D positivo

0 0 0 D negativo

0 + 0 D débil parcial

+ 0 0

RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA

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Resultado; A+

CONCLUSION

Concluyo que esta técnica, es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinación y

reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una técnica inapropiada,

asi como crear un método de interpretaciones sencillas y constantes.

Practica No. 5“Prueba de compatibilidad”

Introducción:

Para requerir una óptima transfusión actualmente serequiere de aceptaciones inmunológicas receptor - donante,ya que la transfusión de sangre o la de sus componentescelulares de un donante a un receptor es una forma detransplante.

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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia deanticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetossensibilizados a uno o mas antígenos sanguíneos. Es útil enel estudio del suero de mujeres con isoinmunizaciónmaterno-fetal y se emplea también en otro tipo de pruebas

como identificación de anticuerpos autoinmunes, detecciónde algunos sistemas sanguíneos y pruebas de compatibilidadsanguínea.

La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normalesincubados in Vitro con el suero de estudio. Durante esteperiodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre surespectivo determinante antigénico. Una vez fijados, loseritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivode Coombs, produciendo aglutinación.

Una prueba de Coombs indirecta positiva significa queexisten anticuerpos libres en el suero de la persona, loscuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos oisoanticuerpos.

Material y equipo:

• Pipetas automáticas de 10 µl, 25 µl, 50 µl y 1 ml.

• Puntas de pipetas desechables

• Tubos de vidrio.

• Incubador para tarjetas DG Gel.

• Centrifuga para tarjetas DG Gel.

Material biológico:

• Hematíes reactivo para investigación e identificación de anticuerpos irregulares deDiagnostic Grifols, S.A.

• Suero de hemoclasificación.

• Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sinanticoagulante.

Reactivos:

• Tarjetas DG Gel.

• DG Gel Sol.

*Reactivos:

Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel SolRango de temperatura: entre 2 y 25 ºC Rango de temperatura: entre 2 y 8ºCLote: 7049.01 Lote: 7003.701Cad: 2008-03 Cad: 2008-06Aspecto: transparente Aspecto: transparenteColor: verde Color: incoloro

Técnica:Método manual:

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1. Dejar atemperar (18-25ºC) muestras y reactivo.2. Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar.3. Identificar las tarjetas y muestras a utilizar.4. Despegar con precaución la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir

contaminaciones cruzadas entre ellos.

5. Preparar una suspensión con hematíes al 1% en DG Gel Sol (10 µl de sedimento oconcentrado de hematíes en 1 ml de DG Gel Sol). Utilizar los hematíes del donantepara la PC mayor y hematíes del receptor para la PC menor. Asegurar la suspensiónde los hematíes antes de utilizar.

6. Dispensar en el tubo correspondiente, 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% deldonante (PC mayor) o 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del receptor (PCmenor).

7. Añadir 25 µl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 µl de suero o plasma deldonante (PC menor).

8. Preparar auto control con 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del receptor y 25µl de suero o plasma del receptor.

9. Incubar 15 minutos a 37 ºC.10. Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel.

11. Leer los resultados.

Interpretación:Negativo: - Banda de hematíes en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles.

Positivo: +/- Escasos aglutinados de pequeño tamaño en la mitad inferior de la columna.

1+ Algunos aglutinados de pequeño tamaño en la columna.

2+ Aglutinados de tamaño pequeño o mediano a lo largo de la columna.

3+ Banda superior de aglutinados, de tamaño mediano en la mitad superior de la columna.

4+ Banda de hematíes aglutinados en la parte superior de la columna.

DP: Doble población (doble banda de hematíes, en el fondo y en la parte superior de la columna.

Resultados:

Paciente: Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+)Donador 1: Orea Valero Erasmo. (A+)Donador 2: Moreno Adolfo. (O+)

M1 m1 M2 m2 AutocontrolGR de donador 1 +suero del paciente

GR del paciente +suero de donador 1

GR de donador 2 +suero del paciente

GR del paciente +suero de donador 2

GR del paciente +suero del paciente

- + - + -

Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al

paciente (AB+), lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos; no así plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reacción en ambas pruebasmenores.

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Conclusión:

Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiadaantes de la transfusión para: Asegurar que todos losglóbulos rojos transfundidos son compatibles con losanticuerpos en el plasma del paciente. Evitar estimular laproducción de nuevos anticuerpos contra los glóbulos rojosen el receptor, especialmente anti-Rh D.

PRÁCTICA No. 6PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGÍNEA

(Técnica salina)

INTRODUCCIÓN

Landsteiner constató que cuando un aglutinógeno se pone

en contacto con la aglutinina homóloga se produce unaaglutinación.

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La compatibilidad sanguínea es la posibilidad de mezclade sangre sin que se produzcan trastornos, tales como losfenómenos de la lisis o de la aglutinación.

A causa de este fenómeno biológico en las transfusiones

de sangre no es suficiente con conocer que la sangre deldonante y la del receptor son del mismo grupo, o bien quela del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que esnecesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porqueningún otro fenómeno de inmunización interfiera. Es eneste sentido por lo que son empleadas las pruebascruzadas.

Además de los 6 antígenos del sistema ABO en loseritrocitos humanos, existen numerosos sistemas deaglutinógenos que contienen muchos antígenos individuales

en los eritrocitos (más de 500.000 millones posibles defenotipos de grupos sanguíneos conocidos). Para evitaraccidentes transfusionales es indispensable tener encuenta el sistema Rh además del ABO.

Del sistema de antígenos Rh es el D el más antigénico, yel término Rh positivo indica que el individuo presentaaglutinógeno D. El individuo Rh negativo no tiene antígenoD y forma la aglutinina anti-D en contacto con éste.

Las reacciones antígeno-anticuerpo pueden observarse in

vitro por:

— Hemólisis: la unión antígeno-anticuerpo se traduce enlisis de los eritrocitos en presenciadel complemento (siempre que el anticoagulante empleado nocapture losiones Ca y Mg necesarios para la activación delcomplemento). — Aglutinación: los anticuerpos que reaccionan en mediosalino se conocen comoanticuerpos completos o aglutinantes (comúnmente tipo

IgM).

OBJETIVO: Determinación de los antigenos del sistema ABO,Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y unPaciente Receptor.

MATERIAL*5 Tubos de ensaye.*6 Pipetas Pasteur.

*1Gradilla.*1 Bulbo.

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EQUIPOMicrocentrífuga.Baño María ó Estufa.



*Papel Parafilm.

MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA.

REACTIVOSAntisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespecífico Anti IgG C-d) Para prueba de Coombs.LABORATORIOS LAFON S.A de C. V.Fecha de Caducidad: 31-Ene-09Lote: 406Hecho en MéxicoAspecto: Transparente:Color: Verde

TÉCNICA

Lavar los eritrocitos con solución salina (3 veces).

SALINA RÁPIDA:1. Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.2. Diluirlo al 3-5% con solución salina 0.9%.3. Agregar 2 gotas de suero.4. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón.

SALINA 37° BAÑO MARÍA:

1. Incubar tubos a Baño maría a 37°C durante 1hora (o 20 min).2. Centirfugar después de haber pasado el

tiempo.3. Desprender el botón de eritrocitos y

observar.AGLUTINACIÓN– No es compatible.NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

SALINA COOMBS:

20

PRUEBA MAYOR

G. Rojos del DONADOR+

Suero del RECEPTOR(paciente)

PRUEBA MENOR

G. Rojos del RECEPTOR(paciente)

+Suero del DONADOR

AUTOTESTIGO

G. Rojos del RECEPTOR(paciente)

+Suero del RECEPTOR

(paciente)



1. Con solución salina 0.9% lavar loseritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinación 3 veces.

2. Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs

AGLUTINACIÓN – No es compatible.NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

RESULTADOS

Paciente: Madrigal Méndez Luis Eduardo (B+)Folio: 009164Fecha:30/10/07

Donador 1: Torres Avilés José Ramón (O+)Folio: 022604Fecha:31/10/07

Donador 2: Rodríguez Núñez José Angel (A+) Folio: 022605

Fecha:31/10/07

SALINA RÁPIDA:

M1 m1 M2 m2 AutotestigoGR de donador 1+ suero del

paciente

GR del paciente+ suero dedonador 1

GR de donador 2+ suero del

paciente

GR del paciente+ suero dedonador 2

GR del paciente+ suero del

paciente

- 4+ 4+ 4+ -


M1 m1 M2 m2 Autotestigo- 4+ 4+ 4+ -

Compatible Nocompatible

Nocompatible

Nocompatible

Compatible

SALINA COOMBS:

Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puededonar suero al paciente (B+), debido a que en el suero nohay anticuerpos de ningún tipo que reaccionen con losantígenos de los eritrocios del Donador 1. Mientras tantoel Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero nieritrocitos.

M1 Autotestigo- -

Compatible

Compatible

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INTERPRETACIÓN

PRUEBA POSITIVA: Existe una aglutinación de lascélulas sanguíneas que indica la presencia delantígeno A o B. En el suero de Coombs notamos si esta

la precencia de Antígeno D en los eritrocitos. Lahemólisis no se debe interpretar como resultadopositivo ya que puede indicar contaminación delreactivo.

PRUEBA NEGATIVA : La no aglutinación indica unresultado negativo e indica que las células sonnegativas para Antígenos del sisitema ABO y D

CONCLUSIÓN

He concluido que en las transfusiones de sangre no essuficiente con conocer que la sangre del donante y la delreceptor son del mismo grupo, o bien que la del donantepertenezca al grupo O (cero), sino que es necesarioconocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningúnotro fenómeno de inmunización interfiera. Es en estesentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas.

Práctica No. 7“Prueba de compatibilidad sanguínea (técnica albumina)”

Introducción:La tipificación de sangre identifica el tipo sanguíneo determinandoantígenos presentes en los eritrocitos, detecta aloanticuerpos encontra esos antígenos. Así los aloanticuerpos pueden aparecernaturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupoconocido o a los antígenos de superficie de los eritrocitos. La prueba

de compatibilidad sanguínea o cross matching esta formada por laprueba mayor y menor.La prueba de cruzamiento mayor para losaloanticuerpos, consiste en probar el plasma del receptor contra los

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glóbulos rojos del donante. Es incompatible cuando se genera unareacción hemolítica, los eritrocitos del donante se destruyen por losaloanticuerpos del plasma del receptor. La prueba menor es una pruebapara los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los glóbulosrojos del receptor. Una incompatibilidad menor es una causa menosfrecuente para causar una reacción en contra una transfusión, porque

el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente enel receptor. Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizandiversos reactivos como potencializadores que mejoran la unión deeritrocitos con algún tipo de anticuerpo. Uno de esospotencializadores es la albúmina. La albumina bovina polimerizada esun reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y encentros de bancos de sangre, funciona como un potencializador quefacilita la reaccion de aglutinación de eritrocitos sensibilizados. Alfinal de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo deCoombs. El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschien 1908, pero Coombs, Mourant y Race, en 1946, la introdujeron en elestudio de los grupos sanguíneos y anticuerpos, cuando una parte desangre (suero) fue usada para la inoculación de animales para

inmunizarlos con proteína humana, utilizando el anticuerpo obtenido enla detección de los llamados anticuerpos incompletos. Esta prueba seusa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en elsuero de sujetos sensibilizados a uno o mas antígenos sanguíneos. Esútil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunización materno-fetal y se emplea también en otro tipo de pruebas como identificaciónde anticuerpos autoinmunes, detección de algunos sistemas sanguíneos ypruebas de compatibilidad sanguínea. La prueba indirecta se realizacon eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio.Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre surespectivo determinante antigénico. Una vez fijados, los eritrocitosson igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs, produciendoaglutinación. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que

existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los cualespuedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos.

Objetivo: Determinación de los antígenos del sistema ABO, Rh (D) y sucompatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor.

Material y equipo:

5 Tubos de ensaye.

6 Pipetas Pasteur.

1Gradilla.

1 Bulbo.

Papel Parafilm.

Microcentrífuga.

Baño María ó Estufa.

Material biológico:

Muestras de sangre de extracción reciente, recogida conanticoagulante o sin anticoagulante.

Reactivos:Suero de Coombs*Albúmina bovina °

*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406. Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto:

transparente.°Albumina de bovino polimerizada Interbiol. Lote APO107. Cad: 15/01/09. Color: incoloro.Aspecto: transparente.

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Técnica:

1. Montar prueba mayor 1 y 2, prueba menor 1 y 2, y autotestigo,con el procedimiento ya anteriormente conocido.

2. Agregar 2 gotas de albúmina al 22%.3. Centrifugar 20 segundos.4. observar aglutinación o hemolisis, o no aglutinación.5. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en baño

María a 37 °C.6. Centrifugar y observar:

• Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible.

• No aglutinación: llevar a Coombs.

7. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina congasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20segundos y observar:


• No aglutinación: reportar compatible.

Resultados:1 PRUEBA MAYOR 1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del

donador 1.2 PRUEBA MENOR 1: 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de G.R. al 3-5% del

paciente.3 PRUEBA MAYOR 2: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del

donador 2.4 PRUEBA MENOR 2: 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de G.R. al 3-5% del

paciente.5 AUTOTESTIGO: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente.

M1 m1 M2 m2 AutotestigoCon albúmina. - - - - -Después de incubación a 37 °C. - - - - -Después de Coombs. - - - - -Después de validación con glóbulos

positivos.+ + + + +

Interpretación:Prueba positiva: Alutinación o hemolisis. Indica no compatibilidad.Prueba negativa:No aglutinación. Indica compatibilidad.

Esquemas:

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Conclusión:Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad conalbúmina bovina ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otrosreactivos, un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo. Estopermite que el operador o realizador de la prueba tenga mayorconfianza y certeza en los resultados que obtenga.

PRACTICA No. 8PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

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FUNDAMENTO:

LISS es utilizado para reducir la fuerza iónica del medio

de reacción en los procedimientos de detección eidentificación de anticuerpos y en las pruebas decompatibilidad. La presencia de este reactivo refuerza lainteracción antígeno - anticuerpo durante la incubación.

GENERALIDADES:El uso de solución salina de baja fuerza iónica fuedescrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col. y

Elliot y col., pero en ese tiempo su uso era limitado yaque la concentración molar obtenida provocaba la hemólisisde los eritrocitos suspendidos.

En 1974, Low y Messeter describieron el uso rutinario de lasolución Liss de 0,03 M que lograba reducir el tiempo deincubación y no presentaba tendencia a la hemólisis al sersuspendidos en salina a baja fuerza iónica, restableciendola presión osmótica de la solución mediante la adición deglicina.Las soluciones de baja fuerza iónica son actualmente lasmás utilizadas en inmunohematología, provocando un aumentoen la velocidad de asociación entre antígenos y anticuerpospermitiendo así acortar el tiempo de incubación de 60minutos a 10-15 minutos, sin sacrificar la sensibilidad delas mismas y sin costos elevados.Se ha observado que lasreacciones antígeno-anticuerpo se ven potenciadas alreducir la fuerza iónica del medio de reacción.

La fuerza iónica es uno de los factores más importantes quedeterminan la tasa y la cantidad de captación deanticuerpos por parte de los eritrocitos. El uso de mediosde reacción de baja fuerza iónica permite disminuir eltiempo de incubación y potenciar las reacciones de losanticuerpos sin incrementar las reacciones inespecíficas.

Los iones Na+ y Cl-, presentes en la solución salinafisiológica, se agrupan alrededor de las moléculas deantígeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas, locual dificulta la unión entre ellos. Este efecto se reduceutilizando soluciones de baja fuerza iónica y disminuyendode esta manera la incubación de las pruebas.

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http://www.cecyt15.ipn.mx/polilibros/inmuno/Cap4/paginas/coombs.html#indice%23indice

http://www.cecyt15.ipn.mx/polilibros/inmuno/Cap4/paginas/coombs.html#indice%23indice



En esta etapa de sensibilización, las posibilidades deasociación pueden incrementarse mediante agitación,centrifugación y/o variación de la concentración delanticuerpo.

Después de que el anticuerpo se ha fijado al antígeno, loseritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a laaglutinación visible; esta red también solidifica yestabiliza la reacción.

En esta etapa la reacción depende de factores como lascaracterísticas del anticuerpo, localización en la membranay número de sitios antigénicos, fuerzas que mantienen ladistancia entre los eritrocitos.

Las características del anticuerpo que deben considerarse

son el tamaño del anticuerpo involucrado y el número desitios de combinación con el antígeno. Los anticuerpos IgMpueden establecer puentes entre los eritrocitos yaglutinarlos espontáneamente en solución salina, mientrasque los IgG no, ya que las IgM, pentaméricas poseen 10sitios de combinación con el antígeno y las IgG dímerossólo dos sitios.

Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en susuperficie, su interacción con los iones del medio alteraesta carga y producen una carga neta crítica denominada

potencial zeta, y la reducción de dicha carga permite quelos eritrocitos se aproximen lo suficiente para que seanaglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron.

Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco desangre tienen un pH entre 6.5 – 7.0, se recomienda unaosmolalidad de 270 – 305 mosm/kg y una conductividad de 3.7mm/cm. El control diario implica el examen de su aparienciafísica: ausencia de turbidez, particulas o sedimento, asícomo, corroborar la capacidad para generar hemólisis,crenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos

normales. Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo deun anticuerpo ya sea un anti- D, un anti- jk, anti- fy oanti- kell diluido; se compara su capacidad de deteccióncontra un medio salino normal incubando 10min a 37ºC, enLISS debe poder rastrearse un anticuerpo, en tanto que enmedio salino no.

MATERIAL Y EQUIPO:

Material Cantidad10 Tubos de ensayo de 12 x 75

1 Gradilla10 Pipetas pasteur

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1 Bulbo1 Marcador1 Microcentrífuga1 Baño María

MATERIAL BIOLOGICO:

Glóbulos rojos lavados al 3 - 5%Suero

REACTIVOS:

Reactivo de LISSReactivo de Coombs

TECNICA:1.- Lavar los eritrocitos:

Separar el suero del paquete de glóbulosrojos.

Agregar cierta cantidad de eritrocitos aun tubo de ensayo y agregarle solución salina

Centrifugar y decantar

Repetir este proceso 3 veces

2.- Realizar la Prueba de LISS:

Enumerar los tubos

Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar unagota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, según el númerode tubo correspondiente,

Mezclar y centrifugar un minuto, decantar elsobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo.

Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender poragitación, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar,

incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000R.P.M.

Anotar los resultados.

3.- A las pruebas negativas realizar Coombs:

Lavar 3 veces las células, agregar suero deCoombs, centrifugar 30 seg.

Leer aglutinaciones y anotar resultados.

REACTIVOS UTILIZADOS:

REACTIVO MARCA FECHA DE ASPECTO COLOR LOTE

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CADUCIDADSuero

Antiglobuinahumana

Lafon 31/ 01/ 2009 Transparente Verde 406

LISS Caserorealizado enCMNSIGLOXXI

1 año Transparente Transparente

----------

PACIENTE: ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+)DONADOR 1: GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+)DONADOR 2: GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+)

RESULTADOS:

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

La hemólisis o la aglutinación representan un resultado positivo e indican lapresencia de una reacción antígeno-anticuerpo. Los resultados negativos no severa aglutinación o hemolisis.

ESQUEMAS:

CONCLUSIONES:

Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad conliss ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros reactivos, unpotencializador de la reacción antígeno-anticuerpo. Esto permite queel operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certezaen los resultados que obtenga.

Tubo ResultadoM1 NEGATIVOm1 NEGATIVO

M2 POSITIVO

M2 NEGATIVO

AUTOTES. NEGATIVO

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PRACTICA 9INMUNOHEMATOLOGIA

DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

INTRODUCCION:PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contralos propios glóbulos rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve parademostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitosestán circulando en el individuo). La prueba se realiza agregando directamenteel reactivo de Coombs a los eritrocitos, previamente lavados para eliminar otras proteínas no fijadas a el; una prueba directa positiva significa que la

relación antígeno-anticuerpo ocurrió in vivo, es decir que la fijación delanticuerpo sobre el antígeno se realizo en el organismo del individuo enestudio.

Las indicaciones principales de esta prueba son: diagnostico de enfermedadeshemolíticas, ictericia o anomalías en la apariencia de los glóbulos rojos bajo elmicroscopio, ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los glóbulosrojos y causan anemia; para investigar reacciones en transfusiones. Parainvestigar la inducción de drogas en células rojas sensibilizadas, medicamentos(por ejemplo, quinidina, metildopa, procainamida y otros) que pueden llevar a la producción de estos anticuerpos.

OBJETIVO: Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de losglóbulos rojos del individuo.

MATERIAL

• 10 Tubos de 12/75

• 10 Pipetas Pasteur

• 1 Gradilla.

• 1 Bulbo.

• Papel Parafilm.• Microcentrífuga.

• Baño María a 37°C.

MUESTRA BIOLOGICA:

Eritrocitos lavados de (3-5%) del donador o paciente.REACTIVO:

Suero de Coombs**Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406 Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto: transparente.

TECNICA:

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Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota deglobulos rojos (3-5%).Centrifugar a 1000 rpm durante 20 seg.Desprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacion.

Rotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones(½,¼,1/8...)Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8.Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotasde suero de Coombs.Colocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5%), mezclar completamente y agregar al tubo #1Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg.

LECTURA:

Aglutina.- Prueba de Coombs directa es positiva.No aglutina.- Prueba de Coombs directa es negativa.

ESQUEMAS y RESULTADOS:

CONCLUCION:

He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir

la presencia de anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos que se encuentran

circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones además

sirve para la determinación de anemia hemolítica autoinmune entre otras afecciones.

Practica 10IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

DILUCIONES

½ positiva

¼ positiva

1/8 positiva

1/16 negativa

1/32 negativa

1/64 negativa1/128 negativa

1/256 negativa

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Fundamento:Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que elindividuo entra en contacto con el medio ambiente y en elcual se encuentran microorganismos como algunas bacterias

coliformes que contienen sustancias químicas en suestructura parecidas a las de este sistema. Por anticuerposregulares debemos identificar a los que existen en todoslos individuos y que éstos tendrán durante toda su vida.

Los anticuerpos irregulares son los que no están de esamanera, aunque en el caso de los naturales no se conoce aciencia cierta qué o cómo se induce su producción. Losadquiridos se conocen también como inmunes y son elresultado de la exposición a antígenos desconocidos por elindividuo al momento de la transfusión o en las mujeres

por el embarazo; estos anticuerpos son dirigidos contraantígenos de sistemas diferentes al ABO.

Los anticuerpos naturales regulares son preferentementeinmunoglobulinas M, las cuales fijan de manera taneficiente el complemento que pueden provocar lisisintravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso lamuerte del paciente. Los anticuerpos adquiridos o inmunesson generalmente inmunoglobulinas G, las cuales producenhemólisis extravascular en el bazo o en el hígado mediantefagocitosis del complejo eritrocito más anticuerpo.

Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) más comunes ennuestra población son los que involucran a los sistemasMNSs, P1, Kidd (Jka, Jkb), Duffy (Fya, Fyb), Kell, Lewis yDiego.

OBJETIVO: identificación del anticuerpo irregular a travésde las diferentes técnicas.

MATERIAL

• 10 Tubos de ensaye.

• 10 Pipetas Pasteur.

• 1Gradilla.

• 1 Bulbo.

• Papel Parafim.

MATERIAL BIOLOGICO:

• Glóbulos rojos lavados al 3 - 5%

• Suero

• REACTIVOSReactivos:

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• EQUIPO1. Microcentrífuga.

2. Baño María ó Estufa.



1. Suero de Coombs*2. Albúmina bovina3. SOLUCION SALINA4. SOLUCION DE LISS

TÉCNICA SOLUCION SALINA

Lavar los eritrocitos con solución salina (3veces).

SALINA RÁPIDA:Agregar una gota de Eritrocitos Lavados.Diluírlo al 3-5% con solución salina 0.9%.Agregar 2 gotas de suero.Centrifugar y observar, anotar desprendimientodel botón.


1) Incubar tubos a Baño maría a 37°C durante 1hora (o 20 min).

2) Centirfugar después de haber pasado eltiempo.

3) Desprender el botón de eritrocitos yobservar.

AGLUTINACIÓN– No es compatible.NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

SALINA COOMBS:1) Con solución salina 0.9% lavar los

eritrocitos de los tubos q no tuvieronaglutinación 3 veces.

2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivode Coombs

AGLUTINACIÓN – No es compatible.NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces.

TECNICA LISS

1. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gotade eritrocitos lavados y al 3 - 5%, según el número de

tubo correspondiente,2. Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el

sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar elexceso del reactivo.

3. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender poragitación, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar,incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000R.P.M.

4. Anotar los resultados.

A las pruebas negativas realizar Coombs:

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1. Lavar 3 veces las células, agregar suero de Coombs,centrifugar 30 seg.

2. Leer aglutinaciones y anotar resultados.

TECNICA ALBUMINA BOVINA

8. Agregar 2 gotas de albúmina al 22%.9. Centrifugar 20 segundos.10.observar aglutinación o hemolisis, o no aglutinación.11.A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos

en baño María a 37 °C.12.Centrifugar y observar:


• No aglutinación: llevar a Coombs.

13.Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina

con gasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs ycentrifugar 20 segundos y observar:


• No aglutinación: reportar compatible.

Resultados ANTICUERPO IRREGULAR: Anticuerpo c.

InterpretaciónEstos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo My ocasionalmente tipo G, y debido a esa temperatura dereacción carecen de importancia clínica salvo que sureacción ocurra también a 37 °C, su importancia radica enpacientes que serán intervenido a 22 ºc como es el caso deoperación de corazón.

Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura óptima dereacción a 37 °C, a Estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia clínica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa, que puedenocasionar la muerte.

Esquemas:

CONCLUSION:

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He concluido que es importante determinar los anticuerposirregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevanteimportancia clínica ya que se les asocia con reaccionestransfusionales de intensidad moderada a severa.

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Manual de Inmunohematologia

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