TRABAJO PRÁCTICO DE LABORATORIO Nº 2

ESTERILIZACION

La esterilización tiene por objeto destruir todos los microorganismos vivos o en estado de latencia. Constituye el fundamento de los métodos de trabajos microbiológicos y de la conservación de alimentos.

Estudiaremos los métodos corrientes aplicables a la esterilización de los medios de los medios de cultivos, material de manipulación y recipientes que van a recibir cultivos puros o medios de cultivos estériles.

1. Físicos: 1.1Calor 1.1.1. Flameado 1.1.2. Húmedo: continuo (autoclave) discontinuo (tindalización) 1.1.3. Seco (horno eléctrico)

1.2Filtración: Filtros de profundidad: asbesto prensado (Seitz); vidrio sintetizado. Filtros de membrana: acetato o nitrato de celulosa (Millipore, Sartorius) Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo): película de policarbonato.

1.3Radiaciones: ultravioletas, rayos gama, catódicos. 2. Químicos: desinfectantes, antisépticos.

MATERIAL A ESTERILIZAR

a) Placasb) Pipetas de distinta capacidad volumétricac) Gasa, Algodón y Papel para hacer tapones de algodón.

A-PREPARACIÓN DEL MATERIAL ENTREGADO PARA SU POSTERIOR ESTERILIZACIÓN

Todo el material debe estar perfectamente limpio y seco, lavamos con agua, jabón y detergente y luego secamos con agua destilada y escurrimos.

Luego secamos en la estufa.Procedimos a envolver con papel tisuue los distintos materiales de laboratorio para

someterlos a una esterilización en una estufa a T° entre 160- 170C° durante 2 hs. Una vez esterilizado el material se deja enfriar lentamente dentro del horno y si la

operación ha sido la correcta los papeles de la envoltura y algodones deben quedar ligeramente amarillos pero sin tornarse quebradizo.

El material esterilizado será utilizado en el laboratorio para realizar los cultivos.

Cajas de petri

Pipetas

Se envolvieron:

Pipetas(De 10 cc, 5 cc, y 1cc)

Placas de petri

Se realizaron:

Tapones para Erlenmeyer

Tapones para tubo de ensayo

B-DIBUJAR Y COLOCAR EL NOMBRE DE CADA UNO DE LOS ELEMENTOS DE UN AUTOVLAVE Y DE UN HORNO ELÉCTRICO O ESTUFA DE ESTERILIZACIÓN

Autoclave

El ambiente es saturado de vapor de agua. Si la presión de vapor de un recipiente se eleva sobre la atmosférica, la temperatura ascenderá, es decir, se aplica calor en forma de vapor saturado a presión.Se eleva la temperatura hasta 121ºC durante 15 minutos

Uso del autoclave

Agregar agua hasta la rejilla Colocar el material a esterilizar sobre la rejilla Cerrar los tornillos en forma enfrentada. Proceder al encendido Calentar con el escape de vapor abierto, se cierra cuando sale un chorro de vapor

continuo. Cuando el manómetro llega a la presión deseada, se regula la llama y se controla el

tiempo, cumplido éste se corta la fuente de calor. Para abrir el autoclave, cerrar la entrada de gas y esperar que la presión se haga cero. Retirar el material, guardar en heladera o armario.

Factores influyentes en la esterilización Temperatura: las endoesporas bacterianas son las más resistentes a la muerte por el calor,

solo se alcanza la temperatura mortal si el vapor está sometido a presión.

Manómetro

Válvula de seguridad

y espireta

Tornillos mariposa

Humedad: la coagulación del protoplasma bacteriano (proteínas, enzimas) a temperaturas moderadas, requiere humedad y cuando esta se elimina la temperatura requerida para la coagulación se eleva rápidamente.

Presión: solo se utiliza para mantener la temperatura del vapor por encima de los 100 ºC. Tiempo: hace falta un cierto tiempo para que el calor penetre y caliente los materiales a la

temperatura de esterilización. Normalmente se requieren de 11 a 12 minutos a 121 ºC (calor húmedo) para matar las endoesporas de bacterias termófilas.

Aire atrapado: es necesario remplazar por vapor todo el aire. Naturaleza de los materiales: es preferible esterilizar en recipientes pequeños, ya que

requieren menos tiempo.

Flameado

Con la llama del mechero, se esterilizan las ansas, piezas, bocas de tubos de ensayo y de erlermeyer.

Horno eléctrico

El calor seco es menos efectivo que el húmedo, se requiere mayor temperatura 170- 200ºC y tiempo para esterilizarse.

Se utiliza para todo material de vidrio como: tubos, pipetas, cajas de petri y frascos, a estos se los protege con papel para evitar la contaminación posterior.

Tiene un termostato que interrumpe la fuente clórica una vez alcanzado el límite de temperatura deseado, y la pone en acción para suministrar calos cuando desciende la temperatura.

Tiene un termómetro y un ventilador para homogeneizar la temperatura interna.

La esterilización se realiza a 160-170 ºC durante 2 horas.Si la operación ha sido correcta, los papeles de envoltura y algodones quedan ligeramente amarillos.

Termómetro

Doble pared con material aislante